岡 山 医 学 会 雑 誌 第74巻1, 2, 3合 併 号(第806, 807, 808号)
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(2) 2. 山. Haurowitz等. の 新 しい 研 究 に よ るRNAの. 崎. 生体内. 良. 平. い, 1週 間 同一 条 件 の もと に飼育 し生 活環 境 に 馴致. で の 役 割 は 蛋 白 合成 の 際 に何 か鋳 造(Template)様. せ しめ た後,瞬 間 的 に撲 殺 して その 大 腿骨 骨 髄を 用. の 作用 を つ か さどつ て い るで あろ うと述 べ て い る.. い た.骨 髄採 取 は 総 て無 菌 的 に行 な つ た.. 然 して, DNAは. 核分 裂 及 び 遺 伝 に密 接 な 関 係が あ. る 事 は 先 駆 者 に よ り認 め ら れ て い る と こ ろで あ る.. 第2節. 実験 方法. 被 覆 培 養法:. Carrel, Fischerの 原 法 を 教室 で. 改良 した 方法 によ つ た.即 ち培 地 の支 持 体 と して は. 飜 つ て,核 酸 の 造血 機 能 に 及 ぼ す 影 響 につ いて. 同種 健 康家 兎 の ヘパ リン加 血 漿を 用 い,発 育 促進 物. は 既 に,天 野1),菊 地9),高 橋21), Andreason43),. 質 と して孵 化7〜8日. Martin72), Lawrance68), Abrams39), Lutwak‑man71),. 式順 は(1),カ. 森 等36)に よ り骨 髄 内 核 酸 量 の 消 長 と造 血 機能 とが. 直径1.5糎 大 に 拡 げ, (2),一 辺 が約1粍. 密接 な る平 行 関係 に あ る事 が 究 明 され て い るが,現. 髄組 織片 を 入 れ る. (3),鶏 胎 圧 搾 液1滴 を加 え,. 在核 酸 の骨 髄 に対 す る直接 作 用 につ い て は不 明で あ. (4),そ の上 に各 種 濃 度 の 核 酸 溶 液を1滴 加 え る.. る.. (5),血 漿 の凝 固の 後,凹. さて,体 外 組 織 培 養 法 は1884年Roux81), 年Harrison59)に. 端 を 発 し, 1910年Burrows. 1907 &. Carrel45)46)は 凝固 メジ ュー ムを 組 織 の 支 持 体 と し て 用 い る事 を考 案 し,更 に1912年Carrelは. 出 した.こ れ が現 今 の被 覆 培 養法 の始 ま りで あ る,. 大 の小 骨. 窩 載 物硝 子 に合 わせ て パ. ラフ ィ ン で 封 入 し, (6), 37〜38℃. の孵 卵 器 に入. れ る,対 照 に は核酸 溶 液 のか わ りに リンゲ ル氏 液1 滴 を加 え た.. その上. に発 育 促進 物 質 と して胎 児 エ キ スを 添加 す る事 を 案. の鶏 胎 圧 搾 液 を使 用 した.術. バ ー グ ラス に ヘパ リン加 血 漿1滴 を. 第3節 第1項. 観察 方 法 組織 増 生 の観 察. 増生 面 積 の計 測:. 37〜38℃. の 保 温 箱 の顕 微 鏡. 本 法 の特 長 は培 養 され た細 胞 の生 活 現 象を 詳細 に観. を入 れ,ア ッペ氏描 画 器で 新 生 組織 を描 画 し,そ の. 察 す る事 によ つて,生 体 内 の生活 現 象 を可 成 り明確. 面 積 を プ ラ リメー タ 一で測 定 し実 面 積 に換 算 した.. に推 定 し得 られ る点 にあ る.従 つて,本 法 を 用 いれ. 次 に増 生 前 後 の差,即 ち絶 対 成 長 価 の原 面積 に対 す. ば骨 髄 の 白血球 機 能,例 え ば遊 走能,貪 喰能 等 の研. る比 率 を比 較成 長 価 と し,求 め られ た比 較成 長価 の. 究 に は,多. 対 照 実験 に対 す る比 率 を成 長 係 数 と した.. くの利 点 が あ り,就 中発 育 増殖 を営 みつ. つ あ る細 胞 の 諸機 能 を 直接 顕 微鏡 下 に観 察 し得 る事 は 最大 の利 点 と云 うべ きで あ る.然 して,家 兎骨 髄. 細 胞 密度 の測 定:増. 生帯 の周辺 部,中 間 部,中. 心 部 の3部 に 就い て それ ぞ れ一 視 野 の細 胞 数 を計 算. の組 織培 養 に 関 して は,教 室 の 亘理38)は その 組織. しそ の和 を 密度 指数 と し,対 照 の そ れ に対 す る比 率. 