液 体 培 地 に於 け る実 験成 績
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(2) 6556. 茎. 田. 芳. 明. 足 水 分 量 を蒸 溜 水 て補 つた 後高 圧滅 菌 後 実 験 に供 し. 10力. た.こ. 先 ずSal. 57Sに つ い て 検 討 す る と 即 ち 力 価6(6/1000. の 場 合 のEDTAの. 中 のEDTAの. 力 価 に 調 整 後 の 寒 天 培地. 終 濃 度 がM/1000の. し2/1000molを. 力 価2と. に 溶 解 せ し めpHの. も の を 力 価1と. して 順 次 名 称 し た.液. 培 地 に お い て はEIDTAは. 価 の 辺 り に 発 育 の 良 否 の 境 界 を 認 め た.(表1). 表1 体. 同 組 成 液 体 培 地 にM/100. 修 正 を 行 な つ た 後 供 試 し た.. そ して この 場 合 も 同 じ くEDTA終 の も の を 力 価1と. 濃 度 が1/1000mol. し以 下 順 次 名 称 し た.. 金 属 イ オ ン: MgSO4及. びFeSO4は. mol)以. 市 販 品 の 可及. 的 純 度 の 高 い もの を 用 い た.尚EDTAと 応 を 検 討 す る と2〜4価. の化学反. の 金 属 イ キ ンで は. 下 で は対 照 群 と変 らず 力価7で. は 薄 く一面. に 無 数 の コ ロニー を 作 る程度 に増 殖 して い る.次 に 力価8の 場 合 には 継 代 可 能 な程 度 に僅 か に発 育 しそ れ よ り高 濃 度 で は全 然 菌 の 発 育 を認 めな か つた.. M+++YH2‑‑=MY‑‑+2H+. 次 にStaph. aureusで. M++++YHZ‑‑=MY‑+2H+ M+++++YH2‑‑=MY+2H+ (Mは. 以 上 で は発 育 は 皆無 で あ つた.. 金 属 イ オ ンYH2‑‑はEDTA). 以 上 の実 験 は保 存株 を純 化 した 上 で 直 ち に用 いた. の 如 くな り, EDTAとMg++,. Fe++イ. ル が 相 互 反 応 量 で あ る た め,金. 属 イ オ ン の 場 合 も終. 濃 度1/1000. Molの. は境 界 がや や 低 い所 に認 め. られ,力 価7で 継 代 可能 な程 度 の発 育 で あ り力価8. も の を 力 価1と. オ ンの等 モ. して 呼 称 し た.. ので あ るが,次 にEDTA加. 培 養 基 に お け る継代 可. 能 な限 界 にお け る菌 を順 次 力 価 の高 い培 養 基 に継 代 して 行 くと表2の 如 き結 果 を 得 た(表2).. 実 験 方法 実 験 材 料 の 項 に述 べ た 材 料 を 用 い て 各 段 階 の EDTA加. 培 養 基(寒. 天 培 地 の 場 合 は 力 価1〜10ま. ブ イ ヨ ン の 場 合 は 力 価1〜15ま も 同 様1〜15ま. で)又. で,ペ. EDTA加. 寒 天培 地 に お け る維代 実 験. て,. プ ト ンの 場 合. 更 に金 属 イ オ ン添 加 培 地 を 作. り これ に 菌 の 培 養 を 行 な う.平. 坂 培 養 の 場合 は 肉眼. に て 発 育 状 態 を 検 討 し‑,±,+,++と (‑は. 表2. 全 然 生 え な い,±. 判 定 し た.. わ ず か 生 え て 継 代 可 能,+. 薄 く一 面 に 無 数 の コ ロ ニ ー を 持 つ 菌 苔 を 生 じ る,++ 対 照 と 変 り な い 程 度 の 発 育)液 比 色 計(島. 津 製A.. L2(580mμ)に 定 し,各. K.. A.. てLight. 体 培 地 の 場 合 は光 電. 5D)を. 用 い フ ィル タ ー. stopping. effctに. 菌 種 に お け る標 準 曲 線 よ りperccの. を 算 定 し.金. 属 イ オ ン, EDTA等. よ り測 湿菌 量. 無 添 加 の 液体 培. 地 に 発 育 し た 対 照 群 に 対 す る%を. 以 つ て 発育 状 態 を. 記 述 し た. Ⅲ. 実. 験. 成. 績. 寒 天 平 板 培 地 及 び 液 体 培 地 に お け るEDTAの 響,そ. れ 等 に 継 代 し た 場 合 の 耐 性 上 昇,及. とMg++, aureusに. Fe++と. の 関 係 等 をSal.. 影. 57S及. びEDTA びStaph.. つ い て検 討 しそ れ等 の結 果 を 各 項 目 に 分. け て 詳 述 す る. 1. A.. 平 板 培 地 に於 け る実 験成 績 EDTA単. 先 づEDTA単. 独添加の影響 独 添 加 は 力 価1(1/1000mo1)よ. 力 価10(10/1000mol)間. に て 検 討 を 加 え た が5〜. り. Sal. 57Sに お いて は初 代 は 力 価8ま で発 育 を認 め 得 たが,力 価7の. もの よ り材 料 を取 り力 価8に 植 え.
