細胞及び培養方法の選択
培養細胞からの Total RNA 抽出の手順 接着細胞のプロトコル 1. プレート ( またはウエル ) より培地を除き PBSでの洗浄を行う 2. トリプシン処理を行い 全量を1.5ml 遠心チューブに移す スクレイパーを使って 細胞を掻き集める方法も有用です 3. 低速遠心 ( 例 300 g
... 5. 約420μlのライゼート全部をカートリッジのウェル1に添加する。 ウェル1は最も大きなウエルです。カートリッジラベルに一番近く、Elution tubeからは最も遠い位置にあります。 6. Maxwell RSC Instrumentを起動し、Startに続いて、細胞の場合には『simplyRNA Cells／AS1390』、組 織の場合には『simplyRNA ...
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クルクミンおよび類縁体の培養細胞への取り込み量の評価 : 細胞内移行と生理作用発現機構の関係解明に向けて 49 < 平成 26 年度助成 > クルクミンおよび類縁体の培養細胞への取り込み量の評価 : 細胞内移行と生理作用発現機構の関係解明に向けて 仲川清隆 ( 東北大学大学院農学研究科 ) 1. ク
... をHepG2 および THP-1 に加え、取り込み量や代 謝を比較し、CURの選択的な取り込みの有無を 明らかにしようとした（Fig. 3）。CUR や CURG、 THCを細胞に処理し、細胞抽出物をHPLC分析 すると、HepG2 や THP-1からはCURが多く検出 され、CURGは検出限界以下で、THCもほとん ど認められなかった（Fig. 4； ...
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ラット褐色脂肪細胞培養キット（製品コード MK422）、ラット褐色／白色脂肪細胞専用培地セット（製品コード MK423）、ラット褐色脂肪前駆細胞 （製品コード MK424）
... ところが最近になって、小型齧歯類の褐色脂肪細胞に存在する熱産生分子 uncoupling protein（UCP； 酸化的リン酸化を脱共役する機能をもち、化学エネルギーを ATP ではなく熱に変換する）と類似のタ ンパク質がヒトの骨格筋などに多量に発現していることが明らかになりました。また、褐色脂肪細胞 ...
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MACSスターティングキットの選択方法
... 処理能⼒： 全血 15 mL 設置可能なセパレーター： MidiMACS Separator／QuadroMACS Separator 3. セパレーター（マグネット）を選択する スターティングキットに添付されるセパレーター（マグネット）として、MiniMACS Separator、MidiMACS Separator、OctoMACS Separator、QuadroMACS Separator、MACSxpress ...
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目次 Ⅰ. はじめに Ⅱ. 細胞性粘菌の培養と保存法 Ⅲ. 細胞性粘菌の観察 Ⅳ. 細胞性粘菌の形質転換法 Ⅴ.PCR 法による遺伝子破壊ベクターの作製 Ⅵ. ゲノムDNAの調製 Ⅶ. 土壌からの細胞性粘菌の分離法 Ⅷ.NBRPからの細胞性粘菌株の提供方法 Ⅸ. 細胞性粘菌に関する参考サイト Ⅹ.
... 17 １０．正確に 5 分間 21℃で静置・保温する。 １１．グリセロール溶液 in 1x HBS を吸い取り、15 mL ＨＬ5 培地を加える。 １２． 12 ～24 時間後、 1,000 倍濃度の選択薬剤 （G418; 20 mg / mL, Blasticidin S 10 mg / mL：フィルター滅菌したもの）を 15 μL 加える。96 well に分注している場合は、Final ...
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ダイズ体細胞胚長期懸濁培養におけるマルトースの効果に関する一考察
... 要旨：ダイズの組織培養による再分化・植物体再生は，未熟子葉から体細胞胚を誘導し，増殖・形態分化・成熟 の各ステージを経て，植物体を再生させる方法が主流である．このプロトコールはモデル品種である Jack でほぼ 確立されているが，最適な培養方法は現在でも遺伝子型の違いに大きく左右される．代表的な日本産黒ダイズで ...
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イントロダクション 細胞毒性と医薬品開発 培養細胞を用いた増殖試験や毒性試験は ドラッグスクリーニングや各種物質の毒性分析に不可欠であり 動物個体を用いた実験手法に比べて処理能力や操作性に優れます 近年は ips 細胞を代表する多能性幹細胞の研究分野の発展により 疾患モデルとしての患者由来の培養細胞
... DNA）と毒性シグナル経路について 細胞毒性を図る古典的な方法としてこれまで 51 Cr 放出アッセイやトリパンブルー染色などの方法がとられてきましたが、それ ぞれRI取扱いの問題や多検体処理が困難であることなどから現在では細胞内マーカーを測定する方法が広く用いられていま ...
