汚 泥 コンポス トの植 物生 長促 成活 性 に関 わ る微 生物 と、

汚 泥 コンポス トの植 物生 長促 成活 性 に関 わ る微 生物 と、

それ らの代謝産物

森 本 正 則 、 松 本 朋 子 、 駒 井 功 一 郎

近畿大学農学部農芸化学科

The Fungi in Bio-sludge Composts and Its Metabolites Relate with PGPR Effect

Masanori

Department

MORIMOTO,

of Agricultural

Tomoko MATSUMOTO

Chemistry, Faculty Nakamachi, Nara

and Koichiro

of Agriculture, Kinki 631-8505, Japan

KOMAI

University, 3327-204

Synopsis

Sometime, the compost products made from bio-sludge and containing paper strips, showed plant growth promoting effect in the field. We have evaluated to separating various fungi from bio- sludge compost that have PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) effect against some crops inoculating test into the incubation soil. Test fungi separated from the compost using by multiple dilution method and colonization on the PDA agar plate. And, the surface of autoclaved oat serials kept each fungus and inoculated by mixing 3% w/w to incubation soil for PGPF (Plant Growth Promoting Fungi) evaluation. As a result, we have recognized PGPF effect and have identified by 18S-rDNA analysis, following similarity analysis compared with on-line database.

All tested fungi showed PGPF effect against cucumber plant compared from growth of the control plant. And the fungus have produced red pigment, have identified as Penicillium sp. by 18S-rDNA analysis. The red pigment have isolated and identified as naphthoquinone dimmer, xanthomegnin using by EtOAc extraction of mycelium and silica gel column chromatography separation. These data suggested that various fungi maybe effect on the plants growth in the field. Though, some metabolites produced by these fungi showed antibacterial activity, these metabolites maybe act as suppressor of the soil borne plant disease.

緒 言

活 性 汚 泥 や 食 品 汚 泥 な ど の有 機 性 廃 棄 物 、 古 紙 な どを 原 料 と した コ ン ポ ス トの 施 用 に よ っ て植 物 生 長 促 進 活 性 が認 め ら れ る こ とが あ る。 これ らの 生 長 促 進 要 因 が コ ンポ ス ト中 に 存 在 す る 微 生 物 や そ の 代 謝 物 に よ っ て 引 き起 こ さ れ る可 能 性 を検 討 す べ く、 微 生 物 土 壌 接 種 試 験 に よ って 導 入 微 生 物 の 植 物 生 長 促 進 活 性 を 評 価 した 。 コ ン ポ ス トか ら の 微 生 物 分 離 は、 生 理 食 塩 水 に よ る段 階 希 釈 後 に 各 種 寒 天 平 板 培 地 を 用 い た 培 養 に よ っ て 各 種 微 生 物 を 分 離 した 。 分 離 し た 糸 状 菌 の 土 壌 接 種 は、

オ ー トク レイ ブ処 理 した オ オ ム ギ 麦 粒 に 糸 状 菌 を 接 種 後 、 真 砂 土 を基 本 とす る培 養 土 へ 混 合 す る こ とで 実 施 した 。 さ らに 各 種 植 物 を 用 い た 生 物 検 定 に お い て生 長 促 進 効 果 の認 め られ た 糸 状 菌 の 同 定 に は、18S‑rDNA解 析 を 用 い た 。

汚 泥 コ ン ポ ス トよ り分 離 し た 糸 状 菌3種 の 導 入 は、 い ず れ も キ ュ ウ リ や トマ トの 生 育 を 促 進 し た。 そ の う ち赤 色 色 素 生 産 菌 は 、18S‑rDNA解 析 の 結 果 か らPeπ̀観 伽msp.と 同 定 し、 本 種 の 生 産 す る 赤 色 色 素 は一 般 細 菌 に 対 して 抗 菌 活 性 を示 し た。 培 養 菌 体 よ り抽 出 ・単 離 し た 抗 菌 性 赤 色 色 素 は各 種 機 器 分 析 デ ー タ よ りナ フ トキ ノ ン ダイ マ ー, Xanthomegninで あ る と 同 定 した 。 こ の 糸 状 菌 の 代 謝 産 物 に つ い て 植 物 生 長 促 進 活 性 試 験 や 抗 菌 活 性 試 験 な どの 詳 細 な 検 討 を 行 っ た の で こ こ に概 要 を報 告 す る。

