気 管 支 喘 息 に お け る抗 原 特 異 的T
cell cloneの
樹 立 と
サ イ トカ イ ン産 生 能 に 関 す る研 究
岡山大 学医 学部 第二 内科 学教 室(指 導:木 村 郁郎教 授)
宮
原
信
明
(平成6年3月30日 受 稿)
Key words: antigen specific T cell clone, IFN-ƒÁ, bronchial asthma, late asthmatic response (LAR)
緒 言 気 管 支 喘 息 病 態 の 基 盤 と な る ア レ ル ギー 反 応 と し て は,従 来 よ り小 児 喘 息 に 代 表 され る如 き IgEを 介 したI型 ア レ ル ギ ー 反 応 が 中 心 で あ り, さ ら に そ の病 因 抗 原 はハ ウ ス ダ ス トお よ び そ の 主 成 分 で あ る ダ ニ(Dermatophagoides farinae) 抗 原 が 重 要 で あ る と考 え ら れ て い る1).し か し, 成 人 発 症 の 重 症 難 治 性 喘 息 に お い て は か か るI 型 ア レ ル ギ ー 反 応 の み で そ の 病 像 を理 解 す る こ とは 困 難 で あ り,こ の様 な病 態 に は む し ろIII型 あ る い はIV型 ア レ ル ギ ー 反 応 が 関 与 し て い る と 推 察 さ れ, IgG抗 体 や リン パ 球 の 果 たす 役 割 に つ い て 検 討 す る必 要 が あ る と考 え られ る2,3,6).ま た 原 因 抗 原 と して は,小 児 喘 息 と は 異 な り真 菌 抗 原,特 に カ ン ジ ダ(Candida albicans)抗 原 の 重 要 性 が 示 唆 さ れ て い る9-11). 一 方 ,か か る病 態形 式 にお け る リンパ 球 の役 割 とい う観 点 か ら 見 る と,近 年 リン パ 球 の 産 生 す る 液 性 因 子 で あ る サ イ トカ イ ン の 重 要 性 が 注 目 さ れ て い る.な か で もinterleukin-4(IL-4) はIgE抗 体 の 産 生 を促 し, interferon-γ(IFN -γ)はIL-4に 拮 抗 的 に 働 き, IgE抗 体 産 生 を 抑 制 す る と考 え ら れ て お り4,5),さらにIFN-γ に は 遅 延 型 過 敏 反 応 を促 進 す る 作 用 も報 告 さ れ て い る7,8).ま た 木 村 は,カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に て 遅 発 型 気 道 反 応(LAR: Late asthmatic response)を 発 現 す る 喘 息 患 者 の リンパ 球 はIFN -γ 産 生 能 が 高 値 を 示 す こ と を報 告 し て お り13), Kayら12)も 重 積 発 作 時 に 血 清 中 のIFN-γ お よ び 可 溶 性IL-2受 溶 体 が 高 値 を示 す と報 告 す る な ど,気 管 支 喘 息 発 作 にT cellの 活 性 化 が 関 与 し て い る もの と推 察 さ れ る. そ こ で 著 者 は,抗 原 特 異 的T cellの 気 管 支 喘 息 に お け る役 割 を 解 明 す る 目 的 で,重 要 な 抗 原 で あ る カ ン ジダ とダニ に 対 す る抗 原 特 異 的T cell cloneを 患 者 末 梢 血 よ り樹 立 し,こ れ ら ク ロー ン のIFN-γ とIL-4産 生 能 に つ い て検 討 し た. 対 象 と 方 法 1.対 象 岡 山大 学 第 二 内 科 に 通 院 中 の 気 管 支 喘 息 患 者 の う ち,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に て 遅 発 型 気 道 反 応(LAR)を 示 し た 患 者1例 と即 時 型 気 道 反 応(IAR)を 示 した1例,ま た ハ ウ ス ダ ス ト 吸 入 誘 発 試 験 に てIARお よ びLARを 示 し た 1例 を 対 象 と した.な お 各 症 例 の 背 景 因 子 は 下 記 の 如 くで あ る(Table 1). 症 例Y. S.(67歳 女 性)は, 52歳 発 症 の 重 症 度 中 等 症 の 喘 息 で,血 清IgE値 は38 IU/ml,カ ン ジ ダRASTス コ ア は2で あ り,カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てLARの み を示 し た. 症 例F. I.(47歳 女 性)は24歳 発 症 の ス テ ロ イ ド依 存 性 の 難 治 性 喘 息 で,血 清IgE値 は671 IU/ ml,カ ン ジ ダRASTス コ ア は2で あ り,カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てIARの み を示 した. 症 例S. O.(55歳 女 性)は40歳 発 症 の 中 等 症 の 喘 息 で,血 清IgE値 は129 IU/ml,ダ ニRAST ス コア は5で あ り,ハ ウ ス ダ ス ト吸 入 誘 発 試 験 に てIARとLARを 示 し た.な お こ の 症 例 は 907
Table l 患 者 背 景
Fig. 1 抗 原 特 異 的T cell cloneの 作 製 法
減 感 作 療 法 を施 行 中 で あ る.
