影 響 関 す 実験的研究 癌 増殖 及 す 胆 嚢摘 除 術 大腸 発

金沢 大学十 全 医 学会 雑 誌 第9 4巻 第3号 ⁴7 9 ⁻4 94 亡1 9 8引

大 腸癌^発生増 殖^に及^ぼす胆嚢摘除術^の 影響^に 関す^る実 験 的 研 究

金沢 大学 医 学部 外科 学 第二講 座く主 任^こ宮 崎逸 大 衆按I

小 坂 健 未

く昭和^{6 0}年⁴ 月2 6日受付1

47 9

胆嚢摘 除術 く胆 掛 に伴う胆 汁酸 代 謝^の変 化と大 腸癌 発 生 増殖の因 果関 係^を究 明す る目的で， N ^．メ チ^ルーN ^，−ニ ト^ローN ^−ニ トロソ グ ア^ニ ジンくN⁻m eth_yl^．N^，−nitr o⁻N ⁻nitr o s ogu a nid in e，M N N G ト誘 発大 腸 癌^に

おけ る胆摘 後の大腸 腫 瘍発 生 率な ら び^に発生 個 数の変 化を検 索す る と と もに， 胆 摘^に伴う胆管 胆汁な ら び に糞便 中 胆 汁 酸 組 成の変 化を検 討し た． 実 験 動 物は^{ハ ー} ト^レ一 系 雌 性モ ル モ ット を 用^い， M N N G は 0^．0 25％水溶 液2ml く0^．5 ^mgI を週2 回， 1 5 週 間 く総 量^{1 5 m} gl 直 腸 内^に注 腸 投与し た^． 病理組 織 学 的検 索は実 験 開始⁴0週後と し， 屠殺 剖 検^によ^{っ て}得ら れ た遠位 側大 腸の連 続 切 片を作製し検索し た． ま た， 胆 汁な ら びに糞便 中の胆 汁 酸分 析^には ガスクロ マ ト グ ラフ ィ ^ー を 用^いた． その結 果， 癌 腫 発生率は単 開腹 群

の76％^に対し腰摘 群で は 5 6％と低 下^し， 癌 腫の深遠 度 別発 生 率^も前 者^の m 癌5 6％， S m 痛5 2％， pm 癌 8％， S S癌4％^に対し後者^では m 癌4 0％， S m 痛28％を認め た だ けで p^m 癌， S S 癌は み ら れず， 胆摘 群

では大 腸癌 発 生 率の低下 な ら びに早 期 癌^の多^い傾 向を 示 し た． ま た， 一一

匹 あ た り の癌 腫 個 数は単開 腹群の 2^．9 6偶^に対し胆摘 群1^．0 8個， う ち 深遠 度^{S m 以 上 の}癌腫個 数^は前者の 0．92 個^に対し後 者0．3 6個と胆 摘 群^で有 意の減 少を 示 しくp く0．05I ， 腫 瘍 径も 0^{．1c m} 以 下の腫瘍が前 者^の2 9^．7％^に対し後者5 1^．9％と胆 棉 群^で腫瘍径の小さ な腫 瘍が有 意^に増 加し たくp く0^．0 51． 胆 管 胆 汁 中胆 汁酸 組 成比は， 胆 摘群では^{コ ー ル}酸

およ び デ オ キシコ ^ー ル酸の上昇に加え， ケ^ノデ オ キ^{シコ ー ル}酸が減 少し，

一次 胆汁 酸ノ^ニ次胆 汁 酸比 が 6 6^．7 から 2 117 ^へ減 少す る傾 向を 示 し た^． 糞便 中胆 汁酸に つ い ては総 胆 汁酸 排 泄 量が減少し， 組 成比では， デ オ キ^{シコ ー ル}酸^およ び リ ト^{コ ー ル}酸^{の 二}次 胆 汁 酸の減 少か ら ^一次 胆 汁酸ノ^ニ次 胆 汁酸比 が 0^．6 0 か ら 1^．39 ^へ 上昇す る結 果が得ら れ た．以上 よ り，M N N G 誘 発モ ル モ ット実験 大 腸 癌で は，胆 摘は大 腸癌 発 生増 殖^に抑 制的^に作用 し た． そ の要 因と し て胆 摘^に伴う糞 便 中胆 汁 酸排 泄量の減 少およ び^二次胆 汁 酸量の減少に起 因 す る ものと結論し た^．