材料および方法

減 圧 濾 過 に よ って 菌 体 と液 体 培 地 を 分 離 し、 そ れ ぞ れ 酢 酸 エ チ ル を 用 い て 抽 出 を 行 った 。

1‑2抗 菌 活 性物 質 の単 離 ・同 定

静 置 培 養 に よ っ て得 られ た 培 養 液 お よ び菌 体 抽 出 物 に お い て抗 菌 活 性 を 示 す 画 分 は 、 酢 酸 エ チ ル 可 溶 画 分 に認 め られ 、 この 活 性成 分 は 培 養 液 お よ び 菌 体 の 両 方 の 抽 出 物 に 確 認 で き た 。 これ らに は TLC分 析 に よ っ て 同 一 の 成 分 が 含 ま れ て い る こ と が 確 認 で き た こ と か ら、 両 抽 出 物 を 統 合 した 。 そ の 後 、 抽 出 物 は4℃ の 冷 暗 所 に 保 管 中 に黒 色 沈 殿 が 生 じ た。 この 沈 殿 物 に は 抗 菌 活 性 が 認 め られ 、 主 成 分 は2種 の 色 素 化 合 物 で あ っ た。 これ らの 抗 菌 活 性 成 分 を 単 離 す る に あ た り、 こ の抗 菌 活 性 の 認 め ら れ た 黒 色 沈 殿 の量 が 十 分 に 得 られ な か っ た た め 、 同一 成 分 を含 み 多 量 に 得 られ た 酢 酸 エ チ ル 相 を シ リ カ ゲ ル ク ロマ トグ ラ フ ィー に よ っ てFr.1〜

Fr.5に 分 画 した。(Fig.1)

単 離 した 赤 色 結 晶物 の 抗 菌 活 性 成 分 お よ び 抗 菌 活 性 を 示 さ な い 濃 青 色 固 形 物 を 各 種 機 器 分 析 に よ っ て 構 造 解 析 を 行 っ た。 しか し、 濃 青 色 固 形 物 に つ い て は 多 くの 重 水 素 化 溶 媒 に充 分 溶 解 せ ず シ

グナ ル の 弱 い1H‑NMRデ ー タ の み が得 られ た。

1‑3抗 菌試 験

菌 体 の 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 に含 ま れ る 主 要 な2つ の 化 合 物 に つ い て の 抗 菌 試 験 は10%DMSOを 含 む LB液 体 培 地 を 用 い 、 サ ン プ ル 濃 度500〜15ppmお

よび10%DMSOを 含 む 液 体 培 地 を コ ン トロー ル と し た マ イ ク ロ プ レー ト法 で行 っ た。 最 小 阻 害 濃 度 は2日 後 の 菌 の 増 殖 を 目視 で 確 認 し、 最 小 阻 止 濃 度(MIC)と した。

1.コ ン ポ ス ト由 来 糸 状 菌 の 生 産 す る 抗 菌 活 性 物 質 1‑1菌 の 培 養 と抗 菌 活 性 物 質 の 抽 出

コ ン ポ ス ト 「ゆ う き 百 倍 」 よ り分 離 した3種 類 の 糸 状 菌 の う ち2種 類 がP翻c̀Z伽m属 で あ り、 そ の 内 の1種 が 他 の 糸 状 菌 に 対 して 阻 止 円 を 形 成 す る こ とか ら、 抗 菌 活 性 物 質 を 生 産 して い る可 能 性 が示 唆 され た。5リ ッ トル 三 角 フ ラ ス コ にPD液 体 培 地 約500mlを 分 注 しPeὴc̀Z伽 柵sp.を 植 菌 し た。28℃ で 静 置 培 養 し、 培 養 期 間 の 目安 と して 液 体 培 地 が 赤 色 に 変 色 した 時 を 培 養 の 終 点 と し た。

2.抗 菌 活 性 物 質Xanthomegninの 生 物 活 性 2‑1植 物 生 長 試 験

培 養 試 験 管 の 底 に 濾 紙 を 敷 き 、 ク ロ ロ ホ ル ム で 所 定 濃 度 に 調 製 し た 被 験 液 を2mlず つ 注 下 し た 。 減 圧 デ シ ケ ー タ ー に て ク ロ ロ ホ ル ム を 完 全 に 留 去

し た 後 、 蒸 留 水2mlず つ を 試 験 管 に 分 注 し 、 供 試 作 物 と し て あ ら か じ め 発 芽 さ せ て お い た レ タ ス 幼 苗 を 置 床 し た 。 試 験 管 は ア ル ミ 箔 で 封 を し 、25℃