2.抗 原 特 異 的T cell cloneの 作 製 法(Fig. 1) ヘ パ リ ン 加 患 者 末 梢 血 か らHISTOPA-QUE1077(SIGMA)を 用 い た 比 重 遠 沈 法 に て 単 核 球 層 を 分 離 採 取 し,こ れ をRPMI1640に て 洗 浄 後, 10%FCS(56℃, 30分 に て 非 働 化), 100 IU/ml Penicillin G, 100μg/ml Streptomycinを
含 有 す るRPMI1640を 用 いて,単 核 球 が5×106/ mlと な る よ う に 細 胞 浮 遊 液 を調 整 し た.得 ら れ た単 核 球 浮 遊 液 を24 wel1のtissue culture cluster(Costar)に 分 注 し,ダ ニ 抗 原 凍 乾 末 ま た は カ ン ジ ダ 抗 原 凍 乾 末(鳥 居 薬 品)を そ れ ぞ れ50μg/mlま た は150μg/mlの 濃 度 で 添 加 し,培 養 5日 後 にrecombinant IL-2(rIL-2:武 田 薬 品) 25 unit/mlを 加 え て さ ら に1週 間 培 養 し,各 々 の 抗 原 に 応 答 す る 細 胞 の 増 生 を促 し た. 培 養12日 後 に 比 重 遠 沈 法 に てBlastを 分 離 し, Fig. 2 抗 原特 異性 の 検定 法 限 界 希 釈 に て ク ロ ー ニ ン グ を 行 っ た.す な わ ち 0.3個/wellのBlastを, MMC処 理 し た 自 己 のPBMC(1×105/well), 1%のPHAお よ び20 unit/mlのrIL-2を 加 え た 全 量200μlの10 % FCS加RPMI 1640に 浮 遊 さ せ, 96 wellの flatbottom culture clusterに て 培 養 し た. 3日 ご と にwellの 上 清 の 半 量 をIL-2を 含 む 培 養 液 と 交 換 し,原 則 と し て2週 間 間 隔 で, MMC処 理PBMCをfeeder cel1と し て 加 え て 細 胞 を expansionし,維 持 し た. 3.抗 原 特 異 性 の 検 定 法(Fig. 2) 各 ク ロ ー ン(4×104/well)をMMC処 理 自 家PBMC(1×105/well),各 抗 原(ダ ニ 抗 原50 μ/ml,ま た は カ ン ジ ダ 抗 原150μ/ml)と と も に 10% FCS加RPMI 1640に て 全 量 を200μ/mlと し, 96 wellのflatbottm culture clusterに て triplicateに て48時 間 培 養 し た.培 養 終 了16時 間 前 に, 3H-Thymidine(6-TdR, Amersham社 製)0.4μCi/mlを 各wellに 加 え た.培 養 終 了 後, 各wellか らsemi-automatic cell harvester
(Labo science社 製)に て 細 胞 成 分 を採 取 し, 液 体 シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン ター(Aloka社 製 LSC-700)に て 放 射 活 性 を 測 定 し,抗 原 添 加 群 のdpmと 非 添 加 群 のdpmと の 比 を 計 算 し, stimulation index(S. I.)と し て 表 し た.な お 今
回 は, S.I.≧10を 抗 原 特 異 性 あ り と判 定 し た14). 4. Surface phenotypeの 検 索
各 ク ロ ー ン をanti-CD2, anti-CD4,及 びanti -CD8と と も に4℃ で30分 間 反 応 後, FITC標 識2次 抗 体 を加 えて さ らに反 応 させ,洗 浄 後flow cytometry(FACStar)でphenotypeを 観 察 し た. 5.抗 原 刺 激 に よ るT cell cloneか らの サ イ トカ イ ン 産 生 能 の 測 定 1)培 養 上 清 の 作 製 樹 立 したT cell cloneをRPMI1640に て3 回 洗 浄 後, 10% FCS加RPMI1640に 再 浮 遊 さ せ た.