K ey ^{w o r}ds c olore ctal c a n c e r_， g^uin e a pi_g，Chole cy^ste cto m y，N ⁻m eth_yl⁻N^，

−nitr o⁻N ⁻nitr o s og^{u a n}id in e，bile a cid

本邦の大腸 癌 確患率は欧米 諸 国^に比^べ低率^であ る も の の^{1 州}， 近 年漸 増す る傾 向にあ り，

5I 郎

， その要因^の究

明が 重要な 課 題 と なっている^． 疫学 的 研 究によ れ ば，

食飼性 因子， 特^に脂 肪 摂 取量．^{と大腸 癌死 亡率の間に正}

の相関 関係が 示 さ れ^{7ト9 1}， ま た実 験 的にも高 脂肪 食を 与え る^ことによ り大 腸 癌^の発 生が促 進さ れ る^こと が証 明さ れて いる^刷川． こ の高 脂肪 食 摂 取^に伴う大腸 癌 発 生^の促進は， 高脂 肪 食 摂取で惹起さ れ る胆汁 酸 代謝^の

変調^に起因 す る と さ れ， 糞便 中の胆 汁 酸排泄 量 な ら び に胆 汁酸 組成比^の変化， 特^{に 二}次胆 汁 酸量^の増 加が大 腸 癌 発生 を促 進す ること が明ら かにさ れ て^いる．

と^ころで， 胆 嚢摘 除 術 く胆 摘う は胆 嚢結石症に対す る手 術術 式と し て広く 用^いら れて いる が， 胆摘 後^に胆 嚢欠 損から胆 汁 酸 代謝が変動し， 胆 汁 酸組 成^の変 化が 惹 起さ れ る可能 性は推 察さ れ る と^ころであ る． か かる 観 点か ら V^{e m}ick ら^{1 21}は大 腸癌 患 者^{に お け る}胆 摘^の

A b br e viatio n s ニA O M ， aZOXy ^{m e}tha n e ニC A， Cholic a cid_三C D C A ， Che n ode o xy^cholic a cid_i D C A

，de oxy^ch olic a cid三D M H ，dim eth_ylh_ydr a zin ei L C A _，1itho cholic a cidニM A M _， m eth_yl⁻

azo xy^{m e}tha n ol a c etateニM N N G， N ⁻m eth_yl⁻N ^，−nitr o⁻N ⁻nitr o s og^{u a n}idin e三M N U， N ^．m eth_yl⁻

4 8 0 小

既 往歴^の有 無を検 討し， 右側 大 腸 癌^に胆 摘^の既 往を有 す る例が多く み ら れ た と し， Tu r u n e n ら^{1 31}も胆 摘後に

大腸 癌が増 加し た と報じ た． ま た Tu rnbull ら^川は女 性^で胆 摘後 大 腸癌 発 生の相 対危 険度が高く， 部 位^{別 で} は直 腸 癌．_{に月旦摘の既 往が多かった と述}べて^いる^． 実験

的^にも W ^{e r n e r} ら^{1 5I}は， ジメ チ ル ヒ ド ラ ジン くdi^．

m ethylhydr a zin e，D M Hl を 用^いた^マウ^ス実験 大 腸癌

に おけ る胆 摘の影響の検討か ら， 胆 摘 後^に大 腸 癌^の発 生が増 加し たこと を報 告し て^いる^． こ のよ うに胆 摘に

伴^い大 腸癌 発 生 率が増 大す る報 告は多く み ら れ る が， 一方では実験 大 腸 癌で追 試し た S^chat te nke rk ら^{1 61}の

