Note Exp. Anim. 26 (4), 331•\334, 1977
Simplified
Methods
in Sampling
and
Shipping
of Individual
Sera
from
Mice and
Rats
for Serological
Checking
of Infections
Kð¯saku FUJIWARA and Yuriko TANISHIMA
Department of Animal Pathology, Institute of Medical Science, University of Tokyo, Shirokanedai, Minato-ku, Tokyo 108
The usefulness of simplified techniques in sampling of individual mouse and rat sera and their shipping in wet state for serological checking of infections were described.
血 清 学 的 検 疫 の た め の マ ウス ・ラ ッ トの個 体 別 血 清 採 取
お よ び 送付 の簡 便 法
藤 原
公 策 ・谷 島 百 合 子
東京 大学医科学研究所獣医学研究部
近 時 動 物 実 験 の 精 度 の 向上 が要 求 され,と くに実 験 成 績 に 大 きい 影 響 を 与 え る諸 因 子 に 対 す る関 心 が高 ま っ て い る。 な か で も実 験 の 過程 で 顕性 化 しやす い潜 伏 感 染 の 防 除 に つ い て は,直 接 病 原 因 子 や 病 変 を 検出 す る こ と も 大 切 で は あ るが,今 日内 外 で も っ と もひ ろ く行 なわ れ て い る のは 血 清 抗 体 を 検 出 す る こ とで あ る[1,2]。 この よ うな 血 清 学 的 検疫 方 法 が,病 因 ・病 変 を 検 出す る方 法 に くらべ て ま さ る点 と して,1)診 断 が 特 異 的 か つ 簡 便 で あ り多 数 の検 体 を 同 時 に 扱 うこ とが で き る,2)不 活 化 抗 原 を用 い る こ とを 前 提 とす るな らば 汚 染 の 危 険 が な い, 3)場 合 に よ っ ては 発 病,病 変 の 形 成 を み な い 不 顕 性 感 染 を知 る こ と も可 能 で あ る,4)生 産 群 で は 退 役 種 親, 実 験 群 では 実 験 終 了後 の動 物 の血 清 を 検 査 す る こ とで む しろ よい効 果 を期 待 で き,経 済 的 で も あ る,な どが 挙 げ られ る 。 もち ろん,感 染,と くに 不 顕 性 感 染 に よ る動 物 の抗 体 産 生 応 答 の て い どはそ れ ぞ れ の感 染 因 子,動 物 種 感 染 状 況 に よっ て か な り異 な る ので,血 清 学 的 検 疫 の み で,す べ て の 固有 感 染病 が 検 出可 能 と い うわ け に は い か な い 。 と くに,こ の方 法 では,あ らか じめ 検 査 対 象 と し て きめ た 病 原 因子 につ い て抗 原 を準 備 す るの だ か ら,そ れ 以 外 の もの につ い て はわ か ら ない 。 また,マ ウ ス ・ラ ッ トの セ ンダ イ ウ イル ス,Mycoplasma pulmonis, ラ ッ トのTyzzer病 な どの よ うに,血 清 学 的 検 疫 の み で, か な り鋭 敏 に汚 染 を検 出で き る も の も あ るい っぽ う,マ ウス の肝 炎 ウ イル ス(MHV)やTyzzer病 の よ うに 特 殊 な増 幅法 口]を 適 用 しては じめ て効 果 が 期 待 で き る も の もあ る 。 以 上 の よ うに血 清学 的 検疫 に も問題 点 は あ るが,さ き に 述 べ た よ うに,他 の 方法 に く らべ る とか な り実 際 的 な 有 用 性 に お い て ま さ るの で,マ ウス ・ラ ッ トな ど実 験 小 動 物 の 生 産 群,実 験 群 の 潜伏 感 染 の チ エ ッ クに は,今 日 内 外 を 通 じて血 清 学 的 検疫 が 主 と し て と りあ げ られ,付 随 的 に 必要 に応 じて病 原 因子 また は 病 変 の検 索 も行 な わ れ る。 さて,血 清 学 的検 疫 の実 を あげ るに は 多 数 の 検 体 を し らべ る必 要 が あ る 。 ま た,自 然 感 染 に よ る抗 体 価 は 高 度 免 疫 動物 のそ れ の よ うに高 くない のが 一 般 で あ るか ら, 個 体別 血 清 を 検 討す る必 要 が あ る 。 しか るに,マ ウ ス ・ラ ッ トな ど小 型 の動 物 で は採 取 で き る血 液 量 が 少 な い うえ, マ ウス で は と くに赤 血 球 の安 定 性 が わ る く溶 血 しや す い｡ この よ うな観 点 か ら,す で に “prediluted plasma” 採 取 法 がParkerら[3]に よ って 考 案 され て い る。 こ こで はParkerら の方 法 を 多 少改 変 し て,わ れ わ れ が 数 年 来 行 な って きた方 法 を,さ らにInternational Com・332
mittee on Laboratory Animals(ICLA)―Virus
Reference Centerの,1976年4月Hannoverに お け る workshOPに お い て き め ら れ た こ と に あ わ せ た 方 法 を 紹 介 し,あ わ せ て 検 査 の た め に 保 存,あ る い は 遠 隔 の 研 究 機 関 な ど に 送 付 す る 場 合 の 方 法 に つ い て も 触 れ て お く 。 個 体 別 血 清 採 取 法:図1に 示す よ うに,ま ず 焼 込 み ま た は マ ジ ッ ク イ ンキ な ど で1.5mlの レベ ル に マー ク し た小 試 験管(12×120mm)に 生 理 的 食 塩 水1mlを 分 注 して お き,こ れ に頸 動 脈 あ る いは 尾 動 脈 切 断,ま た は 心 穿 刺 に よ っ てえ た 全 血 液 を1.5mlの マ ー クレベ ル まで 受 け る。 試 験 管 を 軽 く振 って よ く混 和 し,わ ず か に 角 度
Fig. 1. Preparation of individual serum samples for antibody checking
Table 1. ICLA collaboration
on murine
virus serodiagnosis
(1976-1977)
* Mouse serum ** Rat serum
333
Table 2. ICLA collaboration
on murine
virus serodiagnosis
(1976-1977)
Tokyo-sera
to Sendai
Virus-CF
*, ** See Foot-notes on on Table 1.