こ のT cell clone(4×104/well)に, MMC 処 理 自家PBMC(1×105/well)と,ダ ニ抗 原 50μg/mlま た は カ ン ジ ダ抗 原150μg/mlを 加 え,全 量 を200μlと し, 37℃, 5% CO2の 条 件 下 に て 48時 間 培 養 し,上 清 を 採 取 し て 測 定 ま で-70℃ に て 凍 結 保 存 し た. 2)培 養 上 清 中 のIFN-γ 濃 度 の 測 定 培 養 上 清 中 のIFN-γ は ビ ー ズ 固 相 法 に よ る 2ス テ ップ サ ン ドイ ッチRIA法 を用 い たRIA キ ッ ト(セ ン ト コア 社 製)を 用 い て 測 定 した. す な わ ち, 1次 抗 体 で あ る抗 ヒ トIFN-γ マ ウ ス モ ノ ク ロー ナ ル 抗 体 を 固 相 化 した ビ ー ズ に 検 体 を加 え て 反 応 させ,洗 浄 し た後 に2次 抗 体 で あ る125I標 識 抗 ヒ トIFN-γ マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル 抗 体 液 を加 え て 反 応 させ,洗 浄 後 に 各 ビ ー ズ のCPMを ガ ンマ カ ウ ン タ ー に て測 定 し た. 最 後 に 標 準 曲 線 よ りIFN-γ の 濃 度 を 求 め た. 3)培 養 上 清 中 のIL-4濃 度 の 測 定 IL-4の 測 定 は, AMPPDを 基 質 と し た化 学 発 光 サ ン ドイ ッチELISA法15)を 用 い て 測 定 し た.す な わ ち, 96 wellマ イ ク ロプ レー トに 抗 ヒ トIL-4モ ノ ク ロ ー ナ ル抗 体(Genzyme社 製) を 固相 化 し, BSA(ウ シ血 清 ア ル ブ ミ ン)に て 固 層 の ブ ロ ッ キ ン グ を 施 行 後 洗 浄 し,検 体 を加 え て 反 応 さ せ た.次 に, 2次 抗 体 で あ る ウ サ ギ 抗 ヒ トIL-4ポ リ ク ロ ー ナ ル 抗 体(コ ス モ 社 製) を 加 え て 反 応 後,抗 ウサ ギIgG抗 体(TAGO社 製)を 加 え て3次 反 応 を 行 っ た.さ ら に 洗 浄 後, 増 感 剤(コ ス モ社 製: EMERALDTM)を 共 存 さ せ たAMPPD溶 液 を 加 え て酵 素 反 応 を行 い,検 体 の 発 光 強 度 をマ イ ク ロ ル ミメ ー ター(ダ イ ナ ミ ッ ク社 製)を 用 い て 測 定 し た. 結 果 1.抗 原 特 異 的T cell clone
カ ン ジ ダ 抗 原 特 異 的T cell cloneは 症 例Y. S., F. I.よ りそ れ ぞ れ1ク ロー ン ず つ,ま た ダ
ニ 抗 原 特 異 的T cell cloneは 症 例S. O.よ り2 ク ロー ン の,合 計4株 の ク ロ ー ンが 樹 立 され た. 2.抗 原 特 異 性 の 検 討 4株 す べ て の ク ロー ン はTable 2に 示 す よ う に 自家 抗 原 提 示 細 胞(APC)存 在 下 で カ ン ジ ダ あ る い は ダ ニ 抗 原 に 反 応 し, 3H-Thymidineを 取 り込 み, S. I.は い ず れ も10以 上 で あ っ た. 3. Surface phenotypeの 検 討 今 回 検 討 を 加 え た ク ロ ー ン のSurface phenotypeは す べ て, CD2+, CD4+,
CD8-のhelper/inducer typeで あ っ た. Fig. 3に 症 例S. O.よ り樹 立 した ダ ニ に特 異 的 な ク ロー ン# 1のSurface phenotypeを 示 す. 4.抗 原 特 異 的T cell cloneの サ イ トカ イ ン産 生 能 の 検 討 樹 立 し たT cell cloneに,抗 原 提 示 細 胞 と そ れ ぞ れ の 抗 原 を 加 え て48時 間 培 養 し,そ の 培 養 上 清 中 のIFN-γ, IL-4を 測 定 した.そ の 結 果, カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てLAR反 応 の み を 示 し た症 例Y. S.か ら得 た カ ン ジ ダ に 特 異 的 な ク ロー ン で は, Fig. 4に 示 す 如 くIFN-γ は43.6 IU/mlと 高 値 を示 し, IL-4は1.75pg/mlと 低 値 Table 2 抗 原 特 異性 の検 定
Fig. 3 Surface phenotypeの 検 索
Fig. 4 カ ン ジ ダ 特 異 的TCCのIFN-γ, IL-4産 生 能
