代 関 す 研究 謝 渠 濃度 脳内 内

金沢大 学十全医学 会稚 託 第9 5巻 第5号 7 9 7 ⁻81 2 く1 9 8 6フ 7 9 7

Clo m i_p r a m in e の脳 内 ^{． 血}渠^内濃度^{と 5 −H} ydr o x y t^ryp^{ta m} in e

代 謝 ^に 関 す ^る 研 究

金沢 大 学 医 学 部神 経 精 神医 学 講座 く主任^二山口成良教 授I

岸 谷 和 之

く昭和^{6 1}年⁹ 月6 日受 付I

ラット を用^いて C M P くclo mi_pr a min el を急性ま た は連続1 4 日間 投与 く以下 慢 性 投与1 し た場合の，

脳 内と血梁 くpla s m aI 内濃度の薬 物速 度 論 的 変 化お よ び C M P に よ る脳 内5 H T く5⁻hydr o xy t^ry p t ^am inel 代謝の変化を調^べ た． そ の結果を も と^にC M P の薬 物 速 度論 的 考 察^と躁う^つ病^のア ミ^ン仮 説との関連，さ ら に慢 性 投与^{によ るレ セプ ター の}変 化^に関す る考 察を加え た^． C M P は薬 物 速度 論 的^には急性， 慢 性 投与 熟 他の塩 基性 薬剤と同様^に， 3 ^{− コ ン パ ー} トメ ントモデル類似の^パタ ^{ー ン}を 示 し な が ら減 衰^{し た．} 前者は 3 0 分後， 後 者は 3 日後^に脳 内^一 血 衆 内 濃 度が平 衡^に達し， そ の時脳 内^一 血梁 内 濃 度比 くkp 働 は そ れ ぞ れ 1 5．1士4．7 く平均 値^{士S D}， n ^こ19l ， 2 2．2 を 示 し た． C M P によ る脳 内5 H T 代 謝の変 化を， 5 H T， T R P く^try p t^opha nJ， 5 H I A A く5⁻hydr o xyindole a c etic a ci dl ^の3 種の ア ミン の脳 内 濃 度^{お よ び プロ ベ}ネシ ツ ド法^によ る C M P 脳 内 濃度と 5 H I A A 蓄 積 濃度の関係か ら調^べた． まずイ^ンド^{ー ル}ア ミ^ン く5 H T， T R P，

5 H I A Al の脳 内濃 度^では急性， 慢 性 投 与 共5 H T，T R P 濃度は^{コ ン}ト^{ロ ー} ル群と有 意差な く， 5 H I A A 濃度 の み が急 性， 慢 性 投 与群の両 方でコ ント^{ロ ー} ル群^に比し て有 意 くPく0^．旺 に低 下し て^いた． 慢 性投 与 群で

はwith dr a w al によ る変 化は 3 種 共な^かった． プロ ベネシ ッド法^によ る脳 内C M P 濃度と脳 内5 H I A A 濃

度の関係は， 急 性 投 与群^{で は E こEm a x ．CS}l くC^S十11 Ql， Em a x ^ニ1 0 0， S ^ニ1．2 3 士 0^．0 2 5， Q ^こ0^．0 0 0 1 83 士 0−0 0 00 1 1 慢 性 投 与 群で は E ^ニEm a xl^．C^SパC^S＋11 Q l ^＋Em a x2， Em a xl^こ1 0 0， S ^ニ1．29 士0．0 7 1， Q ^ニ 0⁻0 0 02 1 6士0⁻0 0 01 4， Em a x2 ^ニー3 0くE は C M P の阻 害効 果 ^{C は C M P}脳 内溝鼠 S，Q は定 数ぅの関係が

成立し， 明ら か な 用量依 存 性^は急性 投 与群で の み見ら れ た^． 本結 果か ら， C M P のインド^ー ルア ミ^ン代謝に

対す る影響は， 急性 投 与で は 用 量依存 性の代 謝抑 制， 慢 性 投 与^{に つ い}て は低 濃 度で促 進， 高 濃度で抑制の 2相性であること が わかった． 特^に後者の場 合は， 何ら か のレ セプ タ^ー の関 与す る可能 性が 示唆さ れ た．