(3) EDTAの. 継 ぐ と次 第 に 増 殖 可 能 と な り, 示 す.そ. れ を 更 に 力 価9に. 細 菌 に 対す る影 響 に関 す る研 究 Sa1. 57Sに お い て はMg++イ. 4代 で は++の 発 育 を. 上 げ 継 ぐ と前 の 場 合 よ り. も継 代 数 を 多 く要 す る が9代. に て 力 価9に. 発育す る. 6557. 果 を 示 し,し. か もEDTA力. オ ン添 力1は 謁 価 とMg++力. の 後 は 力 価10の. もの に け継 代 す る も. に お い て+,. 発 育 不 能 で,し. か も力 価9.5を. 調 整 して 実 験 を 試 み. 場 合 と全 く1司様 の 結 果 が 得 られ た.. た が や は り発 育 不 能 で 力 価9がsa1.. 57Sで. 次 にStaph.. て は 初 代 は 力 価7ま. 価6よ. で発育. り材 料 を と りSal. 57Sの. 場 合 に順 じて 力 価 を 上 げ つ つ 継 代 を 行 な つ た が,各. +,. 57Sに. aureusに. 比 し て 多 く要 し,最 高 力 価 は7.5に. 定 力 価7 み 添 加 した. お い て はMg++添. 加 の 影響 が. み の 場 合 は 力 価6で. 7で ± と な つ て い た も の が,推. 6で ± と な り1力. 定 力 価5で+,. 価 だ け低 力価 の方 向 えず れ た結 果. を 得 た.. 段 階 と も対 照 群 と変 わ らな い 発 育 に 到 る ま で の 継 代 数 はSal.. 8に お い て ± とEDTAの. Sal. 57Sと は 異 な り, EDTAの. aureusに. 可 能 で あ つ た が,力. staph.. 得 られ た. 耐 性 の 最 高 で あ っ た.. 価 との. 差 つ ま り キ レ ー ト化 合 物 生 成 後EDTA推. よ う に な る.そ. 著 な効. 次 にFeSO4を. 加 え た 場 合 の 成 績 は 表4に. 示す如. くで あ る(表4).. 留 り そ れ 以 上 は 如 何 に 継 代 して も 発 育 不 能 で あ っ た.. 表4. EDTA加. 又 表 に は 示 さ な か つ た が い ず れ の 菌 に お い て も高. 寒 天 培 地 に 対 す るFe++. 添 加 の 影 響(正. 常 菌). 力 価 発育 菌 を 対 照 培 地又 は低 力価 培地 に培養 した場 合 に は 対 照 群 と変 ら な い 良 好 な 発 育 を 示 し た. B.. EDTA加. 寒 天 培 地 に 及 ぼ す金 属 イオ ン 添 加. の 影響 EDTA加. 寒 天 培 地 で この薬 剤 に よ つて 欠乏 を来 た. して い る 菌 の 発 育 に 重 大 な 障 碍 と な つ て い る だ ろ う と 考 え られ る 金 属 イ オ ンの 中Mg++及. びFe++を. 添 加 し て そ の 影 響 を 先 づ 正 常 なSal. 57S及 aureusに. つ い て 調 べ て 見 た.前. 及 びFe++共. びStaph.. 述 し た 如 くMg++. Fe++添. に そ の1mol.はEDTAのlmol.と 場. 合 と 同 じ くMgSo4又. 液. を 作 成 し,こ. れ をEDTA加. 寒 天 培 地 に 添加 す る 事. に よ つ て(予. め 水 分 を 減 じて お い て す べ て の 組 成 に. は 変 化 の な い よ う に 留 意 し た)そ し た.そ. し た. Mg++の のEDTA. れ 等 の 影 響 を観 察. し て 終 濃 度1/1000mol.の. も の を 力 価1と. 影 響 で あ る が 菌 の 発 育 し得 な い 程 度. 10力 価 寒 天 培 地 を 基 磯 培 地 と して 用 い て. これ にMg++の5,. 4, 3,. 2,. 1.0力. 価 を添 加 し実. 験 を 行 な つ た(表3). 