2.免 疫 電 気 泳 動 法 に よ る新 しい分 析 法*
16
0
0
全文
(2) (66)生. 物 物理 化 学. Fig.. 1.. Immunoelectrophoretic. patterns. of sequentially. diluted. normal. human. serum.. 降 線 に お い て の み 可 能 で あ っ た). これ ら と 試 料 濃 度 と の 関 係 を 検 討 した(Fig.2,3).試 1/2稀. 釈,1/4稀. 釈 は 夫 々75%,50%,25%の. 料 濃 度 は 原 血清 を100%と. 濃 度 と し て あ ら わ し た .そ. 動 の プ レ ー トが 違 え ば 連 続 性 が な い.こ. 適 当 に と れ ば 改 善 さ れ る と して も,再. 現 性,直. れ に 反 してwは. Fig.. 2.. between. の点 は反 応 時 間を. 線 性 の点 で標 準 曲線 と して用 い る に は 不 十 分 で あ. 沈 降 線 の 外 縁 の 不 明 な と こ ろ は,明. Relation. 釈,. の 結 果 β/α,お よ びr. は 濃 度 の 増 大 に よ っ て 増 加 す る が,泳. っ た.こ. し,3/4稀. concentration. and. 瞭 な 部 分 の 延 長 と し て 仮 定 した点. α/β ratio×10‑1. (above),. and. con‑. centration and radius (cm) of ppt line (below) in immunoelectrophoresis. を とっ てwを. 測 定 す れ ば,対 数 で あ らわ した 濃 度 と よ く直 線 関 係 が あ る こ と が 判 明 し た(Fig.. 3).こ の こ とは免 疫 学 的 定 量 に用 い られ る放 射 状 単 純 免 疫 拡 散 法 と類 似 の関 係 が,免 に おい て も成 立 して い る こ とを 推察 させ た.そ ‑66‑. 疫電気泳動. こか ら出発 して,寒 天 電気 泳動 と 放 射 状 単 純 免 疫.
(3) Vol. 15.No. 1.1970. Fig.. 3.. Relation line. between. concentration. and. width. of. ppt. in immunoelectrophoresis. 拡 散 法 を 積極 的 に 組合 せ て,定 量 性 の あ る免 疫 拡 散 電 気 泳 動法 を考 案 した.そ 2.新. (67). れ に つ い て のべ る.. 方法. 再 現 性 の あ る寒天 電気 泳 動法 と して,ま ず 一 定 の厚 さの寒 天 板 を 作 る方 法,水. 分 の蒸 発 を 防止. した 泳動 槽の 考 案,電 気 滲透 を少 な く し,寒 天 の変 形 を 防 ぐた め の ア ガ ロー ス 製 品 の選 択 な どが 基 礎 に な って い る7).方 法 の手 順 はFig.4に. Fig.. 4.. Procedures in detail. (1). for under. quantitative. 示 した .. immunoelectrophoresis.. the corresponding. 免 疫 電 気 泳 動 の オ ブ ジ ェ ク ト台(萱. numbers. of paragraph. Numbers. in the. 垣 製 オ ブ ジ ェ ク ト グ ラ ス4枚 ‑67‑. figure. are explained. in the text.. 用)の. 中 隔 を け ず り,2.
(4) (68)生. 物物理化学. 倍 巾 オ ブ ジ ェ ク ト グ ラ ス2枚 2枚 を の せ る.寒. 用 の 台 に 改 造 した.こ. ロ ナ ー ル 緩 衝 液pH8.6,μ=0.025(ベ 衝 液pH8.6,μ=0.1を4倍 (2). ロ ナ ー ル ソ ー ダ18.0g,1N塩. に 稀 釈 す る)に. 天 を 固 ま ら せ,隙. ガ ラ ス 板 を の せ て,そ. ガ ラ ス板. 酸13ml,蒸. ベ. 留 水1l迄. の原 緩. と か し た も の を 用 い た.. 間 を 埋 め て 後,10mlメ. ブ ジ ェ ク ト台 の 上 に ひ ろ が らせ た.直. さ1.5mmの. ル 強 度1,200g/cm2)を1%に. 最 初 に ガ ラ ス 板 と オ ブ ジ ェ ク ト台 の 接 触 す る 隙 間 に1ml程. ぎ,寒. cmの. こ に5.2×7.5cm,厚. 天 は 同 仁 薬 化 学 製 ドー タ イ トア ガ ロ ー スI(ゲ. と け た 寒 天 を ピ ペ ッ トに て 注. ス ピ ペ ッ トを 用 い20mlの. ち に ガ ラ ス 板 の 寒 天 の 上 に,シ. の ま ま 寒 天 を 固 ま ら せ た .そ. 寒天 を ガ ラス 板 と オ. リ コ ン処 理 を し た5.5×15. の 後 シ リ コン処 理 ガ ラス 板 は 横 に ず ら. す こ と に よ り除 い た. (3). 次 に ガ ラ ス 板 の 陰 極 側 よ り2cm,左. り あ け,こ 製)を. こ にBPBを. 右 の 縁 よ り0.8cmの. 加 え た 血 清2μl(標. 所 に 直 径2mmの. 準 曲 線 用 に は3〜1μl)を. 穴を吸 引によ. ハ ミ ル ト ン 注 射 器(仁. 丹. 使 っ て 正 確 に 入 れ た.. (4). こ れ を 裏 返 し に してWiemeの. 用 い,石. 高 圧 寒 天 電 気 泳 動 装 置 を 大 型 に し た 特 製 の 装 置(Fig.4)を. 