ヒ ト末 梢 血 由来 リ ンパ芽 球 様株 細胞 に関す る研 究
10
0
0
全文
(2) 570. 長. 器 に 放 置 し,検. 索 時 に1,000回. 転,. PH7.1〜7.2の1/100Molリ BS)で. 洗 浄 し,少. 5分. 谷. 間遠 沈 して. 川. 晴. Table. 1. Procedure. ン 酸 緩 衝 食 塩 水(P 量 のPBSに. of. immunofluorescence. staining. 再 浮 遊 し た.次. い A). で1枚. 巳. Preparation. of. cell. smears. の カ バ ー ス リ ッ プ(6×32mm)に5×105個. 程 度 の 細 胞 数 を塗 抹 出 来 る よ う に 加 減 し て,カ ス リ ッ プ に 塗 抹 し た.室 分 間 固 定 し,保. 温 で 乾 燥 後,ア. culture. cell. suspension. washed. with. PBS. バー. セ ト ン で10. resuspended. 存 す る こ と な く直 ち に蛍 光 抗 体 の検. 1•~108. 索 に 使 用 し た(Table 2). に20,. 80,. 40, 160,. 2,560倍)に. 640倍(必. 洗 浄 し,さ. anate. (FITC)標. 記 のP3HR‑1. 30分 反 応 させ る.次. ら にfluorescein. isothiocy‑. 識 抗 ヒ トIgG兎. (Behringwerke製)の20倍 30分 染 色 後,封 し た.観. 要 に応 じて さ ら. 稀 釈 し,前. 塗 抹 標 本 の 上 に か ぶ せ て37℃, にPBSで. 稀 釈 液 を か ぶ せ て37℃. 入 剤 を 用 い て ス ラ イ ドグ ラ ス に 封 入. 励 起 方 式 に よ っ た(Table. 価 の 確 認 し て あ るIM患. 1). EBV抗. 1のB).. 者 の 血 清(TS)を. 体. 使用 した. 原の検索. 胞 の 場 合 と 同 じ で あ る4)5).な お,株. 細 胞樹. 立 前 の 培 養 細 胞 に お い て は 培 養 開 始 時 に,リ. ンパ 節. 組織 由 来 の 線維 芽細 胞 に つ い て は 検 索 日の 数週 間 前 らか じ め カ パ ー ス リ ッ プ を シ ャ ー レ 内 に 入 れ. て お き,monolayerを. fixed. with. used. for. cover. room. slips. (6•~32mm). temparature. acetone. for. staining. Determination. 10min.. immediately of serum. EBV. antibody. titers. staining). acetone. fixed. overlaid. with. incubated. smears serial. for. of. P. 3 HR-. dilutions. 30min. overlaid with labeled rabbit incubated,. at. of. 1 cells. test. 37℃. serum. and. washed. な した 細 胞 を アセ トン固 定 し. 1:20 dilution of FITCanti-human IgG globulin. washed. and mounted. with ultraviolet. C) Demonstration. 被 験 培 養 細 胞 の 塗 抹 標 本 作 製 方 法 は 前 節 のP3H. に,あ. at. observation microscope. 塗抹 標 本 の作 製. R‑1細. about. with PBS. UV. な お コ ン ト ロ ー ル と し て あ らか じ め 高EBV抗. B). on. dried. (indirect. グ ロ ブ リ ン抗 体. 察 は ニ コ ン 製 の 蛍 光 顕 微 鏡 を 使 用 し,. 2節. to. 7.2). cells/ml. smeared. 凍 結 保 存 し て お い た 被 験 血 清 を 溶 解 後1/100Mol て10,. PBS. pH. 1のA).. 蛍光抗体染色法. PBSに. in. (at. fluorescence. of EBV antigen. (indirect staining) acetone fixed smears. of test. cells. unlabeled goat anti-human IgG globulin blocking IgG produced in the cells incubated. for. 30min. at. 37℃. and. for. washed. with PBS. た. 2). Igの. ブロ ック. 被 験 培 養 株 細 胞 はIgを の で,ア Gヤ. 産 生 し て い る と思 わ れ る. 37℃,. 30分 反 応 させ る.こ. 中 のIgG産 抗IgG抗 3). 液 を か ぶせ て. の処 置 に よ つて培 養細 胞. 生 細 胞 は ブ ロ ッ ク さ れ,. FITC標. 反 応 と し て,被. 洗 浄 し,. 験 塗 抹 標 本 にTSの10倍. 30分 反 応 さ せ る.次. 10〜20倍. か ぶ せ て 再 び37℃,. 色 後 同 様 に 洗 浄 し,ス. 検 鏡 した.観. 1:20 dilution of FITC-labeled rabbit) anti-human IgG globulin incubated,. washed. goat. (or. and mounted. よ. 30分 染 色 を 行. ラ イ ドグ ラ スに 封 入 し. 察 は 各 株 細 胞 と も 染 色 標 本2枚. D) Demonstration of immunoglobulin-product ion (direct staining) acetone. 識 抗 ヒ トIgG. 兎 或 い は ヤ ギ グ ロ ブ リ ン 抗 体(Behringwerkeお びHyland製)を. 稀. い でPBSで2回. 稀 釈 のFITC標. proven. observation. 蛍光抗 体染色法. 釈 液 を37℃,. う.染. 識. 体 と は 反 応 し な く な る.. 第1次. with the. incubated and washed. セ ト ン 固 定 の 塗 抹 標 本 に 無 標 識 抗 ヒ トIg. ギ グ ロ ブ リ ン 抗 体(Hyland製)原. 1:10 dilution of serum high EBV antibody titer. 以上作. fixed smears. of test. cells. appropriate anti-human or IgM. dilution of FITC-labeled rabbit globulin specific for IgG, IgA. incubated,. washed. observation. and mounted.