表3. EDTA加. 添 加 の 影 響(正. 常 菌). お いて も推 定 力. 価 と 発 育 度 と の 関 係 が 低 力 価 に ず れ て い る.又sta ph.. aureusに. お い て は 表 に 示 し た 結 果 で はMg++. の 場 合 と 同 様 で あ るが 幾 分 低 力 価 に ず れ た 感 を 受 け た. 以 上Sal.. 57S及. びStaph.. aureus共. 照 菌 を 用 い て 行 な つ た 実 験 で あ る が,次. に正常 な対 にEDTA. 加 菌 培 養 基 に 発 育 し得 る耐 性 菌 を 用 い て 実 験 を 行 な つ た.EDTA耐. 性 菌 と して はsay.. 9力 価 寒 天 培 地 に++に aureusで. 寒 天 培 地 に 対 す るMg++. オ ンに お け る 程 算. 術 的 効 果 が 認 め られ ず, Sal. 57Sに. 完 全 な キ レ ー ト化 合 物 を 生 成 す る た め, EDTAの はFeSO4の1/10mol溶. 加 の 場 合 はMg++イ. はEDTA. 7.5力. す る 菌 を 用 い た. EDTA加. 57SはEDTA. 生 育 す る 菌 を,又Staph. 価 寒 天 培 地 に++に. 生 育. 寒 天 培 地 に は何 れ の 耐 性. 菌 も生 育 し 得 な い10力 価 培 地 で 上 述 の 実 験 の 場 合 と 同 様 に 金 属 イ オ ン 添 加 を 行 な い 表5,表6の. 如 き結. 果 を 得 た. 先 づMg++の 推 定 力 価9以. 影 響 で あ る がSal.. 定 力 価7,. (‑)は. 痕 跡程 度 の生 育. 8, 9で 何 れ も+の. 発. 育 可否 の 点 か らの み検 討 す れ ば算 術 的. 効 果 を 現 わ す が,良 Staph,. はIEDTA. 下 の 培 地 で 十 に 発 育 す べ き で あ る が,. 表 の 如 くEDTA推 育 を 示 し,発. 57Sで. aureueに. 好 な 増 殖 は 見 ら れ な か っ た.. お い て は 推 定 力 価7で. や や 低 力 価 に ず れ て い るがFe++の. ±の発育 で 添 加 影 響 は正.
(4) 6558. 茎. 表5. EDTA加. 芳. 明. 寒 天 培 地 に 対 す るMg++. イ オ ン の 添 加 影 響(EDTA耐. 表6. 田. EDTA加. 図1. ベ プ ト ン培 地 に お け るEDTA添. 加 の影響. 図2. ブ イ ヨ ン培 地 に お け るEDTA添. 加 の影 響. %. 性 菌). 寒 天 培 地 に 対 す るFe++. イ オ ン の 添 加 影 響(EDTA耐. 性 菌) %. 常 菌 の 場合 と 同様Mg++よ. り劣 る結 果 が 得 られ た.. 2. 液 体 培 地 に 於 け る実 験 成 績 1). に おい て普 通寒 天 平 板 培 地 に てEDTA添. の影 響 を 種 々検 討 したが,こ の場 合 はEDTA,金. 加 属. イオ ン等 の 菌 との接 触 の点 に関 して は余 り良 好 と は 云 い難 い,又 発 育度 測 定 に関 して も量 的差 異 を 明確 に区 別 し難 い,よ つて ペ プ トン水 及 び ブ イ ヨ ンにお いて, EDTAそ. の他 金 属 イ オ ン添 加 に よ る 影 響 を. 光 電 比 色計 使 用 発育 菌 量 測 定 方法 に よ り検 討 を 加 え. 対 照 菌(正 常 菌)及. び 平 板 培 地 にて 得 られ た. 殖 し得 る ものStaph.. はEDTA9力. 価添 加に増. aureusは7.5力. 価に増殖 し. EDTA単. 先 づEDTAの. 単 独 添加 は 同組 成 培 地 に 溶 解 した. 用 いてEDTA力. 価0よ. り力 価15(力. 価. 示 す)迄 の 間 を適 当 間 隔. に亘 つ て 実 験 を 行 な い, EDTA無. 添加 培 地 に於 け. る発 育 菌量 に対 す る%を 以 つて 図 示 した.