油 工 ー テ ル の 代 り にIsopar(エ. さ せ た.電. 流 値 は30〜60mAと. ッ ソ 石 油)を. な っ た.ア. 冷 媒 に して,450V定. 電 圧 で15分. ル ブ ミ ンが 原 点 よ り4.5cm移. 間 泳動. 動 した と こ ろで泳動. を 止 め た. (5). ま ず ア ル ブ ミ ン の ス ポ ッ トの 中 心 に あ た る 点 を 裏 か ら ガ ラ ス 板 の 上 に 歯 科 用 の ア ブ ラ シ ブ. ポ ィ ン トを 用 い て 傷 を つ け て お く,次 剃 刀 で 切 っ て 取 除 く.2枚. に オ ブ ジ ェ ク ト台 上 の 寒 天 の ガ ラ ス 板 上 以 外 の 部 分 を 安 全. の ガ ラ ス 板 の 接 す る 部 分 は5mm巾. 位 に 寒 天 を 残 し て お い た.. (6). そ の 上 に 再 び シ リ コ ン 処 理 を した ガ ラ ス 板 を 被 い,ゴ. (7). 次 に 同 じ緩 衝 液 に と か し た1%のIBFの. 45℃. に な っ た 時 こ れ に 抗 ピト 血 清 と し てBehringwerke製. 羊 抗 ヒト血 清 で は0.32mlを. 加 え,駒. 板 の 隙 間 か ら注 入 し て,ガ. ム バ ン ドで3ヵ. ア ガ ロ ー ス(半. 所 を と め て 固 定 した .. 井 化 学)8mlを. 試 験 管 に と り,. 馬 抗 ヒ ト血 清 で は0,25ml. 込 ピ ペ ッ トに て攪拌. し て,(+)極. 側 と(‑)極. ,私 共 の 山 側 の ガ ラス. ラ ス 板 上 の 取 除 い た 寒 天 板 に 相 当 す る 空 間 を み た し た.. Fig. 5. Precipitation pattern in quantitative. immunoelectro-. phoresis (QIEP). (8). ゴ ム バ ン ドを は ず し,シ. 防 腐 剤 と し て チ モ ー ル2gを 棚 を 沈 め,37℃ (9). リ コ ン 処 理 ガ ラ ス 板 は そ の ま ま,オ. と か し た ブ タ ノ ー ル10mlを. 孵 卵 器 に5日. 間,中. 中 に 保持. 間 お い て 放 射 状 免 疫 拡 散 反 応 を 行 な わ せ た.. オ ブ ジ ェ ク ト台 よ り シ リ コ ン 処 理 ガ ラ ス 板 を 取 は ず し,附. 油 工 ー テ ル に10分. ブ ジ ェ ク ト台 の 保 持 棚 に の せ,. 加 え た 流 動 パ ラ フ ィ ン1lの. 性 洗 剤 に30分. 間 浸 した 後,水 ‑68‑. 着 し た 流 パ ラ を 除 く た め に,石. 道 水 で 洗 い,こ. れ を1lの. 生 理 食塩水 中.
(5) Vol. 15. No. 1. 1970. に 移 し,1日. 間 放 置 して余 分 の蛋 白を 拡 散 させ て 除 い た.. (10) 寒 天 板 の 上 に,濡 5%酢. (69). れ た 戸 紙 を あ て て 乾 燥 さ せ,次. 酸 水 に て 脱 色 を 行 な っ た.そ. い で ア ミ ドブ ラ ッ ク10Bに. て 染 色 し,. の 結 果 従 来 の免 疫 電 気 泳 動 と異 な る沈 降 反 応 の 図形 を う る こ. と が 出 来 た(Fig.5). 3.抗. 血清 につ い て の 検 討. 抗 血 清 寒 天 混 合 物 を 作 る 時 の 抗 血清 の 濃 度 は,濃 薄 い と 面 積 は 大 と な る が,沈. い と 沈 降 帯 の 密 度 が 高 く,面. 降 帯 の 密 度 が 低 く な っ て 輪 郭 が 認 め に く く な る .そ. 認 め う る 範 囲 で,面 積 を 出 来 る だ け 大 に し た 方 が,定 し抗 ヒ ト全 血 清 を 用 い る 際 は,す る.一. 般 に ア ル ブ ミ ン,ト. ラ ン ス フ ェ リ ン,γG免. い 抗 血 清 の 濃 度 を 用 い,そ. 6.. ま た は 馬 抗 ヒ ー 血清0.06ml単 た.そ. Effect. of mixed. 4.寒. 独 で あ っ て,人. on. ヒ ト γG0.02ml. pattern. と 抗BJL型. の 混 合 物,な. ど に よ って 免 疫 グ ロ. ブ ク ラ ス の 同 時 定 量 も可 能 で あ る こ と が 判 明 し た.. 天 板 の ど こを 切 断す る か. す る 場 合 と,原 が あ る.し. 点 か ら 少 し は な れ て 切 断 す る 場 合 で,沈. か し面 積 を 測 定 す る 際 に,沈. 方 法 の(5)項)に. 原点 す れ す れで切断. 降 帯 の 面 積 が 異 な り,再. 降 帯 の 面 積 だ け で な く,原. を 結 ぶ 線 の 上 の 面 積 を 測 定 す る よ う に す れ ば,寒 原 点 か ら は な れ て 切 断 し た 場 合 も,面. 現 性 を 欠 く欠 点. 点 の 中心 と アル ブ ミンの 中 点. 天 板 を 切 断 す る 時,原. 点 に 近 く切 断 し た 場 合 も,. 積 に 差 が あ ま り な い こ と が 判 明 し た(Fig.7).こ. 以 後 は 原 点 と ア ル ブ ミ ン の ス ポ ッ トの1mm外. Fig.8に. precipitation. 抗 ヒ. 体 免 疫 電 気 泳 動 と 同 じ位 の 抗 血 清 量 で 十 分 で あ っ. 