抗腫瘍 作 用

54 金沢大 学十 全 医学 会 稚 託 第94巻 第1号 5 4 ⁻68 く19 8 51

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抗 腫 瘍作用

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金沢 大学 医学 部 薬理学 講座 く主 任^二正 印 達 教 授1

川 尻

博

く昭和^{6 0}年¹ 月7 日受付1

新規^に合 成さ れ た d^{．m o r}ph in a n 誘 導体^である d⁻3⁻Cin n a m ylo xy⁻N^．m eth_ylm o rphin a nくD M 341 の 抗腫 瘍 作用 と免 疫増 強 作用^{に つ い}て検 討し た．D M 3 4 は デ キス ト^ロメ トル フ ァ ンや ジメ モ ル フ ア ンと同様

に， 腫 瘍移 植 後^に投与し た時才乃 め0 で腫 瘍^の増 殖を抑 制^し， 担が ん^マ ウス の生存日数を延長し た．

エ ^ー

ルリッ ヒが ん細 胞 く2 ^．OXl O⁶細 胞ノ頭I を腹 腔 内 移 植し た 2 4 時 間 後^から 5 日間 連 続し て 4 0 m gノkgノ日の D M 34 を d d Y ^マ ウス に腹 腔 内 投与す る と，腫瘍^の増 殖は抑制さ れ，担が ん^マ ウスの 平 均 生存日数は生理的 食 塩水を投与し た^マ ウス に比^べ て 5 7^．7％延 長し た． D M 3 4 は腰 瘍 移植 前^に投 与す る と よ り顕著な延 命 作用 を 示 し た． し か し， デ キ^スト^{ロ メ}トル フ ァ ンと ジ メモ ル フ ア ン には前投 与^によ る延命 作 用は み ら れ なか っ

た^． D M 3 4く4 0 mgJkgl 別 を腫 瘍 移 植^{7 日}前^から 5 日間連 続し て腹腔 内投 与し た^{エ ー ル}リッ ヒ腹 水が ん担 が ん^マウス の平均 生 存日数は15 7^，7％ 延 長し た^， さ らに_， エ ^ー ル リッ ヒ腹 水が ん移 植4 日前^から 2 4 日前^の 間に D M 3 4 く4 0 ^mglk_glEjl の 4 日間連 続 投与を開 始し た^マ ウ^{ス に}も平均生存日数^の延長がみら れ た． 平 均生存日数^の延長は D M 34 投 与と腫 瘍 移 植^の間隔が長く な る^にし た がい徐^{々 に}減 弱し た^． D M 3 4 は ザ^ル

コ ^ー マ 18 0 を腹腔 内移 植し た^マウ^{ス に}対し て も同様な抗腫 瘍 作用 を 示 し た． D M 34 は^マ ウス の細 胞 性 免疫

に影 響を与え た． C 5 7 B Lノ6 マ ウス の羊 赤血球くS R B Cl に対す る遅 延 型 過 敏 反 応くD T Hl は D M 3 4く4 0

m gノk_gl を S R 13 C ^で感 作す る 1 日前か ら 3 日後の間に1 回投 与す る^ことによ り増 強さ れ た．D M 3 4 を^{エ ー} ルリッヒ腹 水が ん移 植の 7 日前か ら 5 日間 連 続し て 4 0 ^m glkgl日投 与す ることによ り担が ん^マ ウス の D T H 低 下は抑 制さ れ， ま た担が ん^マ ウス の胸 腺と肺 臓^の重量の減 少も抑 制さ れ た^． し か し， D M 34 は S R B C ^で免 疫さ れ た^マウス の牌 抗 体 産 生細 胞 数^には影 響を^およ ぽ さ な^{か っ}た． 以 上の結果よ り， D M 3 4 は 宿主介 在性の抗腫瘍 作用 と^マ ウス の細 胞 性 免 疫を増 強す る作用 を も^つと考え ら れ た．

K ey ^{w or}ds a ntitu m o r a ctivi_{t y，}d ⁻m O rphin a n_，E hrlich a s cite s c a r ci_{n o m a}