如く胆 摘後も差を認め なかっ た と す る報 告もみら れ，

胆 摘と大 腸癌 発 生の因果 関係^{に ついて}は未だ ^一定^の見 解を み る^に至^っ ていな^{い の}が現 状で あ る．

そこで， 胆摘な ら びに胆摘に伴う胆 汁酸 代 謝の変 化 が大 腸癌 発 生^に及ぼ す影 響を究明す る た め， モ ル モ ッ ト を用^いた M N N G 実験 大 腸 癌を作 製し検 討し た． 現 在実 験 大腸 癌^に用^いら れ る化 学発 癌 物 質は ソ テ^ツ実か ら単 離さ れ た サ イ カ^{シ ン}く^cyc a sinl と同原型 で化 学 的

に合 成さ れ た D M H と その．^{同 族 体アゾキシ メ タン} くa z o xym etha n e， A O Ml お よ び メ チ^ルアゾキ^シメ タ ノ ^ー ルア^セテ ^ー ト く^{m et}hyla z o xy^{m e}tha n ol a c etate，

M A Mlと， al k_ylnitr o s ami de に属す る M N N G お よ び N ⁻メ チ^ルーN ^−ニ ト^ロ ソ ウ^レア くN⁻m ethyl⁻N^．nitr o⁻ S O u r e a，M N Ul の二系 統^に分類さ れ る．

D M H お よ び A O M は肝で M A M に代 謝さ れ た後， 胆汁あ る^いは 血 行 性^に大 腸^に到達し発 癌 作用 を発 揮す る と さ れ^用， 胆 摘^の大腸 発 癌^への影響を検 討す るには必 ずし

r^も適切な

モデ^ルと は言え な^い．

一方M N N G およ び M N U は直 接 的な接 触 作用^によ る もの で_， 注入部 位^であ る遠 位大 腸^に限 局し て腫瘍を発 生す る^こと が知ら れ^{1 7l}， 胆 摘^の 影 響を知る^には よ り適切と思わ れ る．

G_{r o up} O_pe r atio n n

S ha m 叩^{e r a}tio n 5 0

M N N G

坂

か かる 理由^から， 著 者は発 癌物 質と して M N N G を 用^い， モ ル モッ ト実験大腸 癌^の発生率な ら びに発_生個 数が胆 摘によ^って如 何^に変 化す るかを検 討し た．ま た，

得ら れ た結 果が胆摘 後^の如 何な る胆 汁酸 代 謝^の変化^に 起 因す るかを検 索す る た め， ガス クロ マ ト グラ フ ィ^ー

を 用^い胆 摘^{モ ル モ}ッ トの胆 管 内胆汁およ び糞 便中胆汁 酸組 成^の変 化を分析し た^．

材 料およ び方法

実 験 動物はモ ル モ ット 用飼 料^{G M −3}く船橋 農 場製1^お よ び水 道 水^で飼 育^{さ れ た，6} 適 齢，体重約30 0 g の^{ハ ー}

ト^レー くH^{a rt}leyl系雌 性^{モ ル モ} ット を 用^いた． 実験^モ デ^{ル の}作 製は 1 2 時 間絶 食 後， ジ^エチ^{ル エ ー} テ^ルくdi⁻

eth_ylethe rl 麻 酔 下^に約2 c m の上腹 部正中 切 開^にて 開腹し， 胆 嚢 管を 3 ⁻0 絹 糸で結数 切 離 後胆 嚢を摘除 し た． 実 験 群はこ の胆 摘群^に対し， 開 腹 操作のみ を施 行し た単 開腹 群^を対 照 群と し た． 術 後 管理 は手術当日 よ り^{モ ル モ}ッ ト 用飼 料G M ⁻3 およ び 水道 水を自由^に 摂 取さ せ， 抗 生 物質 等の投 与は行な わ な か^っ た．

