Bull. Nagano Environ. Conserv. Res. Inst. No.8(2012) 3. 結果および考察 3.1 長野県における手足口病患者およびヘルパンギーナ患者からのエンテロウイルス検出状況 手足口病患者およびヘルパンギーナ患者 67 検体のうち, が 45 株 (67 %

1．はじめに

手足口病（Hand, foot and mouth disease ：HFMD）は，

3 ～ 5 日の潜伏期間の後，口の粘膜・手のひら・足

の裏などに現れる 2 ～ 3mm の水疱性の発しんを主

症状とした急性ウイルス性感染症である．その他に

発熱（38 度以下） や食欲不振， のどの痛みなどが

見 ら れ る が， 一 般 的 に 軽 症 で， 発 疹 は 3 ～ 7 日 で

消失する．

一方ヘルパンギーナ（Herpangina） は， 典型的に

は 2 ～ 4 日の潜伏期間の後，突然 38 度以上の発熱

を呈し，続けて口腔内に水疱が出現する急性ウイル

ス性感染症である．水疱が破れて痛みを伴うことが

ある．その後 2 ～ 4 日で解熱し，7 日程度で治癒する．

発熱による倦怠感や口腔内の痛みなどから，食事や

水分を十分にとれず，脱水症状を呈することもある．

いずれも乳幼児を中心に夏季に流行する疾患であ

り，病原ウイルスはどちらもエンテロウイルス属に

よるものである．手足口病はコクサッキーウイルス

A 群 16 型（ 以 下 CA16）， エ ン テ ロ ウ イ ル ス 71 型

（以下 EV71）及びコクサッキーウイルス A 群 10 型

（以下 CA10）によるものが多く，ヘルパンギーナは，

コクサッキーウイルス A 群 4 型（以下 CA4），コク

サッキーウイルス A 群 6 型（以下 CA6）及び CA10

の感染によるものが多いと言われている．

このうち CA6 と CA10 は患者個体，感染時期によっ

て，手足口病，ヘルパンギーナ様の多様な症状を示

す．また手足口病，ヘルパンギーナを引き起こすウ

イルスは，年によって入れ替わり，流行規模にも変

化がみられることが知られている

１） ２）

_．

2011 年（H23 年）は，長野県で手足口病が第 31

週（8 月 1 ～ 7 日）に定点医療機関あたり 9.04 人と，

過 去 5 年 間 で も っ と も 多 い 状 況 と な り， 大 規 模 な

流行をみとめた．またヘルパンギーナも，定点あた

り 8 人を超える流行を示した

３）

_．

そこで今回，2011 年（1 月～ 10 月）の長野県に

お け る 手 足 口 病 お よ び ヘ ル パ ン ギ ー ナ 患 者 か ら の

PCR 法によるエンテロウイルス検出状況と，遺伝子

解析および臨床的特徴について報告する．

2．検査対象と方法

2.1　検査対象

検 査 対 象 は， 感 染 症 発 生 動 向 調 査 事 業 に お い て

2011 年 1 月 ～ 10 月 の 間 に 長 野 県 内 の 定 点 医 療 機

関で，手足口病もしくはヘルパンギーナと臨床診断

された患者から採取された咽頭ぬぐい液 67 検体（手

足口病：46 検体，ヘルパンギーナ：21 検体）とした．

また，過去の分離株と比較するために，2007 年（H19

年 ） に 分 離 し た CA6 の 5 株 と，2008 年（H20 年 ）

に分離した CA10 の 5 株を検査材料とした．

2.2　遺伝子学的検査方法

咽頭拭い液から，QIAampViral RNA Mini Kit（QIAGEN

社 ） を 用 い て RNA を 抽 出 し た． 抽 出 し た ウ イ ル

ス RNA は， エ ン テ ロ ウ イ ル ス 特 異 プ ラ イ マ ー

（AM11,12/AM31,32）を用いてワンステップ RT-PCR

により VP2 領域を増幅した． 特異バンド（584bp）

が検出されなかった検体については，セミネステッ

ト PCR（ プ ラ イ マ ー　AM21,22/AM31,32） を 実 施

し た

４） ５）

_{． 得 ら れ た PCR 増 幅 産 物 は QIAquick PCR}

Purification Kit（QIAGEN 社）を用いて精製後，ダイ

レクトシークエンシング法により ABI PRISM 3130

Genetic Analyzer（Applied Biosystems） を 用 い，VP2

領域の塩基配列（512nt） を決定した． 得られた塩

基 配 列 の 成 績 は、GenBank に 登 録 さ れ て い る 塩 基

配 列 情 報 と の 相 同 性 を BLAST （http://blast.ddbj.nig.