，

s a r c o m a⁻1 80，delay^ed⁻t y p^e h_{y p}e r s e n sitivi_{t y}．

麻 薬 性鎮 痛 薬^は， 中枢 神経 系^に広 汎^に作用 し， 鎮 痛 作用， 鎮咳 作 用， 呼吸 抑 制作用 な どのほか内 分 泌 系や 自律 神 経 系お よ び平 滑筋にも作用 す る な ど多く^の薬理 作用 を有し て^いる^り． こ の麻 薬 性 鎮 痛 薬ま た は その類 似 薬な ら び^に関連 薬^には抗 腫 瘍 作用 と免疫 抑 制 作用 が あ る^こと が最近 報告さ れ て^いる^． す な わ ち， Zago n，I．

S．と M cLa ugh1in， P． J^{．2 I}は ^{ヘ ロ} イ ^ンが ^マ ウス の n e u r ob la sto m a の増 殖を抑 制す ること を報 告し て^い

る． ま た， 麻 薬 性 鎮痛 薬の桔抗 薬であ る ナ^ロ キ^{ソ ン}と ナ^ルト^レキソ ン につ いて は， A_yls w o rth， C． F．ら^{3 J}は ラ_ッ トの m a m m a ry tu m o rの増 殖を抑 制す ること を 報 告し ており， Zago n，I^． S^，と M cLa ugh1in， P^．J^{．4 ，5 I} は， マ ウス の n e u r ob la sto m a の増 殖を抑 制す る と報 告 している． 近 年， K igo sh i，S．

6 Iは， 非麻 薬 性の鎮 痛薬で あ る^{ペ ン}タ ゾシ ンが ダガ さ^ノブ血 で腫 瘍 細 胞 傷 害 作用 を も ち， エ ^ー ルリッ ヒ腹水が ん^およ び ザ^{ル コ ー マ} 180 を移

A b br e viatio n s ニB C G， Bd^cillu s Calm et te⁻Guerin三D M 34 ， d ⁻3⁻Cinn a mylo xy^，N ⁻m eth_yl^r

m o rphin a nニD T H ，delay^ed⁻_{t y p}e h_{y p}e r s e n sitivi_{t y 三}F B S_，fetal bo vin e s e r u m i H B S S ， H a nks

bala n c ed s alt s olutio nニP F C，plaq^{u e−}forming ^{c e}ll_i P S ，ph_ysiologi ^{c als alin e}三S R B C，She ep ^{r e}d blo od c ell_i T ris_，trish_ydr oxy^{m e}th_yla min o m eth a n．

−^良

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D M 34 の抗腫瘍 晴性

植し た^マ ウ ス の生存日数を 延 長 す ること を報 告し てし⁻

る． さ らにK igo shi，S．ら^{7 J}は， 非麻 薬 性の鎮 咳薬であ る デ キスト^ロメトル フ_ァ ンと ジメ モ ル フ ァン にも同様

の作用 を^{み い}だ している．

一方， 免 疫 抑 制作^{用 と して} は， モ ル ヒネ^{8 ト川}， コデ イン^岬お よ びペ ンタ ゾシ ン^{1 1 I} に_， 牌 臓の萎縮， リン パ球 芽球 化の抑 制， 抗 体産生細 胞^の減 少な どの作用 が あ る^こと が報 告さ れて いる．

以 上 の事^にも と づ^いて， デ キスト^ロ メト^{ル フ}ァ ンや ジメ モ ル フ ァンと同じ d⁻m O rph in a n 骨 格を も^{つ 一} 連

の化 合 物^{1 2 ，}が新 規 合 成さ れ た が， これ らの中^で特^に抗 腰 瘍 作用^の 強かっ た d ⁻3^．C in n a m ylo xy^．N ⁻m ethyl⁻

m o rph in a n く分 子 量 3 7 3^．53， D M 3 41 のマ ウ ス同種 移 植が ん^に対す る抗腫 瘍 作用 と^マ ウス免疫 系^への作用に

つ いて検 討を^{お こ}な^っ た．

材 料およ び方法 工^． 実験 動 物

実験には d d Y ^マ ウスく雌， 7 ^ヘルル遡令l ま た は C 57 B Lノ6 ^{マ ウ ス}く雄， 6 ^へ 9週 令コ を 用^いた．

H ^． 使用薬物

実験には， 臭 化水素 酸デ キ^スト^ロメト^{ル フ}ァン く^マ

ル コ製 薬， 5 mgノ^ml注射 液う ^およ び リ^ン酸 ジメ モ ル ファン 仙之内製 薬う を 用^いた． リン酸ジメ モ ル フ_ァ ンは生理的 食 塩 水^に6 11 1gノn llに溶 解し， 使用時まで 4 ^DC^に保存し た^．

