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Ox－LDL （一） （＋）
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（一） （＋）
siRNA
contcont cox－2 cox－2
図5－2：酸化LDLによるPPARα、 PPARγ活性化へのCOX－2阻害の影響
RAW 264．7cellに（A）10μMのNS－398と10μMのmeloxicamで1時間前処理後、40μglinlの酸化LDLを
添加し、24時間培養後 “材料と実験方法”に示したようにPPARα、 PPARγリガンド結合活性を測定した。
（B）・（c）“材料と実験方法”で示したようにcox－2のsiRNA処理後、40μg！m1の酸化LDLを添加し、
24時間培養後 “材料と実験方法”に示したように（B）蛋白を抽出し、抗COX－2抗体、抗β一actin抗体で ウェスタンプロット法を行った。 （C）PPARα、 PPARγリガンド結合活性を測定した。結果は3回の実験を
平均化し、平均値±標準偏差を表した。“，P＜0．01，対 対象の細胞群 †， P＜0．Ol，対 LDL添加の細胞群36
7一（3）酸化LDLのCOX－2発現増加に対するERK1／2の関与の検討
これまで当教室のSeno㎞chiらは酸化LDLがERK1／2、 p38MAPKを活性化することを報告
してきた（SenokUchi et．al。2004）。 この、ERK 1／2、 MAPKがマクロファージにおいてCOX－2
の産生を誘導することはよく知られている。そのため、この酸化LDLによるCOX－2の発現
増加がMAPKを介しているのではないかと考えられた。そこでまずRAW264．7 cellを用い、
酸化LDLによるERK 1／2、 p38MAPKの活性化について検討した。40μg／mlの酸化：LDL添加後 1時間よりERK1／2、 p38MAPKのリン酸化が認められ、そのリン酸化は6時間後まで継続し
ていた（図6－1）。P－ERK i…li灘i卿欝婁誓織豊総懸v 6
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P－P38 iili讐羅ii…i…嚢灘…馨・iilili…嚢ilili…ii・l！i灘iiii…iiii…iii…ii…ii…罷l
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図6－1：酸化LDLによるERK1／2、 p38MAPK活性化の検討 RAW 264．7cellに40μg！mlの酸化LDLを添加し、24時間培養後
の細胞群
一 ERKI12
”’A・iei P38 MAPK 嚢 嚢
．禽・…・闘・…．，
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b．．．．．4．
典 嚢
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“材料と実験方法”に示したように蛋白を 抽出し、抗ERKI12抗体、抗phospho ERKI／2抗体、抗p38MAPK抗体、抗phospho p38MAPK抗体でウェス
タンプロット法を行った。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表した。’，p＜0．Ol，対 対象
次にERK1／2の特異的阻害剤であるPD98059、 p38MAPKの特異的阻害剤であるSB203580
を用いて、酸化LD：しによるPPARα、 PPARγ活性化の検討を行った。 RAW264．7 cellに酸化LDL
を40μg／ml添加した3時間後、 COX－2のmRNA発現は約3倍に上昇するが、 ERKI／2の特異的阻
害剤PD98059はこの上昇を抑制した。しかし、 p38MAPKの特異的阻害剤SB203580では抑制を受けなかった（図6－2）。
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図6－2：酸化LDLによるCOX．2発現誘導に対するERK112阻害剤、 p38MAPK阻害剤の影響
RAW 264．7cellに20μMのPD98059と10μMのSB203580で1時間前処理後、40μg！mlの酸化LDLを添加 し、 （A）3時間培養後、“材料と実験方法”に示したようにCOX－2のmRNA発現をRT－PCRにて測定し
た。結果は4回の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表した。 （B）6時間培養後 “材料と実験方法”に 示したように蛋白を抽出し、抗COX－2抗体、抗β一ac廿n抗体でウェスタンブuット法を行った。結果は3回
の実験を平均化し、平均値±標準偏差を表した。＊，p＜0．Ol，対 対象の細胞群 †， p＜0．Ol，対 LDL添加の細胞群
また、酸化LDLによるPPARα、 PPARγ活性化はERK1／2の特異的阻害剤PD98059で抑制さ れたが、p38MAPKの特異的阻害剤SB203580では抑制されなかった（図6－3）。
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Ox－LDL
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図6－3：酸化LDLによるPPARsリガンド結合活性誘導効果に対するERKI12阻害剤、 p38MAPK阻害剤の影響 RAW 264．7cellに20μMのPD98059と10 pMのSB203580で1時間前処理後、40μg！mlの酸化LDLを添加し、
24時間培養後、“材料と実験方法”に示したようにPPARα、 PPARy Vガンド結合活性を測定した。結果は4
回の実験を平均化し、平均値土標準偏差を表した。ft，P＜O．Ol，対 対象の細胞群 †， P＜0．Ol，対しDL添加の細胞群
38
さらに、DN－ERK 1／2では酸化LDLによるPPARα、 PPARγ活性化は抑制されたが、
DN－p38MAPKでは抑制されなかった（図6－4）。これらのことから、酸化LDLによるPPARα、
PPARγ活1生化にはEPK1／2を介したCOX－2発現増加が関与していると考えられた。
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