KWE AC
3.1 材料 お よび方法
供試菌
,カ
ラマツ水抽 出物,供
試培地 お よび菌糸体 の培養条件 に関 しては,1節
「 カラマツ水抽 出物 の資化性 」の1.1材 料および方法 における記述 と同様 である。 また
,粗
酵素液の 調製 に関 しては前節「 フェノール酸化酵素の産出」の2.1材 料および方法 の記述 と同様である。
(1)多
糖分解酵素の測定多糖分解酵素 として β―グルコシダーゼ
,セ
ル ラーゼお よびアラ ビノガ ラクタナーゼ(AGase)の
各活性 を既報(Ohga,1992 b i Mastumoto,1988)に
準拠 して測定 した。β―グル コシダーゼは
, p―
ニ トロフェニルー β―D―
グル コ ピラノシ ド (Sigma社 製)を基質 とし
,遊
離 したp―
ニ トロフェノール を波長400nmの 吸光度で測定 した。1分間 にlμ 皿01のp一
ニ トロフェノール を遊離す る酵素量 を1酵素単位 とした。喧 嗅 叫 蝋 だ
ｘ ∽ ‰ 引 ︼ ｏ 中 目 す れ 鳴 ♂ 監
Fig. Ⅲ―‑7.
Legends i O
●
L̲̲J ̲ 1 : : ̲ ̲ :
0 1 5 10 15 Added cOncentration(%,w/v)
Extracellular diphenoloxidase activities of P′ θE「r9ιEPS OStrθβιrs incubated incubated for ten days in AsG or λs media added with different concentration levels of KWE or AG.
: KWE―AsG mediuⅢ with added KWE,A :KWE― As medium with added KWE, :AGィAsG medium with added AG, A :AG一 As medium with added AG.
‑ 49 ‑
400
300
200
100
Fig. Ⅲ―‑8.
奮
＼日 や∽ 一目
︶ ぬ ｏ
﹁
︼
＞ い ｏ ω ｏ
∽
∞ ｏ Ｏ 側 口
∩ Ｕ
1 5 1o
Added concentration(%,w/v)
○
●
Extracellular laccase activities incubated incubated for ten days different concentration levels of :KWE一AsG medium with added KWE,A
: AG―AsG medium with added AG, A
Of PFθErrOιErS OStr9βιEPS
in AsG or As media added with KWE or AG.
:KWE一As □edium with added KWE,
I AG―As medium with added AG.
Legends:
セル ラーゼ
,AGase活
性 は,そ
れ ぞれ カル ボキ シメチルセル ロー ス(CMC一 Na,
和 光純薬製
),AG(Sigma社
製,minimum98%(TLC))を
基 質 と し,生
成 され た還 元糖 を Somogyi一Nelson法 (SomO―gyi,1952)で
定量 した。l分 間 にグル コー ス換算 でl μ mOlの還元 糖 を遊離 す る酵素 量 を1酵 素 単位 とした。3.2
結果
KWEお
よびAGの
添 加 が1
ヒラタケ菌糸体 の多糖 分解酵素 の産 出 に及 ぼす影 響 を検討 した。すなわち,KWE一 AsG培
地,KWE― As培
地,AG― AsG培
地 お よびAG
―
As培
地 で ヒラタケ菌 糸体 を24°C,10日
間培養 した後,培
養濾液 の β― グル コシ ダーゼ, セル ラーゼお よびア ラ ビノガ ラク タナ ーゼ(AGase)の
各活性 の活 性 を測定 した。 そ の結果 をFig.Ш‑9〜
10に 示 す 。β―グル コンダーゼ 活 性 に関 しては
,KWE― AsG培
地 にお いて,KWEの
添 加濃度 が5%ま
では,添
加 量 の増大 とともに活性 が急激 に増 加 し:そ
れ以上 の添 加量 では,活
性 の 増加 は緩 やか で あ った。 これ に対 してAG― AsG培
地 では,添
加濃度 を変 えて も活 性 は,ほ とん ど認 め られ なか った。
KWE― As培
地 お よびAG― As培
地 にお いて も,そ
れ ぞ れKWE― AsG培
地,AG― AsG培
地 とほぼ 同様 の傾 向が認 め られ た (Fig.皿‑9)。
セル ラーゼお よび
AGase活
性 は,KWE― AsG培
地,KWE― As培
地 ともにK WEの
添加濃度 の増 加 に ともな い両酵 素 の活性 が増 加 した。 これ に対 してAG一 AsG培
地
,AG― As培
地 では,AGの
添加濃度 が増 加す るに従 いi両
酵素 の活 性 は僅 か に増加 す る もののi KWE添
加培地 に比 べ て非常 に低 い活性 を示 した。KWEと AGを
それ ぞれ 添 加 した培地 のセル ラーゼ,AGase活
性 の差 は,添
加濃度 が高 くな るに従 って大 き く な り,添
加濃度15%で
は,KWE添
加培地 のセル ラーゼ,AGase活
性 は,AG添
加培 地 のそれ らの6,2〜 6.5倍 (セ ル ラーゼ活性),8.1〜
9.2倍(AGase活
性)と
な った(Fig.皿
‑10)。
‑ 51 ‑
200
150
100
Fig. Ⅲ―‑9.
Legends:
︵引日
＼∽゛
一目︶ ０∽Ｊ
︒ ・ Ｈ中
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す
・ Ｈ
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︶Ｉ碇
50
︵一中中中中︼︶ ．
10
○
●
Added concentration(%,w/v)
Extracellular β―Glucosidase activities of P′θilrr9ιErs οstrθβιE「s incubated incubated for ten days in AsG or As media added wュ th different concentration levels of KWE or AG.
:KWE一AsG medium with added KWE:A :KWE― As mediutt with added KWE,
: AG一AsG medium with added AG, A :AG― As mediuⅢ with added AG.