抗 血 清 寒 天 混 液 を 流 し こ む 前 に 寒 天 板 を 切 断 す る 時(新. 5.定. 体 を 一 度 で 測 定 出来 る抗. 料 あ た り 抗 ヒ ト血 清0.08ml,抗. antibodies. 積 も. え ば 抗 γG特 異 抗 血 清 な ど を 抗 ヒ. 者 ら の 用 い た 条 件 は 山 羊 抗 ヒ ト血 清 を1:25,兎. の ほ か 抗 ヒ ト免 疫 グ ロ ブ リ ン,抗BJK型. ブ リ ン の 各 ク ラ ス,サ. が 量 的 に も 多 く,面. 分 の あ る も の は 面 積 が 大 き く な りす ぎ た り,. 応 す る 特 異 抗 血 清,例. 混 合 した 寒 天 で あ っ て,1試. Fig.. .し か. 分 以 外 の分 画の 濃 度 が 十 分 測 定 出来 る く. 体 価 を 補 強 した 条 件 に す る こ と に よ り,全. 血 清 寒 天 板 を 作 る こ と が 出 来 た(Fig.6).著 ト γGを1:100に. 疫 グ ロ ブ リ ン の3つ. こ で3成. の た あ に3成. 密 度 が 不 足 し た りす る よ うで あ れ ば,対 ト全 血 清 に 少 量 混 合 し て,抗. の 中間 で輪 郭 を. 量 の 感 度 を 上 げ る こ と に な る(Fig.5). べ て の分 画 に最 適 の抗 血 清 濃 度 と い うの は求 め るの が 困 難 で あ. 大 で そ れ 以 外 の 成 分 は 少 な く面 積 が 小 さ い.そ ら い に,薄. 積 は少 と な る.. れによ り. 側 を 直 線 で 結 ん で 寒 天 板 を 切 断 す る こ と に し た.. 量 免 疫 電気 泳動 に よ る定 量 法 示 す ご と く,濃. 度 既 知 の 試 料 と してBehringwerke製 ‑69‑. 標 準 血 清3μl,2μl,1μlを. 用 い,.
(6) (70)生. 物物理化学. Fig.. 7.. Effect. Fig. 8. Quantitative. of position. of cut. line. on area.. analysis of serum protein components.. ‑70‑.
(7) Vol. 15.No. 1.1970 同 時 に 被 検 血 清2μlと ガ ロ ー ス に よ り,放 う ち11の. 共 に 泳 動 し,山. 抗 ヒ ト γG1:100を. 標 準 血 清 に つ い て は16の. 成 分 は 容 易 に 同 定 す る こ と が 出 来 た(同 定 法 の 項p.74参. 容 易 に23の. 沈 降 線 を 識 別 す る こ と が 出 来 た が,標. γA2,β1E,が 同 定 可 能 で あ っ た.標 ン,コ. 羊 抗 ヒ ト血 清1:25,兎. 射 状 免 疫 拡 散 法 を 行 な っ た.3μlの. 蛋 白,βIEグ. の 成 分,プ. ロ ブ リ ン,セ. ル ロ プ ラ ス ミ ン を 認 め た.ま. つ は ま だ 同 定 出 来 な か っ た が,今. 沈 降 線 を 認 め,. 成 分 以 外 は αIL,α2L,. レ ア ル ブ ミ ン,Gcグ. ル ロ プ ラ ス ミ ン,は. 抗 ヒ ト血 清 で は 明 瞭 な 沈 降 線 と し て は 認 め る こ と が 出 来 な か っ た が,馬 ブ ミ ン,α2HS,セ. 混 じ た1%ア. 常 ヒ ト血 清 に つ い て は. 準 血 清 で 同 定 出 来 た11の. 準 血 清 に 含 ま れ る6種. リ ン エ ス テ ラ ー ゼ,おα2‑HS糖. 照),正. (71). ロブ リ. 著 者 等 の 山羊. 抗 ヒ ト血 清 で は プ レ ア ル. た 正 常 ヒ ト血 清 で 識 別 出 来 る 沈 降 線 の な か で8. 後 再 現 性 お よ び 疾 患 時 の 増 減 の 検 討,お. よ び他 の 同定 法 の併 用. に よ り明 ら か に な る と 思 わ れ る.こ. こで は標 準 血 清 お よ び被 検 血 清 で共 通 に 同定 す る こ と の 出来. た11の. リプ シ ン イ ン ヒ ビ タ ー(TI),α2M,ハ. 成 分,ア. ル ブ ミ ン,α1G,ト. ン ス フ ェ リ ン(Tf),β1A,ヘ. モ ペ キ シ ン(HX),IgM,IgA,IgGに. 面 積 を 測 定 す る に は 染 色 して 乾 燥 した ガ ラ ス 板 を,引. Fig.. 9.. Standard ponents. ア ー ト紙 上 に 引 伸 し た1つ1つ 結 果 をFig.9に 外 は,よ. 示 し た.標. curve. for. quantitation. by quantitative. 準 血 清1μl,2μl,3μlの3点. 伸 器 の フ ィ ル ム を 置 く 台 に の せ て7倍. of. serum. protein. に. com-. 動 化 学 天 秤 に よ り重 量 法 で 測 定 した .そ. の. の 間 に ア ル ブ ミンと トラ ンス フ ェ リン以. ル ブ ミ ン ま た は トラ ン ス フ ェ リ ン で 試 料 が3μlの. 待 値 よ りや や 少 と な っ て い る の は.5日. ラ. immunoelectrophoresis.. の 図 形 を 切 抜 い て,自. く直 線 性 が あ る が,ア. プ トグ ロ ビ ン(Hp),ト. つ い て定 量 した成 績 を の べ る.. 時 は 面 積 が 期. 間 の反 応 時 間 が 免疫 拡散 反 応 の 終 了す る に は ま だ 短 か く ‑71‑.