(3) ヒ ト末 梢 血 由 来 リンパ 芽 球 様 株 細 胞 に 関す る研 究. 製 し,各 々500〜1,000個. の細 胞 を観 察 し,そ の 中 の. 蛍 光 を発 す る細 胞 の百 分 率 を求 め た(Table 3節. 免 疫 グ ロブ リ ンの検 索. EBV抗. IgA,. werke製)の. IgM兎. 倍 健 康 成 人 の 正 常 範 囲 と み な した6)7) 2). 培 養 を試 み たdonorの. 抗体価. 培 養 を試 み た 患 者 お よ び正 常 人35名 の抗 体 分 布 は. 原 検 索 の場 合 と同 様,各 培 養 細 胞 の アセ. トン固定 塗 抹標 本 を作 製 し, FITC標 gG,. 1のC). 571. Table. 2の ご と くで あ る.な お 培 養 は試 み た が,抗. 識 抗 ヒ トI Table. グ ロ ブ リン抗 体(Behring. 2. Distribution various viduals. 各 々 と反 応 させ る直 接 法 を用 い た.各. of. anti-EBV. patients. and. titers. healthy. in indi. グ ロ ブ リン抗 体 は10〜30倍 の稀 釈 液 を用 い,塗 抹 標 本 を37℃, 30分,染. 色 後 洗 浄,ス. 封 入 し検 鏡 した(Table. 3章 1節 1). 血 清EVB抗. ライ ド グ ラス上 に. 1のD).. 実 験成績 体. 正常人の抗体価 The. 測 定 し た正 常 人 は20才 か ら40才 位 まで の健 康 成 人 74名 で,こ の うち男 性 は35名,女. 性 は妊 娠 中 の もの. も含 め て39名 で あ る.男 女 別 抗 体 の 分 布 はFig. 1の. figures. in the parenthesis. of patients from whom. indicate. cell lines were. numbers. established.. 体 の検 索 を行 な わ なか っ た数 名 は,こ の図 よ り除 外 して い る.す べ てのdonorは. 抗 体 陽 性 を示 し,そ の. 抗 体 価 の 分 布状 態 は前 記 正 常 人 の そ れ とほ ぼ 同 じ傾 向 を示 した. IM患 者4名 の 抗 体価 は20倍2名 倍1名. , 80倍1名,. 640. で,こ の うち20倍 と80倍 の 抗 体 価 を示 した3. 名 全 員 よ り株 細 胞 を樹立 し,株 化 の 成 功 率 は4名 よ り6回 試 み3系,. 50%の. 高 率 を 示 した. SMONお. よ び白 血病 患者 で は 各 々8名, ‑160倍. たdonorは1名. Fig. 1 Distributionof anti‑EBV titers in 74 normal individuals (35 males,39 females). 11名 と も抗 体 価 は10. の正 常 範 囲 に あ り , 160倍 以 上 の 高 価 を示 し もみ られ な か った.し か しSMON. 白血 病 患 者 か ら も各 々4系, そ の成 功 率 は38%,. ,. 2系 の株 細 胞 を樹 立 し,. 18%と か な り高 か った.そ の他. 敗 血 症,胃 癌, sarcoidosis,細. 網 細 胞 肉腫 等 の 患 者. 6名 にお いて も抗 体価 は正 常 人 と変 わ りな か っ た が ご と くで, 10倍 よ り40倍 ま で の抗 体 保 有 者 が 圧 倒 的. これ らの 患 者 か らは1系. に 多 く, 80%以 上 を 占 めて い た. 160倍 の 抗体 価 は男. な か った.コ. 性5名,女. 人 ま で6名 の正 常 人 で培 養 を行 な った が,い ず れ も. 性6名(平. この 男 女11名 はIMや. 均15%)に. 見 い 出 され た が,. そ の他 の 特 定 疾 患 に羅 患 して. も長 期 培 養 細 胞 を樹 立 出 来. ン トロー ル と して7ヶ 月 の 乳 児 か ら成. 不 成 功 に終 って い る.. お らず,何 らの異 常 所 見 もみ られ なか っ た. 640倍 と. 3). い う異 常 高値 の 抗 体 を保 有 して い た女 性1名. 40組 の 出 産 時 妊 婦 末 梢 血 お よ び 新生 児 〓 帯 血 の血. は,臨. 妊 婦 お よ び新 生 児 の 抗 体 同 時検 索. 床 的 に も妊娠 直後 とい う こ と以 外 み とめ られ る異 常. 清EBV抗. 所 見 も既 往 疾 患 もな く,こ の 原 因 につ い て は 全 く不. 陰 性 のpair血. 明 で あ る.一 方 抗 体 価 が10倍 に て 検 出 で きな い正 常. まで 陽 性 で そ の新 生 児 に は抗 体 が み られ な い1組 を. 人 も男 女 各 々1名 に み られ,こ の グル ー プは ま だE. 除 い て,他 の38組 は母 子 と も抗 体 陽 性 を示 し,一 般. BVに. に母 親 の抗 体 価 は そ のpairの. 感 染 して お らず 陰 性 と考 え られ る.. 以 上 の 結 果 よ り正 常 人 の90%以. 上 がEBV抗. 体を. 体 価 はFig. 2の. ご と くで あ る.母 子 と も. 清 は1組 の み で あ っ た.母 親 が10倍. 〓 帯 血 の それ と 同 じ. か,わ ず か に高 く,あ る程 度 の 相 関 関 係 が み と め ら. 保 有 し,そ の 殆 ん どの 血 清 が10〜40倍 の 抗 体 価 を示. れ た.こ れ らの抗 体 価 は,健 康 成 人 の そ れ と殆 ん ど. した.し か し160倍 もか な りの 頻 度 に み られ,10〜160. 変 わ りな い こ と も明 らか に な った..