で10日 間 培 養 し た 後 に 子 葉 長(cotyledonlength)、

胚 軸 長(hypocotyllength)、 幼 根 長(radicle

Si-gel column chromatogr chlolroform : methanol ( 4

Fr. 1

Fr. 2 Fr. 3

Fig. 1 Scheme for fractionation of anti-b iotic compound in Penicillium sp.

length)、 鮮 重 量(weight)を 測 定 し た 。 ト マ ト、

キ ュ ウ リ に お い て も 同 様 の 試 験 を 行 い 、17日 後 に 地 上 部 重 量(cotyledonweight)、 地 下 部 重 量 (radicleweight)を 測 定 し た 。 な お 、 コ ン ト ロ ー ル と し て キ ャ リ ア ー 溶 媒 の み を2ml注 下 し た 処 理 区 を 用 い た 。 結 果 は1個 体 あ た り の 平 均 値 の 対 照 区 に 対 す る 百 分 率(%)で 表 し た 。

2‑2殺 線 虫 活 性 試 験1)

サ ツ マ イ モ ネ コ ブ セ ン チ ュ ウ(1晩Zo認08ッ πe

̀πcog瞬 α)は 、 ナ ス の 根 こ ぶ を 蒸 留 水 に 浸 漬 さ せ る こ と で 抽 出 し た 。 各 処 理 濃 度 に 調 製 し た Xanthomegninメ タ ノ ー ル 溶 液(3%未 満)を セ ン チ ュ ウ の 入 っ た 直 径1.5cmの シ ャ ー レ に 加 え 、 処 理 濃 度10ppm50ppmlOOppmの200μ1溶 液 と な る よ う に 調 製 し た 。25℃ ・48時 間 後 、 処 理 溶 液 中 の セ ン チ ュ ウ の 生 存 率 をA、 コ ン トロ ー ル 中 で の セ ン チ ュ ウ 生 存 率Bと し て 致 死 率 を 算 出 し た 。

致 死 率(%)=(B‑A)B‑1×100

結 果

1.Peη10〃'〃msp.の 生 産 す る 抗 菌 活 性 物 質

TLC上 で 黄 色 を 示 す 赤 色 結 晶 物 は 、EcoZ̀に 対 し て500ppmで ご く わ ず か な 抗 菌 活 性 が 認 め ら れ 、 B.8酌 彦̀ZZ̀sにお い て は60ppmで 生 育 阻 害 活 性 が 認 め ら れ た 。 し か し 、TLC上 で 赤 色 を 示 す 濃 青 色 固 形 物 は 、Ec罐 、B.8酌 彦雌s共 に 生 育 阻 害 活 性 が 認 め ら れ な か っ た 。

抗 菌 活 性 が 認 め ら れ た 化 合 物1お よ び 抗 菌 活 性 の 認 め ら れ な か っ た 化 合 物Hは 、 各 種 機 器 分 析 の 結 果 よ り 以 下 の 化 合 物 と 同 定 し た 。

CompoundI:Redcryst.(EtOAc),Sinters>260°

〜270° λmax=382nm,259nm,282nm,FABMS (triethanolamine)597(M+Na),1NMRδ(CDCI3)

C

<

Compound I

Compound II

Compound I Red crystal Escherichia coli Bacillus subtillis

Compound II Dark blue solid Escherichia coli Bacillus subtillis

> 500 ppm 60 ppm

inactive inactive

( MIC ) ( MIC )

Ethylacetate extract

Chloloform Methanol 50 1

Fig.2 Anti-bacterial activity of pigments produced by Penicillium sp.

ppm:13.20(1H,s),7.51(1H,s),4.66(1H,br,s) 4.17(3H,s),3.14(2H,s),1.54(3H,d,」=6.5Hz) 13CNMRδ(CDCl

3)ppm180.0,162.9,158.1,148.3 134.8,122.9,116.9,114.8,114.7,71.4,61.5,36.2 20.6.IR(cm‑1):3271.0,1716.5,1678.0.