ac.jp/top-j.html）より検索し，ウイルスを同定した．

さらに Clustal W を用いて系統樹解析を行った．

キーワード：手足口病，ヘルパンギーナ，エンテロウイルス，コクサッキーウイルスＡ群 6 型，系統樹解析

2011 年に手足口病・ヘルパンギーナ患者から検出した

エンテロウイルスの遺伝子解析と臨床的特徴

内山友里恵

１

_{・中沢春幸}

１

1　長野県環境保全研究所　感染症部　〒 380-0944　長野市安茂里米村 1978

表

_{1　長野県における手足口病患者からのウイルス分離・検出状況}

※

_1～10月

　CA　2

1

（ 9）

2

（ 6）

　CA　6

1

（13）

1

（ 6）

2

（14）

35

（76）

　CA 9

1

（ 2）

1

（11）

2

（14）

　CA 10

1

（13）

7

（15）

　CA 16

7

（64）

6

（75）

5

（12）

13

（76）

30

（94）

1

（11）

4

（ 9）

コクサッキーウイルスB群 3型

1

（ 9）

3

（18）

EV71

2

（18）

34

（85）

6

（67）

10

（72）

エコーウイルス9型

1

（11）

合計検出数

11

8

40

17

32

9

14

46

（）内％表示

2010年

2011年

※

2004年

2005年

2006年

2007年

2008年

2009年

表 1　長野県における手足口病患者からのウイルス分離・検出状況

ヘルパンギーナ患者では，21 株のうち CA6 が 10

株（48%） ，CA10 が 11 株（52%） 検 出 さ れ た（図

3）． このことから 2011 年 1 月～ 10 月は， 手足口

病，ヘルパンギーナ両疾患とも主な原因ウイルスは

CA6 と思われる．加えて病原性の相違によりヘルパ

ンギーナ患者から CA10 が高頻度に検出された．

2004 年（H16 年 ） ～ 2010 年（H22 年 ） の 間，

手 足 口 病 の 流 行 中 に 最 も 多 く 検 出 さ れ た ウ イ ル ス

は， 全国と同様に CA16 と EV71 であり， この 2 つ

の血清型が，数年ごとに入れ替わっている（図 4）．

CA6 は，少数の分離・検出はあったものの，これま

で手足口病の主な原因ウイルスだったことはなかっ

　

3．結果および考察

3.1　長野県における手足口病患者およびヘルパン

　　 ギーナ患者からのエンテロウイルス検出状況

　手足口病患者およびヘルパンギーナ患者 67 検体

の う ち，CA6 が 45 株（67 ％） と 最 も 多 く 検 出 さ

れ， 全 体 の 3 分 の 2 を 占 め た． 次 い で CA10 が 18

株（27％），CA16 が 4 株（6％） で あ っ た（図 1）．

疾 患 別 で は， 手 足 口 病 患 者 46 株 の う ち CA6 が 35

株（76%）と最も多く，次いで CA10 が 7 株（15％），

CA16 が４株（9%）であった（図 2）．

CA6

67%

CA10

27%

CA16

6%

図

1 2011年（1月～10月）エンテロウイルス検出状況

CA6

76%

CA10

15%

CA16

9%

図

_{2 2011年（1月～10月）手足口病患者からの}

エンテロウイルス検出状況

CA6

48%

CA10

52%

図

3 2011年（1月～10月）ヘルパンギーナ患者からの

エンテロウイルス検出状況

4

6

8

10

12

(

)

長野県

全国

CA16

CA16

CA6

CA16

CA16

EV71

EV71

0

2

4

(

)

