5. 結 論
2.1 材料 お よび方法
供試菌株
,供
試培地 および菌糸体の培養 は,前
節「 菌糸体成長 の変化 」の記述 した通 り である。粗酵素液 は,培
養濾液 をセル ロースチューブ (和光純薬製)に
よって,lmM酢
酸緩衝液
(p H4.2)で
24時 間透析 して調製 した。フェノール酸化酵素 としてラ ッカーゼ,ジ
フェノールオキ ンダーゼ
(DPO)を
既報(Ohga,1992 b i Matsumoto,1988)に
準拠 して‑ 59 ‑
50
︵︼∽ｄ嘱ゝ日︶劇∞︻ｏ卜 ︑〜巧 ﹁
・ Ｈ 引ｏｏゝΣ
350
300
250
200
150
100
0
´ 50
！ｒ Basal mediumＩ Ｉ Ｉｌ
⁚ Ｌ
2 4 6 1ncubated days
Fig. IV一‑1. Changes of Ⅲycelial dry weight of P′ θErrDιEPS OStrθ2をvs during ten days incubated in basal(AsG)皿 edium 15% (W/V)of KWE or AG,
Notes I The vertical bars represent standard deviation. KWE and AG mean Karattatsu(とβrf〆 司p)water extracts and arabinogalactan,
respective17・
Legends:O:KWE,●
:AG,△ :Basal(AsG)皿 edim.測定 した。 ラ ッカーゼ
,DPO活
性は,そ
れぞれフ ェニ レンジア ミン (和光純薬),L一
ジ ヒ ドロキ シフ ェニルアラニ ン
(L― DOPA,和
光純薬製)を
基質 とし,波
長525nmお よ び475nmの 吸光度 を測定 し,1分
問当た りに吸光度 を0.001増 加 させ る酵素量 を1酵素単位 と した。2.2
結果
KWE,AG添
加培地 お よび基本培地 におけ る培養10日 目までのラ ッカーゼ活性 の経時 変化 を測定 した。その結果 をFig.Ⅳ‑2に
示す。KWE添
加培地 にお いて,ラ
ッカーゼ活性は
,培
養1日 日にお いて既 に認 め られ,そ
の後,培
養経過 とともに著 し く高 くな った。AG
添加培地
,基
本培地 では,培
養2日 目に活性 が微かに認 め られたが,そ
の後,培
養 日数が経 過 して も低 い活性 のままで推移 した。KWE添
加培地 では,ラ
ッカーゼ活性が培養1日 目に て認 め られたので,培
養24時 間以 内の活性 の経時変化,す
なわち培養1,3,フ6,12,24時
間における活性 を沢1定した。その結果 をFig.Ⅳ
‑3に
示す。KWE添
加培地 では,活
性 は培養 1時間後で認 め られ,そ
の後,培
養時間の経過 とともに高 くな った。AG添
加培地 や基本培 地 では,培
養24時 間以 内にお いて,活
性 は認 め られなか った。KWEI AG添
加培地 お よび基本培地 におけ る培養10日 目までのDPO活
性 の経 時変化 を測定 した。その結果 をFig.Ⅳ‑4に
示す。KWE添
加培地 では,活
性 は培養1日 目で5un―its以上 を示 し
,そ
の後,培
養 日数の経過 とともに漸増 した。AG添
加培地,基
本培地 では, 活性 は培養4日 目にて微 かに認 め られ たが,そ
の後,培
養 日数が経過 して も非常 に低 い状態 のままで推移 した。KWE添
加培地 では,培
養1日 目にお いて,す
でにDPO活
性 が認 め ら れたので,ラ
ッカーゼの場合 と同様 に培養24時 間以 内のDPO活
性 の経時変化 を測定 した。その結果 をFig.Ⅳ
‑5に
示 す。KWE添
加培地 では,活
性 は培養1時間後 に既 に認 め られ, その後,培
養経過 とともに高 くな った。AG添
加培地や基本培地 では,培
養24時 間以 内に おいて活性 は認 め られなか った。この ように
KWE添
加培地 では,培
養後1時間でラ ッカーゼ,DPOの
活性 が認 め られた ことか ら,フ
ェノール酸化酵素は ヒラタケ菌 を接種 した後 に直ちに誘導 され,培
養経過 と‑ 61 ‑
500
400
300
200
100
０ ５０
０
︵哺日
＼∽゛
︶︼ロロ
∽ ｏ
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＞
︻ 一 ｏ ω Ｏ
∽ ω ｏ ｏ 吋
ｎ Basal medium
Incubated days
Fig. IV‑2. Changes of Laccase ten days incubated
Legends I Satte as FiR. IV― ‑1.
activities of
in basal(AsG)
P/θErr9ιErS OJιr92ιrrd during
medium 15% (W/V)of KWE or AG.
12
10
８
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0 3 0 12 24
Incubated hOurs
Fig. IV‑3. Changes of Laccase activities of PFθ E「r9ιEFS OStr92をps during twenty―four hours incubated in basal(AsG)medium 15% (W/V) of KWE or AG.
