免 疫 動 物 諸 臟 器 抗 体 の 抽 出 法 に 就 て 第 一 編
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(2) 2068. 平. 松. 哲. 夫. 出 法 を 詳 細 実 験 し比 較 研 究 し た 結 果 浸 出 液 と. じた後氷 結 或 は加 温 した後 一夜 氷 室 に放 置 し. し て 生 理 的 食 塩 水 を 使 用 し,臓 器 乳 剤 を56℃. 翌 朝 強 力 遠 心 沈 澱 し て 其 の 上 清 を10倍. 2時 間 加 温 後 氷 室 に24時. 液 と し て 実 験 に 供 した.. 間 静 置 した る上 清. に 於 て 免 疫 体 抽 出 量 の最 大 な るを 確 認 し て 居 る.亦 永 田 氏16)は浸 出 液 と し て, 20%に 糖 を 添 加 したTyrode氏. 葡萄. 液 を使 用 して更に 多. 2). 抽 出 液 としては 生 理的 食塩 水 其他 種 々. な る も の を 使 用 した が 各 々0.5%の. 余 は 組 織 細 胞 が 氷 結 融 解 に よ り強 く破 壊 さ. 割 に石炭. 酸 を 混 入 した. 3). 量 の 免 疫 体 を 抽 出 す る事 に 成 功 した.. 稀釈. 加 温 の 為 に は 重 盪 煎 を 使 用 した .氷 結. せ しめ る 為 に は 食 塩 と 氷 片 に よ り約‑15℃. れ る事 実 か ら氷 結 融 解 に よ り免 疫 体 が 臓 器 細. に 冷 却 し た.氷 結 後 の 上 清 は 強 力 遠 心 す る も. 胞 か ら遊 出せ しめ 得 る事 に 想 達 し 緒 方 教 授 御. 透 明 に な ら な い 事 が あ る が 其 の 場 合, Seitz. 指 導 の下 に免 疫 体 抽出 の実 験 を行 ひ聊 か 興味. の濾 過器 を 使 用す れ ば溶 血反 応 並 に血 球凝 集. あ る新 しい 成 績 を 得 た の で 茲 に 報 告 す.. 反 応 に は 不 都 合 の な い 迄 に 透 明 に す る事 が 出 来 る がSeitzの. 第2章. 實 驗材 料 並 に實 驗 方法 第1節. 1). 免. 量 が 多 少 減 少 す る の は や む を 得 な い.亦56℃ 15分 加 熱 す れ ば 透 明 な 上 清 を 得 られ る の で 此. 疫. 免 疫 動 物 と し て 体 重2000〜2500gの. 健. 康 な る成 熟 家 兎 を 選 び 免 疫 原 と し て は 新 鮮 な る山 羊 血 球,〓. の実 験で は 非働 化 の意 味 を 含め て総 て 抽出液 は56℃15分. 第4節 第 一項. 山 羊血 球並 に〓 血 球 は三 回以 上 食塩 水. を 以 て 洗 滌 後10%に 5cc宛4日 3). 間 加 温 後 実 験 に 供 し た.. 血 球 並 に 海 〓 腎 乳 剤 を使 用 し. た. 2). 濾 過 器 を 使 用 す る と抽 出 抗 体. 稀 釈 した ものを 一回 量. 間 隔 を 以 て 耳 静 脈 に 数 回 注 射 し た.. 反応 検 査 方法. 血 球 凝集 反 応. 血 球 凝 集反 応 を 検す るには 臓器 抽 出液又 は 血 清 の 逓 減 的 稀 釈 液 を 入 れ た 各 試 験 管 に5% 血 球 浮 遊 液 を2滴. 宛 滴 加 し37℃. の孵 卵 器 に. 海 〓 腎 は 細 切 し10倍 量 の 食 塩 水 を 加 へ. 2時 間 静 置 後 更 に 氷 室 に 移 し翌 朝 成 績 を 判 定. て 乳 鉢 で 磨 砕 し,軽 く遠 心 沈 澱 後 其 の 上 清 を. し血 球 全 体 が 一 つ の 塊 とな り試 験 管 底 に 沈 降. 10cc宛4日. せ る も の を(〓),液. 