図1,. 2. に ペ プ トン及 び ブ イ ヨンの 場 合 に お け る正常 菌 及 び を総 括図 示 した.. 先 づ ペプ トン水 に お け る実 験 成 績 て はSal. 57S正 常 菌 はEDTA添. 加 の 影 響 が更 に弱 く現 われ,. Staph.. aureueで 価1で. 加 の 影響 が緩 徐 て あ り力 価5で15. 度 に留 る.. はEDTA添. す で に13%に. は 皆 無 と な る. EDTA菌. 加 の 影 響 が 強 く現 低 下 し力 価3で. は発 育. は これ に 比 して や や 低 下. 価 で 皆 無 と な る.. ブ イ ヨ ン の 場 合 はSal. 57Sに. お い て 力 価5て20%. 発 育 を 示 し そ の 後 も 下 降 を 示 し,力 価13で 発 育 度 は 到 達 し,ペ. プ ト ン水 の 場 合 と は や や 傾 向 が 異. つ た. Sal. 57S EDTA菌. 独 添 加 の 影響. Iは 終 濃 度1/1000molを. EDTA菌. はEDTA添. 力 価 を 増 して も30%程. 0%に. 得 る もの を供 試 した.. EDTAを. EDTA菌. 育 を 認 あ て い る.こ れ に比 して. 度 が 少 な く5〜6力. の両 者 を 比 較 しつ つ検 討 した.即 ちEDTA. 菌 と して はSal. 57Sで. A). に近 くな り10%発. わ れ,力. た.. EDTA菌. %発 育 を 示 し,そ の後 も除 々に下 が つ て横 軸 に平行. 価5で35%そ %発. は や は り耐 性 傾 向 を 示 し力. の 後 除 々 に 下 降 し, 12力 価 以 上 で は20. 育 で横 軸 に 平 行 と な る.. Staph. aureusで. は ペ プ トン 水 の 場 合 よ り もEDTA. 添 加 量 が 増 加 す る の み で 同 傾 向 を 示 し,力 育 皆 無 と な り, EDTA菌. 価5で. 発. は こ れ よ り もや や 影 響 が. 少 な か つ た. B). EDTA加. 液 体 培 地 に 対 す る金 属 イ オ ン 添 加. の影 響 固 形 培 地 の 場 合 と 同 様 の 考 え 方 に よ り,大. 量 の.
(5) EDTAの EDTAを. 添 加 して お き これ にMg++を. 細 菌 に対 す る影 響 に 関 す る研究 加 えて 実 験. を行 なつ た.固 形培 地 の 場 合 はEDTAの. 量 は10力. 価 を予め加 え,無 発育 の 状 態へMg++の. 添 加 を行. 図5. 6559. ベ プ ト ン水 に 対 す るMg++添 Staph.. 加 の影 響. aureus. なつ たが,液 体培 地 に て は無 発育 状 態 を 得 る事 が む ずか し く材 料 の 関係 か らも10力 た.こ れ にMg++の. 価 添 加 に と じこ め. 色 々の 力価 を 添 加 し,図3,. 4に 示 す,横 軸 は両 力 価 の 差 に よ るEDTA推 図3. ベ プ ト ン水 に 対 す るMg++添 Sal.. 定力. 加 の影 響. 57S. 図6. ブ イ ヨ ン に 対 す るMg++添 Staph.. 図4. ブ イ ヨ ンに 対 す るMg++添 Sal.. 加 の 影 響. aureus. 加 の影 響. 57S. 菌,. EDTA菌. 共 に25%,. 40%程. 度 で横 軸 に平 行 と. な る. Staph.. aureusに. お い て は ペ プ トン 水,ブ. の 場 合 何 れ もEDTAの 降 す る が, Mg++添. イ ヨン. み の添 加 の 際 発 育度 が急 下 加 時 に お い て も 急 下 降 し,推. 定 力 価 に 対 す る 発 育 度 はEDTAの. み の 場 合 と略 同. 様 で 有 意 の 差 は 見 出 せ な か つ た. C). 価 を もつ て 示 した.尚 これ の対 照 と してA)に るEDTAの. 