2004

2005

2006

2007

2008

2009

2010

2011

CA16

CA16

EV71

CA16

EV71

年

図

4 手足口病の主流原因エンテロウイルスと患者報告数の推移

図 1　 2011 年（1 月～ 10 月）エンテ

ロウイルス検出状況

図 2　 2011 年（1 月～ 10 月）手足口

病患者からのエンテロウイルス

検出状況

図 3　 2011 年（1 月～ 10 月）ヘルパ

ンギーナ患者からのエンテロウ

イルス検出状況

図 4　手足口病の主流原因エンテロウイルスと患者報告数の推移

2011 年に手足口病患者とヘルパンギーナ患者から

検出されたもののうち，512nt が決定できた 39 株

について VP2 領域による系統樹解析を実施した（図

6）．

そ の 結 果，2007 年 に 検 出 し た CA6 と 2011 年 に

検出した CA6 は，異なるクラスターに分類された．

2011 年 に 検 出 し た CA6 の 39 株 は， 同 年 に 静

岡 県 で 検 出 さ れ た CA6 Shizuoka/2011（Accession

No.AB663320） 株 と 98% ～ 100% 相 同 の 類 似 株 で

あった． このことから , 2011 年にヘルパンギーナ

患者と手足口病患者から検出した CA6 は , 診断名に

かかわらず類似株であったといえる．さらに得られ

た塩基配列をアミノ酸配列に変換し , 2011 年検出

株と 2007 年検出株とで比較すると ,10 ヶ所の違い

が認められた（図 7）． 解析したエンテロウイルス

VP2 領 域 は， ウ イ ル ス 粒 子 の 内 部 に 存 在 し 比 較 的

変異の少ないことが知られている

５）

_{．2011 年検出}

た．

しかし 2011 年は CA6 が手足口病患者から 8 割近

く検出され，その傾向は，他年と相違していた（表

1）．

ま た， ヘ ル パ ン ギ ー ナ 患 者 か ら は， 全 国 と 同 様

に 例 年， コ ク サ ッ キ ー ウ イ ル ス A 群 2 型（ 以 下

CA2），CA4，CA5，CA6 及 び CA10 と 多 く の 血 清 型

が検出されており，主に検出される血清型も年ごと

に代わる傾向があった（図 5）．これに対し，2011

年に検出されたのは，CA6 と CA10 の 2 つの血清型

のみで，他の血清型は検出されていない（表 2）．

両疾患において，同年に同じ血清型が多く検出さ

れたことも他年と相違していた．

3.2　CA6 の遺伝子解析

過去の株と比較するために，CA6 が比較的多くヘ

ルパンギーナ患者から分離された 2007 年の 5 株と，

2

3

4

5

6

7

8

9

10

(

)

長野県

全国

CA4

CA6

CA10

CA5,CA6

CA4

0

1

2

3

4

(

)

2004

2005

2006

2007

2008

2009

2010

2011

年

図5

ヘルパンギーナの主流原因エンテロウイルスと患者報告数の推移

CA4,CA6

CA6,CA10

CA2

表2　長野県におけるヘルパンギーナ患者からのウイルス分離・検出状況

※

_1～10月

　　　　　　CA　2

7

(20）

7

（47）

　　　　　　CA　4

14

(40）

5

(11）

18

（75)

1

( 4）

3

（18）

6

（40）

3

（20）

　　　　　　CA　5

1

（ 3）

10

(21）

11

（39）

2

（13）

　　　　　　CA　6

6

(17）

24

（51）

11

（39）

5

（33）

10

（48）

　　　　　　CA　7

3

（20）

　　　　　　CA　9

3

（ 6）

1

( 7）

　　　　　　CA 10

5

(11）

4

（14）

14

(82）

11

（52）

　　　　　　CA 16

1

（3）

1

( 4）

コクサッキーウイルスB群１型

3

（9）

コクサッキーウイルスB群２型

2

（ 8）

コクサッキーウイルスB群３型

3

（9）

コクサッキーウイルスB群４型

3

（20)

EV71

4

（17）

総計

35

47

24

28

17

15

15

21

（）内％表示

2010年

2011年

※

2004年

2005年

2006年

2007年

2008年

2009年

表 2　長野県におけるヘルパンギーナ患者からのウイルス分離・検出状況

図 5　ヘルパンギーナの主流原因エンテロウイルスと患者報告数の推移

23-567 23-447 23-509 23-503 23-505 23-548 23-501 23-499 CA6 Shizuoka/2011(AB663320) 23-453 23-500 23-502 23-537 23-540 23-541 23-542 23-547 23-549 23-508 23-513 23-521 23-433 23-432 23-434 23-435 23-437 23-449 23-451 23-522 23-523 23-569 23-526 23-515 23-520 23-566 23-446 23-550 23-511 23-506 23-448 19-291 19-293 19-298 19-266 19-288 CA6 Gdula(AY421764) 0.02