以 上 の 結 果 を 文 献 値 と 照 ら し 合 わ せ た 結 果 、 こ の 化 合 物 をXanthomegninで あ る と 同 定 し た2・ ε (Fig.3)。 化 合 物Hに つ い て も 構 造 解 析 を 行 っ カ が 、 研 究 室 保 有 の 重 水 素 化 溶 媒 の い ず れ に も 十 チ 溶 解 せ ず シ グ ナ ル の 弱 いIH‑NMRの み 得 ら れ 桿 造 決 定 に は 至 ら な か っ た 。

Fig. 3 Chemical structure of xanthomegnin

2.Xanthomegninの 生 物 活 性 2‑1植 物 生 長 試 験 レ タ ス 幼 苗 試 験

Xanthomegninの 植 物 の 生 長 に 及 ぼ す 影 響 を

Table.1 Effect of xanthomegnin on the growth of lettuce seedlings

Xanthomegnin p-Hydroxybenzoate

concentration (ppm) 10 50 100 10

cotyledon length 93.8 103.6 106.6 103.9

hypocotyl length 105.5 109.0 123.3 109.7

radicle length 119.7 160.9 189.1 105.8

weight 100.4 100.8 103.5 103.9

n = 30 (% of control)

Ot4-6t,:dptc_., lAcT)WE'Et'fliti,-Clfhtt I K ti-A N R'9 L. Xanthomegnin !J` il 'A it IttRT:6•Ei LIJG , FIr-ar:TA-Mttg-e6 p-Hydroxybenzoate tL *1 L 1., "C )11 II L (Table.

1)o

Xanthomegnin Z ft X --e Mt 0 K hqUA tt -C li^ 61 N: p-Hydroxybenzoate L 0) :VM 1-(T ali, ii-V25 G tt, 1--s h, -9 it, .-/ ^-ATL'At 0* < N: lt

活 性 が 高 く植 物 に 対 して 生 長 阻 害 活 性 を 示 す こ と が 多 い が 、 今 回 の 試 験 で は100ppmで も 植 物 生 長 阻 害 活 性 は 認 め られ な か った 。

トマ ト ・キ ュ ウ リ幼 苗 試験

以 前 、 コ ン ポ ス トか ら分 離 した 菌 類 の 土 壌 接 種 試 験 で トマ ト、 キ ュ ウ リを 供 試 植 物 と し て用 い た こ と か ら、 これ らの 植 物 に 対 して も植 物 生 長 阻 害 試 験 を行 っ た(Table.2)。

トマ ト幼 苗 に対 す る影 響 キ ュ ウ リ幼 苗 に 対 す る影 響

Table.2 Effect of xanthomegnin on the growth of plants seedlings

Xanthomegnin p-Hydroxybenzoate

tomato 10 50 100 10 (ppm)

cotyledon weight 104.9 105.1 102.5 108.2

weight 110.2 120.1 118.6 128.1

normal growth 93.3 100.0 93.3 73.3

cucumber 100.0

cotyledon weight 114.5 97.1 91.0 84.5

weight 103.8 116.8 126.1 91.9

normal growth 60.0 93.3 60.0 50.0

tomato : n = 15 cucumber : n = 10 normal growth of control tomato

(% of control) : 50% cucumber : 20%

トマ トに お い て 、 地 上 部 重 量 は コ ン トロー ル と 顕 著 な 差 は 見 ら れ な い が 、 根 の生 育 に対 し抗 菌 物 質 が有 利 に作 用 して い る可 能 性 が考 え られ る。

固 体 サ イ ズ の大 き い キ ュ ウ リに お い て も トマ ト と同 様 に、 根 の 生 育 に 対 し有 利 に 作 用 して い る と 思 わ れ る。 トマ トで は コ ン トロ ー ル 中 で 腐 敗 せ ず に 生 育 した 個 体 数 は50%で あ り、 キ ュ ウ リ に お い て は20%で あ っ た。 抗 菌 物 質 を 処 理 した 区 で は 腐 敗 を お こ さ ず に生 育 した個 体 数 が コ ン トロー ル 処 理 区 よ り多 か っ た こ とか らXanthomegninに 腐 敗 防止 効 果 が あ る こ とが考 え られ る。

2‑2殺 線 虫 活 性試 験

Xanthomegninに 殺 虫 活 性 が あ る と い う 報 告4) が あ る こ とか らXanthomegninの 殺 線 虫 活 性 試 験 を 行 った(Table.3)。

フ ィ リ ピ ン で の 調 査 時 に、 鶏 糞 処 理 ジ ャ ガ イ モ 栽 培 の 試 験 圃場 で は線 虫 に よ る被 害 が 見 られ る が 、

コ ン ポ ス ト処 理 試 験 圃 場 で は 線 虫 被 害 が 見 られ な か っ た 。 今 回 の 試 験 に お い て、100ppmで 致 死 率 70.1%と い う高 い 殺 線 虫 活 性 が 認 め ら れ た こ と よ りXanthomegninが こ の 事 例 の よ うな 線 虫 に 対 す る 防 除 効 果 を 持 つ とい う可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。