を示 した. 一 方 カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てIARの み を示 し た 症 例F. I.か ら得 た ク ロ ー ンは, Fig. 4 に 示 す 如 くIFN-γ, IL-4と もに 産 生 は ほ と ん ど認 め ら れ な か っ た. ダ ニ 抗 原 に てIARとLARの 気 道 反 応 を示 した 症 例S. O.よ り樹 立 さ れ た ク ロ ー ン は, Fig. 5に 示 す 如 く2ク ロー ン と もに いず れ もIFN-γ 高 値, IL-4低 値 で あ り,カ ン ジ ダ抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てLARを 示 した 症 例Y. S.の ク ロー ン と 同 様 の サ イ トカ イ ン産 生 パ ター ン を示 し た. 以 上 の 如 く, LARを 発 症 す る症 例 か ら得 たT cell cloneは い ず れ もIFN-γ 産 生 能 が 高 値, IL-4産 生 能 が 低 値 で あ っ た.ま たIARの み を 呈 し,ス テ ロ イ ド依 存 性 の 症 例 よ り得 られ た ク ロー ン の サ イ トカ イ ン産 生 能 はIFN-γ, IL-4と も に低 値 で あ っ た. 考 察 成 人 発 症 の 難 治 性 喘 息 に お い て は, I型 ア レ ル ギー の 他 に リンパ 球 やIgG抗 体 を介 す るIII型, IV型 ア レ ル ギ ー が 主 と し て 関 与 し て い る と推 察 され て い る2,3).な か で も リ ン パ 球 の 放 出 す るサ イ トカ イ ン が 重 要 な役 割 を 持 つ こ とが 解 明 さ れ つ つ あ り,例 え ばIL-4はIgEを 介 す るI型 ア レ ル ギー に 深 くか か わ っ て お り,一 方IFN-γ が そ れ に 拮 抗 す る働 き の あ る こ とが 明 ら か に さ れ つ つ あ る.さ ら にIFN-γ に は 遅 延 型 過 敏 反 応 の 促 進 作 用 が あ り7,8),遅 発 型 気 道 反 応(LAR), 遅 延 型 気 道 反 応(De-AR)に 関 わ っ て い る13)こ とか ら,難 治 性 喘 息 に 深 く関 与 し て い る と考 え られ て い る29). そ こ で 著 者 は 成 人 気 管 支 喘 息 病 態 に お け る抗 原 特 異 的 なT cell cloneの 役 割 を 明 ら か に す る 目的 で,そ の 重 要 な抗 原 で あ る カ ン ジ ダ抗 原 と ダ ニ 抗 原 に 対 す る 抗 原 特 異 的T cell cloneを 患 者 末 梢 血 よ り樹 立 し,こ れ らの 産 生 す るIFN- γ, IL-4に つ い て 検 討 し た.そ の 結 果 カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てLARを 呈 し た 症 例 よ り樹 立 さ れ た ク ロ ー ン はIFN-γ 高 値, IL-4低 値 で, Th1様 細 胞 の サ イ トカ イ ン産 生 パ ター ン で あ っ た.ま たハ ウ ス ダ ス トに てIARとLARを 呈 した 症 例 よ り樹 立 さ れ た ク ロ ー ン も同 様 にTh1 様 細 胞 の サ イ トカ イ ン パ ター ン を 示 し た.す な わ ちLAR病 態 にIFN-γ が 何 らか の 役 割 を 担 っ て い る こ とが 判 明 し た. 今 回 カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てLARを 呈 した 症 例Y. S.よ り樹 立 さ れ た カ ン ジ ダ に 特 異 的 な ク ロー ン で は, IFN-γ 産 生 能 は 高 値, IL-4産 生 能 は低 値 を示 し, Th1様 細 胞 の サ イ トカ イ ン産 生 パ タ ー ン を呈 し た.こ れ は カ ン ジ ダ 抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に おけ る気 道 反 応 別 のIFN-γ 産 生 能 の 検 討13)で, LARを 有 す る群 に お い てIFN -γ 産 生 能 の 亢 進 が 報 告 され て お り,同 様 の 結 果 と考 え ら れ, LARの 病 態 へ のIFN-γ の 関 与 が 示 唆 さ れ た.ま たIFN-γ は 抗 原 刺 激 に よ る 白 血 球 か らのLTC4産 生 を促 進 す る作 用 もあ り16), LARの 発 症 機 序 の 一 部 にIFN-γ がLCT4を 介 し て 気 道 収 縮 に 促 進 的 に 作 用 す る可 能 性 が 考 え ら れ た. ま た ハ ウ ス ダ ス ト吸 入 誘 発 試 験 に てIARと LARを 示 し た 症 例S. O.