2011年

VP2領域

（512nt）

23-567 23-447 23-509 23-503 23-505 23-548 23-501 23-499 CA6 Shizuoka/2011(AB663320) 23-453 23-500 23-502 23-537 23-540 23-541 23-542 23-547 23-549 23-508 23-513 23-521 23-433 23-432 23-434 23-435 23-437 23-449 23-451 23-522 23-523 23-569 23-526 23-515 23-520 23-566 23-446 23-550 23-511 23-506 23-448 19-291 19-293 19-298 19-266 19-288 CA6 Gdula(AY421764) 0.02

_{◆：ヘルパンギーナ患者から検出したCA6}

無印：手足口病患者から検出した

CA6

2007年

図6

CA6のVP2領域による系統樹解析

2011年

2008年

◆：ヘルパンギーナ患者から検出した

CA10

無印：手足口病患者から検出した

CA10

VP2領域（512nt）

23-512

23-450

23-556

23-568

23-570

23-507

23-538

23-545

23-504

23-555

23-525

23-524

23-517

20-99

20-147

20-160

20-159

20-178

CA10 aichi/2005(AB244323)

CA10 Kanagawa/2003(AB162742)

CA10(AY421767)

0.02

◆：ヘルパンギーナ患者から検出した

CA10

無印：手足口病患者から検出した

CA10

図8

CA10のVP2領域による系統樹解析

23-512

23-450

23-556

23-568

23-570

23-507

23-538

23-545

23-504

23-555

23-525

23-524

23-517

20-99

20-147

20-160

20-159

20-178

CA10 aichi/2005(AB244323)

CA10 Kanagawa/2003(AB162742)

CA10(AY421767)

0.02

20-99

LTVGNSSITT QEAANIVLAY GEWPEYCPDT DATAVDKPTR PDVSVNRFYT LDSKMWQENS TGWYWK 20-147 ... ... ... ... ... ... ... 20-160 ... ... ... ... ... ... ... 20-159 ... ... ... ... ... ... ... 20-178 ... ... ... ... ... ... ... 23-450 ... ... ... ... ... ... ... 23-504 ... ... ... ... ... ... ... 23-556 ... ... ... ... ... ... ... 23-568 ... ... ... ... ... ... ... 23-570 ... ... ... ... ... ... ... 23-555 ... ... ... ... ... ... ... 23-507 ... ... ... ... ... ... ... 23-512 ... ... ... ... ... ... ... 23-524 ... ... ... ... ... ... ... 23-525 ... ... ... ... ... ... ... 23-538 ... ... ... ... ... ... ... 23-545 ... ... ... ... ... ... ... 23-517 23-517 ... ... ... ... ... ... ... CA10(AY421 ... ... ... ... ... ... ... CA10_aichi ... ... ... ... ... ... ...W.. CA10_Kanag ... ... ... ... ... ... ...

図9

CA10のVP2領域アミノ酸配列変異箇所

2011年

2008年

CA6_Shizuo

VDCGQLNHYY PRGSQHCIEL RRVARILSFY GRYSCGQAYS P*RVSE*VLH TVN*ELEDR 23-453 ... ... ... ... ... ... 23-499 ... ... ... ... ... ... 23-500 ... ... ... ... ... ... 23-501 ... ... ... ... ... ... 23-502 ... ... ... ... ... ... 23-503 ... ... ... .C... ... ... 23-505 ... ... ... .C... ... ... 23-537 ... ... ... ... ... ... 23-540 ... ... ... ... ... ... 23-541 ... ... ... ... ... ... 23-542 ... ... ... ... ... ... 23-547 ... ... ... ... ... ... 23-548 ... ... ... ... ... ... 23-549 ... ... ... ... ... ... 23-550 ... ... ...P.. ... ... ... 23-506 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-508 23-506 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-508 ... ... ... ... ... ... 23-509 ...H ... ... ... ... ... 23-511 ... ... ...P.. ... ... ... 23-513 ... ... ... ... ... ... 23-521 ... ... ... ... ... ... 23-433 ... ... ... ... ... ... 23-432 ... ... ... ... ... ... 23-434 ... ... ... ... ... ... 23-435 ... ... ... ... ... ... 23-437 ... ... ... ... ... ... 23-446 ...H. ... ... ... ... ... 23-447 ...H ... ... ... ... ... 23-448 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-449 ... ... ... ... ... ... 23-451 ... ... ... ... ... ... 23-522 ... ... ... ... ... ... 23-523 ... ... ... ... ... ... 23-569