増 生並 び に,骨 髄 内偽 好酸 球 の遊 走 能 を,同 じ く角. の百 倍 を密 度係 数 と した .. 南18)は 墨粒 貪 喰 能 を,田 村24)は 生 体 染 色 をそ れ ぞ れ 詳 し く研 究 し確 固 た る実 験 方 法 を樹 立 して い る. こ こに於 い て,私 は骨髄 造 血 機能 に及 ぼ す核 酸 の. 第2項. 偽 好 酸球 の 機能 観 察. 遊 走 速度 測定:逐. 時 的 に細 胞 の 中心 点 の軌 跡 を. 30秒 を お き に求め,一 細 胞 につ き2分 間観 察 し,こ. 影 響 の一 端 を 究 明す るた め,被 覆培 養 法 に よ り家 兎. れを キ ユ ル ビ メー ターを 用 い て計 測 し,そ の 倍率 よ. 骨 髄 の組 織 増 生,細 胞 密度 並 び に偽 好 酸球 機 能 に及. り換 算 して 実 数値 を求 め, 1分 間 の遊 走速 度 を算 定. ぼ す核 酸 の直 接 添加 の影 響 を観 察 しい さ さかの 知見. した. 墨粒 貪 喰能 観察:こ. を 得 た ので 報告 す る.. れ に は海 野 氏 打抜 載 物硝 子. を 用 いて,墨 汁 は紅 花 墨を リンゲ ル氏 液 にて 磨 り濾 第2章 第1節. 実験 材 料 並び に 実験 方 法. 核 酸 塩 リンゲ ル氏 溶液(以 る):酵. 下 核 酸 溶 液 と省 略 す. こに 於い て 食喰 しや す い様 に した.. 牛 の 胸 腺 よ り抽. 貧 喰率 とは細 胞100個 中 の貧 喰 して い る細 胞 数 で. 使 用 した.使 用 す る に際 し本 物 質. 表 わ し,貧 喰 度の表 現 は 谷22)の 方 法 に 従 い 度数 を. 母 よ り抽 出 したRNAと. 出 したDNAを. 過 後使 用 した.術 式 は 教 室 角 南18)の 法 に倣 い 墨 汁 が 血 漿の 凝 固 した表 面 に侵 入 して薄 い 膜 を 作 り,こ. 実験 材 料. の ナ ト リウ ム塩 リンゲル 氏 溶液 を 作 り,無 菌 的 にす. 0〜4度. るた め にSeitz濾. を求 め,細 胞1つ の平 均 貧 喰度 を 算 出 した.. 実 験 動物:. 過 器 にて 濾過 して 用 い た.. 1.5kg前. 後 の 白 色 健 康 雄 家 兎を 用. に分 け,細 胞100個. に就 きそれ ぞ れ 貪 喰度.
(3) 核酸の骨髄体外組織培養に及ぼす影響. 第3章 第1節. 3. 溶 液 で はNo. 5に 於 い て24時 間 の 成 績 係 数 が1.68 実 験 成 績. とやや 高 値 を示 した 他 は全 て 組織 増 生 は対 照 よ り劣. 増 生面 積 並 び に 細 胞密 度 に 及 ぼ. り, Na. 3で は12時 間 で 増 生 は停 止 した.. す 影響. 1% RNA. 溶液 で は 可成 りの 増生 面 積 の 増大 を きた し全 例 に 於. (1)RNA溶. 液 を 添 加 した場 合(表1,図1). い て比 較成 長 価 は対 照 よ り高値 を示 し, No. 2, No. 4,. 10%RNA溶. 液で は高 濃度 に よ る抑 制 作用 の ため. No. 5の24時 間 の成 長係 数 は それ ぞ れ2.38,. 2.30,. 培 養 初 期 に於 いて 増生 を停 止 し24時 間 に於 け る成 長. 4.28で,特. 係 数 は そ れ ぞ れ0.04, 0.03, 0.02, 0.05, 0.10と. 胞密 度 は培 養 後12, 24時 間 に於 いて 対 照 の67, 64に 対. い低 値 を 示 した. 5%. RNA溶. 著し. 液 添 加 で も明 らか に. 抑 制作 用 が み られ, 24時 間 の 成 長 係 数 は それ ぞれ. にNo. 5で 著 しい組 織 増生 を示 した.細. し, 76, 88と 僅か な が ら増 加 を 認 め た. 0.5% RNA溶. 液添 加 で は 培 養 初 期 よ りす で に著. 0.15, 0.18, 0.11, 0.47, 0.19と 低 値 を 示 した.ま た細. しい増 生 を 示 し, 24時 間 に於 け る成 績 係数 はそ れ ぞ. 胞 密度 も表2の 如 く低 値 を 示 した.次 に2%. れ1.83, 2.35, 3.33, 2.19, 4.55と 高値 を示 した,細 胞. 表1. RNA. 比 較 成 長 価(RNA溶. 液 添 加).