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目次 緒言 1 第 1 章ヒト子宮内膜間質細胞の脱落膜化における Epac の関与 4 第 1 節 実験材料及び実験方法 ヒト子宮内膜間質細胞 (ESCs) と内膜間質細胞株 (EtsTs) の単離と培養 1-2. Epac の免疫染色 1-3. In vitro 脱落膜化 1-4.
... Epac2 の発現を抑制した際に著しく 発現が低下するタンパク質として CRT を同定した。CRT は、小胞体シャペロンタン パク質として知られているが、タンパク質のフォールディング調節だけでなく、細胞 内のカルシウムレベルの調節、細胞接着、アポトーシス、免疫反応、創傷治癒調節な どその機能は多岐にわたる 38-42) 。 ESCs における CRT ...
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目次 Ⅰ. はじめに Ⅱ. 細胞性粘菌の培養と保存法 Ⅲ. 細胞性粘菌の観察 Ⅳ. 細胞性粘菌の形質転換法 Ⅴ.PCR 法遺伝子増幅 Ⅵ. ゲノムDNAの調製 Ⅶ. 土壌からの細胞性粘菌の分離法 Ⅷ.NBRPからの細胞性粘菌株の提供方法 Ⅸ. 細胞性粘菌に関する参考サイト Ⅹ. 参考書 参考文献 Ⅹ
... 1.5 mL マイクロチューブ、PCR 専用マイクロチューブ １．ＰＣＲのテンプレートとなるＤＮＡを調製する。 （ゲノムＤＮＡ、プラス ミドＤＮＡetc） ２．Three primary PCR を行う。この際、できる限り Blunt-end を生成する High-Fidelity タイプの耐熱性酵素を使用する。（例：TOYOBO 社 KOD シリーズ、Takara 社プライムスター、Finnzyme 社 ...
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研究成果の概要 今回発表した研究では 独自に開発した B 細胞初代培養法 ( 誘導性胚中心様 B (igb) 細胞培養法 ; 野嶋ら, Nat. Commun. 2011) を用いて 膜型 IgE と他のクラスの抗原受容体を培養した B 細胞に発現させ それらの機能を比較しました その結果 他のクラ
... B 細胞が個体内のどこでどのように産生されるかにつ いては最近まで良く分かっていませんでした。一方、IgG 抗体を産生する B 細胞の分化過程は 良く研究されています。ウィルスのような抗原が体内に侵入すると、その付近のリンパ節にお いて、細胞表面の抗原受容体（※１）により抗原に反応した B 細胞は増殖し、一部は ...
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目次 基礎 : 実験を始める前に 3 細胞培養 3 培養細胞 3 無菌操作と滅菌 3 基本培地 3 血清 3 無血清培地 3 培養 4 細胞培養の方法 4 実験プロトコール 4 関連情報 ( フィーダー細胞 マイトマイシン C 溶液 Y Human FGF-basic StemBeads
... 3 細胞培養･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 3 培養細胞･･････････････････････････････････････････････････････････････････････････････ 3 ...3 ...
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ヒトiPS細胞由来膵前駆細胞の大量生産に向けた三次元浮遊撹拌培養装置による分化誘導系の開発
... 「序文」 多能性幹細胞の発見・開発により、再生医療の分野では疾患や外科的処置により失われてしまっ た臓器を作成する事が現実味を帯びてきた。膵臓の分野では、2000 年にエドモントンプロトコ ルが発表され、一型糖尿病患者に対する膵島移植が現実のものとなった。 しかしながら、グラ ...
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単層無血清培養系での歯髄由来細胞を用いたヒト人工多能性幹細胞（iPS細胞）の樹立および維持に関する研究
... iPS 細胞の樹立ならびに維持を目指した。 【方法】 本実験は、広島大学ヒトゲノム・遺伝子解析研究倫理審査委員会にて承認を得た研究計 画（第ヒ‐５８号）に基づき行った。すなわち、広島大学病院顎・口腔外科を受診し、同 意の得られた健常人患者由来抜去埋伏智歯の歯髄由来細胞（Dental Pulp Cells:DPC）より 誘導した iPS ...