(4) 572. 長. 谷. 川. 晴. 巳. 同程 度 の抗 原 陽 性 細胞 が 検 出 され, EBV抗. 原 はか. な り持 続 的 に存 在 す る もの と思 わ れ る. 他 方Hodgkin病. 患 者 リンパ 節 由 来 の 線 維 芽 細 胞. 3系 で は,い ず れ に もEBV抗. 原 は 見 い 出 され な か. った. 蛍 光抗 体 間 接 法 によ る実 際 の 抗 原 陽 性 細 胞 の 染 ま り方 は細 胞 全体 に ビマ ン性 に蛍 光 を発 す る もの が 多 くみ られ た(写 真2).時. に細 胞 周 辺 にring状. に. 限 局 した蛍 光 も観 察 され た. 3節. Ig産 生 細 胞 の 検 索. 各培 養 細 胞 中 のIg産 Fig. 2. Relation titers. 2節. of. mothers. at. the. EBV抗. EBV抗. of. EBV. in 40. antibody. matched and. time. of. Table. pairs. 4. 生 状 態 はTable. Immunoglobulin. production. cell lines as tested. infants. unofluorescence. 4の. ごと. in OUMS‑. by direct. imm. method. delivery.. 原の検索. 原 はす べ て の株 細 胞 に検 出 され7),そ. 陽 性 細 胞 数 は0.4〜5.4%,平. 均2.1%で. の. あ っ た.由. 来 した 疾 患 に よ って 陽 性 細 胞 数 の 割 合 に殆 ん ど変 化 は な く, SMON患 均4.7%と (Table. 者 よ り樹 立 したOUMS‑13が. 平. わず か に高 値 を示 した 程 度 で あ った 3). 又OUMS‑16株. 化 前 に お け るEBV抗. 原 は,末 梢. 血塗 抹標 本 お よ び7日 目の カバ ー ス リッ プで は 陰 性 Table. 3. Determination itive. cells. escence. of by. EBV. indirect. antigen. pos. immunofluor. method. くで あ り, IgG,. IgA,. 産 生 細 胞 を,各 々0よ て 示 した.最 17日 目 で は 数 千 個 の 細 胞 中 数 個 の リ ン パ 球 とmacr ophageに. 陽 性 細 胞 を み と め,30日. で もそれ よ りわ. ず か に 多 い 陽 性 細 胞 を み と め た.OUMS‑11aと‑11b は 樹 立 直 後 の 培 養52日, %のEBV抗 UMS‑3,. 51日. ‑5の. よ う に,. ら にO. た が,産 生 細 胞 の 割 合 は0〜50%以. 1年 以 上 経 過 し て い て も. 以 上 を 占 めて い たOUMS‑5の 〜10%ま. 類 のIgの. も遅 く樹 立 したOUMS‑16は1回,他. の す べ て の株 細 胞 は い ず れ も2〜3回. 動 した.例 え ば始 めIgA陽. 目 に は す で に1.3〜1.2. 原 保 有 細 胞 が 見 い 出 さ れ た.さ. IgMの3種. り50%以 上 ま で6段 階 に分 け. 検 索 を行 な っ 上 まで か な り変. 性 細 胞 が 全 細 胞 の50% よ うに,次 回 には5. で 低 下 し, 3日 目 に は全 く陰 性 に な って し. ま っ た例 もみ られ た..