よ り作 製 し た ダニ 抗 原 に 特 異 的 なT cell cloneも2ク ロ ー ン と もに カ ン ジ ダ に 特 異 的 な ク ロ ー ン と 同 様 に, IFN-γ 高 値, IL-4低 値 とTh1様 細 胞 の サ イ トカ イ ン産 生 を示 した.こ の 点 に 関 して, Romagnaniら は ダ ニ 抗 原 に て 即 時 型 皮 膚 反 応 を 示 す 症 例 よ り作 製 した ク ロー ンはIL-4高 値, IFN-γ 低 値 のTh2 様 細 胞 の サ イ トカ イ ン パ タ ー ン を示 す と報 告 し て い る17,18).この よ うに ダニ に即 時 型 の 反 応 を示 す 症 例 よ り作 製 さ れ た ク ロー ン はTh2様 細 胞 の サ イ トカ イ ン産 生 を 示 す と の 報 告 が 多 い が,遅 発 型 気 道 反 応(LAR)を 示 す 症 例 よ り作 製 さ れ た ク ロ ー ン の 報 告 は 見 当 た ら な い. LARは 従 来 はIARか ら連 続 し た 反 応 でIgE抗 体 が 関 与 し て い る と の考 え 方 が 主 流 で あ っ た が,近 年 木 村 ら19)やIto20)ら は む し ろIgG抗 体 が 関 与 す る 可 能 性 を 報 告 し て お り, LARを 呈 す る症 例 で は 抗 原 特 異 的IgG抗 体 が 関 与 して い る と想 定 さ れ る21).さ ら にIgG1抗 体 とIFN-γ と の 間 に は 相 関 関 係 が 認 め られ22),ま たLARを 示 す 症 例 に お い て は ダ ニ 抗 原 に お い て も カ ン ジ ダ 抗 原 に お い て も リン パ 球 幼 若 化 反 応 やIL-2産 生 能 が 亢 進 し て い る こ と も報 告 され て い る23).さ ら に 喘 息 以 外 の病 態 に お い て も, Oriiら24)は ア トピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 の う ち で 非 即 時 型 反 応 を 示 す 症 例
の 末 梢 血 リンパ 球 は 即 時 型 を示 す もの よ りもIFN -γ 産 生 能 が 亢 進 し て い る と報 告 し て い る.こ の よ うに 非 即 時 型 の 病 態 に はIFN-γ が 関 わ っ て お り,症 例 のS. O.のLARの 病 態 に は,カ ン ジ ダ症 例Y. S.と 同様 にTh1様 の 活 性 化 さ れ た リ ンパ 球 か ら産 生 さ れ るIFN-γ の 関 与 して い る 可 能 性 が 強 く考 え られ た. 一 般 に カ ン ジ ダ 抗 原 は遅 発 型 ,遅 延 型 の反 応 を起 こ し易 く,ダ ニ 抗 原 は 即 時 型 の 反 応 を 起 こ し易 い25)こ とが 知 られ て い る。しか し抗 原 の 種 類 に 関 わ ら ず,気 道 反 応 の 様 式 か らみ る と, IARに はTh2様 の 活 性 化 さ れ た リンパ 球 の 産 生 す るIL -4が 関 与 す る の に 対 し, LARに はTh1様 の 活 性 化 さ れ て リン パ 球 の 産 生 す るIFN-γ が 強 く関 わ り, III型, IV型 ア レ ル ギ ー 反 応 に 基 づ き, 気 道 反 応 が 惹 起 さ れ る と考 え られ た. 次 に カ ン ジ ダ に特 異 的 な クロー ンで はIFN-γ, IL-4と も に 産 生 は ほ とん ど 認 め られ な か っ た. こ の 症 例 は気 道 反 応 と して はIARの み を 認 め る 症 例 で あ り,前 述 の 如 く即 時 型 反 応 に はIL-4の 関 与 を示 唆 す る報 告 が 多 い.し か し本 症 例 は ス テ ロ イ ド依 存 性 で あ り,長 期 大 量 投 与 中 の ス テ ロ イ ド剤 が サ イ トカ イ ン産 生 に 影 響 を 及 ぼ し, IAR以 外 の 気 道 反 応 を抑 制 した 可 能 性 が 考 え ら れ た.こ の 点 に 関 し て,ス テ ロ イ ドホ ル モ ン に はIFN-γ, IL-1, IL-2, IL-3, IL-6, IL-8な
