Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/
Title
№１３：ラット象牙芽細胞における電位依存性Ca２＋透
過性チャネル発現の検討
Author(s)
小島, 佑貴; 東川, 明日香; 木村, 麻記; 佐藤, 正樹;
澁川, 義幸; 田﨑, 雅和
Journal
歯科学報, 114(5): 508-508
URL
http://hdl.handle.net/10130/3493
Right
目的：露出した象牙質への刺激は象牙細管内液の移 動による象牙質痛を誘発する。近年，象牙芽細胞が 感覚受容器として歯髄ニューロンと神経伝達を確立 することが報告された。象牙芽細胞は transient re-ceptor potential（TRP）チャネルで象牙細管内液 移動を感知し，pannexin チャネルから歯髄ニュー ロンへ ATP を放出することで，感覚情報をニュー ロンに伝達している。一方，近年新たな ATP 放出 チャネルとして calcium homeostasis modulator１ （CALHM１）が報告された。CALHM１は電位依 存性に Ca２＋ と ATP を透過させる。そこで象牙芽細 胞における CALHM１の発現について Ca２＋ 透過性 を指標として検討した。 方法：５−７日齢の新生仔ウィスターラット切歯か ら歯髄スライス標本を作製し象牙芽細胞を得た。脱 分 極 刺 激 は 標 準 細 胞 外 液（Krebs 液）か ら５０mM Na＋ を K＋ に置換した高 K＋ 溶液を 用 い た。細 胞 内 Ca２＋ 濃度（［Ca２＋ ］i）は fura-２の二波長蛍光比で記 録した。CALHM１の antagonist として５０μM Gd３＋ を，電位依存性 Ca２＋ チ ャ ネ ル の 非 選 択 的 antago-nist として５０μM Ni２＋ を用いた。加えて標準細胞外 液から Ca２＋ を除去した溶液，細胞外 Ca２＋ 濃度を０．０１ −２．５mM に調整した細胞外液 を 用 い て，細 胞 外 Ca２＋濃度依存性についても検討した。 結果：象牙芽細胞に脱分極刺激を行うと一過性に ［Ca２＋ ］iは増加した。細胞外 Ca２＋を除去すると脱 分極誘発性［Ca２＋ ］i増加は消失した。脱分極誘発性 Ca２＋流入は，０．０１−２．５mM の範囲で細胞外 Ca２＋濃 度依存性を示し（KD＝０．９mM），５０μM Ni２＋ に影響 されなかったが，Gd３＋ によって有意に抑制された （p＜０．０５；N＝３）。 考察：象牙芽細胞への脱分極刺激が Gd３＋ 依存性選 択的 Ca２＋ 流入を誘発した事から，象牙芽細胞に電 位依存性 Ca２＋ 透過性 ATP 放出経路が存在すると示 唆された。Ni２＋ は T/R 型電位依存性 Ca２＋ チャネル の antagonist であるため，象牙芽細胞における両 者の発現は否定された。 目的：歯科矯正治療中に生じる歯根吸収は代表的な 問題の一つである。近年，歯髄の有無により歯根吸 収程度に差があることが報告され，多くの研究が行 われている。安村らは，メカニカルストレスを付与 した歯根膜細胞に歯髄細胞を共培養し，歯根膜細胞 の RANKL の有意な増加を示した。しかし，メカ ニカルストレス付与した歯根膜細胞と歯髄細胞の関 係性に関する炎症性サイトカインおよび液性因子を 分子生物学的に証明しているものは少ない。本研究 は，メカニカルストレス付与時のラット歯根膜細胞 （PDLC）の反応を，歯髄細胞（DPC）の有無によ る IL-６および液性因子（PGE２）の発現の差異に ついて分子生物学的に検討を行った。 方法：４週齢 SD 系雄性ラットの門歯を抜歯後， PDLC，DPC を 採 取 し 通 法 に 従 っ て 培 養 し た の ち，第４，５継代目の細胞を実験に用いた。PDLC にメカニカルストレスとして２０００rpm の遠心力を ２０分間付与し，DPC と共培養を行ったものを実験 群とした。対照群として，メカニカルストレスを付 与 し て い な い PDLC 単 独 培 養 群，DPC 単 独 培 養 群，DPC との共培養群，メカニカルストレスを付 与した PDLC 単独培養群の４群を用いた。ストレ ス付与後１，３日における PDLC 中の IL-６の発現 を定量 RT-PCR 法にて解析を行い，３日における PDLC，DPC お よ び 培 養 液 中 の PGE２の 発 現 を ELISA 法にて解析を行った。 結果および考察：定量 RT-PCR 法の結果，ストレ ス付与後３日において実験群は，付与していない群 と比較して IL-６の発現量が有意に高い値を示し た。ELISA 法 の 結 果，PGE２に お い て PDLC と DPC それぞれで PDLC 単独培養群，DPC 単独培養 群と比較し，実験群を含む各対照群で有意に高い値 を示した。また，培養液中の PGE２において実験 群は各対照群より高い傾向を示した。以上の結果よ り，DPC の存在がメカニカ ル ス ト レ ス を 受 け た PDLC の IL-６と PGE２の発現を促進し，歯根吸収 を促進する可能性が示唆された。