(5) ヒ ト末 梢 血 由 来 リンパ 芽 球 様 株 細 胞 に関 す る研 究 しか し全 般 的 に は株 細 胞 に よ って あ る程 度 産 生 す るIgが. 定 ま っ て い て,例 え ばIM由. Aが 最 も多 く,IgGは. 来 の3系 はIg. 産 生 して い な い か,産 生 し. て いて もわ ず か しか 見 られ な か った. 同 一SMON患. OUMS‑13で. じ くSMON由. 来の. は,株 細 胞 の樹 立 よ り前 の 培 養21日 目. にIgMを5〜10%,. IgGを0〜0.5%み. 細 胞 樹 立 前 で もIgを. 産 生 して い る こ と を確 認 した. なおIg陽. した 状態 に お く と,そ れ の60%は. 出 生 後3ヶ 月 以 内. 抗 体 を 保有 して い るが,8〜10ヶ. 月 後 に は 抗 体 をな. 生 後 減少 して つ い に 消失 す る もの と解 され るが,人. も少 数 な が ら合 成 して い て. ほ ぼ同 一 の 傾 向 が み られ た.同. と を明 らか に して い る.赤 ん 坊 猿 を生 後 外 界 と隔 離. く して し ま う とい う.こ れ は母 猿 よ り貫 った 抗 体 が. 者 由 来 のOUMS‑11aと11bは,. どち ら も3種 類 のIgと. 573. とめ,株. 性 細 胞 の 蛍 光 色 素 に よ る染 色 程 度 は 陽 性. 間 に お い て も同様 に母 親 よ り胎 盤 を通 過 して きたE BV抗. 体 が,出 産 後 次 第 に消 失 す る こ と を示 唆 して. い る.し か る に生 後1年6ヶ 再 び上 昇 し,満2〜3才. 月 以 後,抗 体 保 有 率 は. ま で に幼 児 の80%がEBV. 抗 体 陽性 とな り,以 後Fig. 1の よ うに陽 性 率 は90%. 以 上 を維 持 して い る.こ の 理 由 と して2つ の 可 能 性. 細 胞 の 割 合 が 多 い と き,特 に50%以 上 の場 合 に 著 し. が考 え られ る.第1は. く蛍 光 を発 し,そ の 細 胞 の 内部 構 造 も明 らか で は な. が 出産 後 次 第 に消 失 す る と, EBVの. いが,逆 に 陽 性 細 胞 が 少 な い場 合 は蛍 光 は 弱 く,細. 母 親 よ り貰 った 乳 児 のEBV 初 感 染 を受 け. (水平 感 染)乳 児 は あ らため て 抗 体 を産 生 す る.第. 胞 内の 部 位 によ って 蛍 光 の 差 が み られ た.し か し,. 2は 妊 娠 中 にす で に胎 盤 を介 して 母 親 よ りEBVが. 胞 体 内 に 限 局 した り,細 胞 周 辺 部 の み に蛍 光 を み と. 胎 児 へ 感 染(垂 直 感 染)し て い るが 抗 体 産生 は み ら. め た こ とは な く,核 の 上 も染 め 出 され る場 合 もみ ら. れず,出 生 後 免 疫 機 構 の 発 達 に伴 な い,体 内 に 潜 伏. れ た(写 真3).. して い るEBVに 4章. 血 清EBV抗. 考. 対 す る抗 体 を産 生 す る.. ア メ リカ に お い て は思 春 期 に な って 始 め てEBV 察 抗 体 保 有 率 は80%の 体 の 検 索 よ り,こ の ウ ィル ス は 世 界. に よ る と, IMは. レ ベ ル に達 す るが, Evansら12). 唾 液 を介 して のEBVの. 水平感染. 各 国 に普 遍 的 に 伝 播 して い る こ とが 明 らか に され て. の可 能 性 が 強 い.又 開 胸 術 の 際 体 外 循 環 や 大 量 の 輸. い る が,今 回 の 検 索 か ら本 邦 に お い て も,健 康 成 人. 血 を 行 な う と,術 後IMに. の殆 ん どが この 抗 体 を保 有 して い る こ とが確 認 され. るpost‑perfusin. た.. Gerber13)ら. 株 化 に成 功 したdonorの. 抗 体 価 も正 常 人 の そ れ と. 類 似 した 臨 床 症 状 を呈 す. syndromeが. お よ びHenleら14)は. み られ る こ とが あ る. 患者の術前術後の. 抗 体 価 の 変 化 よ り,こ の疾 患 の一 部 はEBVよ. り生. 殆 ん ど変 わ りな く,異 常 に高 い抗 体 価 を示 すdonor. じた もの と考 え,体 外 血 液環 流 や輸 血 と い う異 常 な. は1例. 経 路 か ら も感 染 し得 る こ とを 報告 して い る.. もみ られ な か っ た.. この 結 果 よ り株 細 胞 の 樹 立 に はEBV抗. 体価の高. このEBVの. 感染 経 路 と して,垂 直感 染 と水 平 感. 染 の2つ が 考 え られ るが8)9),も. 西 山 ら15)は本 邦 の 一 地方 で 集 団的 に み られ た泉 熱 の 疫 学 的 な 検索 よ り,こ の疾 患 がEBVに. 