第 5 章
5.2 材料および方法
5.2.1 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 お よ び 界 面 活 性 剤 添 加 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 の 調 製 弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 は 3.2.1 と 同 様 の 方 法 で 有 効 塩 素 濃 度 100 ppm，
pH 6.0 に 調 製 し た 。pH お よ び 有 効 塩 素 濃 度 も 3.2.1 と 同 一 の 方 法 で 測 定 し た 。 界 面 活 性 剤 は ポ リ グ リ セ リ ン 脂 肪 酸 エ ス テ ル お よ び シ ョ 糖 脂 肪 酸 エ ス テ ル 配 合 洗 浄 剤 を 用 い た 。 2 剤 の 構 造 を Fig.5 -1 に 示 す 。
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本 剤 は 非 イ オ ン 界 面 活 性 剤 で 食 品 添 加 物 に 指 定 さ れ て お り ， 食 品 用 乳 化 剤 お よ び 洗 浄 剤 と し て 使 用 さ れ て い る 9 1 ）。HL B（ Hydrophile- lipoph ile balance）
値 は 各 々 16 ，15 と 親 水 性 を 示 す 。界 面 活 性 剤 添 加 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 は ，弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 に ポ リ グ リ セ リ ン 脂 肪 酸 エ ス テ ル お よ び シ ョ 糖 脂 肪 酸 エ ス テ ル 配 合 洗 浄 剤 (シ ョ 糖 脂 肪 酸 エ ス テ ル 5 %配 合 )を 各 々 2 50 ppm と な る よ う に 添 加 し て 調 製 し た （ 以 下 ， P-WAH S， S-W AHS と 略 す ）。
5.2.2 界 面 活 性 剤 添 加 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 の 性 質
弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 に 界 面 活 性 剤 を 添 加 す る こ と に よ り ， 界 面 活 性 効 果 お よ び pH， 遊 離 塩 素 濃 度 が 維 持 さ れ る か ど う か を 検 討 し た 。
界 面 活 性 効 果 は ， 水 道 水 ， 次 亜 塩 素 酸 ナ ト リ ウ ム 溶 液 （ 有 効 塩 素 濃 度 100 ppm）， 弱 酸 瀬 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 ， P -WAHS お よ び S-WAHS の 表 面 張 力 を 表 面 張 力 計 CBVP-A3（ 協 和 界 面 科 学 (株 )）を 用 い ，プ レ ー ト 法 に て 測 定 し 評 価 し た 。
ま た ， 弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 ， P -WAHS お よ び S-WAHS 各 々 10 0 mL を 調 製 後 ，実 験 室 内 に 室 温 ，開 放 状 態 で 静 置 し た 場 合 の pH お よ び 遊 離 塩 素 濃 度 の 経 時 的 変 化 を 測 定 し た 。 pH は EH Con trolle r（ (株 )IWAKI）， 遊 離 残 留 塩 素 濃 度 は DPD 法 残 留 塩 素 測 定 器 （ (株 )SIB ATA） を 用 い て 測 定 し た 。
5.2.3 B.cereus 芽 胞 の 調 製
Plate-Count-A gar(ME RCK)に Bacillus cereus (NBRC 13597 )を 塗 布 し ，37 ℃ で 24 時 間 培 養 し た の ち ，5 日 間 室 温 に 静 置 し て 芽 胞 を 形 成 さ せ た 。芽 胞 を 含 む コ ロ ニ ー を 平 板 か ら 採 取 し 滅 菌 精 製 水 に 懸 濁 し た 後 ， 60 ℃ ， 10 分 の 加 熱 処 理 を 行 い ， 滅 菌 精 製 水 を 用 い て 2 回 洗 浄 し ， 芽 胞 懸 濁 液 を 調 製 し た 。 実 験 に 当 た っ て は ， 顕 鏡 に て 90 ％ 以 上 が 芽 胞 で あ る こ と を 確 認 し た 。
5.2.4 B.cereus 芽 胞 に 対 す る 殺 菌 効 果
基 礎 実 験 と し て ，水 中 に 浮 遊 状 態 の B.cereus芽 胞 に 対 す る 殺 菌 効 果 を 検 討 し た 。水 道 水 ，ポ リ グ リ セ リ ン 脂 肪 酸 エ ス テ ル (250 pp m)，シ ョ 糖 脂 肪 酸 エ ス テ ル 配 合 洗 浄 剤 (250 ppm)， 弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 ， P -WAHS ， S-WAHS 各 々 100 mL に ，B.cereus 芽 胞 懸 濁 液 を 6.0～ 6. 3 logCFU/mL と な る よ う に 添 加 し た も の を 試 料 液 と し た 。 な お ， P-W AHS お よ び S-WAH S は 調 製 後 5 分 以 内 に 実 験 に 供 し た 。
試 料 液 の 一 部 を 経 時 的 に 採 取 し ，速 や か に 0.1 ％ チ オ 硫 酸 ナ ト リ ウ ム 添 加 滅 菌 生 理 食 塩 水 中 に 混 和 し て 残 留 塩 素 を 失 活 処 理 し た 。 失 活 処 理 後 ， 適 宜 希 釈 し て Plate- Count-A gar に 塗 抹 し ， 37 ℃ ， 48 時 間 培 養 後 ， 生 菌 数 を 測 定 し た 。
5.2.5 キ ュ ウ リ お よ び ア オ ネ ギ の 洗 浄 殺 菌
カ ッ ト 野 菜 洗 浄 殺 菌 へ の 適 用 を 想 定 し ， 供 試 野 菜 と し て 表 面 構 造 な ど か ら 殺 菌 効 果 が 得 ら れ に く く ， か つ 生 食 す る 機 会 の 多 い キ ュ ウ リ お よ び ア オ ネ ギ を 用 い た 。 キ ュ ウ リ お よ び ア オ ネ ギ は 市 販 品 を 試 験 に 供 し た 。 水 道 水 ， 弱 酸 性 次 亜 塩 素 酸 水 溶 液 ， P-WAHS お よ び S-WA HS を 被 験 液 と し た 。 な お ， P-WAHS お よ び S-WAHS は 調 製 後 5 分 以 内 に 実 験 に 供 し た 。
キ ュ ウ リ の ヘ タ 部 お よ び ア オ ネ ギ の 根 部 を カ ッ ト し て 除 い た 後 ， 各 被 験 液 流 水 下 で 1 分 間 ， 擦 り 洗 い を 行 っ た 。 そ の 後 ， キ ュ ウ リ は 2 分 の 1 に カ ッ ト し た も の (100 ～ 120 g）， ア オ ネ ギ は 10 cm の 長 さ に カ ッ ト し た も の 約 10 本 (9
～ 11 g)を 各 被 験 液 30 0 mL に 投 入 し ， マ グ ネ チ ッ ク ス タ ー ラ ー を 用 い て 攪 拌 し つ つ 10 分 間 浸 漬 処 理 し た 。 浸 漬 処 理 後 ， キ ュ ウ リ お よ び ア オ ネ ギ の 5 g
を 滅 菌 生 理 食 塩 水 45 mL に 採 取 し 破 砕 し た も の を 試 料 原 液 と し た 。 試 料 原 液 を 滅 菌 生 理 食 塩 水 で 適 宜 希 釈 し て Plate-C ount-Agar に 塗 抹 し ， 37 ℃ ， 48 時 間 培 養 後 ， 生 菌 数 を 測 定 し た 。