(4) 4. 山. 図1.各. 種 濃 度RNA溶. 液 添 加 に 於け る. 比 較 成 長 価(平 均). 崎. 良. 平. 密度 は24時 間 に 於 い て 密 度 係 数 は144を 示 した. 0.1% RNA溶. 液 添加 例 で は培 養 後12時 間 及 び24時 間. の成 長 係数 はNo. 7を 除 き2以 上 の高 値 を 示 し,密 度指 数 は対照 と有 意 の 差 を 認 め な かつ た. 0.01% RNA溶. 液 で は培 養初 期 に於 い て 対 照 と 同程 度 の増. 生 を 示 した が, 121時間以 後は 可成 りの差 を認 め24時 間の成 長 係 数 はNo. 6以 外 は そ れ ぞ れ1.30, 1.80, 2.10, 1.97と 大 体 対照 の約2倍 の増 生面 積 を示 した. 細 胞 密度 は対 照 と有 意 の 差 を認 め な かつ た. 0.001 % RNA溶. 液 で は比 較成 長 価,密. 度 指 数 共 に 対照 と. 有 意 の差 を認 め な かつ た. (2)DNA溶 1%. DNA溶. 液 を 添加 した 場 合(表3, 液で は培 養後3時. 4図4).. 間 で ,全例 に於 い て. 比 較成 長 価 は対 照 よ り低 値 を示 し, 24時 間で は 成 長 表2. 密 度 指 数(平 均値). 係 数 はそ れ ぞれ1.00, 0.98, 1.26, 0.93, 1.39と 対照 と同程 度 の増 生 を 認 めた.細 胞 密 度 は24時 間 の 密 度 係 数が220と 対 照 の2倍 以 上 の増 加 を 示 した. 0.5% DNA溶. 液 の添加 では 全 例 に 於 いて 培 養 の初 期 よ り. 細胞 増 生 が尽 ん で, 24時 間 の 成 長 係 数 は それ ぞ れ 1.40, 1.33, 1.57, 1.33, 1.23と 明 らか に対 照 よ り 高値 を示 した.細 胞 密 度 は対 照 と有 意 の 差 を 認 めな か つ た.次 に, 0.1% DNA溶. 液 の 添 加 で24時 間 の成 長. 係 数 は それ ぞ れ1.00, 0.98, 1.26, 0.97, 1.39を. 示 し,. 対 照 と増生 面 積 は有 意 の差 を認 め な か つ た.密 度指.
(5) 核酸の骨髄 体外組織培養に及ぼす影響 表3. 表4. 比 較 成 長 価(DNA溶. 密 度 指 数(平 均値). 5%. 5. 液 添 加). RNA溶. 液 の 添 加 で,遊. 走速 度 は培 養 初 期 よ. り 既 に 明 らか に 低 い 値 を 示 し,全 遊 走 を 停 止 した.. 2%. RNA溶. て 培 養 後12時 間 で. 液 で も各 培 養 時 間 に. 於 け る遊 走 速 度 は 対 照 よ り全 て 低 く,ま 上 も 遊 走 を 認 め た の は 対 照 はNo. 3例 に 対 し,. 2%. RNA溶. 液 の 添 加 で はNo.. 例 を み た に す ぎ な い.. 図4.各. 種 濃 度DNA溶. 液 添 加 に於 け る. 比 較成 長 価(平 均). た72時 間 以. 1, No. 4, No. 5の. 1%. RNA溶. 2の1. 液 の 添加 で は. No. 5で 対 照 よ り低 値 を 示 した 以 外 大 体 対 照 と 同 程 度 の 遊 走 速 度 を 示 し た. 次 に, 0.5%. RNA溶. 液 の 添 加 で 培 養 後3時. 遊 走 速 度 は 対 照 の16.72,. 15.21,. 10.20,. 18.20,. 間の. 15.12,. 18.21,. 13.34μ/minに. 対 し, 20.00,. 22.95μ/minと. 可 成 り の 促 進 を 示 し た が24時. 17.54, 間以. 後 は 全 般 的 に 対 照 よ り僅 か に 低 い 値 を 示 した.一 墨 粒 貪 喰 能 は 培 養 後6時 し,対. 照 の 平 均 貪 喰 度 は そ れ ぞ れ0.42,. 0.46, 0.24に 対 し, 0.5% れ1.06,. 数 も対 照 に比 し有意 の 差 は な かつ た. 第2節 (1)RNA溶. 偽好 酸 球 機能 に 及 ぼす 影響 液 を 添 加 し た 場 合(表5,表6,. 図2,図3).. び0.001%. RNA溶. 0.56, 0.36,. 液添 加 で はそ れ ぞ. 1.06, 0.92, 0.74, 1.56と 対 照 の 約2倍. を 示 した.貪. 喰 率 も 同 等 の 高 値 を 示 し た.. RNA溶. 差 を 認 め な か つ た.. 方,. 間 に於 いて 最 高 の 値 を 示. の高値 0.01%及. 液 で は遊 走 速 度 は対 照 と有 意 の 0.1%. RNA溶. 遊 走 速 度 は 対 照 よ り促 進 を 示 し,貪. 液 で は全般的に 喰 能 は 培 養 後6.