低 は あ ま り関係 な い もの と思 わ れ る.. し垂 直 感 染 に よ る. な らば,妊 娠 中 にす で に胎 盤 を介 して ウ ィル ス は母. 症 で あ る こ とを示 唆 し,EBVは. よ る感 染. 時 に は 水 に よ って. 伝 播 す るの で は な い か と推 測 して い る. 以 上 はEBVの. 水 平 感 染 を示 唆す るデ ー タで あ る. 親 よ り胎 児 へ と伝 播 して い る こ と を意 味 す る.妊 婦. が,一 方 垂 直感 染 に 関 して は未 だ そ れ を裏 づ け る記. の血 清 お よ び新 生 児 の〓 帯 血 清EBV抗. 体 を検 索 し. 載 は み られ ず,そ の可 能 性 は あ る もの の殆 ん ど明 ら. 体 陽性 で,母 親 の. か に な って い な い.自 験 に お い て も新 生 児 の大 部 分. 抗 体 と比 較 して,そ の 陽性 率 お よ び抗 体 価 が か な り. が 抗 体 を保 有 して い て,こ の抗 体 は胎 盤 を介 して母. よ く相 関 す る こ とが 明 らか とな った.従. 親 よ り移 行 した もの で あ る と推 測 され た が,こ の抗. た結 果,新 生 児 の95%がEBV抗. って 新 生 児. に み られ た この抗 体 は,母 親 よ り胎 盤 を介 して胎 児. 体 の存 在 がEBVの. に 移行 した もの と解 され る.. 不 明 で あ る.Changら16)は45例. 吉 田 ら10)の成 績 に よ る と,生 後6ヶ 月 〜1年5ヶ 月 まで の 乳 児 の 抗 体 保 有 率 は約40%で. あ り,今 回の. 養 し,1例. 感 染 を も意 味す る の か ど うか は の〓 帯 血 白血 球 を培. も株 化 に成 功 しな か っ た が コ ン トロ ー ル. と して41例 の 同 白血 球 にIM由. 来 の リン パ芽 球 様 株. 成 績 と照 ら し合 せ る と,生 後6ヶ 月 間 に抗 体 保 有 率. 細 胞 の培 養 慮 液 を加 え た とこ ろ,そ の 内 の19例 よ り. が 減 少 す る こ とが推 測 され る. Landonら11)は. 株 細 胞 を樹 立 して い る.こ の こと は〓 帯 血 に はEB. 接 触 して い る猿 は常 にEBV抗. 人と. 体 を保 有 して い る こ. Vが 存 在 せ ず,加 え た リンパ 芽 球 様 株 細 胞 よ り ウ ィ.
(6) 574. 長. 谷. ル ス が 移 行 した こ と を示 唆 す る.. 川. 晴. 巳. 作 用 か ら解 放 され て 賦 活 化 し,抗 原 と して認 識 され る よ うに な るの で は な い だ ろ うか.. 現 在 の と こ ろ,妊 娠 中 に母 体 よ り胎 児 へEBVが 移 行 した とい う確 か な証 拠 は 得 られ ず,水 平 感 染 経. さ らに写 真1で 示 され るよ う に, macrophageに. 路 を介 して伝 播 す る可 能 性 の 方 が 強 い よ うに思 わ れ. 接 触 した リン パ球 に もEBV抗. る.恐. リン パ球 がmacrophageよ. ら く多 くの 場 合 は 乳 幼 児 の 時 期 に不 顕 性 感 染. の形 で感 染 す る もの と解 され る6).. こ と を示 唆 す る.こ. 9系 の 株 細 胞 す べ て に,少 数 な が ら持 続 的 にEB. 原 が み られ た こ とは, りこの 抗 原 を受 け とっ た. う して リンパ 球 へ 入 っ たEBV. は さ らに増 殖 し,抗 原 刺 激 と して そ の リン パ球 に作. V抗 原 陽 性 細 胞 が み と め られ た こ とは,こ れ ら リン. 用 して, blastoid. パ 芽球 様株 細 胞 にEBVが. は な い か と推 測 され る.. か な り長 期 に わ た って 感. transformationを. 起 させ るの で. 染 して い る こ とを示 して い る.こ の ウ ィル ス は未 だ. 株 化 した9系 の培 養 細 胞 にお いて, macrophage. 生 体 材 料 か らは直 接 分 離 され て お らず,株 化 され た. の増 殖 が著 明 で あ った こ と は,こ の仮 説 を裏 づ け る. リ ンパ芽 球 様 細 胞 に お い て の み 検 出 され て い る. E. 所 見 と も思 わ れ る.. BVが. 病 原 ウ ィル ス で はな いか と疑 わ れ て い る後 鼻. 腔 癌17)癌組 織 由 来 の 培 養 細 胞 に は,ガ 着 してmonolayerと. ラ ス管 壁 に密. して発 育 す る線 維 芽 細 胞 様 細. しか し, macrophageと ン パ球 に もEBV抗 ず してEBVが. 接 触 して い な い 少 数 の リ. 原 が み られ, macrophageを. 経. 賦 活 化 した こ と も考 え られ,リ. ンパ. 