担癌生体における好中球の役割と好中球枯渇化の意義について 第1編 担癌生体における好中球の役割 - 好中球枯渇化抗体(RP-3)と好中球活性化BRM(G-CSF, OK-432)を用いた検討 - 第2編 担癌ラットにおける好中球枯渇化療法の意義と好中球活性化BRM_S(G-CSF, OK-432)を用いた再刺激の腫瘍増殖に及ぼす影響について

Title

担癌生体における好中球の役割と好中球枯渇化の意義につ

いて 第1編 担癌生体における好中球の役割 - 好中球枯渇化

抗体(RP-3)と好中球活性化BRM(G-CSF, OK-432)を用いた検

討 - 第2編 担癌ラットにおける好中球枯渇化療法の意義と

好中球活性化BRM_S(G-CSF, OK-432)を用いた再刺激の腫瘍

増殖に及ぼす影響について( 内容の要旨(Summary) )

Author(s)

若原, 正幸

Report No.(Doctoral

Degree)

博士（医学）乙 第1265号

Issue Date

2001-01-17

Type

博士論文

Version

URL

http://hdl.handle.net/20.500.12099/15004

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氏名･(本籍)7 学位の種類 学位授与番号 学位授与日付 学位授与の要件 学位論文題目 審 査 委 員 若ンf原 正 _{幸(岐阜県)} 博 士(医学) 乙第126L5 号 平成13､年1月17 日 学位規則第4条第2項該当 担癌生体たおける好中球の役割と好中球枯渇化ゐ意義について 集1編 担癌生休における好中球の役割一好中球枯渇化抗休(Rト3)-と -好中球活性化BR山(G-CSF,OK⊥432)を用いた検討一 策2編 _{担癌ラッートにおける野中球枯渇作療法の意義と好中球活性化BRM㌃} (G⊥c即,OK-4台2)を用いた再刺激の腫瘍増殖に及ぼす影苧に ついて (主査) (副査) 豊睦 重久 治脇 佐森 授授 教教 教授 高 見 剛 論 文､内 容 の 要 旨 好中球は生体防御機構のなかで血外来性異物に対しこれを貴会･消化して排除するが,･宿主免疫機構の場で は各種免疫担当細胞やサイトカインを誘導しそ,抗腫瘍作用着発拝する可能性が廟待さ_れている｡ ところで:担癌生如こおける好中球め役割を検討した敦皇の碗究結重から,凍ヰ融ま担癌卓期には抗腫瘍性七, 末期では腫瘍増殖促進性に作用する二面性を示す可能性右指摘し亡き美｡㍉そとで今回,担癌生如こおける好卓球 の役割を好中球枯渇イヒ抗体RP3,■顆粒録刺激因子G-CSF,P ′ぉよび免疫賦活剤OE-43畠を如､,①各薬剤単独投与 時に於ける末梢血好中球数,好中球活性,腫瘍垣殖曲線,生存率あゝら好中球機能を推察した上で(第1編),② RP3を投与して好中球を枯渇化した上で,G-CSF或いはOK-432を併用投与した場合の影響を比較検討し(第2 編),担癌末期における顆粒球除去療法め有用性を推察した`Lム 研究対象と研究方法7 F344系堆ラットにジエチルニトロソアミンで誘発･樹立した転移性肝癌(G舶幻を∴同系ラット背部皮下に 約12.5mg移植して担癌モラルを作成し,移植直後を担癌早期群,14日目を末癌恕と想定して以下め検討を行っ た○①末梢血白血球数,へモグラム分画比から算定したリンパ球数･,好中球数,単核球数,好中線活性 (chemiluminescence法,CL活性)と単位好中球当たりのCL活性｡②腫瘍増殖曲線(長径と短径を経時的に測定 し,平均腫瘍容積を(長径×短径ソ2で壌示),生存白臥 し-なお,末梢血は尾切断法にて採取し･好中球枯渇化抗体は山形大学仙道教授よりハイプリドーマの形で供与さ れたRP3をマウス腹腔内へ移植し,得られた腹水(IgM抗体)を用いた｡また,reCOmbinanthumah G_CSF (rhG-CSF)とOK-432は中外製薬(株)よら供与右受けた｡毎られた測定値はmean±standard｡rtbr(SE)で表 示し,生存白数は1ogrank法で,生存曲線はKaplan-Meier法で/他はStudent,st-teStにて検定し,:5%兼高を 有意差ありと判定した｡ 研究結果 1.RP3,G-CSF或いはOK-432単独投与の場合(第1編) ①健常ラットにRP3を投与すると好中球数とCL活性は有卦こ低下したが,単位好中坪当たりあcL活性の低下 は軽寧であ?た0②担癌ラッ7トにRP3き投与すろと･担癌早期群･末期群とも好中球数とC哨性昼有意に低下 し,腫瘍増殖は早期群で促進が,末期群で抑制が観察され,生存期間も同様傾向を示しノた｡③担癌早期或いは末 期にrhG-CSFを投与すると好中球数とCL活性は有意に増加し,OK-432でも同様嘩向が観察された｡④腫瘍増殖 は担嘩早期投与群で･rhG-CSFは有意の促進号･OK-432は有意の抑制を示し,生存期間はrhG-CSF.で短窮細ゞ, OK-432で延長が観察された0一方,担癌末期に投与した場合も好中球数とCL活性は有意に増加しキが,腫瘍増 殖と生存期間は非投与群に比べrbG-CSFで差がなく,OE-432で有意の抑制効果が観察された｡ ー93i