於け. み添 加 の 場 合 の成 績 を 点 線 を もつ て 示. したが,こ の 場 合 のEDTA力. 価 は実 際 の 力 価 を 示. し対 比 した. Sal.57Sで. はペ プ トン水 に お いて はEDTAの. の場 合 に比 して正 常 菌, EDTA菌. み. 共 にや や上 方 に. 合 成 培 地 に お け る検 討. 上 記 実 験 に よ り 正 常 菌 とEDTA菌. 属 イオ ンの存 否 に よ り差 異 の存 す る事 が分 つ たの で 更 に 完 全 合 成 培 地 を 作 製 し,こ. れ にMg++を. 添加. す る 事 に よ り発 育 度 の 比 較 を 行 な つ た.合. 成培地 と. して は 次 の 組 成 の も の を 用 い 金 属 イ オ ン は 無 添 加 で 後 よ りMg++を. 添 加 し た.. ず れ発 育 良 好 な る成 績 を 得 た.ブ イ ヨ ンの場 合 に は. Na2HPO4. 1.4. EDTA力. KHZPO4. 1.0. NaCl. 2.0. glutamate. 2.5. 価 に よ る菌 の 発育 度 の 低 下が 最 初 は急 に. 低 下 してEDTAの. み 添 加 の場 合 よ り も低 い 価 を 得. た.そ の後 に お い て は著 明 な減 少 は 見 られず,正. 常. との 間 に は金.
(6) 6560. 茎. 田. 芳. 明. aepartate. 5.0. れ る. Sal. 57Sは 約3力 価 の上 昇 を 認 め たが,詳 細. glucose. 2.0. に検 討す る と正 常 菌 で は9力 価 で++, 9.5力 価 で−,. tryptophan. 0.02. (蒸 溜 水1,000ccに こ れ にMg++イ. 10力 価 で.と9価 溶 解 しpH. 8.0に. 修 正). オ ン を 添 加 し正 常 菌 及 びEDTA. 菌 を 培 養 した 成 績 は 表7に. 示 す 如 くで あ る.. 以上 で は如 何 に継代 す る も発 育は. 全 く認 め られ な い.即 ち限 界 は 不 連 続 的な 態度 を示 しそ の間 に移 行性 が 認 み ら れ な い. Staph. aureus で は1.5力. 価 の 上 昇 を認 めSal. 57Sよ り も少 な く. 限 界 に お け る態 度 もや は り57Sの 場合 と同様であ つ た .金 属 欠 乏 状 態 に対 して 菌が 耐性 を保 有 して来. 表7. るの は,抗 性 物 質 に対 す る耐 性 上 昇 とは異 な り必 要 物 質 の欠 乏 に対 す る抵 抗 で あ るた め正 反 対 と云 え る. 金 属 イオ ンは大 部 分 酵 素 反 応 に対 す る触 媒 作用 で あ るが, EDTAに. 対 して 抵 抗 力 を 上 げ て 来 るの は 利. 用 し得 る金 属が 減 量 され て来 て も,こ れ に馴 化 して 僅 か の金 属 イオ ンを 触媒 と して 用 い て代 謝 回 転 をか ろ う じて 行 わ しあ て い るか,又 は 別 の系 路 を 形成 し て 代 謝 を 行 な つ て い る と考 え られ る.し か し金 属 イ 正 常 菌 に お い て はMg++イ. オ ンを順 次 増 量 す る. に つ れ て 発 育 菌 量 は 次 第 に 増 加 す る が, に お い て は1/50000mol.添. EDTA菌. 加 に て も急 に 発 育 菌 量. は 増 加 し,正 常 菌 と の 間 に 著 差 が 存 す る が そ の 後 の Mg++増. 量 に 対 して 正 常 菌 よ り は 良 好 な 発 育 を 示 し. オ ンは 不 可 欠 の もの で あ るた あ或 る一 程 度以 上 の欠 乏 は酵 素 反応 を皆 無 とせ しめ全 く発 育 不能 を来 す も の と考 え られ る. 次 にEDTA過. イ オ ン添 加 を行 なつ た場 合で あ る が, Sal.57Sで は Mg++を. 著 差 は 認 め られ な くな る.. 