D M 34 く東 洋^フ ァルマ ^ーK ．K．1 は， デ キスト^{ロ メ}ト

ル フ ァ ンよ り合 成さ れ た もの で， 図1 の ご と き構 造を 有し て^いた^． D M 34 注射 根は 以 下^のよ うに調 製^{し た．} 2 0 0 mg の D M 34 と H C O^．6 0 くFヨ光ケミ カ ル ズ1 2 g を

丁 ⁻

^{C H}

C H C H 2 0

55

耐 熱ね じ口び ん ほOml 容 鼠 柴田科 判 で 混合し， 沸 騰 水洛中で完 全に溶 解さ せ た． これに， あ ら^か じ め 10 0⁰C に加温 し て お^いた 5 0 ml の生_理的 食塩水 を加え，

振 視^力lく は んの のち， 密栓して約2気圧 1 2 0⁰C で¹5分 間高圧滅 菌し た． 滅菌 後， 溶 液が 8 0⁰C 以 上の間^に高圧 滅 菌器 よ り と り だ し， 振 温かく は ん し たのち， 水 中に て急速^に冷や し た． 数 時間 後D M 3 4 が細^かな結 晶と な り沈澱 し ている注 射液が作 製さ れ た． 使用時^には， 沈 澱 し^{て い}る D M 34 を振 塗によ り均^{一 に}懸 濁さ せてか

ら注射を^{お こ}な^った．

m ^． 腫瘍 細胞浮遊液^の調 製

腫瘍 細 胞 浮遊 液^は速 度 沈 降法 くv elo cit y ^{s e}d im e nta^． tio nl^{1 3 ト 1}叶によ^って調 製し た． す な わ ち， エ ^ー ルリッ ヒ が ん細 胞ま た は ザルコ ^ー マ1 8 0細 胞を腹 腔 内^に移植し て7から10 日目^のd d Y マ ウ スよ り10 mlの腹 水を採 取し， 40 mlの ハ ン ク ス平衡塩類 溶 液 くpH 7．4_， ^ハン ク ス幸酎 と 混和し遠心 く2 0 0g， 5 分間フし た． 沈澱し た 腫瘍 細胞を 4 0皿1 の^ハ ン ク ス液に浮遊さ せ たのち，

5 0 0 ml のフ ラ スコ内に2 種 類^{の ショ}糖^{ハ ン}クス溶 液 で 2 層に重層さ せ た溶 液の上に_， 分渡^{ロ ー} ト^{に 1}ハ 注 射 針を チ^{ュ ー} ブで接 続し た装置を 用い て静かに重 層し た． 2 層^{の シ}ョ糖^ハ ン ク ス溶 液は， 上層^{に フェノ ー ル}

レ ッド を含ん だ 1⁻0％^ショ糖^ハ ン ク ス溶 液^{1 5}0 ml， 下 層^{に フ ェノ ー ル}レ ッ ド を含ま ない 1^．5％シ ョ糖^{ハ ン ク}

ス溶 液3001 nl を 用い て作 製し た． 腫瘍 細 胞を 2 層の シ _ョ糖^{ハ ン ク ス}溶 掛^こ重層し て 4 ⁰C で 9 0分 間 静 置し た^のち， フ ラ スコの底^に沈 ん だ腫 瘍細 胞を集めて^ハ ン ク ス液^に再 浮 遊させ， 遠心 洗源し た． その後 適量の^ハ ン ク ス液^に浮 遊させ， 血球 計算 盤を用^いて細 胞 数を計

F ig^．1．d−^{3−C in n a mylo xy−N}−^{M ethyln l O rPh in a n}

−

C H 3

数し た の ち， さ らに^ハ ンク^ス液を加えて 4^．O^Xl O⁶細 胞ノ^ml の細 胞 浮遊 液を作製した^{． こ}の腫 瘍 細 胞^の生 存 率を ト リ^{バ ン}プル ^ー色 素 排 除 能テストで調べ た と^こ