発 癌 剤M N N G の投 与 方法は M N N Gく和光 純薬l を 投 与1時 間前^に遮 光墳中^で蒸 留 水に溶 解，0^．025％水溶 液と し， 2 ^mlく0^．5 ^mgl を月工門 繚よ り 1 0 ^{c m} ま^で挿入 し た 八光カ テ ^ー テル く^{7 フレ ン}チ サ イ ズう を通 し直腸 内に注 腸 投与し た． M N N G投 与回数^およ び期 間は，術 後8 日目^から開 始し，過 2 回，15 週間く総量15^mgノ匹I 投 与し た．

工． 病 理組 織 学 的検 索 方法

M N N G 投 与 開 始 後⁴0週 目に全例 屠 殺 剖 検し く図 1う， 摘 出し た大 腸を肉眼的^に観 察し た後，遠 位側大 腸 を 1 0 ％^{ホ ル マ}リン液^にて固定し た． 病理標 本は腸管^の 長軸 方 向^に幅1 0 0ノ^ノご と 6ノ^上の連続切片を作 製し，H E

S a c洞ほ^e

n

−

− − − − − − − − 一 − − − − −

2 5 C holecy^ste ctO m y 5 0 ^{一． − I I1 ．．1．． − − − − − − − T − − − − − − − − −}2 5

0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 ^{3 5 4 0} We eks

F ig^．1^． Expe rim e ntal de sig^n． Nu mbe r s回 of a nim als at the o n s et a nd ^{s u r v}iving ^at the e nd

ofthe e xpe rim e nt a r e sho wn． T he a r r o w s sho w the pe riod of in stillatio n with M N N G^． M N N G_，N⁻m eth_yl⁻N^，−nitr o⁻N⁻nitr o s ogu a nid in e．

N ⁻nitr o s o u r e aニU D C A _，u r S Ode o xy^cholic a cid．

大腸癌 発生増殖^に及 ぼ す胆 摘^の影 響^に関す る実 験 的研 究

染色後検 索^に供し た^．得ら れ た腫瘍^の組 織学的 判定は，

大腸癌取 扱^い規約^刷に準じ行^った^． す な わ ち，痛が粘 膜 内^{にと どま り，}粘膜 下 層^に及 ん で^いな^いものを^m 癌，

癌が粘膜 下 層^にと ど ま り， 固有 筋層^に及 ん^でいないも の を^{S m} 癌， 痛が固有 筋 層^にと ど ま り， これ を越えて いな^いも の をp^m 癌， 痛が 固有 筋層を越え^{て い}る が，

梁膜表面^に出^{て い}な^いものを ^{S S}癌と し た．

工工． 糞便 中胆 汁酸分析 方法

分析試料は，術 後 第2 8 週 時^の1 日 量^の糞便を採 取し 2⁴時間凍 結乾 燥 後^， 乳 鉢 中で粉 末にし た ものを 用^い

た．

抽出 方法^{は Gr u ndy ら1 9 ，，} 滝田 ら^{2 0 ，}ぉよ び佐々木^{2 り}

の方法^に準じ， 分 析 装 置は島津G C⁻7 A 型 ガ^スク^ロ マ

ト グラ^{フ ィ ー} を使用 し た^． カ ラムは 0．2％pol_y ト 1 1 0ノ

クロモ ソ ルブ W ⁻H P 8 0 ^句10 0 を充 填し た ガ ラ^{ス カ} ラ ムを 用^{い， ヘ} リ ウ^ムを キャリ ア^ー ガスと し， 流 速6 0

mlノ^{min， カラム}温 度2 20⁰Cの条件^{で 分}析し た．

各種胆 汁 酸^の標 準 標品 は ガ^{ス クロ}工業株 式 会 社製^の

コ ^ール酸 く^Cholic a cid， C Al， デ オ キシ コ ^ー ル酸 くde o xycholic a cid， D C Al， ケ^ノデ オ キ^{シコ ー ル}酸 e^{che n ode o xycholic a cid， C D C A l， リ トコ ー ル}酸 く1itho cholic a cid_，L C Al ，およ び ウ^ルソ デ オ キ^{シコ ー} ル酸 く^{u r s ode o x}y^cholic a ci d， U D C AJ を 用^い， 内 部 標準物質^には同社^のコラン酸 く^chola nic a ci dl を 用^い