量 を 添加 せ しめて お き これ に金 属. 使 用 した場 合 はEDTAとMg++と. の差 即. ち推 定 力 価 に対 す る 菌の 発 育 度 はEDTA添. 総 括 及 び 考 按. 加 のみ. の 時 の 力価 に対 す る発 育 と略 同 様 で あつ て, EDTA Sal. 57S及. びStaph.. 寒 天 平 板 培 地,ペ. aureusを. 供 試 菌 と して普 通. プ トン水 及 び ブ イ ヨ ン に 金 属 と キ. レ ー ト化 合 物 を 生 成 す るEDTA(ethylen tetra acetate)を し,更. にEDTA加. 添 加 して 発 育 に及 ぼす 影 響 を検 討 培 地 に 発 育 し た 菌 を 継 代 す る事. に よ り 得 ら れ たEDTA耐 した)が. diamine. 性 菌(EDTA菌. を 記 述. こ れ 等 培 地 に 如 何 な る態 度 を 示 す か も併 せ. 検 討 した.. (1/1000mol.終. 濃 度 を1力. た 場 合, Sal. 57Sは8力 Staph.aureueに. EDTA添. オ ンが 数 量 的 に キ レー ト化4G物 を 形成. してい る事 を 示 し,又EDTAそ. の ものが 菌 に対 し. て 発育 抑 制 効 果 を 示 さない 事 を推 察 せ しあ 得 る.し か しStaph. aureusの. 場 合 はや や低 力価 にず れ る傾. 向 を 示 が,こ れ はEDTAそ. の ものの 発 育 抑 制 効果 が. 存 す るか,又 他 に複 離 な 作 用機 作が 存在 す るの か も 知 れ な い. Fe++添. 加 の場 合 はMg++イ. オ ン添加. に 比 して 数 量的 な 関 係 が得 られ な か つ た.. 先 づ 普 通 寒 天 平 板 培 地 にEDTAを. た.こ. とMg++イ. 添 加 して. 価 と す)菌. の発 育 度 を 見. 価 で 同 程 度 の 発 育 を 認 め,. て は7力. 価 で 同程 度 の 発 育 を 認 め. の 成 績 よ り す る と, Staph.. aureusの. 加 に 敏 感 で あ り換 言 す れ ば,金. 方 が. 属 イオ ン. 次 に液 体 培 地 に 於 け る実 験 成 績 で はペ プ トン水, ブ イ ヨン両 培 地 共 固型 培 地 に比 してEDTAの. 小 量添. 加 に よつ て 急 激 に 発育 量 の 減 少 を認 め,特 にStaph. aureusで. は 急激 で あ りSal. 57Sと の間 の 差 異 が明. 瞭 に 現 わ れ,金 属 イオ ンの要 求 度 の 差 異 が関 係 す る もの と考 え られ る.. に かか る培. 両 培 地間 に お け る差 異 を詳 細 に比 較 す れ ば ブイ ヨ. 地 に 発 育 し得 た 両 菌 を 順 次 継 代 し て 耐 性 菌 を 求 め た. ン培 地の 場 合の 方 が減 少度 がや や 緩 除 で あ りブ イ ヨ. が,そ. ンの 方 が 金 属 イ オ ン が 多 い 事 を 示 し て い る.又. の 要 求 度 が 高 い も の の 如 く で あ つ た.更. の 成 績 で はSal,. 57Sで. に 良 好 な 発 育 を 示 すEDTA菌 Staph. EDTA菌. aureusに. 昔 と非 常. を 得 る 事 が 出 来,. て は7.5力. が 得 ら れ た.こ. は 力 価9で. 価 に て++の. 発育を示す. の 点 か ら もStaph.. aureus. の 方 が 金 属 イ オ ン に 対 して 要 求 度 の 大 き い 事 が 窺 わ. EDTA耐. 性 南 と正常 菌 との比 較 で は前 者 の 方 が常. に 発 育 が よ く耐 性 上 昇 を 明 らか に示 して お り,特 に Sal. 57Sに お い て は そ の間 の差 異 が大 であ る. 又Sal. 57Sに お い て正 常 菌, EDTA菌. 共 に力価.