(8) (72)生. 物物理化学. て,不 十 分 で あ った ことを 示 して い る.Vaerman8)ら. が 放射 状 免 疫 拡散 反 応 を 終 着 さ せ る の に. 25日 間,孵 卵 器 に放 置 した成 績 が あ るが,標 準 曲 線 の直 線 性 を よ く して,定 量 の 精度 を上 げ るた め に は,a)反. 応 時 間 を5日 以 上 長 く して,拡 散 を 十 分 に行 な わせ るか,b)抗. 血清のなかの抗ア. ル ブ ミン の濃 度 を も う少 し高 く して,ア ル ブ ミンの 面 積 が も う少 し小 さい と こ ろで 反 応 が 完 了 す る よ うにす るか,の. いず れ か を とれ ば よい と思 わ れ る.. 被 検 血 清 中 の各 成 分 の濃 度 を 求 め る に は,対 応 す る成 分 の面 積 が,標 した と き の何%に. 準 血 清 の2μlを100と. な るか を 求 め,そ れ に標 準 血 清 の そ の成 分 の 濃 度 を 乗 じて,求. 来 る.そ の成 績 をTab.1に. 示 した.同. め る ことが 出. じ試 料 血 清 を,定 量 法 と して 現 在 最 も信 頼 性 の あ る放 射. Table 1. Comparison between serum protein components as obtained by QIEP and single radial immunodiffusion.. 状 単 純 免 疫 拡 散 法Behringwerke製Partigenに ず し もす ぐれ た一 致 で は なか ったが,こ. よ る各 成 分 の定 量 値 と比 較 した.そ. の時 は2つ の方 法 と も不 慣 れ で あ っ て,ハ. 射 器 の代 りに ミク ロ ピペ ッ トを使 用 して い る.術 者 の慣 れ に よ る技 術 向上 の上,比. の成 績 は必 ミル トン の注. 較 す れ ば,原. 理 的 に は も う少 しよ い一 致 が 得 られ る の で は な いか と考 え られ る. 面 積 を 測定 す るの に,重 量 法 の代 りに,引 伸 した写 真 を プ ラニ メ ー タ ー に よ り測 定 す る.ま. た. は各 成分 の 図形 は,成 分 毎 に相 似 形 と仮 定 して,沈 降 帯 の基 線 か らの高 さと 巾 の 積 で沈 降帯 の面 積 の 代 り と して も用 い う る こ とが判 明 した. 6.定. 量 免 疫 電 気 泳 動 の 半定 量 法 と して の使 用. も し面 積 の 測 定,標 清2μlを,同 1例 をFig.10に. 準 曲 線 の 作 製 な ど の 手 間 を 省 い て,簡. 時 に 正 常 ヒ ト血 清2μlと 示 した.こ. の 例Hodgkin氏. α112%,α216%,β10%,γ37%と. 単 に こ の 方 法 を 用 い る に は,被. 病 で は,寒. 著 増,α2MとHp,β1Aが. の. 天 電 気 泳 動 に お い て も ア ル ブ ミ ン25%,. 量 免 疫 電 気 泳 動 を し て み る と,ア. 明 の α1成 分,γMが. 検血. 量 免 疫 電 気 泳 動 を 行 な っ て み る と よ い.そ. 明 ら か に ア ル ブ ミ ン の 低 下,α1,α2の. 加 が 見 ら れ る の で あ る が,定 α1TI,αIG,不. 並 べ て,定. 増 加,β. ル ブ ミ ン とTfの. 中 等 度 増 加,γGは. の 減 少,γ. の増. 減 少 が 著 し く, や や 増 加,γAは. 正 常 と 変 ら な い な ど の 変 動 を 明 確 に 捉 え る こ と が 出 来 た.. こ. 7.定 量 免 疫 電気 泳動 と従 来 の方 法 と の比 較 こに のべ た定 量 免 疫 電 気 泳動 を 従 来 の免 疫 電 気 泳 動 と比 較 す る と,新 a.定. 量 性 が あ る.. b.従. 来 の方 法 で は 反 応 の おこ る区 画 が,せ いぜ い0.7×6.0cm2で. 方 法 は2.0×6.0cm2と. しい方 法 は. あ っ た の に 比 べ,新. しい. 拡 大 され た た め,沈 降 線 の 重な り合 い も少 くな り,従 来 の 方 法 よ り多 く ‑72‑.