間 隔 で 腹 腔 内 に3回 第二節. 1). 注 射 し た.. 血 球 の 塊 が 浮 遊 せ る もの を(〓),肉. 臓器 乳 剤製 法. 免 疫 家 兎 は 最 後 の 注 射 か ら7日 後 頸 動. 放 血 の 終 了 直 前 予 め37℃. に 加温 せ る. 生 理 的 食 塩 水 を 「カ ニ ュ ー レ」 を 通 じ て 反 対 側 頸 静 脈 よ り注 入 し て 体 内 の 血 液 を 可 及 的 流 出 せ しめ た.. 血 液 の 流 出 せ ざ る に 至 る迄 行 つ た. 開 腹 して 取 出 し た る所 要 臓 器 は 更 に 水. 道 水 流 水 下 に8〜16時. 別 け の つ く迄 凝 集 せ る もの を(+),肉. か に 見 別 の つ く もの を(±),陰 (‑)と. 第二項. 溶 血 反応. 間 洗 滌 した る後 生 理 的. 臓 器 抽 出 液 又 は 血 清 の 逓 減 的 稀 釈 液, 血 球 浮 遊 液 及 び2単 た る 後37℃. 2.5%. 位 の補 体 を各等 量混和 し. の 孵 卵 器 に2時. 間放 置後 氷室 に. 移 し 翌 朝 成 績 を 判 定 し た.成. 績 の記 入 には 完. 全 溶 血 を(〓),強. を 取 除 き,胎 児 圧 搾 器 に 装 し砕 滅 し更 に 乳 鉢. 血 を(〓),弱. で 充分 磨 砕 して半 流動 体 の臓 器乳 剤を 得 た.. (‑)と. 1). 性 の ものを. せ り.. 食 塩 水 で 洗 滌 し,濾 紙 の 間 に挾 ん で 充 分 水 分. 第三節. 眼的に. 溶血 反 応 を検 す るには 先づ 補 体価 を測定 し. 生 理 的 食 塩 水 の 体 内 灌 流 は 頸 動 脈 よ り最 早. 3). 眼 的に見. は 分 りに く い が 凝 集 鏡 で 拡 大 し て 見 れ ば 明 ら. 脈 よ り放 血 致 死 せ しめ た. 2). の 中に 中等 度 の大 きさの. 度 溶 血 を(〓),中. 溶 血 を(+),完. 等 度溶. 全溶 血 阻止 を. した.. 抗 体 抽 出 法 第3章. 上 記 の 如 く し て 製 し た 臓 器 乳 剤0.5g. を 採 り種 々 な る浸 出 液4.5ccを. 加 へ て よ く混. 第1節. 実 驗 及び 成 績. 加 温 法 と冷 却 法 との 比 較.
(3) 免疫動物諸臓器抗体の抽出法に就 て. 2069. 前 述 の如 く先 輩 岡 崎 氏 は 臓 器 乳 剤 を56℃. 験 し て 居 る.そ れ 故 岡 崎 氏 加 温 抽 出 法 と余 の. 2時 間 加 温 後 氷 室 に24時 間 静 置 し た る後 分 離. 冷 却 抽 出 法 とを 同 一 材 料 を 使 用 して 各 臓 器 に. した 浸 出 液 に 於 て 抗 体 量 が 最 大 で あ る事 を 実. 就 て 実 験 し次 の 如 き 成 績 を 得 た.. 第1表. 山 羊 血 球 免 疫 家 兎 に 於 け る抗 体 抽 出 法 の 比 較. 血 清 溶 血 素 価6,400. 抽 出液0.85%生. 理 的 食塩 水. 血 清 溶 血 価 に 対 す る百 分 率 は完 全 溶 血 を なせ る稀 釈 凌 に よ り計 算 す 第2表. Forssmann氏. 血 清 溶 血 素 価12,800. 抗 体. に 於け. 抽 出 液0.85%生. る 実. 験. 理 的 食塩 水. 血 清 に 対 す る百 分 率 は 完全 溶 血 せ る稀 釈 度 に よ り計 算 す. 第3表. 鶏血 球 免疫 家 兎 に於け る抽 出法 の比 較. 血 清 の血 球 凝 集 素 価3,200. 抽 出 液0.85%生. 理 的 食塩 水.
