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図8－2：ApoEノックアウトマウスにおけるCOX・2、15d－PGJ2発現、　PPARα、　PPARy活性化の検討　ApoEノックアウトマウスから、大動脈洞を採取し、A，“材料と実験方法”に示したように、COX－2 の蛋白発現をウェスタンプロット法にて検討した。B，採取した大動脈洞を“材料と実験方法”に示したように、EIA法にて15d・PGJ2を検討した。　C，採取した大動脈洞を“材料と実験方法”に示したように、ELISA法にてPPARα、　PPARγ活性化を検討した。　＊．ρ＜0．Ol、対　対象の細胞群

7一（6）マクロファージにおけるPPARα、　PPARγ阻害による酸化L，DしによるABCA－l　mRNA

発現の検討

まず、酸化LDLによるPPAR．α、　PPARγ活性化に対するPPARα、　PPARγアンタゴニストの適正濃度を検討するため、PPARαのアンタゴニストGW6471、　PPARγのアンタゴニスト TOO70907の酸化LD：しによるPPARα、　PPARγ活性化に対する抑制効果を検討した（図9－1）。

GW6471は0．5μMの濃度でPPARγのリガンド結合活性に影響することなくPPARαのリガ

ンド結合活1生を抑制した。しかし、1pMの濃度ではPPARαリガンド結合活性だけでなく、

PPA：Rγリガンド結合活1生も完全に抑制した。一方、　TOO70907は0．Ol　pM以上の濃度で酸化

LDLによるPPARγのリガンド結合活性を完全に抑制した。意外なことに、1μMのTOO70907

はPPARαのリガンド結合活1生を増加した。これらのことから、　PPARαを特異的に抑制する GW6471の濃度は0．5μM、　PPARγを特異的に抑制するTOO70907の濃度は0．OlμMと考えられ

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図9－1酸化LDLによるPPARα、　PPARγ活性化に対するPPARα、　PPARγ阻害剤の効果

RAW264。7細胞に示す濃度のPPARαの阻害剤GW6472（A）、PPARγ阻害剤TOO70907（B）を示した濃度

添加し、24時間培養後、　‘‘材料と実験方法”に示したように、PPARα（●）、PPARγ（▲）リガンド結合活性を測定した。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表した。“，p＜0．Ol，対対象の細胞

群

　次に、酸化LDLによるABCA1発現におけるERK　1／2、　COX－2の役割を検討した。マウスの

腹腔マクロファージにおいて40μ9／mlの酸化LDLはA：BCA1のmRNA発現を著明に増加させ、

その効果はCOX－2の阻害剤NS－398（NS）、ERK1／2の阻害剤PD98059（PD）にて抑制を受

けた。また、0．5μMのPPARα阻害剤GW6471（GW）、0．01μMのPPA：Rγ阻害剤TOO70907では、この増加を部分的に抑制し、PPARα、　PPARγ共に抑制することにより相加効果が認め

られた。同様の効果を、PPARα、　PPA：RγのsiRNAを用いて検討した。　PPARα、　PPARγのsiRNA

46 処置にてマクロファージ内のPPARα、　PPARγ発現はそれぞれ72％、77％に減弱した。また、

PPARγのsiRNAはPPARγ1、　PPARγ2ともに抑制した。このPPARα、　PPARLγ　siRNA処置細胞で

は、コントロールと比較して、酸化LDLによるABCA1のmRNAの発i現を著明に抑制し、

PPAR．α、　PPARγともに阻害することにより相加効果が得られた（図9－2）。

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ドキュメント内熊本大学学術リポジトリ Kumamoto University Repositor Title マクロファージにおける酸化低比重リポ蛋白質による PPARα PPARγ 活性化機序およびその意義 Author(s) 竹田, 佳代 Citation Issue date Type (ページ 50-53)

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はPPARαのリガンド結合活1生を増加した。これらのことから、 PPARαを特異的に抑制する GW6471の濃度は0．5μM、 PPARγを特異的に抑制するTOO70907の濃度は0．OlμMと考えられ

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図9－1酸化LDLによるPPARα、 PPARγ活性化に対するPPARα、 PPARγ阻害剤の効果

添加し、24時間培養後、 ‘‘材料と実験方法”に示したように、PPARα（●）、PPARγ（▲）リガンド結 合活性を測定した。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表した。“，p＜0．Ol，対対象の細胞

次に、酸化LDLによるABCA1発現におけるERK 1／2、 COX－2の役割を検討した。マウスの

けた。また、0．5μMのPPARα阻害剤GW6471（GW）、0．01μMのPPA：Rγ阻害剤TOO70907で は、この増加を部分的に抑制し、PPARα、 PPARγ共に抑制することにより相加効果が認め

46

処置にてマクロファージ内のPPARα、 PPARγ発現はそれぞれ72％、77％に減弱した。また、

PPARγのsiRNAはPPARγ1、 PPARγ2ともに抑制した。このPPARα、 PPARLγ siRNA処置細胞で

PPAR．α、 PPARγともに阻害することにより相加効果が得られた（図9－2）。

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