(9) Vol. 15. No. 1. 1970. の 成分 を 同 定 す る こ とが 出来 る.そ の結 果 は寒 天電 気 泳 動後,片. (73). 側 に従 来 の免 疫 電 気 泳 動 を 行 な. い,他 側 に定 量 免 疫 電 気 泳 動 を行 な った場 合 に 明確 に な った(Fig.11).. Fig. 10.. Fig.. 11.. Comparison between QIEP pattern of normal and abnormal (Hodgkin's disease) serum.. Comparison. between. immunoelectrophoresis. and. quantitative. immunoelectrophoresis.. c.抗. 血 清 の 使 用 量 は,両 者 同 じか,或 い は 新 しい 方 法 が少 な くて済 む か も しれ な い が,新. し. い 方 法 で は 抗 血 清 を 組 合 せ て 使 用 す る な ど,面 倒 な 操 作 を 必要 と す る. d.泳. 動 時 間 は新 しい方 法 が 短 く,15分:40分. で あ る が,反 応 時 間 は5日 間:1日. 間 で,新. し. い方 法 が 長 くか か る. e.操. 作法 は新 しい方 法 が 複 雑 で あ る.. 定 量 免 疫 電 気 泳 動(QIEP)を a.QIEPで RIDよ. 放 射 状 単 純 免 疫 拡散 法 に よ る定 量 法(RID)と. 比 較 す ると,. は使 用 した 試 料 の 半分 の 拡 散 で,片 側 の み で 判定 す るの で,全 周 の 拡 散 を 用 い る. り精 度 が 落 ち る.. b.QIEPで. は血 清 全 成 分 を 一 挙 に定 量 出来 るの に,RIDで. c.QIEPで. は抗 全 血 清 で定 量 可 能 で あ るが,RIDで. は1度 に1成 分 しか 測 定 出 来 な い.. は特 異 抗 血清 を 準 備 しな い と 定 量 出来 な. い. d.操. 作法 はQIEPの. 方 が 簡 単 で あ る.. 要 約 す る と定 量 免疫 電 気 泳動 は従 来 の 免 疫 電 気 泳 動 と放 射 状 単 純 免 疫 拡 散 法 の 中 間 に あ た る方 ‑73‑.
(10) (74)生. 物物理化学. 法 で,従 来 の免 疫 電気 泳動 と くらべ る と操 作 法 が 複 雑 で あ るが,臨 った方 法 で,広. 床 検 査 の 目的 に は よ りよ く合. く行 な わ れ る こと に よ り血 清 蛋 白質 各 分 画 の病 態 生 化 学 的 意 義 を 明 らか にす る方. 法 で あ る と 思 わ れ る.. II.血 免 疫 雷 気 泳 動 に お い て,沈 利 用 す る 方 法,特. 降 線 を 同 定 す る 方 法 と し て は,特. 異 抗 血 清 の 使 用,既. 利 用 法 な ど,様. 清 蛋 白成 分 の 新 同定 法. 々 な 方 法 が あ り,総. 異 的 染 色 法,抗. 原 の特 異 的 活 性 を. 知 抗 原 を 近 く に お い て 比 較 す る 方 法,そ. の 他 ア イ ソ トー プ. 括 的 に は 既 に 述 べ た6).そ. 比 較 す る 方 法 が 最 も 確 実 な 方 法 で あ り,特 高 価 で あ る こ と と,同. 異 抗 ヒ ト血 清 蛋 白 分 画 は 市 販 さ れ て い る.た. 定 の た め の 手 数 が,特. れ で 顕 微 鏡 オ ブ ジ ェ ク トグ ラ ス に2試. に お い て も,試. と に10μl程. こ の 方 法 を 屡 々用 い る こ と に よ り,疾. 定 の 能 力 を 向 上 さ せ て,よ. 疫 グ ロ ブ リ ン の3成. ト リプ シ ン イ ン ヒ ビ タ ー(α1TI)が (Hp),γA,γM免. 切. な れ て,巾2mmの. 患 時 血 清 で 量 的 変 動 の た め に相 対 位 置 が 入 れ か わ って い. α1‑酸 性 糖 蛋 白(α1AG)の. 12.. た 自 分 の 用 い て い る 抗 ヒ ト 血清 の 性 質 を 明 ら か に す る. 分 は 誰 が 見 て も 容 易 に 同 定 が 可 能 で あ る.次. 域 に1つ. ラ ンス. に α2Mと α1 プ トグロ ビン. ロ ブ リン な ど が 見 た だ け で ほ ぼ 同 定 可 能 で あ る.た. for identification. of ppt. れ と α1リ ポ 蛋 白(α1L)の. 区 別 な ど が 困 難 な こ と が あ る.そ. lines. in IEP.. 区 別,α2領. 域 で はHpと. セル ロプ. の方 法 は定 量 免疫 電 気 泳 動. の 方 法 に よ っ て 側 溝 の 方 で 同 定 し な が ら,中. ‑74‑. 域,. 類 ず つ 採 用 し て 同定 の 参 考 にす. 変 望 ま し い こ と で あ る と 考 え る.こ. 法 に お い て も 同 様 に 適 用 す る こ と が 出 来 て,こ. だ. 区 別,α1TIと. こ で そ の 人 の 能 力 や 必 要 に 応 じ て,α1領. ず つ 小 さ な 溝 を 作 っ て 特 異 抗 血吸 清 を1種. る こ と を ル チ ン化 す る こ と は,大. れ を 基 準 に し て,ハ. 