(7) EDTAの. 細 菌 に対 す る影 響 に 関 す る研 究. を上 げ る につれ て発 育 曲 線 は横 軸 に平 行 とな るが, これ はEDTAと. 金 属 イ オ ン とが キ レー ト化 合 物 生. 成 を行 なつ た場 合少 量解 離 して お り この量 にてSal.. Stapb.. 6561. aureusで. は6力. 変 らな い 発 育 を 示 す の は5力 2). EDTA加. を 強 め て い く とSal.. 57S正 常 菌 に お いて,ブ イ ヨン培 地 の場 合の み は13. は7.5力. 力価 で 発育 が認 め られ な くな り,ペ プ トン水 の場 合. る.こ. と全 く趣 を 異 にす るが,こ れ は ブ イ ヨン中 に は糖類. られ な か つ た. 3). 57Sは9力. EDTAと2価. 金 属 イ オ ン は 同 モ ルが 相 互 反. か と推 量 す る.. ン(Mg++,. これ に金 属 イ オ ンを 添加 して見 掛 上 のEDTA力. 価. aureus. の力 価 以 上 で は 如何 に継 代 す る も発 育 は認 め. 応 量 で あ る た め, EDTA過. 過 量 を加 えて お き,. 価, Staph.. 価 迄 対 照 と変 らな い良 好 な 発 育 を示 す に至. ンを必 要 とす る機 作が 原 因 となつ て い るの で はな い. 平 板培 地 の 場 合 にEDTAの. 価 で あ つ た.. 寒 天 培 地 に 継 代 し 順 次EDTA価. 57Sは 発 育 を示 す もの と 考 え られ る.し か しSal.. その他 の要 素 が存 しこれ等 の代 謝 に 大量 の金 属 イオ. 価 ま で発 育 可 能 で対 照 と. Fe++)の. 量 添加 培 地 に 金 属 イ オ. 添 加 を 行 な つ て 行 き,キ. ー ト化 合 物 生 成 後EDTA推 育 度 を 観 察 し た. Mg++添. レ. 定 力価 に 対 す る 菌の 発 加 の 場 合Sal.. 57Sに. ては. を 減 じて行 く実 験 を 行つ たが これ と同様 の考 え 方 で. 推 定 力 価 に 対 す る 発 育 はEDTAの. 液体 培 地 を 使つ てMg++添. 力 価 に 対 す る 発 育 度 と全 く同 様 で あ り算 術 的 効 果 を. 加 につ き実 験 を 行 な つ. た成 績 で はSal. 57Sで は いつ れ の 場 合 に お い て も. 示 し, Staph.. EDTAの. Fe++添. み の 添加 に比 して 発育 量 は 増 強 して お り,. 特 に推 定 力 価 の大 な る例 に お いて 差 異 が大 き いの は 解 離 に よ るMg++イ. オ ンの 残 存 が大 と な るた め に. か か る成績 を得 た と考 え られ, EDTAそ. の もの の. 作 用 は認 め ら れ な い.し か しStaph.. aureusに. お. aureusに. て は 僅 か 下 方 に ず れ る.. 加 の 場 合 はMg++添. 加 に 比 べ て算 術 的 効 果. を 示 さ ず 強 く下 方 に ず れ る 成 績 を 得 た. 4). ペ プ トン 水 及 び ブ イ ヨ ン に お い てEDTA添. 加 の 影 響 を 観 察 し た が,. Sal. 57Sで. に よ り 除 々 に 発 育 度 減 少 し,一. い て は著 明 な差 異 は 認 め られ な い が,や や 低 く出 る. 度 が 減 少 し な くな り, Staph.. 傾 向に あ りEDTAの. で 急 激 に 減 少 し,4〜5力. EDTA耐. み の 作用 が 幾分 現 れて くる.. 性 菌 は明 らか に 金 属 イオ ンの 減 少 に 耐. え得 る菌 で あ る事 は推 定 し得 た が,更 に これ を確 か め るた め,無 金 属 合 成 培 地 を 作 り こ れ に 少 量 の Mg++添. 加 に よ る発 育 量 を検 討 した が, EDTA菌. は1/50000,. 1/10000mo1.(終. 濃 度)の 添 加 で 発 育. 量 は急上 昇 を 来 た し 正 常 菌 に 比 してMg++イ. オン. の少 量 で発 青 良 好 な結 果 を示 して い る.. EDTA耐. 5). EDTA過. Mg++添. イ オ ン とキ レー ト化 合 物 を生 成 す る. EDTA(etlny len diamine tetraacetate)を 培 地 に 添加 し,こ れ 等 培 地 に お け るSal. 57S及. びStaph.. aureueの. 発育. 状 況 を 観察 し,次 の 如 き結 果 を得 た. 1). 普 通 寒 天平 板培 地 にEDTAを. Sal. 57Sは8力. 価(1力. 添加 した 場 合. 価 は 終 濃 度1/1000molを. 示 す)ま で 発 育 可能 で あ るが,対 照 と変 らな い発 育 を示 す の は6力 価 迄 で あつ た.. aureueで. は少 量 添加. 価 で 発 育 皆 無 と な る.尚. 量 添 加 ペ プ トン 水 及 び ブ イ ヨン に. 加 を 行 う と, EDTA推. 育 度 はEDTAの. 定 力 価 に対 す る発. み 添加 の場 合 の 力価 に 対 す るそ れ. よ り良 好 で あ つ た. 金 属 イ オ ン 無 添 加 合 成 培 地 に お け るSal. 57S. 者 はMg++の. 細 菌 の生 活 条 件 に必 須要 素 と考 え られ る2価 金 属. 加. を 認 め た.. 6). 論. はEDTA添. 定 力 価 以 上 で は発 育. 性 菌 は 正 常 菌 に 比 して 発 育 良 好 で あ る事. の 正 常 菌 とEDTA耐. 結. み添 加 の 場 合 の. 性 菌 の 発 育 を 比 較 す る と,後. 少 量 添 加 で 著 明 に 発 育 す る. (参 考 文 献 は 第2編. の 末 尾).