(6) 6. 山. 表5. 崎. 良. 平. 偽 好 酸 球 遊 走 速 度(RNA溶. 液 添 加).
(7) 核酸の骨髄体外組織培養に及ぼす影響. 表6. 墨 粒 貪喰 能 膚(RNA溶. 図2.各. 液 添加). 7. 種 濃 度RNA溶. 液 添 加 に 於け る偽. 好 酸球 遊 走 速 度(平 均). 図3.各. 種 濃 度RNA溶. 液 添 加 に於 け る墨. 粒 貪 喰 度(平 均). 遊 走 速 度 は1% き,僅. DNA溶. 液添 加 で 多 少 抑制 的 に 働. か な が ら対 照 よ り低 値 を 示 し た.墨. は 培 養 後3時. 間 の 平 均 貪 喰 率 が 対 照 の0.47,. 0.42, 0.42, 0.29に 1.21, 0.93と. 対 し,そ. れ ぞ れ1.25,. 亢 進 を 示 し た.貪. を 示 し た.. 0.5%. DNA溶. れ ぞ れ1.73,. 液 の 添 加 で は遊 走速 度 は. に 貪喰 率 を 示 した. (2). DNA溶 図5,図6). 液 を添 加 した 場 合(表7,表8,. 均 貪 喰 度 はそ. 2.12, 1.76, 2.16, 0.82と 対 照 の2乃. 倍 の 高 値 を 示 し た. に 於 い て,遊. 0.74,. 1.42, 1.72,. 喰 率 も同程度 の高 値. 対 照 と有 意 の 差 を 認 め な か つ た が,平. 時 間 に於 い て 対照 の約2乃 至4倍 の平 均 貪 喰度 並 ぴ. 粒 貪 喰能. 0.1%. DNA溶. 至3. 液 で は 培養 初 期. 走 速 度 は 明 ら か に 対 照 よ り促 進 を 示 し,. 6時 間 以 後 は 対 照 と 有 意 の 差 を 認 め な か つ た.墨 貪 喰 能 は0.5% た.. DNA溶. 粒. 液 の 添 加 と 同様 亢 進 を 示 し.
(8) 8. 山 表7. 表8. 墨 粒 貪喰 能(DNA溶. 崎. 良. 平. 偽 好 酸 球 遊 走 速 度(DNA溶. 液 添 加). 液 添 加).