2011年

図7

CA6のVP2領域アミノ酸配列変異箇

23-448 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-449 ... ... ... ... ... ... 23-451 ... ... ... ... ... ... 23-522 ... ... ... ... ... ... 23-523 ... ... ... ... ... ... 23-569 ... ... ... ... ... ... 23-526 ... ... ... ... ... ... 23-515 ... ... ... ... ... ... 23-520 ... ... ... ... ... ... 23-566 ... ... ... ... ... ... 23-567 ...H ... ... ... ... ... 19-291 ...D.HH ....*.S... W...L. ...*TH. ...Q... ...Q... 19-293 ...D.HH ....*.S... W...L. ...*TH. ...Q... ...Q... 19-298 ...D.HH ....*.S... W...L. ...*TH. ...Q... ...Q... 19-288 ...D.HH ....*.S... W...L. ...*TH. ...Q..Y ...Q... 19-266 ...D.HH ....*.S... W...L. ...*TH. ...Q... ...Q... CA6_Gdula(

AN.W.FD..H T.SC*.SV.. W*M....PLH ...*.HT ARC... FI.Q...N. 23-506 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-508 ... ... ... ... ... ... 23-509 ...H ... ... ... ... ... 23-511 ... ... ...P.. ... ... ... 23-513 ... ... ... ... ... ... 23-521 ... ... ... ... ... ... 23-433 ... ... ... ... ... ... 23-432 ... ... ... ... ... ... 23-434 ... ... ... ... ... ... 23-435 ... ... ... ... ... ... 23-437 ... ... ... ... ... ... 23-446 ...H. ... ... ... ... ... 23-447 ...H ... ... ... ... ... 23-448 ... ... ...P.. ...P ... ... 23-449 ... ... ... ... ... ... 23-451 ... ... ... ... ... ... 23-522 ... ... ... ... ... ... 23-523 ... ... ... ... ... ... 23-569

2007年

図 6　CA6 の VP2 領域による系統樹解析

図 7　CA6 の VP2 領域アミノ酸配列変異箇所

図 9　CA10 の VP2 領域アミノ酸配列変異箇所

図 8　CA10 の VP2 領域による系統樹解析

(

512nt

)

CA10 は，系統樹解析で異なるクラスターに分類さ

れたが，アミノ酸配列に変換すると，同義置換され

相違は認めなかった．

2011 年（ １ 月 ～ 10 月 ） に 流 行 し た 手 足 口 病，

ヘルパンギーナは，臨床所見で非典型的な症状を認

める傾向にあり， 主な原因ウイルスは CA6 による

ものと推察された．

エンテロウイルス感染症は，多種・多様の症状を

呈 す る こ と で 知 ら れ て い る． ま た，RNA ウ イ ル ス

の特徴としてウイルス変異が起こりやすく，診断を

下す臨床現場でも苦慮する事例も多いことが推察さ

れる．特に 2011 年に手足口病，ヘルパンギーナ患

者から多く検出された CA6 は， 遺伝子解析の結果

から過去の CA6 との相違が明らかになり， 感染性

や患者に症状を引き起こす病原性が，過去の同血清

型から変化した可能性が推察された．

　

