Relative
a c t i v i t y (
％） 3-3-1-3．ＭＤＨ活性測定用試薬の基本的性能
Ｗｏｎｇら47)が報告している方法と本法を使用して、精製したc-MDHとｍ－ＭＤＨの 活性測定値を比較した(Table６)。彼らの方法に比べて本法は、ｃ－ＭＤＨには１．４７倍、
ｍ－ＭＤＨには１．８９倍の高い感度を示した。また、Ｗｏｎｇらの方法は内因性ＩＤＨの影 響を回避するために３７℃、６０分間インキュベートを要するが、長時間のインキュベー
ションにより、ｃ－ＭＤＨで３％、ｍ－ＭＤＨで１１％の失活を生じ、本法より低値を示し た。
●
Table６.CompansonofMDHisozymeassays
( ｍni .
）
MethodIncubation time
c－ＭＤＨ ｍ－ＭＤＨ
ＡＢ
A c t i v i t y
（/U L
）
ReIative
a c t i v i t y (
％）
A c t i v i t i y
（/U L
）
このように、ＧＨＣｌはマトリックスの違いによる影響を受けないこと、ｍ－ＭＤＨを阻 害しないでｃ－ＭＤＨのみを選択的に阻害することから、ＧＨＣｌが最適であると考えられ た。ＧＨＣｌの必要量はｃ－ＭＤＨのみを完全に失活させる必要があるため１．４mol/Ｌとし た。
同一血清の１０回連続測定での同時再現性を見るため、正常値付近(平均値；Ｔ－ＭＤＨ
13.6、ｍ－ＭＤＨ６３Ｕ/L)および異常高値付近(平均値；Ｔ－ＭＤＨ４２､９Ｕ/L、ｍ－ＭＤＨ２３．５Ｕ/L)で検討した。変動係数(ＣＶ値)は、ＦＭＤＨでは0.7％～2.5％、ｍ－ＭＤＨで
は1.8％～6.7％であった。また、同じ血清を用いての１０日間測定での日差再現性は、
すべて５％以内であり高い精度を示した。
精製したｃ－ＭＤＨ(2,000Ｕ/L)、ｍ－ＭＤＨ(2,000Ｕ/L)を用い高値測定限界を検討し
－２８－
6０ ５
９５．７ １４１．０
1００ １４７
2６０ ４９３
1００ １８９
Ａ;methodofWongetal．Ｂ;proposedmethod．
2０
回帰式は、ｙ＝1.46ｘ＋６．８７(N=３０；ｙ＝本法、ｘ＝電気泳動法)となった(FYgl5)。
n＝３０ r=0.922
y=1.46ｘ＋６．８７
5 ０
︵ヨヘコ︶で○二一①﹇こつ①の○ユ○﹄Ｑ
4０
● 3０
.
夕 霧 ．
た結果、Ｔ－ＭＤＨ測定用試薬はｃ－ＭＤＨで約８００Ｕ/Ｌまで、ｍ－ＭＤＨで約1,000Ｕ/Ｌ までの原点を通る直線性が確認された。ｍ－ＭＤＨ測定用試薬では、ｍ－ＭＤＨで2,000
Ｕ/Ｌまで直線性が確認され、ｃ－ＭＤＨは約2,000Ｕ/Ｌまで99.6％以上が阻害され検 出されなかった。これらは日常検査に供するに充分な測定範囲にあった。
本法と電気泳動法との相関をｍ－ＭＤＨアイソザイムに関して検討した。正常範囲内 の検体３０例、ｍ－ＭＤＨ高値の検体３０例について検討した。正常範囲内の３０例は本法 では測定できたが、電気泳動法では感度が低くｍ－ＭＤＨ活性のバンドが検出されなか
ったため相関の対象から除外した。ｍ－ＭＤＨ高値検体での相関は、相関係数r=0.922、
1 ０
０
０ １ ０ ２ ０ ３ ０
E l e c t r o p h o r e s i s m e t h o d ( U / L
）
methodandproposedmethodfor
F
i g . １ e c l e n e e w t b e ５ n o i a t l e r o r C . t r o p h o r e s i s
m-MDHactivity
－２９－
共存物質であるビリルビン(～４０ｍｇ/dl)、乳ビ(Intra-lipos③、～１％)、アスコルビ ン酸(～５０ｍｇ/dl)、グルコース(～1,000ｍｇ/dl）などのＭＤＨ測定値への影響、また
抗凝固剤のクエン酸、EDTA、ヘパリンによる影響はいずれも認めらず、本法の良好な 精度が確認された。ヘモグロビン(～500ｍｇ/dl)は、赤血球にｃ－ＭＤＨが高濃度に含ま れるため、ＴＬＭＤＨ測定では正誤差となり溶血検体での測定は不可能であった。
血清中の内因性乳酸とＬＤＨの存在は、反応系に用いるＮＡＤをＮＡＤＨに還元する ことから正誤差をもたらす。そこで、この乳酸とＬＤＨの複合干渉を防ぐために、ＬＤＨ 活性の阻害剤としてオキザミン酸48)約６０，mol/Ｌを測定試薬に添加すると、乳酸１
，mol/ＬとＩ－ＤＨ(LD-1,ＬＤ－５）5,000Ｕ/Ｌの存在下での血清ＭＤＨ測定値への影響は ５分間の反応で完全に回避された。
正常値の設定は健康診断の検体６２５例(男性３４０名、女性２８５名)について、'Ｆ ＭＤＨおよびｍ－ＭＤＨ活性を測定し、正常範囲をパラメトリック法により算出した。
'ＰＭＤＨの正常範囲は平均値±ＳＤで１６．２±３．９Ｕ/L，ｍ－ＭＤＨの正常範囲は平均値
±ＳＤで５．２±２．５Ｕ/Ｌであり、男女差は認められなかった。
－３０－
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