(9) 核酸の骨髄 体外組織培養 に及ぼす影響 RNAを. 9. 見 出 して,核 酸 が細 胞 の機 能 と密接 な関 連. の あ るこ とを 予想 した.そ. して,今. 日癌 細 胞 の如 く. 増 殖 の盛 ん な 細胞 で は特 に核 酸代 謝が 活 溌 で あ る事 が 知 られ,従 つ て正 常 時 に於 い て 絶 えす 活 溌 に血 球 形 成 の行 な わ れ て い る造血 臓 器 に於 いて も核酸 代 謝 の 旺盛 で あ る事 は 当然 予想 され ると ころ で あ る.既 に,菊 地9)10)は骨 髄 核 酸 代 謝 と 骨 髄 造血 機 能 が 密 図5.各. 種 濃 度DNA溶. 接 な 関 係が あ ると して,こ れ を定 量 的 に立 証 して い. 液 添 加 に於 け る. るが,一 方 細 胞 化 学 的 核 酸 代 謝 の 研究 と して は. 偽 好 酸球 遊 走 速度(平 均). Thorell86), White89), Caspersson50), Davidson53), 森36)等 の業 績 を挙 げ る こ と が 出来 る.先 に も触 れ た 如 く,天 野 は血 球 形成 の 初 期盛 ん に分裂 す る細 胞 で は 胞体 内 に多量 のRNAを. 含 有 す る と共 に,核. 分 裂 に 際 して 核物 質 の 新 しい 合成,就 中核 の 重要 な 成 分 で あ るDNAの. 新 しい 合 成 が 必 要な わ け で あ. る.そ の際,胞 体 内RNAが. 材料 的 に核 内 のDNA. に変 化す るの で あろ うと 述 べて い る. Thorellも 蛋 白合成 との 関連 を考 慮 に入 れ て更 に詳 細 な究 明 を行 な い, Casperssonは 胞 体 内RNAが. 蛋 白 合成 に際. し,酵 素的 な 役割 を 果 すの だ と予 想 して い る.森 は RNAが 図6.各. 種 濃度DNA溶. 液 添 加 に於 け る. 赤血 球 系及 び顆 粒 球 系の 所 謂 未熟 細 胞 に多. 量 に集 積 し,特 に前 赤芽 球,好 塩 基 性 赤芽 球,骨 髄. 墨 粒 貪喰 度(平 均). 芽 球 等 の細 胞 分裂 の可 能 な細 胞 に多 い 事 を指 摘 して い る.又 上 村4)は 核 酸 呈色 反 応 に て核 酸 の 消長 と骨 髄 造 血 機能 とが並 行 関 係 に あ る と述 べ て い る.同 位 元 素 を用 い た実験 と して 菊地,高 橋, Andreason43), Martin72), Lawmance68), Abtams39), Lutwak‑man71) 等 の報 告 が あ る が,教 室 の長 瀬25)はP32を. 用いて. 各 種 実験 的 貧 血家 兎 骨 髄 の核 酸 燐 の推 移 に就 い い て 経 時 的 に定 量 を行 な い骨 髄 造 血機 能 と核酸 との 密接 な 並 行 関係 を立 証 して い る.以 上,核 酸 の造 血 機能 に関 す る細 胞 化学 的 な 役割 に就 いて 述 べ た. 次 に 核酸 の 生物 学 的 作用 に就 い て は,核 酸 並 び に その 誘導 体 が 菌 の発 育 を促 進 せ しめ る と云 う数 多 く の 研 究 が あ り,例 え ば79)A型 第4章. 総 括並 び に 考按. の 溶 血 性連 鎖 状 球 菌. の 培養 に際 し増 殖 因 子 と して 用 い られ,そ の際 強 い. 核 酸 は細 胞 の 重要 な 構成 因子 の一 つで あ る ことは. 溶血 毒 を作 る事が 知 られ て い る.高 等 動物 に対 す る. 論 を俟 た ない が,そ の 生理 作用 に つ いて は不 明の 点. 核 酸 の生 物学 的作 用 に 関す る研究 で は, 19世 紀 の終. が多 い. DNAは り, RNAは. 核分 裂 及 び 遺 伝 に密 接 な関 係 が あ. 蛋 白合成 の場 に 重要 な 役 割 を果 して い. ると云 わ れ る.即. ち, 1941年Caspersson50)は. 各種. りにZiegler90), Wells87), Cabat49), Ames42)等. に. よ り核 酸 の 白血 球 増 多 作用 の あ る事 が 知 られ,次 い で1928年Doan54)等. は家 兎 に 酵 母核 酸 ソー ダ1gを. 細 胞 に 於 いて 核 酸 の多 い と ころで は 蛋 白合 成,細 胞. 静脈 注 射 し,一 時 は 白血 球 減 少 を呈 す るが45分 乃 至. 分 裂 が 旺盛 で あ る と 述 べ て い る.彼 と平 行 して,. 150分 の 間 に増 加 を 認 め て い る.又1951年Rosenow80). 1938〜1942年 に亘 り天 野1),古. は犬 に毎kg,. 賀14)等 は 紫 外線 顕. 微鏡 を使 用 し血 液細 胞 を 観察 しその細 胞 質 に 多 量 の. 0.59の. 核 酸 ソー ダを 静 注 し,白 血 球. 数の 増 加 す る実 験 を行 なつ て い る,本 邦 に於 い て は.
