超 生 体 染 色 顆 粒 の 電 子 顕 微 鏡 的 研 究
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(2) 758. 中. 本. 孝. か に 大 腿 骨 々 髄 を 取 出 し そ の 小 片 を オ ブ エ ク トグ ラ ス 上 に 採 り, Hanks氏. 0.1%. Janus. green. B(Bayer社. 製). 液 を 少 量 加 え て デ ッ ク グ ラ ス で 覆 い,デ. ッ. クグ ラ ス の 一側 を 上 下 す るこ とを 繰 返 え す と細 胞 は 遊 離 し,全. 部 の 細 胞 が 超 生 染 さ れ る.そ. に よ り そ の 良 否 を 判 定 す る.尚 54),田 上55)等. 之 に は 横 田53),長. 下 同 じ)し. Hanks氏. 液 で2回. AU. 50型 を 使 用 し た. 観. を2回. chondriaの. 改 良 し て 外 径8mmの. 胞 塊 を 形 成 し て い る硝 子 管 の 細 の 細胞 塊 を. を 三 角帽 子型 に折. り両 端 をヘ ア ピ ン で止 め た漏 斗 状 の濾 紙 袋 に 入 れ て alcoho1,. monomer‑alcohol,及. びmonmerを. し た 秤 量 瓶 へ 順 次 移 し か え る.脱 80,. 90,. 水 は50,. 100%(2回)alcoholを. 速 か に(2分. 間)無. 各5分. 水alcoholを. みた 60,. 70,. 間,次. 通 す.色. 水 銀 カ リ ウ ム 錯 化 合 物 はalcoho1に 作 は 出 来 る だ け 速 か に 行 い,無. いで. 素 と沃 化. 溶 解 す るか ら操. 水alcoho1を. 通 した. 後 に も普 通 顕 微 鏡 下 で細 胞 内 に 色 素 顆 粒 が残 つ て い る 事 を確 め た 後 に 包 埋 に 移 る よ う に す る. 3) %. 固 定 液 の 作 製 法:. KI. 60cc.を. ‑5%. HgCl2. 100cc.と15. 混 和 す る と瞬 時 に し て美 麗 な赤 澄黄. 色 を 呈 し て 強 く 混 濁 す る が,暫. く放 置 す れ ば上 清 液 は. 赤 澄 黄 色 透 明 と な り 下 部 に 同 色 の 沈 澱 が 生 ず る.使 に 臨 みNo.. 2の 濾 紙 で2回. ウ ム 酸 液(燐 4). 酸 緩 衝 液pH. 包 埋;一. 濾 過 し,等 7.4)を. Bで. 超 生 染 し,. 像 に一 致 し て暗 緑 色 の 棍 棒 状 乃 至 球 状 の 生 染 後 オ ブ エ ク トグ ラ ス 上 に 塗. 量 の2%オ. 用. スミ. 加 え て 使 用 す る.. 包 埋 に 使 用 し たmonomerはn‑but. 像 が 認 め られ. の 所 見 か らす る とmitochondriaはJanus. green. Bに. よ つ て特 異 的 に 染 色 され て い る よ うに思. わ れ る. 之 がLazarow. 清 液 を捨 て て 更 に濾 紙 で 十 分. 大 き さ に す る.之. green. は 非 常 に 判 つ き り とmitochondriaの. 液 で この 細 胞 を浮 遊 させ. 長 部 を 石 台 の 上 で 鉄 槌 を 用 い て 破 砕 し,中 取 出 し1mm3の. 績. 抹 して 速 か に 乾 燥 した 細 胞 を この 液 で 固 定 した場 合 に 間 固 定 し,. 硝 子管 の 一端 を マ ツ チ 軸 の 太 さに 引 伸 ば し て封 じ た遠. 水 分 を 取 除 い た 後,細. 成. 行. る.こ. て 移 し 遠 心 沈 澱 す る.上. 察. 顆 粒 が 認 め ら れ る.超 加 え て15〜30分. 心 沈 澱 管 に 少 量 のHanks氏. 度 の 厚 さ の 切 片 と し,. 察 は 明 石 製 作 所 製 電 子顕 微 鏡. 時 間 固 定 し た 細 胞 を 普 通 顕 微 鏡 下 に 観 察 す る とmito. く 遠 心 沈 澱(1000回/分,. 法56)を. に 貼 り,観. 液 で20cc. 洗 滌 す る.. 次 い でEpstein氏. 