どの 種 々 の サ イ トカ イ ン産 生 抑 制 作 用 が 認 め ら れ て い る30).さ ら にRobinsonら26)は ス テ ロ イ ド療 法 施 行 に よ り,気 管 支 肺 胞 洗 浄 液 細 胞 中 の サ イ トカ イ ン のmRNA発 現 を検 討 し, IL-4, IL-5は 減 少 し, IFN-γ は 増 加 す る と 報 告 し て い る.し か し ス テ ロ イ ドホ ル モ ン に よ る気 道 反 応 の 抑 制 機 序 に つ い て は 末 だ に 不 明 な 点 が 多 く, 今 後 の 検 討 が 必 要 で あ る. ま た,最 近Th1, Th2の 分 化 を左 右 す る サ イ トカ イ ン と し て, IL-4, IFN-γ 以 外 にIL-10, IL-12が 注 目 さ れ て い る. IL-10はTh2ク ロー ン が 産 生 し, Th1ク ロー ン か ら のIFN-γ, IL -2産 生 を抑 制 す る働 き が あ り27), IL-12はTh1 ク ロ ー ン か らのIFN-γ 産 生 を促 進 させ, Th2 ク ロ ー ン の 増 生 を抑 制 し, IL-4産 生 を抑 制 す る28).す な わ ちIFN-γ を 抑 制 す るIL-10の 作 用 不 足 な ど が 遅 発 型 気 道 反 応(LAR)に も 関 与 し て い る可 能 性 が 考 え られ,今 後IL-4, IFN-γ にIL-10, IL-12を 加 え て 検 討 す る こ と に よ り遅 発 型 気 道 反 応 の 機 序 を さ ら に 明 らか に で き る もの と考 え ら れ た. 結 論 気 管 支 喘 息 の 発 症 機 序 に お け る リン パ 球 の 関 与 を解 明 す る研 究 の 一 環 と し て,カ ン ジ ダ お よ び ハ ウ ス ダ ス ト抗 原 吸 入 誘 発 試 験 に てIARや LARを 示 した 喘 息 患 者 を対 象 に,そ れ ぞ れ の 末 梢 血 リン パ 球 よ り抗 原 特 異 的T cell cloneを 樹 立 し,こ れ ら の ク ロー ン の 産 生 す るIFN-γ, IL -4に つ い て 検 討 し た . (1)カン ジ ダ 喘 息 症 例2例 よ りそ れ ぞ れ1ク ロ ー ン ず つ ,ま たダ ニ喘 息症例 よ り2ク ロー ンの 抗 原 特 異 的T cell cloneを 樹 立 し た. (2)各ク ロー ンのSurface phenotypeはhelper/ inducer typeで あ っ た. (3)カン ジ ダ に よ るLAR症 例 の 抗 原 特 異 的T cell cloneと ダ ニ に よ るIAR+LAR症 例 の 抗
原 特 異 的T cell cloneは と もにIFN-γ 産 生 能 が 高 値 を示 し, LARへ のIFN-γ の 関 与 が 想 定 さ れ た.
(4)カン ジ ダ に よ るIAR症 例 の 抗 原 特 異 的T cell cloneはIFN-γ, IL-4産 生 能 が と も に 低
値 を 示 し,ス テ ロ イ ド剤 の 影 響 が 考 え られ た. 以 上 よ り,成 人 喘 息 病 態,特 にLARの 機 序 に 抗 原 特 異 的T cel1の う ちTh1様 細 胞 由 来 の IFN-γ が 関 与 す る 可 能 性 が 想 定 さ れ た . 尚本 論 文 の要 旨 は 第43回 日本 ア レル ギー 学 会(平 成5年10月)に お い て発 表 した. 稿 を終 え る に あ た り御 指 導,御 校 閲 を賜 りま した 恩 師 木 村 郁郎 教 授 に深 謝 致 し ます と共 に,終 始 懇切 な る御指 導,御 助 言 を賜 りま した高 橋 清 講 師,な ら び に 木村 五 郎 助 手 に深 謝 致 し ます.
文
献
1) Miyamoto T, Oshima S, Mizuno K, Sasa M and Ishizaki T: Cross antigenicity
among six species
of dust mite and house dust antigens.
J Allergy (1969) 44, 228-238.
2) Pepys J, Turner-Warwick
M, Dawason PL and Hinson KFW: Arthus (Type 3) skin test reactions
in man. Clinical and immunopathological
features;
in Excepta Medica Foundation, No. 162, Rose
B, Richter M, Sehon A and Frankland AW eds, Little Brown and Company, Boston (1968) pp 221
-235 .