(10) 10. 山. 崎. 林 田26),岸 川11)等 の 業績 を挙 げ る 事 が 出来 る.林 田は 家 兎 に酵 母 核酸 ソ ーダ毎kg,. 平. 代 用 す る事 が可 能 で あ る と述 べ る と共 に,細 胞 組 織. 静注 し,. の代 謝,あ るい はそ の他 の 事 に関 して定 量 的研 究 を. 白血球 増 多 を 認 め,岸 用 は酵 母 核酸 ソー ダ を先 づ正. す る場合 の 培地 の発育 促 進物 質 と して圧 搾 液 の如 く. 常 マ ウス の腹 腟 内 に注 入 し,約3倍. 力 価 の不 定 な もので は精 密 な研 究 を す る事 は不 可 能. 球 増 加 を,次 い で400γ. 5mgを. 良. か ら18倍 の 白血. レ ン トゲ ン照 射 後 の マ ウス. であ るが,リ. ンゲ ル氏 液に 各種 ビ タ ミン,必 須 ア ミ. に注 射 した場 合 も同様 の 白血 球 数 の増 加率 を示 した. ノ酸,グ ル コー ゼ 等 の 上 にRNAを. と述 べ て い る.. 依 つ て,定 量的 に一 定 した組 成 を もつ 優秀 な 発育 促. 上 記 の核 酸 投 与 に よ る白血 球 増加 は末 梢血 液 に あ らわ れ る所 見 で あ り,そ の 際骨 髄 へ の影響 につ いて Doan等. は骨 髄 組 織 切片 標 本 を 作 り検 討 した 結果,. 加 え る こと に. 進 物質 を 作 る事 が 可能 で あ る と述 べ て い る. さて,組 織 培 養 に お いて核 酸 の直接 添 加 の影 響 を みた もの にTenant85),林27),勝. 田36)等 の 実 験 が. 骨 髄 細 胞 の成 熟 過程 が 明 らか に促進 して い る こと を. あ る.即 ち, Tenant等. 認 め,林 田 は酸 母核 酸 の 静注 後, 3時 間 よ りそ の骨. 芽細 胞 を カ レル 瓶培 養 法 に て培 養 し,核 酸 が線 維 芽. 髄 像 にお い て漸 次骨 髄 母細 胞及 び前 骨 髄細 胞 の増 加. 細 胞 の増 生 を促 す事 を 観 察 し,そ して核 酸 が組 織 培. を認 め, 9時 間 乃至24時 間 に於 い て骨 髄母 細 胞 は10. 養へ の添 加実 験 に於 い て,細 胞 の代 謝 機 転 を は やめ. 〜20倍,前 骨 髄 細胞 は2〜5倍. は二 十 日 ネズ ミ の心 臓 腺 維. る事 を暗 示す る と共 に,こ の場 合核 酸 が 低 分子 の も. は 骨 髄 像 よ り好 中球 系. の よ り寄 木細 工 様 に合 成 され るの み で な く,核 酸 そ. てい る.又,Habetin57)等. と著 しい増 加 を認 め. 細 胞 の 著 明 な 増 加 を, Ames等. は 骨 髄 に幼 若 な る. の もの が 直 ち に供 給 され 利 用 され る道 もあ る と報 じ. Monconucleic Lencocyteの 増 加 を 認 め てい る出 そ し. て い る,又,林. て, Doan,. 及 ぼ核 酸 の影 響 を 検 討 し増生 面 積 及 び細 胞 密 度 を求. Habetin,. Ames等. は核 酸 の 白 血 球 増 多. 用 は骨 髄 へ の 直 接刺 戟 作用 で あ る と結 論 してい る.. 等 は被 覆 法 に よ り培養 単 球 の 発育 に. め てい る.そ の成 績 を み る に酵 母 核酸5mg/dlを. 併 し,唯 単 に核 酸 を注 射 して骨 髄 に刺 戟 像 を認 めた. 添加 して そ の増 生面 積 は 培養 後72時 間 で 約2倍,細. とい う理 由 で核 酸 が直 接 に 作用 した と結 論 す る事 は. 胞密 度 は2.5倍 の効 果 を 認 め,胸 腺 核酸 は5mg/dl. 出来 な い.何 故 な らば核 酸が 先 づ網 内系 で処 理 され,. の添 加 で増 生 面 積 は1.4倍,細. そ こか ら催 白血 球 増 多 因 子(Lencopoietin)が. 果 を認 め てい る.勝 田等 は家 鶏 胎児 の心 臓 線維 芽 細. 生産. 胞 密度 は2.1倍 の効. され,こ の因 子 が骨 髄 に作用 した と も考 え られ る.. 胞 を 培 養 し核 酸 添加 実験 を行 な い前 述 の如 く家 鶏 胎. 又 林 田 の説 の 如 く核 酸 が脳 中枢 に作 用 して,中 枢支. 児 抽 出 液 に代 る優 秀 な 発育 促 進 物質 で あ ると云 つて. 配 下 に一種 のLencopoietinを. い る.然 し,来 だ骨髄 組織 培 養 に対 し核 酸 を添 加 し. 生 じ,そ れ が 間 接 的. に骨 髄 に作 用 したか も知 れな い.そ の真 実 を 究 明す. た実 酸 はみ られな い.そ こで 私 は核 酸 の骨髄 へ の 直. るた め,骨 髄体 外 組 織培 養 法 を応 用 して核 酸 の骨 髄. 