使 用 し て200°A程. 先 ず 上 記 の 方 法 でJanus. て 上 清 液 を 捨 て る.之. 述)を. Kを. collodion膜. 谷川. い 最 後 に 濾 紙 で 水 分 を 十 分 に 吸 い 取 る. 之 に 固 定 液(後. type. 薄 切 は 島 津 製 作 所ultrarnicrotom. つ い で オ ス ミウ ム を含 ま な い 沃 化 水 銀 カ リウ ム液 で短. 次 に 超 生 染 さ れ た 細 胞 を10ccのHanks氏. 3分 間,以. 薄 切;一. こで 普 通 顕 微 鏡. の研 究 を参 考 に した .. の 遠 心 沈 澱 管 に 洗 い 流 し,軽. 5). 『Janus. and. green. Cooperstein57)等. の 云 う如 く. Bはmitochondriaは. れ て 発 色 す る が,. で は酸 化 さ. mitochondria以. の は 還 元 さ れ てLeuko‑Janus. 外 の 所 に あ るも greenに. な り眼 で 見. え な い 』 と い う現 象 を 示 す も の か 否 か を 明 ら か に す る 目 的 で 次 の よ う な 観 察 を 行 つ た. 0.1% B. Hanks氏. 液 にSodium. Janus. hydrosulfiteの. green 粉 末 を少. 量 加 え る と溶 液 の 色 は 直 ちに 褪 色 して 淡 桃 色 か ら無 色 に な る.こ. の 液 に 極 く 少 量 の2%オ. え る と, Janus. green. Bは. は 暗 緑 色 を 呈 し て 来 る.即 Janus. green. Bは. ス ミ ウ ム酸 液 を加. 直 ち に酸 化 され て 色素 液 ち,還. 元 きれ て 色 を失 つ た. オ ス ミ ウ ム酸 に よつ て容 易 に酸 化. さ れ て 酸 化 型 の 緑 色 を 呈 す る.こ. の反 応 は 沃 化 水銀 カ. リ ウ ム の 存 在 に 於 て も 同 様 で あ る.著. 者 の 固 定 液 は1. %オ. の液で固定す る. ス ミ ウ ム 酸 を含 ん て い る の で,こ. 場 合 に もJanus. green. み に 認 め ら れ る事 は,. Bの. 色 がmitochondriaの. mitochondria以. 外の場所には. そ の 還 元 型 に 於 て も 色 素 は 全 く 存 在 し な い か,或. は存. 在 し て も 非 常 に 少 い も の と考 え ら れ る. さ て 次 に,超. 生 染 せ ず に 上 記 の 方 法 で 固 定,脱. 水,. 包 埋 され た細 胞 を超 薄 切 片 に して電 子 顕 微 鏡 下 に 観 察. ylmethacrylateとmethylmethacrylateを8〜. す る と 細 胞 の 微 細 構 造 が 極 め て よ く 保 た れ て い る事 が. 9.5と2〜0.5の. 解 る(写. 比 率 で 混 合 し て 使 用 し た(両. 者 の 混 合 比 は 室 温 に よ り決 め る)。 重 合 用monomer は 之 に2%. Benzoyl. peroxideを. 次 に, Janus. 加 え た もの を用 い. た. monomer‑alcohol, は 各10分. と し,重. 前 よ り45℃ つ た.. monomer(3回)の 合 に 用 い るmonomerは. で 半 重 合 状 態 に し た も の で45℃. 真1)。 green. Bで. 超 生 染 した 後 に 同様 の方. 法 で 作 つ た 細 胞 の 切 片 を 見 る と,色. 素 は 沃 化水 銀 カ リ. ウ ム と 不 溶 性 の 錯 化 合物 を形 成 し て,. electron. dens. 浸漬時間. の 塊 と し て 表 わ れ る 事 が 解 る.即. electron. dens. 約1時. の 塊 り,又. 間. 24時 間 行. は 厚 い 壁 を 持 つring,又. 如 き 外 観 を 呈 し て い る(写. ち,. は そ の 集 合物 の. 真2)。. こ の 様 な 像 を 拡 大 し て 詳 細 に 観 察 す る と(写. 真3),.