ろ， 常^に8 5％以 上 で あった．

工V ^． 抗腫瘍 実験 1 ^．オ乃 びわ^ノ0 実験

腫 瘍細 胞は^{エ ー} ルリッ ヒが ん細 胞ま た は ザ^{ル コ ー マ} 1 8 0細 胞を用^いた^{． い}ずれ か の腫 瘍 細 胞を 2^．OXl O⁶細 胞ノ頭 腹腔 内^に移 植し た 3 0 匹 の d d Y ^マウス を1群1 0 匹ず^つ 3群^に分け た． 腫 瘍細 胞 移 植^{2 4} 時 間後か ら， 1 群^には D M 3 4 を 20 m glkgI日， 次の1群^には D M 34 を 4 0 m g化gノ日， 残り の 1群は対 照 群と して生 理的食 塩 水を 0^．2 5 mlノ頭ノ日， 1 日 1 回， 5 日間連 続し て腹 腔 内^に投 与し た^{． エ ー ル}リッ ヒが ん細 胞を移植し た^マ ウ ス では腫瘍 細 胞 移 植後1 0 日間，ザルコ ^ー マ1 8 0細 胞を 移 植し たマウス では腫 瘍 細胞 移 植 後^{7 日}間体 重を測 定 す ることによ り腫 瘍の増 殖を観 察す る と共^に， マ ウス の生存を 6 0 日間観 察し た．

2 ． D M 34 の前 投与 実 験

あ ら か じ め各 表 く表3 ^へ一表 鋸 ^に示 さ れ た^いろいろ の投 与^スケ ジ^{ュ ー} ル， 投 与量^で， D M 3 4， デ キスト^ロ メ ト^{ル フ} ァンま た は ジ メモ ル フア ンを前投 与し た 1 群 8 ^へ1 0 匹のd d Y ^マ ウ^{ス に}， 2．OXl O⁶細 胞ノ頭^{のエ ー ル} リッ ヒが ん細胞ま た は ザ^{ルコ ー マ} 1 8 0細 胞を腹 腔 内^に 接 種し た． これ ら の^マ ウス に つ い て_， 玩H正犯 実 験と同 様^にし て体 重^の変 動と生存日数を観 察し た^．

V ． 担が んマ ウ^{ス の}免 疫担当臓器重 量^の測 定 腫 瘍 細 胞 移植⁷ 日前^から 3 日前ま での 5 日間， 4 0

m gノkgl 日 の D M 3 4 ま た は 0^．2 5mlノ頭l日^の生理的食 塩 水を腹腔 内投 与し た そ れ ぞ れ 3 0 匹^の d d Y ^マ ウス に エ ^ー ルリッ ヒが ん細 胞を 2．O ^Xl O⁶細 胞ノ頭 腹 腔 内^に移 植し た． つ い で， D M 3 4 投 与マウ^{ス お} よ び生理的 食 塩 水 投与^マウ^スを そ れ ぞ れ 1 0 匹ず^つ3群^に分け，腫瘍 細 胞 移 植^の3 日後， 6 日後^およ び 1 2 日後に脾臓，胸 腺お よ び腸 間 膜リ^{ン パ}節を摘 出し た^． 摘 出臓 器^のま わ りの

結 合組 織 等を除 去し， 血 液な ど を生理的 食塩 水で洗 源 除 去し たあと， その湿重量を測 定し た． 対照 と し て は，

臓 器 摘 出^の7 日前か ら 3 日前まで の 5 日間， 4 0 m gノ kgl日 の D M 3 4 ま た は 0^．2 5 ^mlノ頭ノ日 の 生 理的食 塩 水

を腹 腔 内 投 与し た そ れ ぞ れ 1 0 匹^の非 担が ん^マ ウス に つ いて， その脾臓， 胸 腺お よ び腸 間 膜リ^{ン パ}節^の湿 重 量を測 定し た．

Vl^{． ヒ ツ}ジ赤血球 浮 遊i夜^の調 製

A Is e rv e r氏 液^坤と 混和し たヒ ツジ保 存血 は 日本 生

物 材 料^{セ ン}タ^ー く束 京う^{よ り}購入 し， 採血 日 よ り 2 週 間以内に実 験^に使用し た^． 適 当量の ヒ ツジ保 存血 を¹0

ml遠 心管^にと り 70 0 g に て1 0分 間 遠 心し た． 上清^お

よ びパ フ イ^{ー コ ー} ト を， パ ス ツ ^ー ルピペ ット を水 流ポ ンプに接 続し た装 置で吸 引 除 去し， 沈澱赤血球を 生 理 的食 塩 水^に再 浮遊さ せ た． これ を さ^{ら に}生 理的 食 塩 水