毎年の流行状況及び流行株の解析は，疾病の流行

を監視する上で極めて重要である．今後も感染症発

生 動 向 調 査 を 通 じ， 経 年 的 な 流 行 状 況 の 把 握 に 努

め，臨床の現場にフィードバックしていきたい．

文　献

1） 国立感染症研究所　感染症情報センター：注目

すべき感染症「手足口病」，感染症発生動向調

査感染症週報，10（24）10-14（2008）

http://idsc.nih.go.jp/idwr/kanja/idwr/idwr2008/

idwr2008-24.pdf　（2011 年 11 月確認）

２） 国立感染症研究所　感染症情報センター：注目

すべき感染症「ヘルパンギーナ」，感染症発生

　　動向調査感染症週報，12（26）7-9（2010）

http://idsc.nih.go.jp/idwr/kanja/idwr/idwr2010/

idwr2010-26.pdf（2011 年 11 月確認）

３） 長野県健康長寿課　長野県感染症情報 2011 年

（H23 年）第 31 週 8 月 1 日～ 7 日

http://www.pref.nagano.lg.jp/eisei/hokenyob/

kansen/23-31w.pdf（2011 年 11 月確認）

４） 清水博之，米山徹夫，吉田弘，山下照夫：病原

体検出マニュアル，手足口病，1 ～ 22（2003）

５） Nasri D, et al .（2007）, Typing of Human

Enterovirus by Partial Sequencing of VP2．J Clin

株と 2007 年検出株の VP2 領域にコードされたアミ

ノ酸配列に相違がみとめられたことは，感染性や病

原性を司る領域にも変異が生じた可能性が考えられ

た．

3.3　CA10 の系統樹解析

過去の株と比較するために，CA10 が比較的多く

ヘ ル パ ン ギ ー ナ 患 者 か ら 分 離 さ れ た 2008 年 5 株

と，2011 年に手足口病患者とヘルパンギーナ患者

か ら 検 出 さ れ た も の の う ち，512nt が 決 定 で き た

13 株について VP2 領域による系統樹解析を行った

（図 8）．2008 年に検出した CA10 と 2011 年検出の

CA10 は，異なるクラスターに分類された．さらに ,

今回解析した領域での塩基配列では，相違が認めら

れるものの , アミノ酸変換で同義置換され，アミノ

酸配列には相違を認めなかった（図 9）．

3.4　臨床的特徴

従来，突然の高熱を伴い発疹が口腔内に限定した

所見を認めればヘルパンギーナ , 38℃以下の発熱で

発疹が口腔内だけでなく手足にも出現が確認されれ

ば手足口病と診断される場合が多い．しかし，松岡

ら

６）

_{によれば，2011 年は，高熱と口腔内発疹の所}

見からヘルパンギーナと診断しても，その後に皮疹

が出現したことから手足口病と診断を訂正した事例

を報告しており， その非典型事例から CA6 が 62%

と，比較的多く検出されている．また，これまでよ

り大きい扁平な水疱を伴う場合や，病後に爪甲が脱

落する症例が国内外で報告されており，脱落した爪

甲から CA6 が検出されている

７）

_{．2011 年は， 非典}

型的な臨床所見が認められる傾向にあった．

4 まとめ

手足口病の原因ウイルスは，数年ごとに CA16 と

EV71 の 流 行 を 繰 り 返 し て い た が，2011 年（ １ 月

～ 10 月）は CA6 が手足口病患者から 8 割近く検出

され，その傾向は他年と相違していた．

ヘルパンギーナの原因ウイルスは，CA6 と CA10

の２種類がほぼ半々であった．

2007 年に検出した CA6 と 2011 年検出の CA6 は

系 統 樹 解 析 に お い て， 異 な る ク ラ ス タ ー に 分 類 さ

れ，アミノ酸配列においても 10 ヶ所の相違を認め

た．

2008 年の検出 CA10 の 5 株と，2011 年の検出の

７） 柏井健作 他（2011）手足口病後に脱落した爪

からのコクサッキーウイルス A6 型の検出－和

歌山県，IASR，Vol. 32（11）：339-340

Microbiol 45（8）： 2370-2379

６） 松岡高史・松岡明子・松岡伊津夫（2011）今

夏流行した手足口病とヘルパンギーナの臨床ウ

イルス学的特徴，長野県小児科医会

Genetic analysis of enterovirus and clinical characteristics were detected in patients with hand，

foot and mouth disease and herpangina in 2011

Yurie U

CHIYAMA

1

_{，Haruyuki N}

_AKAZAWA

1

　　　　　1　Nagano Environmental Conservation Research Institute, Infectious Disease Society Division,

1978 Komemura, Amori, Nagano 380-0944, Japan