膚 発現 機序 関す 研究 遅発型皮 反応

金沢 大学 十全医学 会雑 誌 第90巻 第⁴ 号 5 87w^{5 9 7 (198=} 5 87

遅 発 型皮膚反 応 ^の 発 現機序^に関 する研 究

‑ マ ウス にお け る ^ハ ブ テ ^ン化 脾 細 胞 投 与^によ る 接 触 性 皮膚炎 発 現の抑 制 ^一

富山医科 薬 科大学 医学 部細菌学 ^･ 免疫 学 教 室

小 西 健

山 岸 高 由

桜 井 信 也

( 昭和5 6年6 月1 9日受 付)

本 論文^の要 旨の ^一部は, 昭 和5 4年1 0月, 第1 6 回 日本細 菌 学会 中部 支部 総 会^{に お いて}発 表し た^.

K ey ^{w o r}d 接 触 性 皮 膚 炎, 遅 発 型 過 敏 症, ハ プ チン化 細月乱 免 疫 抑 制

D ie n s & Scho e nheit^l)に始まった遅発 型 皮 膚反応 ( D H S )^の発 現磯 序^に関す る研 究は近 年 急速な進 歩を と げ たこと は周知の ところ で あ る. なかで も 重要な知 見

の,^{一 つ}は Fr e u nd^'s c o mplete adju v a nt(F C A)^の同 時投 与^によって発現 す る D H S が同^一抗 原の前 投与によって 抑制さ れ る^‑ im m u n e de viatio n ^q という事 実^2)‑4)で あ り, 私 達も同人 ら と と もに これに関す る ^一連^の研 究 を行^っ た結果, D H S 発 現が F C A 処置と抗 原 投与の位 置関係^に左 右さ れ る と^いう事 実か ら D H S の発現と その

抑制は抗 原前 投 与によ る抑 制 因子 の 生成と F C A 処 置

によ る 発 現準 備 因子^の産生との競 合^によ るので は な か ろ う^かと推 論し た^{5ト9 )}

こ のよ うに ツ ベ ルク リ^ン型皮 膚 反応の発 現^には時 期

の差 は あ れ, 抗原とadj^{u v a ntの}併用 を要す る が, 接触 性皮膚 炎 (C D) は D H S の ^一 型であり な が ら小 分子量

の抗原^の経 度 的投 与^によ^って惹 起さ れ る点で特 長が あ

r),しかもadju v a nt の併用 を 必要と し な^{い1 0ト1 3)}. こ の

点^から C D にお け る im m u n e de viatio n 類似^の現象を 観察す ることによ^って そ^の発 現機 序を解 析しツベル ク リン型 反応のそ れ と 比較検 討す ること はadj^{u v a nt の}作 用,

ハブ テ ン およびその担体の認識 機 構を知る 上 で有 用であ る と考え ら れ る.

そこ で私 達は本 報^{に お い}て, まず^ハ プ チン化 脾細 胞

を前投 与す る^ことによ り ピ ク リン酸誘 起^のC D が抑 制さ れ るか否^かを観 察し, 抑 制の機 作^{に つ いて}若干^の検討 を加え た. 以下は そ の成 績^の概 要で あ る^.

材 料お よ び方法

1) 動 物: 4 ^〜 6 遇令, D D N お よ び I C R マ ウスの 雄を用^いた^.

2) 抗 原^: 和 光 純 薬 製Pic ryl ch lo ride(2^‑4^･6tri^‑

nitr o^･1^‑Chlo r obe n z e n e, 以下P C)^{お よ び そ の}誘 導体^で あ る T^rinitr obe n z e n e s ulfo n ate(T N B S)を使用 し た.

3) 培 養 液^: 組 織 培 養 液は 日水 製 薬 製^{R P M I 16 4 0} を, 仔ウ^シ血 清 (^{F C S ) は Fl}o wlabo r ato ry社 販 売の も^のを 用^いた^.

4) R I: R I 標 識^には N e w Engla nd Nu cle a r 社 製³H^･ウ リ ジ^ン(3 0ci/ m m ol)を, シ ンチ ラ^ントには A m e r sha m 社 製A C S ⁼II を使用 し た.

5) 代 謝 阻 害 剤^: 共 和 醸 酵 製 mito mycin C (M M C)^およ び半 井化 学 製^5･flu o r o u r a cil(^{5 F U})を 用^い

た.

6) P C によ る感 作^: 前日除 毛し た^マウス の腹 壁^に 5% P C, 0^.1 ml を塗 布^{す ることによ っ}て感 作し た^.