胞 と,浮 遊 状 態 で 多数 の細 胞 集 塊 を形 成 す る リンパ. 球 に潜 伏 して い た ウ ィル ス が賦 活 化 して,直 接 その. 芽 球 或 い は細 網 細 胞 様 細 胞 の2種 類 が み られ る.こ. リン パ球 に作 用 した可 能 性 もあ る.. の う ち前 者 で はEBV粒. 子 或 い は 抗 原 は 陰 性,後 者. ヒ ト由来 の リン パ芽 球 様 株 細 胞 にIgが. 産 生 され. で は 陽 性 で あ る と い う18)19).又 自 験 のHodgkin患. て い る こ とは 多 くの 諸家22)23)24)25)26)に み と め られて. 者 由 来 の3系 の 培 養 細 胞 に お いて も,線 維 芽 様 細 胞. い るが,そ の 産 生 され て い るIgの. と リンパ 芽球 様 細 胞 が み られ たが,同 様 に前 者 で は. て は 一 定 で な く,報 告者 に よ って い ろ い ろで あ る.. 全 くEBV抗. 1966年 始 め て これ に つ い て 記 載 し たTanigakiら22). 原 をみ と めず,後 者 で はす べ て の系 に. 数%の 抗 原 陽 性 細 胞 を み とめ て い る.こ の 結果 もE. は,検 索 し たBLお. BVは,リ. べ て1〜3種. ン パ芽 球 様 細 胞 に の み存 在 す る こ と を示. 唆 す る もの と思 わ れ る. 染細 胞 が す べ て リンパ. 芽 球 様 細 胞 で あ る こ とは,こ の ウ ィル スの 感 受 性 細 胞 が リンパ球 系 に 限 られ て い る こ と を意 味 して い る の で は な い か とい う.さ. らにEBV感. 染 細 胞(リ. ン. パ 球)が 生 体 外 に分 離 され た場 合,他 の 細 胞 は次 第 に死 滅 す る が,こ の細 胞 だ け はin vitroで 無 限 に増 殖 を続 け る よ うに な っ て,株 細 胞 の 樹 立 に至 るの で. 培 養 の初 期 にmacrophageの. 出現 と増 殖 を み とめ, リ ンパ球 が密 接 な接 触 状. 態 を有 して い て,こ のmacrophageと. リン パ球 が,. 株 細 胞 の樹 立 に何 らか の 役割 を 演 じて い るの で は な い か とい う こ と を前編 に お い て 記載 した. 今 回 の蛍 光抗 体 によ って,さ らに このmacrophage と リンパ球 の 一 部 に培 養17日 以 後EBV抗. 原 をみ い. 出 した こ と は,こ の 推 定 を支 持 す る知 見 と思 われ る macrophageは. 単 球 或 いは リンパ 球 が 変 化 し た も. の と考 え られ て い るが20)リンパ 球 が 培 養 状 態 で変 化 してmacrophageと BVはNadkarniら21)が. 産 生 して い た が,く. み られ,さ. りか え. 生 細 胞 にか な りの変 動 が. らに方 法 に よ ってIgの. 種 類 も変 化す る. こ と を報 告 して い る. OUMS株. 細 胞 で もIgG,. のIgの. うち, 1〜3種. IgA,. IgMの3つ. 類 を産 生 して い る こ とが 証. 明 され た.し か し1つ の 株 細 胞 を経 時 的 に 検 索 す る と産 生 す るIgの MS‑5の. 種 類 に変 化 が み られ,例. え ばOU. よ うに,始 め の2回 の 検 索 で はIgAが. 陽 性 で あ った が, 3回 目に は 全 く陰 性 と な る例 も存. は な い か と記 載 して い る.. 以 後 数 週 間macrophageと. よ び白 血 病 由 来 の 培 養 細 胞 はす. 類 のIgを. し検 索 を行 な う と, Ig産. 日沼 ら8)に よ れ ばEBV感. 種類や量 につい. な り,そ の 中 に潜 伏 して い たE 指 摘 した ように.宿 主 の 抑 制. 在 し,こ の よ うな 変 化 に つ い て は現 在 は っ き り しな い. OUMS‑13が. ま だ株 化 され て い な い 培養 開 始3週. 間 目 に お い て,す で にIgGとIgMの2種. 類 のI. gを 産生 して い るこ とが証 明 され た が,Chessinら 27)は末 梢 血 の リ ンパ球 をin vivoで 短期 間 培 養 す る と, Igを MS‑13の. 産生 す る こ とを 明 らか に して い る. OU 場 合 も株 化 前 のIg産. 生細 胞 は,末 梢 血 よ. り移 行 され た リンパ 球 系 細 胞 よ り産 生 され た もの と 解 され る. 蛍 光 抗 体 陽 性 細 胞 の染 ま り具 合 や 蛍 光 部 位 は一 定 して い な か っ た. EBV抗. 原 陽 性 細 胞 で は, ring状. に特 異蛍 光 を 発 す る もの,細 胞 質 肉 や核 内 に い ろ い.