Table.3 Effect of Xanthomegnin on Nematicidal Activity (%)

Concentration (ppm)

10 50 100

Xanthomegnin 16.2 44.1 70.1

(48h after treatment)

考 察

静 置 培 養 に よ っ て 得 られ た培 養 液 お よ び 菌 体 抽 出 物 に お い て 抗 菌 活 性 を 示 す 画 分 は、 酢 酸 エ チ ル 可 溶 画 分 で あ っ た 。 こ の画 分 は培 養 液 お よ び菌 体 の 両 方 か ら抽 出 さ れ 、TLCに よ って 同 一 の 成 分 と 確 認 し た。 さ ら に 活 性 成 分 は 菌 体 よ り効 率 良 く酢 酸 エ チ ル に よ っ て 抽 出 さ れ る こ とか ら、 菌 体 か ら の 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 を 用 い て シ リカ ゲ ル ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ る 活 性 化 合 物 の 分 画 を 行 っ た。 単 離 さ れ た 活 性 成 分 は 赤 色 結 晶物 質 で あ り、 抗 菌 活 性 を 示 さ な い 濃 青 色 固 形 物 と共 に 酢 酸 エ チ ル 抽 出 画 分 に 存 在 して い た。 赤 色 結 晶 物 はTLC上 で 黄 色 、 溶 液 中 で 黄 か ら 榿 色 を 示 し、 濃 青 色 固 形 物 はTLC上 で 赤 色 、 溶 液 中 で も 赤 か ら濃 青 色 を 示 す こ と か ら、 菌 床 が 赤 色 を 呈 し て い る の は こ の 二 つ の 化 合 物 に よ る も の と 考 え ら れ る。 ま た、

Peπ弼 脇 μ配.sp繁 殖 活 動 初 期 に 見 られ る 培 地 の 黄 変 は 赤 色 化 合 物 の 溶 液 の 色 と似 て い る よ う に思 え る。

抗 菌 活 性 の 認 め られ た 赤 色 結 晶 物 は260〜270℃

付 近 で 黒 変 し た。 これ を 各 種 機 器 分 析 に よ っ て 構 造 解 析 した と こ ろ、13C‑NMRや1H‑NMRの デ ー タ か ら は ナ フ トキ ノ ン2重 体 の 片 側 分 の ス ペ ク トル しか得 られ な い が、1H‑NMRの13.20ppmの 水 酸 基 の シ グナ ル が ダ ブ ル ピー ク に な る こ とに よ り二 量 体 で あ る と う か が え ら れ 、 既 知 化 合 物 の ナ フ トキ ノ ン誘 導 体Xanthomegninで あ る と推 察 し た。 ま た、 文 献 記 載 のIRやUVな どの 機 器 分 析 デ ー タ と も 比 較 した と こ ろ 非 常 に 良 く一 致 した た め、 この 化 合 物 で あ る と同 定 した。 抗 菌 活 性 の 認 め ら れ な い 濃 青 色 固 形 物 は 研 究 室 保 有 の 重 水 素 化 溶 媒 の い ず れ に も十 分 に溶 解 せ ず 、 ご く弱 い1H‑NMRス ペ ク トル デ ー タが 得 られ た の み で 化 合 物 の 同 定 に は

至 ら な か っ た が 、 結 晶 性 が 高 く水 や 有 機 溶 媒 に も 溶 解 しに くい こ と か ら、 自然 界 の 生 態 系 で も固 体 で 存 在 し活 性 は 示 さ な い と推 察 で き 、 活 性 体 で あ るXanthomegninが 役 割 を 終 え た 後 、 形 を 変 え 不 活 性 化 した もの で は な い か と考 え られ る。