達 し た 人 で も β1A‑cと ヘ モ ペ キ シ ン(Hx)の. A method. 区 別,そ. 極 的 に採 用 す. ト血 清 蛋 白 の 免 疫 電 気 泳 動 に お い て ア ル ブ ミ ン,ト. 疫 グ ロ ブ リ ン,β1A‑cグ. Fig.. α2領 域,β1領. の 結 果 は 試 料 か ら8mmは. 位 置 関 係 か ら 同 定 さ れ,そ. 疾 患 時 の 変 動 が 加 わ っ て くる と,練. ラ ス ミ ン(Cp)の. の 刃 で 長 さ1〜1.5cmの. 囲 の 緩 衝 液 を 少 し吸 取 った あ. り深 い 読 み と りの 能 力 を 習 得 す る 上 に も,積. べ き 方 法 で あ る と の 結 論 に 達 した .ヒ フ ェ リ ン,γG免. こ に 安 全 剃刀. 特 異 抗 血 清 を 入 れ た 場 合 と 変 りが な か っ た.. る 沈 降 線 を 同 定 す る こ と が 容 易 と な り,ま 上 に も,同. 央 に溝 を 作 る通 常 の 免疫 電 気 泳動. こ に 戸 紙 片 を 添 入 して,周. の 特 異 抗 血清 を 毛 細 管 で 入 れ た.そ. 溝 を 用 い,0.1mlの. 降 線 を 形 成 す る 能 力 に 変 りが な い こ とを確. 料 を の せ,中. 料 の 外 側 の 余 分 の 空 間 を 利 用 し て,こ. り こ み を 泳 動 方 向 に 並 行 して 作 り,そ. だ そ れが. 異 抗 血 清 に よ る 同 定 法の 活 用 を 妨 げ て い る.. 私 共 は 近 距 離 で 用 い る と 少 量 の 特 異 抗 血 清 で も,沈 か め た.そ. の な か で は 特 異 抗 血 清 を 使 用 して. 央の.
(11) Vol. 15. No. 1. 1970. Fig.. 13.. A method zones in. by. for a. identification. small. quantitative. amount. of of. (75). precipitation. specific. antisera. immunoelectrophoresis.. 部 分 で 定 量 化 を 行 な う こ と が 可 能 で あ っ た(Fig.12,13).. III.M成 免 疫 グ ロ ブ リ ン に 少 量 のM成 少 せ ず に存 在 す る こ と が 多 い.そ. 分 判定 用免 疫 電 気泳 動9). 分 が 存 在 す る 時 は,M成. 分 以 外 のresidual免. の 存 在 は 周 囲 の 免 疫 グ ロ ブ リ ン の 拡 散 に よ る沈 降 線 に 重 な っ て,沈 な い こ と が 多 い.こ. 分 を 認 あ る の に,免. 泳 動 か ら判 定 ま で の 時 間 の短 い(20分)寒 residual免. ちFig.14に. 疫 電 気 泳 動 で は64倍. 疫 グ ロ ブ リ ン の 影 響 が 少 な い 点 が 有 利 で あ る が,一. だ け の 判 定 で あ る の で,免 白 を 免 疫 グ ロ ブ リ ンM成. 疫 グ ロ ブ リ ン以 外 の 蛋 白 で も,易 分 と認 め る 可 能 性 が あ る.そ. 出 来 る の で す ぐれ て い る.免 重 要 で あ る.そ. お い て,512倍. 疫 電 気 泳 動 に よ るM成. こ ま でM成. 分. 稀 釈 まで 寒天 電 気. 稀 釈 ま で 可 能 で あ る に す ぎ な い .こ. 天 電 気 泳 動 で は,M成. 分. 降 線 の彎 曲 と し て は 認 め ら れ. の こ と は ミエ ロ ー マ 血 清 を 正 常 人 血 清 で 稀 釈 した 系 列 で,ど. の 存 在 が 検 出 可 能 で あ る か 検 討 して 判 明 し た .即 泳 動 で はM成. 疫 グロ ブ リン も減. う す る と 抗 原 過 剰 域 で 行 な う通 常 の 免 疫 電 気 泳 動 で はM成. 分 の 拡 散 が 少 な く,周. れ は 囲 の. 方 寒 天 電 気 泳 動 の 欠 点 は ,易. 動度. 動 度 が 同 じで あ れ ば バ ン ドを 作 る 蛋. の 点 は免 疫 電気 泳 動 で は 抗 原 性 の 確 認 が. 分 判 定 法 の 感 度 を 高 め る こ と は,そ. の意味で. れ を 実 現 す るた め には 免 疫 拡 散 法 自体 を 短 時 間 で 行 な え るよ うに 変 え る ことが 出. 来 れ ば 一 番 よ い が,現. 在 は 不 可 能 で あ っ て,現. 細 い 沈 降 線 に して,抗. 血 清 に 免 疫 グ ロ ブ リ ン の 一 部 分 と 反 応 す る よ う な 特 異 抗 血 清 を 用 い る と,. M成. 分 が 抗[血清 と 反 応 す る か 否 か で,residual免. 策 で 多 少 は 改 善 す る こ と が 出 来 た,そ. 在 の 方 法 で は 沈 降 線 を 抗 原 過 剰 で な い,最. 疫 グ ロ ブ リン の 影 響 を 切 下 げ る ,な. の た め に は 長 距 離 の 泳 動 と 抗L鎖,ま ‑75‑. 適比 の. どの解 決. た は抗 ア ロタ イ プ.