Eey ^{w o r}ds C M P

，5 H T，5 H I A A ， 操 う^つ病^， ア ミン仮 説^{， レセプ タ ー}

う^つ病は精 神科日常 診 療上最も多^い疾 患の ^一 つで あ り， 遷 延性う^つ病， 軽 症 う^つ病の存 在な ど今日的 問題 も多く有し ている．そ の病 因論に つ いて は，近 年 性 格^一 状況 因を中 心と し た精 神 病理学 的 研 究^りと と もに_， S e r oto nin， n O r adr e n alin e代 謝との関 連を中心 と し た， 生化学 的研 究も盛んであ る^{． 一} 方， その治 療^には 三環系抗う^つ剤 汀 C Al ^およ び 四環 系 抗う^つ剤が主に

使用 さ れ ている．

T C A は 1 9 5 0 年代 末よ り I M P く^imipr a min el が 用^い

ら れ， 以後 多 数の薬 物が使用 さ れ， そ の薬理作 用は

S e r OtO nin やn o r adr e n alin e の シナ プス前 膜^への再と り 込 み阻 害と考え ら れ て き た が， 近 年は慢性 投 与^によ るP ⁻adr e n o c ep to r， 5 H T 2 r e c ep to r に対す る do w n⁻ r egulatio n 仮 説²¹が提 唱さ れて いる．

一 方， 近 年 測 定 技 術の進 歩に伴^い， T D M く^the r a⁻ pe uticdr ug m o nito ringl も T C A で行な わ れ る よ うに

な^った が，抗て んかん薬のよ う な^ホ明瞭な結論は得ら れ て^いな^い． く^ヰ明 瞭な結 論と は有効 血 中漉 度^の設 定う A bbr e viatio n s こC M P

， Clo mi_pr a min e三D M C M P

， de s m eth _ylclo mi_pr a min e三D M I M P， de s^． 1p^{r a}mi n ei E _， effe ct ニE C T ， ele ctric c o n v ulsiv e the r ap y 三³H ， triti um ニ5 H I A A

， 5⁻h_yd_{r o xy}⁻ indole a c etic a cid_ニH P L C ， h igh p^{e r}fo r m a n c e li_quid chr o m atog^{r a}ph_{y 三 5}H T _， 5⁻h_ydr o xy^． try p t^{a m}in ei5 H T O L

，5⁻h_ydr oxy t^ry p t^ophol_i 5 H T P

，5 ⁻h_ydr o xy t^ry p t^opha n三工C 50，50％^{inhib i−}

7 98

そこ で著者^は， T C A のう ち前^シナ プスへの再と り 込^み阻 害が大き^いと さ れ て^いる C M P^{3 1}を 剛 ⁻て， ラッ

トに お い て急 性 慢性 投 与 実験を行ない， その5 日 T 代 謝^への影響と C M P 脳 内一^血祭くpla s mal 内濃 度との

関連を検 討し， よ り合理的な C M P 療 法を検 討す るこ と を目 的と し て本研 究を行な^っ た．

対 象およ び方法

工． 試 薬

C M P くclo mi_pr ami n el ， D M C M P くde s m eth_yl⁻

Clomi pr a min el ，I M P くi mi pr a min el は Ci ba^．Geig y

社よ り提 供を う け た．

5 H TくSe r oto nin c r e atinine s ul_phatel ，5 H I A A ほ^． h_ydr o xyiⁿdole a c etic a ci dl， は A ld rich 社 くU^．S^．Al^． ，

5 H T O L く5⁻hydr o xy try p tophoり， pr Obe n e cid は S igm a 社くU^．S^．A^．l， T R P くし^try p topha nl は半 井 化 学よ り購入 し た^． 他の試 薬は市販の特級ないし高 速 液 体クロ マト グ ラフ ィ ^ー 用 を 用^いた．

工工． 動 物 実験

す ^べ て W ista r 系 雄ラッ ト， 体 重16 0T^{2 0 0}g を 用 い，午前8時 半よ り午 後8時 半 点灯^の1 2 時 間の明暗サ イ クルで飼育し た． な^お， 動物は前日午後5時よ り絶 食さ せ， 翌 日午 前9 時半^句1 0時^に実 験を開始し た0

1^． C M P の血 柴内 濃度およ び脳 内 濃 度^の検 討 C M P 1 5 m glkg を腹 壁 皮 下^に投 与 後， 5，1 5，3 0，

6 0， 弧 12 0 分 後に断 頭， 頸 部よ り採 血を行な^い， 血祭 内およ び脳 内 濃度 測定^の試料と し た． 試料^{は −8 00C で} 保存し， 2週 間以内に測 定を行なった^． 以下^の実 験で も同様^の保存を行なった^．