接 影 響 を追 求 す るた め,健 康 家 兎骨 髄 を被 覆法 によ. へ の 直接 影 響 を観 察 す る事 は最 も適 した方 法 と云 わ. り培 養 し,培 地 に種 々の濃 度 の核 酸 溶 液 を添 加 し上. な け れ ばな らぬ.. 記 の実 験 成 績 を得 た が,以 下 そ れ を総 括 して述 べ る.. こ こで,組 織 培 養 法 に おい て その 培養 と して 用い. 2%. RNA溶. 液 添加 で 組織 増 生 は対 照 よ り悪 く,. られ る発 育 促進 物 質 に関 す る従 来 の文 献 を み るに,. 却 つ て 抑制 的 に 作用 した. 1%. 1912年Fischcr55),. 産 面 積 は 対 照 の約2倍,. Carrel47)48)等は家 鶏胎 児抽 出液. を組 織培 養 の 培地 と して 用 い, Fischerは そ の 中に. もよ く対 照 の 約2倍. 含 ま れ るGrowth. RNA溶. promoting substanceにEmbryo. RNA溶. 液 添 加 で増. 0.5% RNA溶. 液添 加 で最. の 値 を 示 した.然. し, 0.01%. 液 では 対照 と有 意 の 差 を認 め な かつ た.細. sinな る名 称 を 与 えて い るが,そ れが 如 何 な る物 質. 胞 密 度 は0.5%,. で あ るか未 だ十 分 に解 明 され て いな い. Fischer55)56),. よ り高値 を 示 した以 外,他 の 濃 度 で は対 照 と有 意 の. Kutsky66), Novikoff74)等 は核 酸 に 関係 して い る物. 差 を 認 めな か つ た.次 に,偽 好 酸球 の機 能,就 中そ. 質 で あ ると推論 して い る.更 に, Carrel & Baker48),. の 遊走 速 度 と墨 粒 貪 喰能 に就 い て述 べ る と遊 走速 度. Fischer55)56)等 は発 育 促進 物 質 で あ る胎 児抽 出液 中. は0.5% RNA溶. には核 酸 以 外 の高 分 子 の物 質,即 ちあ る種 の 蛋 白,. した 以外 は どの濃 度 溶 液 添加 で も対 照 と有意 の差 を. ア ミノ酸 等 多 数 のGrowth. 認 め な か つた.墨. promoting factorの 存. 1% RNA溶. 液添 加 で 僅 か に対 照. 液 添 加 で 僅 か に対 照 よ り亢 進 を示. 粒 貪 喰 能 は0.5%,. 在 す る事 を指 摘 し て い る.最 近 勝 田63)等 は発 育 促. 液添 加 で 対 照 の 約2倍. 進 物質 と して鶏 卵 胎 児 圧 搾 液 の かわ りにRNAを. に就 い て は0.5%DNA溶. 1%. RNA溶. の 値 を示 した.次 にDNA 液 添加 で 増 生 面積 は対 照.
(11) 核酸 の骨髄体外組織培養 に及ぼす影響 の約1.5倍 の値 を 示 し, 1%及. 液添. て,核 酸 分解 物 が核 酸 合 成 の素 材 と して 利用 され る. 加 で は対 照 と有 意 の 差 を 認 めな か つ た.細 胞 密 度 は. の みで な く,各 種 ビ タ ミン と共 に補 酵 素 と して 極 め. 1%. て 重要 な 役割 を演 じて い る事 が知 られ て い る.. DNA溶. び0.1% DNA溶. 11. 液添 加 で対 照 の約2倍,. 0.5% DNA溶. 液添 加 で対 照 の 約1.4倍 の 密 度係 数 を示 した.偽 好. 以上 の 事実 か ら核 酸 そ の もの が骨 髄 に対 し直 接 刺. 酸 球 の遊 走速 度 は どの 濃 度 溶 液添 加 で 何 等影 響 が み. 戟 的 に作 用 す る以 外 に分 解 物 と して利 用 され る道 も. られな か つ たが,墨 粒 貪 喰 能 は著 明な 亢 進 が み られ,. あ る ことが 充分 考 分 考 え られ る.. 0.5%. DNA溶. 液 添 加 で 対 照 の約3倍,. 1.0% DNA 第5章. 溶 液で 対 照 の約2倍 の 平 均貪 喰 度 並 び に貪 喰率 を 示 した.. 結. 語. 私 は核 酸 の骨 髄 造 血 機能 に及 ぼ す影 響 に 就 い て検. 以上,私 は骨 髄 組 織 培 養 を応 用 して核 酸 が骨 髄 に. 討す るた め,健 康家 兎 骨 髄 を被 覆 法 に て培 養 し,各. 対 し,直 接 刺 戟 作 用 を有 す る事 を認 め る と共 に,. 種 濃 度 のRNA並. 従 来の 研 究 者の 業 績 を 組 織 培 養 の 面 よ り立 証 し得. を行 な い,次 の結 果 を 得 た.. た.. 1)RNAの. この際,骨 髄 組 織 培養 に添 加 した核 酸 が どの 様 な 形 で刺 戟 作用 を 発揮 す るに至 る ものか を 以下 考 按 し た い.. び にDNA溶. 液 の 直 接 添加 実 験. 至 適 濃 度溶 液 の 添 加 は増 生面 積 の著. しい増 大 と,細 胞 密度 の増加 を認 め た.そ して偽 好 酸球 の墨 粒 貪喰 能 の著 しい亢 進 と,遊 走速 度 の 軽 度 促進 を認 め た.. 1945年Ahlstrom40)は. 