3) 木 村 郁 郎:最 近 の ア レ ル ギ ー 学 の 展 開;ア レ ル ギ ー の 理 論 と そ の 展 開,木 村 郁 郎 編 著,医 薬 ジ ャ ー ナ ル 社, 大 阪(1991)pp 11-22.
4) Snapper CM and Paul WE: Interferon-ƒÁ and B cell stimulatory factor-l reciprocally regulate Ig isotype production. Science (1987) 236, 944-947.
5) Pene J, Rousset F, Briere F, Chretien I, Bonnefoy JY, Spits H, Yokota T, Arai N, Arai K, Banhereau J and De Vries JE: IgE production by normal human lymphocytes is induced by interleu kin 4 and suppressed by interferons ƒÁ and ƒ¿ and prostaglandin E2. Proc Natl Acad Sci USA (1988) 85, 6880-6884.
6) 月 岡 一 治:カ ン ジ ダ 喘 息 の 発 症 機 序 に 関 す る 研 究.第3報 吸 入 誘 発 型 と1型 お よ びIII型 ア レル ギ ー の 関 連 に つ い て.ア レ ル ギ ー(1985)34, 289-296.
7) Issekutz TB, Stoltz JM and V. D. Meide P: Lymphocyte recruitment in delayed-type hypersen sitivity; The role of IFN-ƒÁ. J Immunol (1988) 140, 2989-2993.
8) Fong TA and Mosmann TR: The role of IFN-ƒÁ in delayed-type hypersensitivity mediated by Th1 clones. J Immunol (1989) 143, 2887-2893.
9) 可 部 順 三 郎:真 菌 と ア レ ル ギ ー.治 療(1986)68, 2030-2034.
10) 木 村 郁 郎,高 橋 清:老 人 喘 息 と そ の 対 策.現 代 医 学(1985)17, 2308-2312.
11) 木 野 稔 也,大 島 駿 作:気 管 支 喘 息 患 者 に お け る 真 菌RAST-特 に カ ン ジ ダRASTの 意 義 と そ の 測 定 精 度 の 検 討.臨 免 疫(1982)14, 906-916.
12) Corrigan CJ and Kay AB: CD4 T-lymphocyte
activation
in acute severe athma;
Relationship
to
disease severity and atopic status.
Am Rev Respir Dis (1990) 141, 970-977.
13) 木 村 五 郎:気 管 支 喘 息 に お け るinterferon-γ(IFN-γ)産 生 能 に 関 す る 研 究.第1編 気 管 支 喘 息 の 各 種 病 態 に お け るIFN-γ 産 生 能 の 検 討.岡 山 医 誌(1992)104, 1107-1116.
14) 笠 松 正 憲,辻 卓 夫,三 浦 真 理 子:高 感 度interleukin-4測 定 法(Sandwich ELISA法)と ア トピ ー 性 皮 膚 炎 患 者 に お け る 血 清 値 に つ い て.ア レ ル ギ ー(1993)42, 878-882.
15) Parronchi P, Macchia D, Piccinni M, Biswas P, Simonelli C, Maggi E, Ricci M, Ansari A and Romagnani S: Allergen and bacterial antigen specific T cell clones established from atopic donors show a different profile of cytokine production. J Immunol (1991) 88, 4538-4542.
16) Saito H, Hayakawa T, Mita H, Yui Y and Shida T: Augmentation of leukotriene C4 production by gamma interferon in leukocytes challenged with an allergen. Int Arch Appl Immunol (1988) 87, 286-293.
17) Maggi E and Romagnani S: Reciprocal regulatory effects of IFN-ƒÁ and IL-4 on the in vitro development of human Th1 and Th2 clones. J Immunol (1992) 148, 2142-2147.
18) Wierenga E, Snoek M, Groot C, Cheretien I, Bos J, Jansen H and Kapsenberg M: Evidence for compartmentalization of functional subsets of CD4+ T lymphocytes in atopic patients. J Immunol
(1990)144,
4651-4656.
19) 木 村 郁 郎:遅 発 型 ア レ ル ギ ー の 発 症 機 序-細 胞 反 応 を 中 心 に-;第3回 免 疫 薬 理 シ ン ポ ジ ウ ム 記 録 集,冨 岡 玖 夫 編,デ ー ・エ ム ベ ー ・ジ ャパ ン,東 京(1985)pp 23-40.
20) Ito K, Kudo K, Okudaira
H, Yoshinoya S and Morita Y: IgGl antibodies to house dust mite
(Dermatophogoides
farinae) and late asthmatic response. Int Arch Allergy Appl Immunol (1987) 81,
69-74.