7) C D の惹 起と その測 定: 1% P C in ole u m

,2 0

〟1 を耳介^に塗布し,塗布 前^およ び 24 時 間後^の耳 介の厚 Studie s on the de v elop ^{m e n}t of D elay^ed H _{y p}ers e n sitivi_{t y} ^q S up p^{re s s}io n of the D e v e^‑ lop ^{m en}t of Conta ct D e r m ati tis b_y Tr云^{n s}fe r with = ap t^{e n a}ted S_ple e n Cellsin M ic e‑ ^.

K_{e n}ich i Ko nish i, T akay^{o s}h i Y a m agi ^sh i & S hiny^a S aku rai , D ep^{a r}tm e nt of Ba cte riolog y a nd Im m u n olog y･S ch o ol of M ed icin e, Toy^{a m a} M edi_{c a}l and P ha r m a c e utic al Univ ersi_{t y},

Toy^{a m a.}

5 88 小西^J 山岸 ^･桜 井

み を尾崎 製作 所製dial ga uge

t tPe a c o ck^"にて計測し た^.

8) ^ハ プ チン化脾 細 胞 (T N ^･S C) の作 製^: 頚 椎脱臼 後, 頚部を切 断し て可 及 的脱 血さ せ た^マウ^スよ り脾 臓 を と り出し, R P M I 1 6 4 0液 中に圧 出し て ト型の ご と く 脾 細 胞浮 遊 液を得た. こ れ を 1,15 0rpm , 5分 間遠 心し,

得ら れ た沈 殿を軽く 振って解き ほ ぐ し,0 ^.8 3 % 塩 化ア ン モニ ウム液5 ^〜 8 ml を加え,室温^に5 分 間おいて溶 血さ せ, 更に 1 ,1 5 0rpm , 3 分 間遠心 し た^. そ の沈 殿に R P M I液を加え て 2 回遠 心 洗 浄し, 2 ^×1 0^8コ/ml と な る よう^に調 整し た. これに M M C lO O_/Jg お よび5 F U 2 0 0_FLg/^ml を含む R P M I 液を等量^に混 和し, 3 7⁰C に3 0 分 間お き,R P M ‡液で 2 回洗 浄した後, 2 ^×1 0^8コ/

ml に調 整し, T N B S 6 00_J̀g/ml に含む R P M I 液と等 量に混 和し,3 7⁰C で 3 0 分 間 感作し た^{. こ}れ を 2 回洗 浄

紆

し て^ハ ブ テ^ン化 脾 細 胞 (T N ^‑S C) を得た. この細 胞液 を生 体 内^に投与す る と きには生 食 水^に, 培 養す る場合

には 5 % 仔ウシ血清 加R P M I 液 中^に浮 遊して 用^に供し た.

9) ^ハ プ チン感 作細 胞^の作 製: 前 述^の T N ^‑S C を無 処 置^マウスの静 脈 内に投 与し, そ の降 職を と り出して R P M I 液 中に 圧出し, 遠 心 洗 浄してT N B S 感 作 細

(^"T N^‑S C^"･S C) を得た^. 又 P C を腹 壁^に塗布さ れ た^マ

ウスの牌 臓か ら同様^にし て P C 感 作 細 胞(P C^‑S C) を得 た.

1 0) プ ラスチック付 着 細 胞と非付 着細 胞^の作 製: 径 1 0 c m のフ ァ ル コン社製プ ラ^スチ･^{ツク ･ シ ャ ー レ}中の

R P M I 液2 0 ml に1牌臓を圧 出し, 8)と同様に処理 し て肺 細 胞 浮遊 液を作 製し, 37⁰C, 4 5 分 間 培養 後, 非付 着 細 胞を洗^い落し, 更に3 7⁰C,3 0分 間培 養し てシ ャ^ー

1

m e a s u ご e m e nt

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P C^‑S C H ^{mC uj}_坤^{̲Ⅹ∈l tdu r e}e n ^‑s cha Ⅱわe r

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m e a s^ur e^me nt Fi g^. 1^. T he o utlin e ofthe e xpe rim e nts.

T N B S : Trinitr obe n s e n e s ulfo n ate.

P C: Pic ryl ch lo ride(Trinitr o chlo r obe n s e n e)^. S C: Sple e n c ells^.

T N ^･S C:S C c o upled with T N B S^.

t tT N^‑S C^{, ,･}S C: S C fr o m mic e wh ich r e c eiv ed T N ^･S C^. P C^‑S C: S C fr o m mic e tr e ated with P C o n the sk in,

接 触性 皮 膚 炎^の抑 制Sup pr e s sio n of Co nta ct De r matitis

レ に付 着し た細 胞を集め, 付 着細 胞^{と し た}. 前 述^の4 5 分間培 養 後^{シ ャー レ に}付着せ ず浮 遊す る細 胞を新し^い シ ャ ^{ー レ}中で更に37⁰C ,3 0分 間培 養し,浮 遊す る もの を集め て非付 着 細 胞と し た.