(12) (76)生. 物物理化学. Fig. 14.. Sensitivity. of agar electrophoresis. and immunoelectrophoresis. in the detection of small amount of serum M-component that was experimentally made by sequentially diluting myeloma serum with normal human serum.. Fig. 15.. Schematic. representation. of a method. for identification. of. M-component.. Fig.. 16.. An. example. present. of. detection. of. M-component. method.. ‑76‑. in patient's. serum. by. the.
(13) Vol. 15.No. 1.1970. (77). 抗 血 清 に よ る 沈 降 図 形9)の 比 較 を 行 な っ て い る(Fig.15).. この 方 法 を 応 用 して,ミ エ ロー マ の 初 期 で あ る とか,良 性 単 ク ロー ン免疫 グ ロブ リン症 の境 界 例 な どの確 認 に 役立 て る こと が 出来 る.通 常 の免 疫 電 気 泳動 で はM成 この方 法 に よ って 証 明 出 来 た1例 をFig.16に って,定 量 免 疫 電 気 泳 動 はM成. 分 が 確認 出 来 な い の に,. 示 す10).こ れ は 従 来 の免 疫 電気 泳動 の改 良 法 で あ. 分 の存 在 につ いて の感 度 は従 来 の方 法 よ り 低 い.こ れ は5日 間. の 反 応 時 間 が長 い た め で あ る.. IV.脚 免 疫 電 気 泳 動 の コ ン ピ ュ ー タ ー に よ る 判 定 法 免 疫 電 気 泳 動 の パ タ ー ン が 表 現 して い る も の を 正 確 に 読 み と る こ と は 熟 達 と 経 験 だ け で は 困 難 で あ る.正. 常 の と り う る 様 々 な パ タ ン の 範 囲,そ. ン が 超 え て い る か,い. な い か,た. カ ン だ け で は す ま さ れ な い も の が あ る.そ タ ー ン を 得 る こ と と,パ め て,そ. れ を 特 定 の 患 者 の 血 清 の 免 疫 電 気 泳動 の パ タ ー. く さ ん の 沈 降 線 の1本1本. に つ い て そ れ を 行 な う に は,個. れ を 行 な う に は 第1に. 再 現 性 の あ る免疫電気泳動 パ. タ ー ン を 数 字 に あ ら わ し て コ ン ピ ュ ー タ ー に 記 憶 さ せ,正. れ に よ っ て 異 常 を 読 み と る こ と,究. 人の. 常の範囲を決. 極 的 に はパ タ ー ンそ の ものを コン ピ ュ ー ター に 直 接. 読 ま せ て 判 定 さ せ る こ と が 将 来 達 成 さ れ る で あ ろ う と 思 わ れ る10,11).そ の 一 つ の 段 階 と し て,免 疫 グ ロ ブ リン が 多 ク ロ ー ン型 の 増 加 を 示 す 場 合 に そ の ク ロ ー ン の 分 布 が,正 か ど うか を 見 る1例. 常 と 異 な って い る. と し て 免 疫 グ ロ ブ リ ン の 各 ク ラ ス の 増 減 と 沈 降 線 の 起 点,終. 点,最. もふ く ら. ん だ 点 な どが ど の よ う に 相 関 を 示 す か を コ ン ピ ュ ー タ ー に よ っ て 検 討 し た 私 共 の デ ー タ が あ る. こ れ は γG免 疫 グ ロ ブ リ ン が1,700mg/dl以 肝 炎6例,肝. 癌3例,強. 上 に 増 加 し た44例. 皮 症9例,SLE9例. 疫 拡 散 法 に よ り 測 定 し た(Table. Table. 2).こ. 2.. に つ い て,ま. ず γG,γA,γM,γDの. れ に よ り,γGを1,000mg/dlに. Data. used. for. ‑77‑. analysis. の 疾 患,肝. by. computor.. 硬 変 症17例,慢. 性. 各濃度を単純免. 調 整 して 免 疫 電 気 泳 動.
(14) (78)生. 物物理化学. を 行 な っ て10),抗 の べ た 方 法)に Fig.17の. 各 点 のXY座. した(Table あ る.そ. γGFC,抗BJK,抗BJLを. よ る パ タ ー ン を3倍. 2).こ. 標 上 の 数 値 を 読 ん だ.こ. こ で はKx2以. れ ら の 間 の 相 関 係 数 を2230NARC型. 17.. Schematic. さ ん 孔 テ ー プ に 入 れ て,84の. representation. of the. 下 お よ びLx2以. 度 と抗 γGFCを た はIgAの. 用 い た 時 のyの 濃 度 と 抗BJLを. points. used. for. 抗BJKを. 疾 患(肝. 間 の 相 関 が‑0.5871で1%以 用 い た 時 のx1の ‑78‑. 下 は 記 載 を省略. analysis. に て 作 り,こ. 硬 変,慢. れを. by computor.. 相 関 係 数 を 数 分 間 で 求 め る こ と が 出 来 た(Table. 下 の 危 険 率 で 有 意,肝. 項IIIに. 点 を 零 点 と し て,. コ ン ピ ュ ー タ ー に よ り計 算 した も の で. の 結 果 か ら 有 意 な も の を 選 ぶ と 肝 硬 変 症 のIgAと. 数 が‑0.7406で1%以. IgGま. ラ フ用 紙 上 に 投 影 し て,原. の た め に 任 意 の 行 の 間 の 相 関 係 数 を 求 め る プ ロ グ ラ ム を,NARC語. Fig.. そ. 用 い た 時 の 長 距 離 免 疫 電 気 泳 動(前. に 引 伸 し,グ. 3).. 用 い た と き のx1の 性 肝 炎,肝. 間 の 相 関係. 癌 の 総 括)のIgG濃. 下 の 危 険 率 で 有 意,SLEの. 間 の 相 関 係 数‑0.7639と‑0.7470が. 時の いず.