(8) 6562. 茎. Studies Part. I. on. Influence. 田. 芳. Influence. 明. of Edta. of EDTA. on. to Bacteria Growth. of. Bacteria. By Yoshiaki Department. Kukida. of Microbiology, Okayama University Medical School (Director: Prof. Sakae MURAKAMI). In order to investigate the effect of EDTA on the growth of bacteria, EDTA and bivalent metalion were added to the media in fixed proportion. The growth of Sal. 57 S and Staph. aureus were studied on this madia and the following results were odtained. 1) Sal. 57 S were able to grow on nutrient agar media containing up to 0.008 M EDTA. The rate of growth was the same as the control up to a concentration of 0.006 M EDTA Staph. aureus was able to grow on nutrient agar media containing up to 0.006 M EDTA. The rate of growth of Staph. anreus was the same as to the control up to a con centration of 0.005 M EDTA. 2) After repeated transfers the Sal. 57 S was capable of growing on media containing 0.009 M EDTA. Staph. aureus also showed an ability to grow in higher concentration of EDTA, i. e. 0.0075 M EDTA. The rate of growth of the subcultured organisms mentioned above was the same as the control. However, in higher concentration of EDTA no growth was observed, even with the subcultured organisms. 3) Since the equal mols of EDTA and bivalent ion are equivalent, the excessive mot of EDTA must exist in media in free when mot of bivalent ion was added in smaller amount than mot of EDTA. The auther would express the excessive mot of EDTA as "pos sible concentration of EDTA". The relationship between "possible concentration of EDTA" and the growth of organisms was studied having cholated EDTA by Mg++ and Fe++ By chelation of Mg++ the rate of growth of Sal. 57 S was proportional to "possible concentra tion of EDTA" as well as to "true concentration of EDTA", that medned the concentration of EDTA added with no chelation. In the same test using Staphs aureus the rate of growth was somewhat inferior than expected rate of growth. However, in chelation by Fe++ the rate of growth against "possible concentration of EDTA" did not correspond to "true con centration of EDTA", but the rate was exceedingly inferior. 4) The effect of addition of EDTA to peptone water and bouillon. was studied.. The. growth of Sal. 57 S was gradually decreased by the addition of EDTA, but up to a certain concentration no decrease was observed. The growth of Staph. aureus was completely in hibited at concentrations of 0.004-0.005 M EDTA, but only small concentration was nesces sary for partial inhibition. The rats of growth of EDTA resistant bacteria was superior than normal bacteria. 5) The rate of growth of bacteria to a "possible concentration of EDTA" was superior than the rate of growth to a "true concentration of EDTA". The rate of growth mentioned above was observed in peptone water and bouillon media chelating by Mg++. 6) By contrast, normal Sal. 57 S and synthetic media the EDTA resistant bacteria only a small amount of Mg++. EDTA resistant showed marked. Sal. 57 S on metal ion free growth with the addition of.
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