21) 小 栗 栖 和 郎:遅 発 型 気 道 反 応 に お け るIgGサ ブ ク ラ ス 抗 体 に 関 す る 研 究.第1編 血 清 中 抗 原 特 異 的IgG サ ブ ク ラ ス 抗 体 と遅 発 型 気 道 反 応 の 関 連 に つ い て.岡 山 医 誌(1992) 104, 797-807. 22) 木 村 五 郎:気 管 支 喘 息 に お け るinterferon-γ(IFN-γ)産 生 能 に 関 す る 研 究.第2編 気 管 支 喘 息 に お け るIFN-γ 産 生 能 と 各 種 リ ン パ 球 機 能 と の 比 較 検 討.岡 山 医 誌(1992) 104, 1117-1125. 23) 金 廣 有 彦,高 橋 清,多 田 慎 也,宗 田 良,猪 木 篤 弘,谷 本 安,木 村 五 郎,岡 本 章 一,岡 野 智 治,古 藤 直 紀,木 村 郁 郎:気 管 支 喘 息 患 者 の 遅 発 型 気 道 反 応 に お け る リ ン パ 球 の 関 与 に つ い て.ア レ ル ギ ー(1992) 41, 739-748.24) Kondo N,
Fukutomi O,
Agata H,
Motoyoshi F,
Shinoda S,
Kobayashi
Y,
Kuwabara
N,
Kameyama T and Orii T: The role of T lymphocytes in patients with food-sensitive atopic dermati
tis. J Allergy Clin Immunol (1993) 91, 658-668.
25) 月 岡 一 治:カ ン ジ ダ 喘 息 の 発 症 機 序 に 関 す る研 究.第2報 カ ン ジ ダ に 対 す るIgE抗 体 と ア ト ピー 素 質 と の 関 連 に つ い て.ア レ ル ギ ー(1982) 31, 1029-1034.
26) Robinson D, Hamid Q, Ying S, Bentley A, Assoufi B, Durham and Kay AB: Prednisolone
treatment
in asthma is associated with moduration
of bronchoalveolar
lavage cell interleukin-4,
interleukin-5,
and interferon-gamma
cytokine gene expression.
Am Rev Respir Dis (1993) 142, 401
-406 .
27) Fiorentino DF, Zlotnik A, Viera P, Mosmann TR, Howard M, Moore KW and O'garra A: IL
-10 acts on the antigen-presenting
cells to inhibit cytokine production by Th1 cells. J Immunol (1991)
146, 3444-3451.
28) Manetti R, Parronchi P, Giudizi MG, Piccini MP, Maggi E, Trinchieri G and Romagnani S:
Natural killer cell stimulatory
factor (interleukin 12) induces T helper type 1 (Th 1) specific immune
response and inhibits the development of IL-4-producing
Th cells. J Exp Med (1993) 177, 1199
-1204.
29) 難 波 一 弘:気 管 支 喘 息 に お け る遅 発 型 気 道 反 応 の 機 序 に 関 す る 研 究.第1編House dust抗 原 に よ る遅 発 型 気 道 反 応 局 所 の 細 胞 反 応 及 び ロ イ コ ト リエ ン の 変 動.岡 山 医 誌(1993) 105, 185-193.
Establishment
of antigen
specific
T cell clones
from
asthmatic
patients
including
evaluation
of cytokine
production
Nobuaki
MIYAHARA
Second
Department
of Internal
Medicine,
Okayama
University
Medical
School,
Okayama
700, Japan
(Director:
Prof. I. Kimura)
To clarify the pathogenesis of bronchial asthma, we established T cell clones specific for Candida antigen and for mite antigen from the peripheral blood of three asthmatic patients. Flow cytometric analysis was performed on these clones. The surface phenotype of all clones was helper/inducer type. These clones were analyzed for the ability to produce interferon gamma (IFN-ƒÁ) and interleukin 4 (IL-4).
The T cell clone established from the patient who showed late asthmatic response (LAR) after bronchial inhalation of Candida, as well as the clones from the patient who showed IAR and LAR after inhalation of housedust mite, produced a higher amount of IFN-ƒÁ and lower amount of IL-4. The T cell clone established from the patient who were under corticosteroid therapy and showed IAR after inhalation of Candida produced lower amounts of IFN-ƒÁ and IL-4, which seemed to be inhibition of cytokine production from antigen specific T cell clone by corticosteroids.
These findngs indicate that T cell clones established from the patients who showed LAR produced a large amount of IFN-ƒÁ, suggesting that IFN-ƒÁ plays an important role in allergic reactions of LAR.