で3 回遠^JL⁻洗 惟をお こな^い， 25％あ る^いは 5 ％の濃 度

に生理的 食 塩 水に浮遊さ せ たヒ ツジ赤血球 くshe ep^{r e}d b lo od c ell，S R B Cl 浮遊 液， ま た は 2 0％^の濃度^に5 ％

ウシ胎 児 血 清 tfetal bo vin e s e r u m ， F B Sl 加^ハンク ス液^に浮 遊さ せ た S R B C 浮遊 液^を作 製し た． 生 理的 食 塩 水に浮 遊さ せ た 2 5％S R B C 浮 遊 液は， マ ウス の S R B C ^に対す る遅 延型過 敏反応 くdelayed⁻t y p^ehy pe r⁻ s e n sitivit y，D T Hl ^の誘 発^に使用 し， 5％F B S 加^ハン ク^ス液に浮遊さ せ た 2 0％S R B C 浮 遊 液は抗 体 産生細 胞を検 出す る た め^の指 標 赤血球 浮 遊 液^の作 製^に用^い た^． 5 ％の濃 度^に生理的食 塩 水^に浮 遊さ せ た S R B C 浮 遊 液は， その1mlに 14 ml の蒸 留 水を加え て溶血 さ せ， 5 4 1 n m で吸 光 度を測 定し， この値と， 1 ^XlO^g S R B Cl ml浮 遊 液は 54 1 n m で吸光 度 傾が 0．6 8 であ る こと が 示 さ れ て^いる^{1 61}こと との関 係か ら， S R B C浮 遊 液の細 胞 数を求め た． この S R B C 浮 遊 液よ り 5 X lO⁸ 細 胞ノml あ る^いは， 5 X l O⁶細 胞ノmlの S R B C の生理 的 食塩 水 浮遊 液を作 製し， マウス の感作に 用^い た^．

VII． マウス の S R B C に対するD T H ^{へ の} D M 3 4 ^の 影 響^に関す^る実 験

D M 34 の マ ウス細 胞 性 免 疫^にお よ ぼ す作用 を調べ

る目 的^で， マ ウス のS R B C に対す る D T H ^へ の D M 3 4 ^の影 響^に関す る実 験^{1 7ト1 鋸}を お^こな^っ た^． す な わ ち，

4 0 匹^の C 5 7 B Lノ6 雄 性^マ ウスを 1 群5 匹 ず^つ 8群^に 分け， S R B C で感 作^{す る 3 日}前^から 4 日後まで の8 日 間の間^で， D M 3^{4 の 4}0m gJIk_g腹 腔 内 投 与を各 群 所 定

の時 期^におこなっ た． S R B C によ る感 作は， 生理的 食 塩 水^に浮 遊させ た 5 X lO⁶細 胞ImlのS R B C 浮 遊 液 0^．2 mlく1 X lO⁶S R B Cl を 眼裔 静 脈 叢よ り静 脈 内 注 射^{用2 01}し て^{お こ}な ^った．感 作よ り 4 日後， これ らの各 群

のマ ウス の右 後足 既 皮 下^に生理的 食塩 水^に浮遊させた 2 5％S R B C浮 遊 液0^．0 2 ml く約1 X lO⁸S R B Cl を注 射 し， 足 舵反応を誘 発し た． 誘 発^から 2 4時 間 後^に右後 足 庶と 左後 足 疏^の厚 さ を^ノギスを 用^{い て}圧迫を加え な^い

よ うにして測 定し， その左 右 後 足 脈の厚さの差を足 舵 反応^の大き さ と し た． 対照 と し^てD M 3⁴を投 与し^{て い} ない2群^のマ ウス各⁵ 匹^{につ い} て， 1 群^には S R B C 感 作を おこな^い， も う1 群^には S R B C 感 作をお こな わず

に足 択 反 応を誘発し， その大き さ を測 定し た．

Vlu． 担 が ん^マ ウス の D T H に及^ぼす D M 3 4 前 投 与 の影 響^に関する実験

腫 瘍 細 胞 移 植7 日前か ら 3 日前ま での5 日間， 40

m glk_gl日^の D M 3⁴ ま た は 0^．2 5 mll 頭J日の生理的食 塩 水を腹 腔 内投 与し た そ れ ぞ れ 2 8 匹^のd d Y ^マ ウス に