(15) Vol. 15.No. 1. 1970 れ も5%以. 下 の 危 険 率 で 有 意 で あ っ た.こ. る な か に も,増. (79). れ ら は 多 ク ロ ー ン 性 高 γ‑グ ロ ブ リ ン血 症 と 一 括 さ れ. 加 の 各 ク ラ ス と 易 動 度 の 間 に 少 しず つ 特 徴 が あ る こ と を 示 して い る. Table. 3.. Correlation. こ れ ら の 点 は 更 に 検 討 し て,発. coefficients. obtained. by. computor. analysis.. 展 さ せ て ゆ くつ も り で あ る.. これ らの4つ の 改 良 は免 疫 電 気 泳 動 を 血 清 の 分 析 に適 用 して ゆ く うち に,必 対 策 で あ って,0.002mlの. 然 的 に生 れ て き た. 血 清 を分 析 して得 られ る情 報 を,出 来 るだ け有 効 に 利 用 し て,血 清. 蛋 白分 画 の 変 動 よ り疾 患 の意 味 をつ か み と ろ うとす る,一 つ の方 向 に沿 った もの で あ る.こ 究 のIに. 対 して は 谷 垣 信行(ニ. 誠(三 重 大 ・医 ・宮 地 内 科),沢. ュ ー ヨ ー ク州 ロズ ウ エル パ ー ク記 念 研 究 所)III,IVに 武 祐 子,IVに. 関 して 大 山. の研. 関 して 柳 田. 浩(金 沢 大 ・医 ・生 理 学 教 室)諸. 氏. の 御 助 力 に負 うと ころが 大 で あ った こ とを 付 記 して,感 謝 の 意 を 表 した い. 最 後 に この講 演 の機 会 を得 た こと を電 気 泳 動 学 会 担 当 の方 に感 謝 す る.. 文. 献. 1) Grabar, P., & Williams, C. A.: Methode permettant l'etude conjuguee des proprietes electrophoretiques et immunochemiques d'un melange de proteines. Bioch. Biophy. Acta, 10, 193-194 (1953) 2) West, C. D., Hinrichs, V., & Hinkle, N. H.: Quantitative determination of serum globulins beta-2A and beta-2M by immunoelectrophoretic analysis J. Lab. & Clin. Med., 58, 137-148 (1961) 3)伊. 藤 直 彦,井. 林. 淳:血. 清 蛋 白Subfractionの. 電 気 泳 動 的 研 究,生. 物 物 理 化 学10,144‑145(1964). 4). Afonso, E.: (1966). Quantitative immunoelectrophoresis of serum proteins, Clin. Chim. Acta. 13, 107-112. 5). 右 田 俊介:免 疫 電気 泳 動 法 の手 技 と応 用:日 本 臨牀:17,574‑587(1959) ‑79‑.
(16) (80)生. 物物理化学. 6). 右 田 俊 介:免. 疫 電 気 泳 動 の 実 施,臨. 床 病 理11,434‑441(1963). 7). 右 田 俊 介:血. 清 蛋 白 の 臨 床,第1回. 北 陸 内 科 懇 話 会,昭44年5月21日,講. 8). Vaerman, J. P., Verheyden, A. M. L., Scolari, L., & Heremans, J. F.: Further studies on single radial immunodiffusion. Immunochemistry, 6, 279-285 (1969) Migita, S.: Homogeneous immunoglobulins in humans and in experimental animals, Acta Hemat. J ap, in press.. 9) 10). 右 甲 俊 介,柳. 11). Schwick,H.G.:ヒ. 田 誠:免. 潭 グロ ブ リ ン の 臨 床,皮. 膚 科 綿 要64,65‑80,(1969). ト血 漿 蛋 白 質 研 究 の 現 況,講. ‑80‑. 演 要 旨,昭43年6月12日(1968). 演 抄 録1〜21(1969).
(17)
関連したドキュメント
Fig, 1.5 Comparison between result of plastic strain field by crystal plasticity FEA and fatigue test on crack initiation s ite in Ni alloy, a mapped region showing the grain
ク ロー ン型
FUJISAWA SHUNSUKE MIGITA Cancer Research Institute Kanazawa University Takaramachi, Kanazawa,... 慢性活動性肝炎,細
the cause of impaired wound healing: reasonable In Section 2 we presented clinical measurements penetration of low capillary tip density may cor- showing how
2 Similarity between number theory and knot theory 4 3 Iwasawa invariants of cyclic covers of link exteriors 4.. 4 Profinite
4.1 Symmetrization along radial geodesics and a qualitative generalization of Bishop’s volume comparison theorem.. We begin justifying the name starlike domain with scalar
In this section we outline the construction of an algebraic integrable system out of non- compact Calabi–Yau threefolds, called non-compact Calabi–Yau integrable systems, and show
In this work, we proposed variational method and compared with homotopy perturbation method to solve ordinary Sturm-Liouville differential equation.. The variational iteration