11) ^{ハ ブ テン}化 脾 細 胞の生体 内分 布の測 定: 1 0 % F C S 加R P M I 液で 3 ^〜 5 ^×1 0^畠コ/^ml の T N ^‑S C浮 遊 液を作り,径3 c m の フ ァ ルコ ン社製 滅 菌^{シャ ー レ に1.9}

ml づ^つ分注し, 5 0_〟C i/ml の³H^･ウ リ ジ^ン0^.1 ml(5

〟C i) を加え, 1 8時 間培 養し た. こう し て得ら れ た R I 標識^ハ プ チ^ン化 脾 細 胞の 2 × 10^7コを尾 静 脈 内^に注 射 し, 1 , 5, 2 4, 72 時 間お よ び 7 日後^に頚 椎脱臼 さ せ たのち, 肺, 肝, 牌, 腎, 胸 腺お よ び末 梢リ^{ン パ}節群 (ソケ イ部, 腹 蔵 部お よ び傍大 動脈^{リン パ}節)を採 取し

5 8 9

た. 各臓 器は細 切し て^{シ ン}チ ラ^ントに浮 遊し, ア^ロカ 社 製シ ンチ^レー シ ョン^･カ ウンタ ^ー L S C^･67 1 ^にて計 測 し た. 対 照と し て無 処置^マ ウスの脾細 胞を上 記 同様に R I 標識し た も^{の に つ い}て も観 察し た^.

1 2) 実験の概 要^: 上 記の T N^･S C,

"

T N^YS C^"･S C お

よ び P C^‑S C 投 与によ る P C^･C D 発 現^に及ぼす影 響の観 察に関す る実験の概 要は図1 の と お りである.

成 績

1^. P C接触 性皮 膚 炎^の発 現に及^ぼす^ハブ テン化 牌細 胞 投 与^の影 響

D D N ^マウスを用^いて P C 感作 前14_,7,5,4,2 臥 直軌 感 作 後1, 2, 3, 4, 5 お よ び 7 日^にT N^･S C 2×1 0^7コ■を

Table l^･ E ffbct ofthe tr e at_m e nt _wi th hap te n ated^･SPl^{e e n c e}皿s o nthe de v elop^{m e nt o}f

C O nta Ct de r m atitis in mic e

Tr e atm e nt

Se n siti^･ Days afte r z atio n S e n Sitiz atio n

In c f e a S e Or N o.of e a ∫也ick^{n e s s}

血 奴s (m m Xl O ²)

te st￠d

m e a n ±S.D.

% of

餌p p^{r e S S}bn

S ig血 蝕a n c e

1 4

‑7

【5

一

1

】2

0 1 2 3 4 5 7

∵

e n O n

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O O

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8 4

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b

′

○

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b

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l

0.3 5^±0.5 3 0.3 3^土0.4 1 1.5 0^士0.3 8 1.3 8^士0.5 2 1.3 8^±0.6 9 0.5 7^±0.5 5 2.0(;^土0.5 0 1.5 0^土1.14 2.0 0 ^±0.4 5 2.0 0^±0 3.6 7^±0.9 3 2^.7 5^土0.2 7 8 5^.5 6^±0^.5 6 8 0^.6 3^±0^.5 4

7 4 0 2

つ_〟

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p^<0^.0 1 p^<0^.0 1 p <0^.0 1 p^<0^.0 1 p <0^.0 1 p <0^.0 1 p^<0^.0 1 p <0^.0 1 p^<0^.0 1 p <0^.0 1 p <0^.0 1 p <0.0 1

Hap t^{e n :}Trinitr obe n z e n e s uげo n ate(T N B S)^. S.D.:Sta nda rd de viatio n.

Hap te n atedspl^{e e n c e}ns(T N^‑S C)^:S p l^{e e n c e}usfto m mic e w e r e tr e ated with T NBS in

Vitr o a s sho w nin the m ate ri als an d m ethodsin thisp^ap^{e ∫.}

D D N mic e w e r eirde cted intr a v e n o u慮_y wi th 2×1 0⁷ 0f T N^‑S C o n the in dic ated day befbr e and afte r th e s e n sitiz atio n･ A llmic e_,C O ntaining the c o ntr ol mi c e

, W e r e S e n Sitiz ed b_y th e app五c atio n of 5 % p i^{c ry}l ch lori de(^{P C}) ^to th e ab do minal sk in, a nd 7 dayslat￠r W e r e Chane ng^ed by2 0pl of l % P C to the e a r sk in･ An oth e r c o ntr ol mi c ￠,n OtP^{r etr e ate}d

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n d n ots e n sitiz ed〉 W e 工e als o challe ng^ed in the s am e W ay^. Ea ch valu edl O W Sthe m e an 土

S^･D･Ofe a L th ickn e s s(m m

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)2 4 hr afte rthe chane ng^e.