COX－2 図7－1＝マクロファージにおける酸化L肌による15d－PGJ，生成量の検討

RAW264．7細胞に“材料と実験方法”に示したように10μMのNS－398、10　FtMのmeloxicam、20μMの PD98059と10　pCMのSB203580で1時間前処理後（A）、またはDN－ERKI／2、　DN－p38MAPK、　LacZを 感染後（B）、またはCOX－2　siRNAを細胞内に導入後（C）、40μglmlの酸化LDLを添加し、24時間 培養後、“材料と実験方法”に示したようにEIA法にて、15d－PGJ2を測定した。結果は4回の実験を 平均化し、平均値±標準偏差を表した。“，p＜0．Ol，対対象の細胞群　†，　p＜0．Ol，対　LDL添加の細胞 群

41

A

　　　　　　（幽葦Oε

■Oрn圃q川■m）」」超一5一一〇〇邸」一＝

20

15

10

5

o

Ox－LDL ^{（一） （＋）}

B

　　　　　　含∈、Oε

一〇рn■N口m）」」6■5■一〇〇6」U＝

20

15

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o

Ox－LDL ^{（一） （＋）}

図7－2：マクロファージにおける酸化LI）しによるPGE2、　PGD，の検討

RAW264．7細胞に40μg！mlの酸化LDLを添加し、24時間培養　“材料と実験方法”に示したようにEIA 法にて、PGE2（A）、PGD2（B）を測定した。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表し た。”，p＜0．Ol，対対象の細胞群

　　　　（嘱儲ω6Ω眉剛O↑隔⊃」匡》

あ呂》旧り060＝旧噌り‘旧ρ．眉⊆邸O旧一匡イ帖店」

20 18 16 14 12 10

8 6

2 o

Z　Ga14－chimera　PPARct 國Ga14－chimera　PPARγ

15d－PGJ・｛醐｝《一｝

5

図7－3：マクロファージにおける15d－PGJ2によるPPARα、　PPARγ活性化の検討

RAW264．7細胞に15d－PGJ2を示した濃度添加し、24時間培養後、“材料と実験方法”に示したように、

PPARα、　PPARγリガンド結合活性を測定した。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表し た。㌦ρ＜0．Ol，対対象の細胞群

　　　　　　42

7一（5）Apo：Eノックアウトマウスの動脈硬化病変におけるCOX－2、15d－PGJ2発現とPPARα、

PPARγ活性化の検討

　まず、通常食を24週間与えたApoEノックアウトマウスとWTマウスの血漿脂質を比較検

討した。血漿のTotal　cholesterol（TC）はApo：Eノックアウトマウスで約7倍に上昇していた。

一方、HDL－cholesterol（HD：L－C）、中性脂肪（TG）には差を認めなかった（表4）。

Body　weight　（g） TC　（mg／dl） TG　（mgldl） HDレC（mg／dl）

WT　（n　＝10）

apoE一’一　（n＝　9）

24．4±3．8

25．8±4．2

65土18

499土82＊

60土22

55士27

46士8

48±6

　　表4：WTマウスとApoEノックアウトマウスの血漿脂質プロフィール

　　結果は、4匹の結果を平均化し、平均値±標準偏差を表した。“，p＜0．Ol，対　対象

　　TC　，　total　cholesterol；　TG，　triglycerides；　HDL－C，　HDL　cholesterol．

　次に動脈硬化病変を組織学的に検討した。ApoEノックアウトマウスの大動脈洞には、

WTマウスと比較してOil　red　O陽性の明らかな動脈硬化病変が存在しており、またこの動脈 硬化病変部には、マクロファージの局在に一致した酸化：LD：しの存在を認めた（図8－1）。

　さらに、ApoEノックアウトマウスマウスと、　WTマウスの大動脈洞のCOX－2、15d－PGJ2 の発現、PPARα、　PPARγ活1生化を検討したところ、　WTマウスに比しApoEノックアウトマ

ウスではCOX－2、15d－PGJ2発現が増加しており、PPARαの転写活性は2．55倍、　PPARγの転写 活性は2．28倍に増加していた（図8－2）。

43

纏

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鯵鱒綿、』

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