以上の結果,好中球は担癌早期には腫瘍増殖抑制的に,末期には増殖促進的に作用する可能性が示唆され,担 癌末期でのRP3投与の有用性が示唆された｡一方,G-CSFは担癌早期では腫瘍増殖促進的に,･1LOK-432は増殖抑 制的に作用したことから,担癌早期に存在する抗腫瘍性好中球がG-CSFで骨髄かち動員された幼若型好中球によ り希釈･相殺され,OE-432は細胞傷害性好中球をさらに賦活して抗腫瘍効果考増強した可能性が示唆された｡ 2.RP3投与で好中球を枯渇化後rhG-CSF或いは0鱒-432を併用投与した場合(第2編) ①G-CSFは好中球数とCL活性を有意に増加させたが,OKT432で特有葺の増加は観察されなカ三った｡また,こ

の程度は担癌早期群と奉期群で著差時ケら晒かっ料β腫瘍増殖と生存期剛坤即坪併用で,一層期群は腫瘍

増殖が有意に促進し隼存期間嘩綺しゃが!一.早革酵では撃度の嘩殖抑制与隼存鱒間の延長が観察された｡③OK-432併用投与の場合は,末期群で噂琴抑割主生存壬画?延長が,卓琴群章毎殖促進と生存期間の短縮が観察され

ノ} た｡ ∴ 二 ｢ 丁､LIニ ､ 以上の結果,寧P3で末梢血好中坪を准将化しG-CSFを併用すると,∴骨髄由来の好中球が動員され好中球数の増 加扁Lられたが二末如蕗は腫瘍廟痛意た促臆し長一方,0由早2タ岬の場合は好中球数の増加はみられ ず,残存好中球の賦活により早期群で腫瘍増殖が促進された｡それゆえ,好中球は担癌末期では増殖促進性に早

期では抑制的に作用するが,好中球碍渇化状態で鱒G-CSFとOK-4含叩重なった反応を示す可能性が示唆ぎれた｡

考察と結語

好中球の直接的な抗腫瘍作用の存在嘩だ確認声れて.シ､年いが丁一.担扉早期には細胞傷害性(善玉)に･末期に

は免疫抑制性(悪玉)に作用する可能性が報告さ･れている｡近年,遺伝子組み替え操作による額粒球刺激因子

G十CSFとてざ･好中辞枯渇化抗体RP3の軍場で人為桝こ野中坪野考操作可能とな.り･一鱒嘩夢劉畢q)評嘩が可能となっ

た｡申請者ら?RP3を用いた検討で好中坪中二面性情確認できたが,担嘩早期にq-qSFを投与す.ると骨髄カ†ら動 員された未感作幼弱好中嘩が抗腫瘍性好中評の作用を相殺する可能性と仁木期では腫瘍増殖促進性好中球がG-CSF で動員された未革好中球で声釈され,結果哩こ噂殖抑亭鱒作用草示す可嘩性が推察さ叫たタ∵方,三三OK-432は担 癌早期で昼細昭傷害性好中球を賦挿して抗腫瘍効果車増強したが,末卿;匝免疫抑制性野中球を賦括㌧た結果, 脛嘩増殖が促進された可能性が推察されキ｡■また,好中球枯渇化喋撃でG-CSF或いはOK-432を併用投与した場 合,動員･賦碍された好中球は腫瘍増殖に対し相反する作用を示した｡そのなかで,一▲,.甲3投与で担癌末期の免疫 抑制性好中球を枯渇化後,G-CSFで幼弱系好中球を動員した場合に脛琴増殖が促嘩された琴由車,･担癌早期に細 胞傷害性好中球を枯渇化後,OE-432で残存好中球を賦活して腫瘍増殖が促進された理由の説明は困難である｡ 今後,RP3で枯渇化される好中球の性格と,担癌早期或いは末期の好中球により誘導･産生され尋活性酸素や炎 症性サイトタインの推移などの検索が必要である｡ 結語と･して今回の研究結果,担癌生体での好中球は様々な作用を示すので卜その枯渇化や賦活は,二.特に担癌末 期の癌化学療法施行中は慎重であるべき≒考えられた｡ 論文審査の結果の要旨 申請者一若原正幸鱒担癌生体における好中球の役割を,好中球枯渇化抗体RP3を用い担桓早期には抗腫瘍性に, 末卿こは腫蓼増殖促進性に作用する可能性を明らかi主した｡ま丸RP娘与で野中球を枯鱒化した上で,顆粒球 刺激因子G-CSF卒るい昼争疫賦活剤OK-432を併用投与した場合甲野中坪猟好中球活性,腫瘍増殖曲線,生存 率に及ぼす影響を詳細に検討した結果,好中球は担癌時期により様々な反応を示す可能性右明らかにした｡これ らの結果は,腫瘍による生体侵襲と抗腫瘍作用に於ける好中球の役割を評価する上で極めて示唆に富んだ内容で, ヒト療治療の進歩に少なからず寄与するものと考えられる｡ [主論文公表誌] 担癌生体における好中球の役割と好中球枯渇化の意義について 第1編 _{担癌生体における好中疎ゐ役割一好中球枯渇化抗体(RP3)} Lと好中球活性化BRM(G-CSF,OK- 432)を用いた検討-2000年Biotherapy14:367∼377 第2編 担癌ラットにおiナる好中球枯渇化療法の意義と好中球活性化BRMs(G-CSF,OK一 432)を用いた ′再刺激の腫瘍増殖に及ぼす影響について 2000年Biother如y14:906∼913