た．

臥 胆管胆 汁中胆 汁酸分析方 法

胆管胆 汁は第⁴0 週 屠殺 時 採取し た．各^モルモ ット を

481

12時 間絶 食後， ジエチル エ ^ー テル麻 酔下^に， 腹 部正中 線上で開 腹し， 単 開腹 群で は胆 嚢摘 除 後， 胆摘 群^では 直ち^に， 総胆管 内に外 径1^．1 ^{m m の} ポ リ^エ チ ^{レ ン} チ^{ュ ー} ブ く工G A R A S H I 社製1 を逆行 性^に挿入 し， 自然 流 出^のま ま胆 汁を採取 し， 直ちに凍結し測 定ま で保 存 し た．

抽出 方法は南 部ら^{2 2 I}，岩 淵^{2 別}の方 法に準じ行^い，分 析 装 置， 分析 条 件お よ び標 準 物 質は糞便 中胆 汁 酸分析と 同様^に施 行し た．

王V． 統計 学的検定 法

百分 率^の検 定はズ²検 定を 用^い， 平 均 値^の検 定は Stude nt の t分 布を 用^い行^い， 5 ％未 満の危 険 率を

も^って有 意と し た．

成 績

工^． 腫瘍発 生率

M N N G投 与^によ る腺腰 発 生 率は単 開腹 群， 胆摘 群 共^に1 00％^であ^っ た． 癌腫 発 生率は単開腹 群^の2 5 匹中 1 9 匹 く7 6％ンに対し胆摘 群では 2 5 匹中1⁴ 匹く5 6％う

を 示 し， 癌腫^の深 遠 度 別で は単 開腹 群^のm 癌14 匹 く56 ％ン， S m 癌1 3 匹く5 2％l， pm 癌2 匹く8 ％1，

S S

癌1 匹く4％う^に対し， 胆摘 群^では m 癌1 0 匹く4 0％う，

S S 癌7 匹 く2 8％1 を認め た だ けで pm ， S S 癌は み ら れ な^か った． 癌腫の発 生 率は両群 間^に有 意差は な^いが 胆 摘 群^で減 少す る傾 向を 示 し た． ま た深 遠度 別 発 生率

では， 単 開 腹群^では 深遠 度^pm 以 上の進 行し た痛が 8 ％^に発生 し た^{の に}対し， 胆 摘群で は進 行癌^の発 生は

Table l． Colo nic tu m o rin cide n c ein sha m ope r ated a nd^chole cy^ste cto miz edgu l n e a pigs in stilled with M N N G

Gr o up 禁霊s 慧完も憲^{芸喜怒 慧完h霊感霊喜 慧昆h誓竿冨}芦^s

S ha m ope r atio n 2 5 25 く1 0 O1 25 く¹00J ¹9 く76 1

C hole cyste cto my 2 5 25 く¹001 2 5 く¹001 ^{1 4} く5 61

Table 2． In cide n c e of c a r ci_{n o m a s}b_y histologic aldep th of in v a sio n

Gr o up No． of

a ni11 1 als

In cide nq^{e o}f c a r cinom a sby histologl C al dep th of in v a sio n く％1

m S m p^{m S S}

S ha m ope r atio n 25 1 4 e561 ¹3 く⁵21 2 く81 1 く41

C hole cyste cto my 25 1 0 く4 01 7く2 81 0 0

A b br eviatio n s of h istologic al dep th of in v a sio n a r e a s foll_{o w s 二} m ， m u C O S al lay^{e r}こS m， S ubm u c o s al lay⁻ e rこ pm ，pr Ope r m u S C ula rlaye rこ S S，S ubs e r o s allaye r．