をつ け て机 上 に 約20∼30分 静 置,凝 固 させ る。 つ い で 2,000回10分 遠 心,別 の小 試 験 管 も し くは プ ラ スチ ック チ ュー ブ に上 清 のみ を 移 す 。は じめ に 食 塩 水2容 に 対 し て 全血1容 が 加 え られ て い る か ら,血 漿 対 血 球 比 を 約 1:1と す れ ば,こ の よ うに し てえ た 上 清 つ ま り血 清 の 希 釈 は お よそ1:5と な る。 保 存 ・送 付 方 法:上 記 の よ うに して 採 取 した1:5血 清 を 検 査 のた め に 保 存 あ るい は 送 付 す る場 合,従 来 は -20℃ フ リー ザ ーに 凍 結,も し くは ドラ イ ア イス を 利 用 す る こ とが 多 い が,凍 結 ・融 解 に と もな う抗 体 活 性 の 低 下 を 考慮 す る と,と くに 自然 感 染 に よ る低 い 抗 体 価 の 保 持 には 好 ま しい とは い え な い 。 む しろ 防 腐 剤 を 入 れ て 液 状 の ま ま保 存 す る のが よ く,と くに 輸 送 の場 合 に は, 荷 造 り も簡 単 で輸 送 費 もい ち じ る し く節 約 で き る。 防 腐 剤 と しては,マ ー ゾ ニ ン(チ メ ロサ ール)を0.01%, ま た は ア ジ化 ナ トリ ウム(窒 化 ソ ー ダ)を0.1%の 割 合 に 加 え る。 図1に 示す よ うに,血 液 希 釈 に 用 い る生 理 食 塩 水 に あ ら か じ め1%マー ゾ ニ ンあ るい は10%ア ジ化 ナ ト リ ウ ム を1/100量 加 え て も よ い 。 密 閉 で き る 小 型 の プ ラ ス チ ッ ク チ ュ ー ブ を 利 用 す れ ば,多 数 の 検 体 を 封 筒 に 入 れ て 郵 送 す る こ と も 可 能 で あ る 。 こ の よ う に し て え た マ ウ ス ・ ラ ッ トの 血 清(1:5)の 抗 マ ウ ス 肝 炎 ウ イ ル ス(MHV)お よ び 抗 セ ン ダ イ ウ イ ル ス 補 体 結 合 (CF)抗 体 価 を,夏 期30℃ を 超 す 室 温 で 約2ケ 月 間, あ る い は4℃ に 数 ケ 月 以 上 保 存 し て お い て か ら し ら べ た が,ま っ た く抗 体 価 の 変 化 は な か っ た 。 こ の よ うな 方 法 で,す で に 述 べ たICLAのworkshoPに 関 連 し て マ ウ ス お よ び ラ ッ トの 血 清 を,チ ェ コ ス ロ バ キ アBla-tislavaの 疫 学 微 生 物 学 研 究 所,英 国Carshaltorの
Laboratory Animal Centre,西 独Hannoverの Zentralinstitut f ｹr Versuchstierkundeお よ び オ ラ
ン ダNijmegenのCatholic University Medical Schoolに 航 空 便 で 送 付 した 後,先 方 で え ら れ た 成 績 と,
こ ち ら で え た そ れ と を 比 較 し た 成 績 を 比 較 す る 機 会 が あ っ た 。Table1,2に 示 す よ うに,た ま た ま1976年 夏 期 の け っ し て 条 件 の よ く な い 季 節 で,到 着 後 夏 期 休 暇 の た
334 め 一 部 で は か な りの時 間 を経 て検 査 され た よ うで あ った が,そ れ に もか かわ らず,輸 送 に よる影 響 は ほ とん どな か った 。MHVに 関 して は一 部 機 関 の成 績 が 解 離 し てい るが,MHVに は ウ イル ス 株 に よ る抗 原 性 の差 異 もあ る の で,必 ず し も血 清 側 の 問題 のみ で は な い と考 え られ る。 以 上述 べ た 方法 に よ り,マ ウ ス ラ ッ トの血 清 学 的 検 疫 実 施 の 可 能性 が 高 め られ,固 有 感 染 病 の防 除 に 役 立 つ こ と と思 わ れ る。 本研究の一部 は,文 部省科学研究費(No.210703,1977)に よった。 REFERENCES
[1]
Fujiwara,
K. (1971): Problems
in checking
inapparent infections in laboratory mouse colonies: An attempt at serological check-ing by anamnestic response. In Proceed-ings of the IVth International Symposium on Laboratory Animals. pp.77-92, Nat. Acad. Sci., Washington, D. C.
[2] 藤 原 公 策(1977):実 験 動 物 の 感 染 病,藤 原 公 策 他 編:実 験 小 動 物 の 感 染 病, pp.13-29.ソ フ ト サ イ エ ン ス 社,東 京.