(7) ヒ ト末 梢 血 由来 リン パ 芽球 様 株 細 胞 に 関 す る研 究. ろ な 形 で 一 部 分 特 異 的 に光 る細 胞 もあ り,こ れ は抗. な い もの と思 われ る. 原 は培 養2〜3週. 後 よ り培 養 細 胞 中. の リン パ球 お よ びmacrophageに. 5). 出現 し,株 細 胞樹. 原 が 同 部 に局 在 して い る た め と思 わ れ る.又 細 胞 全 体 がdiffuseに Ig産. 染 め 出 され る もの もみ られ た.. 生 細 胞 で も細 胞 全 体 がdiffuseに. しか も特. 異 的 に強 く蛍 光 を発 す る こ と が 多 く,こ の傾 向 は特 にIg産. る. 6). 結. 語. transformationを. 起 し,リ ン パ 芽球 様細. 胞 に 変 化 させ た もの と推 測 され る. 7). 体 お よ び リン パ. 原 とIg産. 培 養 初 期 に リ ンパ球 お よ びmacrop. 中 で 増 殖 し,リ ンパ球 に 抗 原 刺 激 を与 えて. blastoid. 蛍 光抗 体 法 を用 いて 血 清EBV抗 芽 球 様 株 細 胞 のEBV抗. 生 細 胞 を検 索 し,. 8). 健 康 成 人 の 殆 ん どはEBV抗. 体 を保 有 して い. 樹 立 され た 株 細 胞 は す べ て1〜3種. す べ て の 株 細 胞 は そ の 原 疾 患 の ちが い に 拘 ら. ず,非 常 に類 似 した 未 熟 な リンパ 芽球 様 細 胞 で あ る こ と, EBVを. る. 出産 時 の新 生 児 も殆 ん どがEBV抗. 体 を保 有. して お り,こ れ は 胎盤 を介 して母 親 の抗 体 が 移 行 し. 類 のIg. を産 生 して い る.. 次 の よ うな結 論 を得 た.. 2). EBVは. hageの 5章. 1). EBV抗. 立後 も長 期 に わ た っ て数 パ ー セ ン トの 割 合 で存 在 す. 生 細 胞 が 高 率 にみ られ る場 合 に 著 明 で あ っ. た.. 575. 保 有 して い る こ と,Ig産. 生 して い. る こ とか ら培 養 細 胞 の 起 原 は 末 梢 血 中 の リンパ 球 に 由来 す る もの と して 推 測 され る.. た もの と推 測 され る. 3). EBVの. 感 染 細 路 は 垂 直 感 染 と水 平 感 染 の2. 稿 を終 え るに あ た り,御 指 導,御 校 閲 い た だ い た. つ が 考 え られ るが,水 平 感 染 に よ る可 能 性 が 強 い も. 恩 師,平 木 潔 教 授,並. の と思 わ れ る.. しま す.. 4). 株 細 胞 の 樹 立 とEBV抗. 体 価 とは 直 接 関 係 は. 文 1) Epstein, Barr, 2). M.. A.,. Achong,. Y. M.: Lancet,. Priori,. E. S.,. 232,:. D. J.,. 1,:. 床 病 理,. 5). Henle,. and. 6). 医 事 新 報, 7). 学 の あ ゆ み,. 9). 長 谷 川 晴 已,坪 78,:. New Biol.. Nat.. J.. 545‑549,. R. Jr.,. 橋 寿,須. 27‑29,. 82‑83,. 田 野 玲:内. 科,. 田 輝 彦,三. 25‑26,. 1971. 本. Eng. 木 潔:医. 15). 1971. 26,:. 好 勇 夫:医. 1970. 学 のあゆ. J.. B.,:. J.. 1971.. C.,. New Eng.. and. J. Med.,. 1968.. P., Walsh, and Purcell,. J. Med.,. 西 山 貞 夫,西 島 健 治,後. 420‑424,. 1970.. L.. J. H., R. H.:. Rosenblum, Lancet,. Scriba,. M., Jo. yner, C. R., Harrison, F. S., von Essen, R., Paloheimo, J., and Klemola, E., New. 1968. 田 輝 彦,平. 12,. Niederman,. R. W.:. 1121-1127,. 田 野 玲,日. 46,: 881-884,. 1,: 593-596, 1969. 14) Henle, W., Henle, G.,. Bacteriol.. 藤 恒 久:日. 72,:. and Malan,. Inst.,. A. S.,. 279,:. 玉 貞 介,葉. 学 の あ ゆ み,. J. C.,. Cancer. 13) Gerber, E. N., 1969.. J.. 井 宏 己,児. Mc Collum,. Virol,. W.:. 好 勇 夫,坪 77,:. 日 沼 頼 夫,葉. 沼 頼 夫:医. 1969.. 2312,:. 8). み,. 17:. 田 野 玲,高. 長 谷 川 晴 已,三. 吉 田 国 司,酒. 11) Landon,. Yamaguchi, J., J.. Henle,. 1248‑1256,. 日 沼 頼 夫,葉. Myers,. 1967.. 葉 田 野 玲:臨 G.,. L.,. Blakeslee,. 4). 91,:. M.,. J. T. Jr.:. 1045-1051,. 10). 12) Evans,. Konn,. and Grace,. and. 1971.. Y.,. Wudarski,. G.,. 献. 702-703, 1964.. J. R.: Nature. 61-62,. 3) Hinuma,. B.. 1,:. Dmochowski,. B., and Wilbur,. び に三 好 勇 夫 講 師 に深 謝 い た. 65,: 16). 282,:. 岡 品 子,西 藤 敦,川. 村 明 義:日. 1417‑1425,. Chang, nkenship,. R.. 1068-1074, 岡 久 寿 弥,平. 1970. 山 雄,浜. 本 医 師 会 雑 誌,. 1971. S.,. W.:. Hsien, J.. Nat.. M.. H.,. Cancer. and Inst.,. Bla.