(4) 2070. 平. 松. 哲. 夫. 2). 10倍 等 張 食 塩 水. 3). 10%蔗. 種 々な る抽 出 液 に 於 け る. 4). 5.1%葡. 冷却 抽 出抗 体 量の 比 較. 5). 20%葡. 臓 器 抗 体 の 抽 出 は そ れ に 使 用 され る抽 出 液. 6). Tyrode氏. 液(CaCl2欠). の 種 類 に よ り抽 出 抗 体 量 に 多 少 が あ る.余 は. 7). Tyrode氏. 液(CaCl2欠)+20%葡. 冷 却 抽 出 法 に 於 て 下 記8種. 8). 20%葡. 第1〜. 第3表. を通 覧 す るに 冷却 法 は加 温法. に 優 る と も劣 ら ざ る よ い 成 績 を 示 し て 居 る. 第2節. 類 の抽 出液 を使 用. して 同 一 材 料 か ら 抗 体 抽 出 を 試 み た.即 1). ち. 生理 的食 塩 水. 第4表. 第4表. 即 ち10倍 等 張 食 塩 水, Tyrode氏. NaHCC3に. 萄 糖, 20%葡. 液(CaCl2. 萄 糖 溶 液+0.1%. 於 て 他 の 抽 出 液 に 於 け る よ り多 量. の 抗 体 を 抽 出 し得 て い る. 第3節. 萄糖 溶 液 萄糖溶 液. 萄 糖 溶 液+0.1%. 萄糖 NaHCC3. の 溶 液 を 使 用 し て 実 験 した 結 果 は. の 如 き も の で あ る.. 種 々な る抽 出液による鶏血球免疫家兎肝臓並に腎臓越幾斯中の 血球凝集素量比較. 欠)+20%葡. 以 上8種. 糖溶 液. 冷 却 時 間 と抽 出 抗 体 量. 冷 却 法 に 於 て氷 結 の 時 間 の 長 短 が 抽 出 抗 体. 血 清凝集素価6,400. 量 に 影 響 の あ る事 が 考 へ られ る.文 献 に よ る と冷 却 に 際 し て は 細 胞 間 に あ る 水 分 が 先 づ 氷 結 し次 い で 細 胞 内 部 に 及 ぶ の で あ つ て 氷 結 の 程 度 に よ り細 胞 の 破 壊 の 程 度 が 異 な る の で あ る,故 に 氷 結 時 間 の 長 短 と抽 出 抗 体 量 の 関 係 を み る為 に し た 実 験 成 績 は 第5表. に示 す通 り.
(5) 免疫動物諸臓器抗体 の抽出法に就て. 2071. で あ る.. 第5表. 冷 却 時 間 と抽 出 抗 体 量.山. 羊血 球 免疫 家 兎肝 並 に腎 に於 け る実験. 血 清 溶 血 素 価6,400. 即 ち 氷 結 時 間 が15分. 〜1時. 抽 出 液0.85%生. 理的 食 塩水. 氷 結 融 解 とい ふ 細 胞 の 機 械 的 破 壊 作 用 は 之. 間 と 長 くな る. に 従 ひ 抽 出 抗 体 量 も増 加 し て居 る. 1〜4時. を 繰 返 す こ と に よ り益 々強 くな る こ とが 考 へ. 間 で は 最 高 価 を 示 し, 24時 間 後 で は む し ろ 減. られ,従. 少 し て居 る.比 の 事 は 余 の 実 験 しだ‑15℃. の. が 考 へ られ る.冷. 冷 却 で は 細 胞 内 部 迄 充 分 氷 結 す る の に1時. 間. 却15分. 後56℃ 水 浴3分. 第6表. に 示 す 如 き 成 績 を 得 た.. 冷 却 回 数 と抽 出 抗 体 量 第6表. 冷 却 回 数 と 抽 出 抗 体 量. 血 清 溶 血 素 価12,800. を. 1回 と し て 冷 却 を 繰 返 し抽 出 抗 体 量 を 比 較 し. 前 後 を 要 す る と考 へ て 良 い か と思 ふ. 第4節. つ て 抽 出 抗 体 量 に も影 響 の あ る こ と. Forssmann氏. 抽 出 液0.85%生. 抗 体 に 於 け る実 験 理的 食塩 水.