Xanthomegninの 生 物 活 性 は 、 抗 菌 活 性 は も と よ り殺 虫 活 性 、 ミ ト コ ン ド リ ア に 対 す る 脱 共 役 作 用 、 遺 伝 子 複 製 実 験 に お い て 陽 性 で あ る が 正 常 細 胞 に 対 して は 影 響 を 与 え ず 抗 腫 瘍 活 性 を 持 つ とい う こ と が 知 ら れ て い る。 キ ノ ン 系 の 化 合 物 は 生 物 活 性 を 有 す る こ と が 多 い こ と も あ り Xanthomegninの 植 物 に 対 す る 生 長 試 験 を 行 っ た が 、 レ タ ス 、 キ ュ ウ リ、 トマ トの い ず れ に お い て も阻 害 活 性 は認 め ら れ ず 、 特 に 根 の 部 分 の 生 育 に 対 し て 有 利 に作 用 して い る よ う に思 え た。 比 較 と し て 用 い た 抗 菌 物 質p‑Hydroxybenzoateに お い て も 同様 の 結 果 を 示 す こ とか ら、 抗 菌 物 質 が 植 物 の 根 の 部 分 で 土 壌 病 原 菌 や 根 部 の 腐 敗 を 防 除 し、 植 物 に 対 して よ い 影 響 を 与 え て い る と考 え られ る 。 同 様 な 知 見 は蛍 光 性 シ ュー ドモ ナ ス で も認 め られ て い る5)。 以 前 、 コ ン ポ ス トか ら分 離 した 菌 類 の 土 壌 接 種 試 験 に お い て も 同様 に トマ ト、 キ ュ ウ リ の 主 根 長 が コ ン トロ ー ル と比 較 して 伸 長 し、 植 物 の 生 育 が 良 好 で あ っ た こ と よ りXanthomegninの 土 壌 接 種 試 験 で も 同様 の 効 果 が 期 待 さ れ る。 さ ら に 、 殺 線 虫 試 験 に お い て は100ppmの 処 理 濃 度 で 高 い 殺 線 虫 活 性 が 認 め られ て お り、 コ ン ポ ス ト施 用 土 壌 に お け る 線 虫 防 除 効 果 との 関 連 性 が 示 唆 さ れ た 。

土 壌 病 害 は植 物 の根 か ら感 染 す る こ とか ら拮 抗 微 生 物 を 利 用 し、 病 原 菌 の 密 度 を 低 下 さ せ 病 原 菌 の 活 動 を 抑 制 して 発 病 を 軽 減 さ せ よ う とい う生 物 的 防 除 剤 の 開 発 が 期 待 さ れ て い る。

現 時 点 で も生 物 的 防 除 剤 と して ワ タ 稲 立 枯 病 に 有 効 なP伽oresc飢8の ピー ト製 剤 が あ り、 糸 状 菌 で あ る 距rZαro柵ッce8やGZ̀OC̀αd認mひ かeπSもアル ギ ン酸 塩 と粘 土 鉱 物 の 混 合 物 で カ プ セ ル 化 して 良 好 な 結 果 が 得 られ て い る。 しか し、 製 剤 ・施 用 等 の 作 業 期 間 に 生 物 活 性 が 低 下 す る な ど、 施 用 後 根 圏 で 速 や か に定 着 して 効 果 を発 揮 しな け れ ば な ら な い な どの 問題 点 が あ り実 用 化 さ れ た 例 は極 め て

少 な い の が 現 状 で あ る。 今 後 の さ ら な る 実 用 化 の た め に 微 生 物 の機 能 が 発 揮 さ れ る 土 壌 の 物 理 学 的 要 因 につ い て も 明 ら か に す る こ と、 ま た 、 製 剤 化 した 微 生 物 の 効 果 的 な 施 用 法 の 開 発 が 必 要 で あ る と考 え られ る。

引用文献

1) Yasuko Kimura, Satoshi Nakahara, and Shozo Fujioka: Aspyrone, a Nematicidal

Compound Isolated from the Fungus, Aspergillus melleus , Biosci. Biotech.

Biochem. 60(8), 1375-1376, 1996

2) Axel Zeek, Peter Ruf3, Hartmut Laatsch, Wolfgang Loeffler, Herbert Wehrle, Hans Milner und Hartwig Hoist : Isolierung

des Antibioticums, semi-Vioxanthin aus Penicillium citreo-viride und Synthese des

Xanthomegnins Chem. Ber. 112, 957-978,

1979

3) Thomas J. Simpson, "C Nuclear magnetic resonance spectra and biosynthetic studies

of Xanthomegnin and related pigments

from Aspergillus sulphureus and melleus. J.

Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 592-595, 1977 4) Kayser, 0., Kiderlen, A. F., Laatsch, H., Croft,

S. L., 2000. In vitro leishmanicidal activity

of monomeric and dimeric napthoquinones.

Acta Tropica. 77, 307-314.

5) Nakata K, Harada N, Sumitomo K, Yoneda K: Enhancement of plant stem growth

by flocculation of the atibiotic-prpducing

bacterium, Pseudomonas fluorescens 5272, on the roots. Biosci. Biotech. Biochem. 64(3),

459-465, 2000