LeRends: Same as Fig. IV―‑1.
‑ 63 ‑
６ ４
︵引日
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⁚ Ｌ
Basal medium
0 4 8 8
11〕1ncubated days
Figo IV―‑4ち Changes during KWE or しexends I Same as
of diphenol oxidase ten days incubated AG.
Fig. IV―‑1.
activities of
in basal(AsG)
P′θrrrοιErS OSιr92ιErS
medium 15% (W/V)of
⁚
︲
３
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Basal mediuロ
24
12 3
0
Fig. IV―‑5。 Changes of diphenol during twenty― four of KWE or AG.
しegends I Same as Fig. IV―‑1.
Incubated hours
oxldase activities of hours incubated in basal
P′θ「rr9ιEFS OStreβιrrs
(AsG)medium 15% (W/V)
‑ 65 ‑
ともに著 しく産 出 された と考 え られ る。
3.多
糖分解酵素 の経時変化3.1
材料 お よび方法供試菌株
]供
試培地お よび菌糸体 の培養 は1節「 菌糸体成長の変化 」,粗
酵素液 の調製 は 前節「 フェノール酸化酵素 の経時変化 」の記述 した通 りである。多糖分解酵素 として,
β―グル コシダーゼ
,セ
ル ラーゼお よびア ラ ビノガラクタナーゼ(AGase)の
各活性 を既報 (Ohga,1992 b i MastuⅢ
oto,1988)に
準拠 して測定 した。 β―グル コシダーゼは,p
―ニ トロフ ェニルーβ一D―グル コ ピラノシ ド (Sigma社 製
)を
基質 とし,遊
離 したp―
ニ ト ロフェノールを波長400nmの 吸光度で測定 した。1分間にl μ molのp一
ニ トロフェノール を 遊離す る酵素量 を1酵素単位 とした。セル ラーゼ,AGase活
性 は,そ
れぞれカルボキ シメチルセル ロース
(CMC一 Na,和
光純薬製),AG(Sigma社
製,minimum98%(TLC))
を基質 とし,生
成 された還元糖 をSomOgyi一Nelson法(SomOgyit 1952)で
定量 した。1分間 にグルコース換算 でl μ mOlの還元糖 を遊離す る酵素量 を1酵素単位 とした。3.2
結果
KWE,AG添
加培地お よび基 本培地 におけ る培養10日 目までの β―グルコシダーゼ】セル ラーゼ
,AGaseの
経時変化 を測定 した。その結果 をFig.Ⅳ‑6〜
8に示 す。β―グル コンダーゼ活性 に関 して
,KWE添
加培地 では,活
性 は培養6日 目で認 め られ, その後,培
養 日数 の経過 とともに急激 に高 くな った。AG添
加培地 お よび基本培地 では, 活性 は培養8日 日で認 め られ.そ
の後,10日
目に向けて僅 かに高 くな ったが,KWE添
加培地 に比べて非常 に低 い活性 であった (Fig.Ⅳ
‑6)。
セル ラーゼ活性 に関 して
,KWE添
加培地 では,活
性 は培養4日 日で認 め られ,そ
の後,培養 日数の経過 とともに著 し く高 くな った。
AG添
加培地 お よび基本培地 では培養10日 目 で活性が認 め られたが,KWE添
加培地 に比べて非常 に低 い活性 であ った (Fig.Ⅳ‑7)。
AGase活
性 に関 して,KWE添
加培地 では,活
性 は培養4日 目で認 め られ,そ
の後,200
150
100
Basal medium
Incubated days
Fig. IV―‑6. Changes of β―Glucosidase activities of PrθrrrDιys οstr9コιE「S
during ten days incubated in basal(AsG)medium 15%(W/V)
of KWE or AG.Legends I Satte as Fig. IV― ‑1.
︵召 め
目
︶
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‑ 67 ‑
4
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∽ ０
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＞
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︻ Ｆ 引 引 Ｏ Ｏ
Incubated days
Fig. IV‑7. Changes of Cellulase activities of P′ θrrroιE「S OStr"ιErd
during ten days incubated in basal(AsG)medium 15% (W/V) of KWE or AG.
Legends: SaIDe aS Fig, IV―‑1.
10
2.0
︵ ５
Ｈ日＼
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︻ロロ
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０・５
０ ０・５
０
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︼ｎ目 鷺側
＜
ｒ Ｉ Ｉ Ｉ Ｉ
⁚ Ｌ
Incu
４ ｂ
Basal mediulll
6
ated days
Fig. IV―‑8。 Changes of Arabinogalactanase activities of ′′θrrr9ιrrd οJιrθコιErJ
during ten days incubated im basal(AsG)medium 15χ (W/V) of KWE or AG.
Legends I Same as Fig. IV一‑1.
‑ 69 ‑
培養 日数の経過 とともに高 くなった。