2 ． C M P と 5 H T 代 謝 い 急性投 与 群

イ^ンド^{ー ル}体の脳 内 濃度^のC M P によ る変 化を検 討 す る た め， C M P 1 5 mgJkg を皮 下 投 与2 時 間 後^に断 頭， 採血を行な^い， 全脳は た だ ち^に矢 状 断にて 左右均 等^に2 分 割し， 左方は インド ^ー ル体 測 定用， 右 方は C M P，D M C M P 測定用 と し た^． 対 照 群は生 食を投 与し

たのち同 様の処 置を行な^った．

次にC M P の5 H T 代 謝に 及 ぼ す影 響^を検 討す る た め，M e ek ら^弟の プ^{ロ ベ}ネシッド法を 用^いた^． す な わ ち C M P O．2^へ6 0 mglkg までを皮下投 与し， 1 5 分後^にプ

ロ ベネ^シッド 2 00 mgノk_g を腹 腔 内に投 与し，その2時 tio n c o n c e ntr atio n ニ工M P ， imi_pr a min e ニM _，

間 後に断頭， 採血 を行な い， 前 述の測 定^と同様の処 置を行な^っ た．

2 ト慢性 投 与 群

C M P 3 m glkg，10 mgJk_{g お}よ び 生食 対照群^の3 群

について，

一 日 ^一 軌 1 4 日間連 続 午 前^{9 へ10} 時に皮下 に注射し た後，1 5 日目^に急性 投 与と同様の処 置を行な い検 討し た． ま た， C M P lO m glk_g，1 3 日間投 与後，

2 日間 無処 置の期 間をお いたwith dr a w al 群 を作り，

インド^ー ル体^の脳 内^{レ ベル}， プロ ベネ^シッ ド法によ る 代 謝回転の測 定およ び C M P，D M C M P の脳内，血祭内 濃 度 測 定を行な^った^．

III^． 測定法

1 ． C M P，D M C M P の測 定

Pr e sko r n ら^5Jの方 法^を若 干 変 更して用^いた^． 脳の5 倍量^の ホモ ジェネ^ー ト 0^．2^へ1．O ml に0^．5 N NaO H O^．5 ^旬1^．O ml加え， アル カリ性と し た後， 内 部 棲 準 I M P く血 祭C M P 測 定では 5 0ng， 脳C M P 測 定^では 1 0 0 ngl 含 有^のn⁻hep ta n eJis o a mylalc oholく99^こ1 1

を 5^．O ml加え， 1 時間 振と う抽 出し た． 遠心後上層の

有 機 層^4．5 mi に0．0 5 N H Cl O．1 ml を加え て 3 0 分間 振と う， 抽 出し， 遠心後^の下 層 く水 層ユ2 0^へ4伸l を高 速 液 体ク^{ロ マ}ト グ ラフ ィ ^ー 法 くH P L C フの試 料と し た．

高 速 液体クロ マ ト グ ラ^フは W ate r s社 製，6 00 0 A 型 ポ^ンプ_， U 6 K 型 インジ^ュクタ ^一 に4 4 0 型 2 54n m 固定 波 長 式 紫 外 線 吸 収 計を接 続し， 分 離の た めには Du^．

Po nt社 製Z O R P A X O D S カ ラム く4^．6n m X2 5c ml を 用^いた． 移 動 相は， triehyla min ebuffe rくpH 3．01 とa c eto nitri トを 3 ^こ2 の比率^で混合し， 流 速は1^．5

mlノmin で行な^っ た^．

C M P，D M C M P，I M P の実際^の標 準流 出^パタ ^ーンを 図1 の川に示 し た．I M P，D M C M P，C M P は 6．8，8．8，

1 1．6 分^に分離し， 測定を障 害す る物 質は なかった^． C M P，D M C M P と も 2 5 ^へ4 0 0 ngl^ml までI M P に対す る_pe ak heigh ^{t r ati}o は良 好な直線 性^{を 示 し， その}測 定 限 界^{は 5 n}gノml で あ^った． 図^{1 の}は闇実 際^の試料^か ら^の H P L C 流 出^パタ ^{ー ン}を 示 す^．

2 ^． イ^ンド^ー ル体^の測 定

Ande r s o n らの方 法^{6 1}を若 干変 更し た H P L C 螢 光測 定 法を 用^いた^． 脳を 10 倍量の0^．1M 過塩素 酸^{で ホ モ} ジ^ュナ イ ズ し た後， 冷 却遠心機^{に て}4 0，00仁1X g，30 分 間 遠心後^の上 澄⁴0 ^へ60 メイ1 を測 定用の試 料と し た．