(8) 576. 長. 47,: 497-483,. 谷. 川. 晴. 1971.. and Pressman, 97,:. 17) Old, L. J., Boyse, E. A., Oettgen, H. F., de Harven, E., Geering, G., Willi. S.,. L. J.,. Macrophage, 21-30,. J.. Henle,. : Int. J. 22) Tanigaki,. The. 26) Oboshi,. Philadelphia,. Hinuma, S., Nadkarni,. W.,. Henle,. Cancer, N.,. G.,. 6,:. Yagi,. Studies. J. J.,. Clifford,. 10-17,. Y.,. 27) Chessin,. Klein,. R.,. P.. 1970.. Moore,. 458-468,. of lymphoblastoid. human peripheral Part. blood. cell. lines. J. Immun.,. Thorbecke,. and Miles,. C.:. G. J., Cancer. de. Res.. 1969. Seido,. T.,. Y.:. Gann,. 60,: 427-432,. L. N., P.. W.:. Old. Hatano,. Glade, D.,. P. R.,. Reisfeld,. R.,. and. 1969. Asofsky, R.,. and. J. Immun, 101,:. 1968.. derived. from. leukocytes.. 11. Immunofluorescence. Harumi. G. J.,. S.,. Baker,. Terry,. G. E.,. Science,. E. A.:. B. D., E.,. A.. 1967.. 29,: 823-836,. 1970.. 21) Nadkarni, G.,. Les & Febiger,. R. S.:. R. A.:. Rabson,. 1966.. and Boyse,. 308-319,. Harven,. 1971.. I.,. J. D., Thorbecke,. 25) Clarkson,. 19) 高 田 満,川 村 明 義:日 本 医 師 会 雑 誌,. Immun.,. Finegold,. and Manaker,. 99,:. N. N., and Weiser,. J. L.,. 24) Wakefield,. J.. 1966.. 152,: 1259-1261,. 221,: 771-772, 1969. 65,: 1369-1379,. D.:. 634-646,. 23) Fahey,. amson, B., and Clifford, P.: Proc. N. A. S., 56,: 1699-1704, 1966. 18) de-The, G., Ambrosioni- J. C., H. C., and Kwan, H. C.: Nature,. 20) Pearsall,. 巳. study. by HASEGAWA. Department of Internal Medicine, Okayama University Medical School (Director:. Prof. Kiyoshi HIRAKI). Three types of investigations by the immunofluorescence method were performed. EB virus (EBV) in various sera and EBV antigen in the nine lymphoblastoid cell tested by the indirect method and production of immunoglobulin in these cell lines direct method. 1) It has been shown that the virus is widely disseminated among normal persons. Antibody to lines were was by the in Japan.. 2) Newborn infants possess EBV antibody on delivery. This antibody is probably transmitted from mother to fetus via the placenta. 3) There is no difference in EBV antibody titers between normal individuals and donors from whom the lymphoblastoid cell lines were established. 4) EBV antigen appears in a small number of lymphocytes and macrophages within a few weeks after initiation of peripheral leukocyte cultures. 5) All the established cell lines persistly demonstrate a few percentage of EBV antigen-positive cells. 6 ) All the cell lines produce two or three classes of immunoglobulin but the proportion of the stained cells varies considerably during long-term culture..
(9) ヒ ト末 梢 血 由来 リ ンパ 芽 球様 株 細 胞 に関 す る研 究. 577. 写 真 説明 写 真1. 培 養17日 目にEBウ. 写 真2. リ ンパ芽 球 様 株 細 胞(OUMS‑16)に. 写 真3. ィル ス抗 原 陽 性 を示 したmacrophageお. リンパ 芽球 様 株 細 胞(OUMS‑13)に 光 が 認 め られ る.蛍 光 抗 体 直 接 法.. お け るEBウ. よ び リンパ 球(T.O.).蛍. 光抗体 間接法. ィル ス抗 原 陽 性 細 胞.蛍 光 抗 体 間 接 法.. お け る免 疫 グ ロブ リ ンIgM産. 生 細 胞.細 胞 内 の 所 々 に 特 異 蛍.
(10) 長. 谷. 川. 晴. 巳. 長 谷 川 論 文 附 図.
(11)
関連したドキュメント
If immunoglobulin is released into the medium from degenerating cells, a high percentage of immunoglobulin- positive cells may result from these cells continuing
In this study, I transplanted the EGFP-labeled GP into an ectopic position, the animal hemisphere of wild-type embryos, and investigated whether or not
of neratinib-resistant cell lines from HER2-amplified breast and lung cancer cell lines.. using various drug
こ の論文は、EBER1 とEBER2 が異なる機能を果たしているこ とを初めて示した点で重要 であ
・BARF1 蛋白質 が検出されず、残り 2 例に低レベルでの発現を認めた。そこでBARF1 の蛋 白 質 とし て の 発現を さらに検 討するた めに、 NPC 由 来EBV 陰性細 胞株であ る CNE1
To assess the global difference of DNA methylation levels between LCLs and PBCs, I performed a hierarchical cluster analysis using the methylation data of 400,240
そこで我々は、PBCs の 192 検体と LCLs の 92 検体から常染色体 DNA を採取し、Human Methylation 450 K array を用いて DNA
Lymphoblastoid cell lines from typically developed children (TD-C) (N = 20) and children with ASD (ASD-C) (N = 20) were cultured with PBS or human ghrelin (0.01 µM) for 24 h, and