(6) 2072. 平. 即 ち1〜4回. 松. と回数 を増 加 す るに従 ひ抽 出. 抗 体 量 は 増 加 し て 居 るが5回. 哲. 夫. 法 に 依 る時 の 方 が 抽 出 蛋 白 量 が 多 い.. 以 後は 最 早増 加 第4章. して 居 な い. 第5節. 冷却 法 及び 加 温法 に よる. 依 つ て 臓 器 を 冷 却 氷 結 し融 解 す る 抽 出 法 は. 冷 却 法 と加 温 法 に 依 り抽 出 した 各 臓 器 の 蛋 Kjeldahlに. の 成 績 は 第7表 第7表. よ り測 定 し た が 其. に 示 す 如 く各 臓 器 共 各 々 冷 却. 抽 出 メ ヂウ ム. 論. 以 上 の 各 実 験 成 績 か ら食 塩 と氷 と の 寒 剤 に. 抽 出蛋 白 量 の 比 較. 白 量 をMikro. 結. 生 理的 食塩 水. 1). 臓 器 蛋 白並 に 臓 器 抗 体 抽 出 量 に 於 て 加. 温 法 に 優 る と も 劣 らな い 良 い 抽 出 法 で あ る. 2). 冷却 法 に よる臓器 抗 体 抽 出量 は抽 出液. と し て は10倍 Tyrode氏. 等 張 食 塩 水, 20%葡. 液, 0.1%. 萄糖加. NaHCO3加20%葡. 萄糖. 溶 液 が 優 秀 で あ る. 3). 冷 却 時 間 は1時. 間が 適 当で 其以 上 長時. 間 に 互 る も抽 出 抗 体 量 は 増 加 し な い. 4). 冷 却 回 数 は4回. に於 て抽 出抗 体 量最大. とな り,其 以 上 は 回 数 を 増 加 して も抽 出 抗 体 量 は 増 加 しな い. 擱 筆す るに当 りて終 始御懇 篤 な る御 指導並 に御校 閲 の労 を辱 ふ せ し恩師 緒 方教 授 に対 し謹 て感謝の意 を表 す.. 文. 献. 1) Pfeiffer u. Marx, Deutsch. med. Wochenschr. 1898 u. 1901, sowie Zeitsohr. 27, S. 272, 1898 2) Wassermann, Zeitschr. 235, 1894. f. Hyg., Bd.. 9) Sick,. Deutsch.. Arch.. f. kl. Med., Bd. 80,. 1904. f. Hyg., Bd. 18, S.. 10) Emmerich, II Anfl.,. 3) Widal u. Sicard, Ann. de Pinst., T. II, P. 33, 1897 4) Achard u. Bensaude, Arch. de med. exper., 1896, P. 748 5) Emden, Handbuch von Kolle-Wassermann, II. Aufl., Bd. 2, P. 236 6) Foder u. Rigler, Centralbl.. 1909. 11) Mallannah,. Handbuch. von Kolle-Wassermann. Bd 2, P. 236 Centralbl.. f. Bakt.,. I. Abt., Bd.. 42, P. 567, 1906 12) Heim, Aufl.,. Handbuch. von Kolle-Wassermann. II. Bd. 2, P. 236. 13) Weil u Braun,. Biochem.. Zeitschr.,. Bd 17,. P. 337, 1909. f. Bakt.,. Bd.. 23, P. 960 7) Castellani, Ebenda, Bd. 37, P. 381, 1901. 8) Jatta, Zeitschr. f. Hyg., Bd. 33, P. 185,. 14) Jules. Freund,. Journ.. of Immunol., Vol. 14,. P. 102, 1927 15). 岡 崎. 岡 医 雑,第43年,. 16). 永 田. 岡 医雑. 55卷,前. 7号, 1931(昭 編.. 和6年7月).
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