同 位 元 素 を 用 いて 生 体 内. 2)DNAの. 至 適濃 度 溶 液 の添 加 は 増生 面 積 の軽. に 与 え た核 酸 が速 や か に分 解 され,又 試 験管 内 に添. 度 の増 大 と,細 胞 密 度 の増 加 を 認 めた.そ. 加 した実 験 に お いて も同 様分 解 され る事 を観 察 して. 酸 の 墨粒 貪 喰能 の著 しい亢 進 を 認 め たが,一 方 遊 走. い る.又,. 速 度 に対 して促 進 作 用 を認 め な かつ た.. Brown44)等. の実 験 は 生 体 内に 与 え られ. して 偽好. た 核酸 の 一部 は体 内 核 酸 の合 成 素 材 と して利 用 され る可能 性 のあ る事 を示 して い る.一 方 近 年,核 酸 誘 導 体 の生 物 学 的 作用 が 諸学 者 に よ り研 究 され, 1928 年Doan54)は. ア デ ニ ン,グ. アニ ン,ヌ ク レオ チ ド. を 家 兎 に注 射 し,白 血 球 数 の増 加 と骨 髄 に 於 いて 刺 戟 像 を認 めて い る.又,服. 部30)は 健 康 家 兎 に リポ. 核 酸 分解 物 を 注 射 す る と骨髄 細 胞 新生 を促 進 せ しめ る と述 べ て い る.牧 野33)34) Schwietzer83)等 は核 酸 ピ リ ミヂ ン合 成 の 重要 な 前駆 物 質 と しての オ ロ トン 酸 が 白 ネズ ミに対 し発 育 促進 作用 の あ る事 を 認 めて い る.更 に,最 近 の め ざま しい生 化学 の進歩 に依 つ. 擱 筆 す るに 臨 み終 始 御 懇 篤 な る御 指 導,御 校閲 を 賜わ つ た 恩師 平 木 教授 並 び に 角南 講 師 に深 甚 な る謝 意を 表 す. (本 論 文 の要 旨は 日本 血 液学 会 第20及 び21回 総 会 に於 い て発 表 した) (文 献 後掲).
(12) 12. Effect Part. of Nucleic 1.. Effect. 山. 崎. Acids. on. of nucleic normal. 良. 平. Bone-Marrow acids. rabbit. Tissue. on the. bone. Culture. leucocyte. series. of. marrow. By Ryohei. Yamasaki. Department of Internal Medicine Okayma University Medical School (Director: Prof. Kiyoshi Hiraki) In. order. marrow,. the. bone. to determine. the. author. added. RNA. being. cultured. marrow 1.. The. the. growth. In. addition,. ability. direct area. addition markedly. there. by. effect and the. of RNA and. also. of nucleic DNA coverslip at there. acids. at various method,. optimal. recognized. a marked. in pseudo-eosinophils. as well. as a slight. addition. of DNA. hematopoietic. functions. concentrations. directly. and. the. concentration. could. were. on the. obtained to the. following. culture. be observed. an. increase. acceleration. of. carbon. increment. in the. particle. rabbit. results.. medium. in the. wandering. of bone. to normal. cell. increased density.. phagocytotic. velocity. of these. cells. 2. growth ability wandering. In. the. case of. the. area and an increase of pseudo-eosinophlis velocity.. there. in the cell density. was greatly accelerated. were. recognized. a mild. increase. in the. Moreovr, the carbon particle phagocatotic but there could be seen no effect on the.
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