高速 液 体^{クロ マ} ト グ ラフは島 津社 製L C−^{3 A 型 ボン}

m oleニM A O， m O n O a min e oxida s e 三N A，

n o r adr e n alin eニP R O， p^{r O}tri_{p t y}li_{n e三}R E M ， r apid ey^e m o v e m e nt ニT C A ， tricy^clic a nti⁻ depr e s s a nt 三T D M ， the r ap^{e u}tic dr ug ^{m o n}ito ring i T R H ， th_yr otropic r ele a sing ho r m o n ei

T R P

，try p t^OPha nニ^{W ．W ．}g， W et W eigh ^t g^{r a m}

C Io mi pr ami n e の脳内 ^．血祭内 膜度と 5 H T 代謝^に関す る研 究

プ， S I L⁻1 A 型 イ^ンジ^ュ ク タ^一 にR F⁻5 1 0L C A 螢 光分 光器を接 続し， カ ラ ムは Z O R P A X ⁻O D S を 恥 ^一た． 励 起波長2 8 5^{n n l}い^べtンド巾2 0 n ml，測 定 波長345工1 m い^で ンド 巾 4 0 ^{n m}l と し た^． 移 動 相は 0 ^．01M s od iu m a c etatebuffe rくpH 3⁻7J とメタノ ^ー ルを 9 0^ニ1 0 の割 合^で混合し， 1．5 mll mi n の流 速^{に て}測 定し た．

図2 に脳 内の イ^ンド ^{ー ル}体の 分離 状 況を 示 し た^． 5 H T，T R P，5 H T O L，5 H I A A のr et_{e n}tio n tim e．は そ

れ ぞ れ 5^．6，8．8， 12．8，1 4．6 分であ り， 分 離^は良 好^で あ^った． 実際の脳 試 料では，5 H T O L は は と ん ど検 出さ れ ず， 5 H T， T R P， 5 H I A A の3者を測 定^の対 象と し た^．

成 績

工． C M P，D M C M P ^の血源 内^一 脳内 濃 度^{につ いて}

D M C M P

r T l 了 十l

O 4 8 1 2 1 6 M i_{n u}te s

0 4 8 1 2 1 6 M in ute s

F ig⁻1． H i_gh _pe rfo r ma n c e chr o matogr a m of C M P くclo mipr a min eI， D M C M P くde s m ethylclomi pr a⁻

min eL く1Ista nda rds 二I M Pく^imipr ami n el l OO ng，

D M C M P 2 0 0 ng， C M P 2 0 0ngく^．2 H ヨr ain e xtr a cts．

Mobile pha s e こ1％^trieth_yla min ebuffe rくpH 3^．Ou

a c eto nitrile 3ノ2， flo w r ate l^．5mlノ^min．， W a V e

le ng th 2 54n m ，I M Pくisl^ニinte r n al sta nda rd^．

799

凶3 にC M P 15 mglk_g 皮 下投 与 後の C M P 血 祭 札 脳 内濃 度を測 定し た結果を 示 す． 血祭内濃 度は投 与 直 後よ り急速^に減 少し，3 0 分後よ り脳 内^一血 祭 内濃 度比 は ほ ぼ一^一定 値と な り， そ^の値は 1 5^．1士4．7くn ^ニ19う^で あ^っ た． C M P の a ctiv e m etabolite で あ る D M C M P は少量で あ る た め 正確な定量は困難で あ^った が， 2 時 間 後で は D M C M P の血 祭 内 濃 度は 0 ^旬2 8nglml で あった．

II ． C M P と 5 H T 代謝

1 ， 急性 投 与群

11 イ^ンド^{ー ル}体^の脳 内 濃度

図 4 は C M P 急性 投 与後の各インド^ー ル体^の脳 内濃 度を 示 し た も の で あ る．5 H T，T R P で は C M P 群，対照

I I r T

．．

1

一

丁 ⁻l

O 4 8 1 2 1 6 0 4 8 1 2 1 6

M inutes M in ute s

F ig^．2． H i_gh _pe rfo r m a n c e chr o m atog^{r a m o}f indole s． 旧 sta nda rds 二5H T く5⁻h_ydr o x y^， try p ta min eI 3，75 ng， T R P く^try p topha nJ 2 5ng，

5H T O L く5⁻h_ydr o xy try p tophoIJ ^l．2ng，5H I A A く5⁻ h_yd^{r o x}yindole a c etic a cidJ 3．1 ng^． ほ1 Br ain e xtr a cts． M ob ile pha s e 二0^．01 M s odiu m a c etate

buffe rくpH 3^．71J

lm etha n o1 9 0J

Il O，flo w r at_el．5 ^mll m

i n．，T ，Cha nge ofs e n sitivit y^．