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成果目標及び成果実績 ( アウトカム ) 成果指標 1 遺伝子導入技術 幹細胞分化誘導技術 生物発光技術等を適用した培養細胞を用いて 試験期間 1 ヶ月程度で発がん性 催奇形性及び免疫毒性を予想評価できる試験方法を開発し 標準的なプロトコールを取りまとめる 遺伝子発現解析技術を短期動物試験に適用し
... ○ 他の手段と比較して実効性の高い手段となっているか。 ○ － 補記 （過去に事業仕分け・公開プロセス等の対象となっている場合はその結果も記載） ○ 整備された施設や成果物は十分に活用されているか。 ...
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ヒト幹細胞臨床研究実施計画の概要 研究課題名申請年月日実施施設及び研究責任者 自己培養歯根膜細胞シートを用いた歯周組織の再建平成 22 年 9 月 27 日実施施設 : 東京女子医科大学宮﨑俊一 対象疾患ヒト幹細胞の種類実施期間及び対象症例数治療研究の概要その他 ( 外国での状況等 ) 新規性につい
... 【移植方法】 手術開始前に写真を撮影し、歯周組織検査を実施する。ヒビテ ン綿球で術野を消毒後、局所麻酔下において患部周囲の歯周ポケ ット近傍を切開する。全層弁で剥離し、不良肉芽を含む軟組織を 除去した後、歯周ポケットにさらされていた歯根面のスケーリン グ・ルートプレーニングを行う。歯周欠損のサイズを計測後、自 ...
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培養細胞の維持方法 細胞を集めて cell lysate を作る protein concentration をはかる Western blot 具体的に IHC の protocol とそれに付随して私が気付いたこと ラボでの注意点も含め 列記させていただきます ( ただし文章に関しては私がオリジ
... ことに答えることにまごついていたことと、一日目ということもあり、お願いせずにカーテン の向こう側で、質問の答えの内容を考えていました。 ６日の午後は産科の病棟に行きました。CMCはインドで２番目に大きい病院ですが、そこです ら、産科は野戦病院のごとく、何十人者妊婦がカーテン一枚でたくさん寝かされていました。 ...
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B-Mybは表皮角化細胞の三次元培養において増殖を促進し、分化を抑制する
... B-Myb の RNA やタンパクの発現が、リアルタイム PCR 法、 ウエスタンブロット法にて検討された。 ヒト角化細胞株 HaCaT 細胞を用いて B-Myb を過剰発現させた際やノックダウンさせた際の増殖や分 化への影響が検討された。pCMV-B-Myb ベクターを transfection させて恒常的に B-Myb を過剰発現させ た ...
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肥大化ヒト人工多能性幹(iPS)細胞由来心筋細胞の性状解析; 高度に精製されたヒトiPS細胞由来心筋細胞において低密度培養は肥大化および電気的リモデリングを誘導する
... 近年、iPS 細胞（induced pluripotent stem cell、人工多能性幹細胞）における研究の進展が目覚しく、 創薬研究にも応用が可能になってきた。特に安全性試験への利用において、副作用およびオフターゲット作 用発生の予測精度を向上させ、新薬創出の高速化と効率化の促進が期待されている。しかし、 iPS ...
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図 1: 操作法の概要 2. この製品の使用法 2. 1 実験開始前に サンプル材料 細胞培地またはセルフリーの培養上澄 アッセイ用の試薬は細胞にダ メージを与えないので 直接細胞培養プレートに加えることができます サンプルを直接試験しないときは LDH 活性の測定の前に 250 g の遠心で 細胞
... い培地で洗浄し、1μg/ml のアクチノマイシン D で3時間プレインキュベ ーションしました。その後、様々な量の TNF- αをウェルに加え、プレー トを16時間インキュベートしました。培養細胞への細胞傷害性を細胞傷 害性検出キット PLUS ...
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マウス iPS細胞から歯原性上皮細胞様細胞への高効率な分化誘導を目的とした培養条件の最適化
... 胞（miPS 細胞）から歯原性上皮細胞を分化誘導する方法について検討を重ねてき た。その結果、胚様体形成によって miPS 細胞の分化を促進するとともに、神経栄 養因子の一種である neurotrophin-4（NT-4）を作用させることによって、歯原性 上 皮 細 胞 特 有 の 遺 伝 子 （ CK14, p63, CD29, ...
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