(3) 超 生体染色顆粒の電子顕微鏡 的研究. 759. 之 等 の 色 素 錯 化 合 物 は 全 て 一 定 の 形 を 示 し て い るが,. 想 定 は 事 実 と全 く相 異 す るも の で あ る事 が 明 か に され. mitochondriaの. た.即. 内 部 構 造 は 色素 の侵 入 に よつ て全 く. 破 壊 さ れ て い る事 が 解 る.併. し一 部 の 染色 が 十 分 で な. い と 思 わ れ る も の に 於 て はcristaeの れ,又. 存在が認め ら. 明 らか に 二 重 膜 の 存 在 が 認 め られ,之. に 染 色 さ れ て い る も の がmitochondriaで 疑 う ベ く も な い(写. 真3,矢. (渡 辺 氏19)の 云 うa, 酸 球 の 好 酸 顆 粒,又 hondria以 en. Bご. 印)。. b,. c顆. 粒 の 何 れ も)及. gre. て い る(写. 真5).網. Bは. 50),. 60)と Bに. 共 に発 表 した 所 であ る よ つ て 凝 集 しSGFを. の 事 に 就 い て は 第3編61)に. の よ う にJanus. 網 赤血 球. 染 め な い て 小 胞 体 を染 め. green. 形 成 す る.こ. green. 赤 血 球 中 に 小胞 体 の 存在 す る事. は 先 に 妹 尾 等58), がJanus. 染 まつ. 認 め ら れ る も の も あ る.. に 於 て はmitochondricを. が,之. び好. 1個 の 細 胞 の 中 で も. 特 異 的 な 例 と し て はJanus. green. Bは. オ ス ミウ ム 酸 に よ つ て酸. 化 す る と再 び 元 の 青 緑 色 に 返 え る し,そ. の作用は沃化. に 認 め ら れ る.. 好 中球 の好 中顆 粒. る. 然 し 細 胞 に よ つ て は 全 くmitochondriaの. 不 染 性 のmitochondriaの. green. 水 銀 カ リ ウ ム と錯 化 合 物 を 作 つ た 色 素 の 場 合 に も 同 様. の ま まの形 て認 め られ. 真4),. な つ たJanus. 還 元 され て無 色 に. あ る事 は. 淋 巴 球 そ の 他 の 小 胞 体 等, mitoc. て い な い も の も あ り(写. 述 の よ う に ま ず 第1に. 等 の色素. 外 の 顆 粒 又 は 構 造 物 は 何 れ もJanus 染 め られ て お ら ず,そ. ち,上. 述 ベ るが こ. Bがmitochondriaを. 染め. 従 つ て 若 しJanus. green. BがLazarrow. and. Cooperstinの. 云 う よ う に 細 胞 内 に 一 様 に 入 つ てmi. tochondria以. 外 の所 で は還 元 型 に な つ て い る とすれ. ば 之 に オ ス ミ ウム 酸 を 作 用 させ た場 合 に は 細胞 質 全 体 が 緑 色 に な つ て 然 るベ き で あ る.然 Janus. green. ondriaに 第2の. Bの. しこ の 場 合 にも. 色 調 は 超 生 染 時 と 同 様 にmitoch. 限 局 し て 認 め られ る. 反 論 は,こ. の よ うな 細胞 を 固 定 し て電 子 顕 微. 鏡 で 見 た 場 合 に も 色 素 と の 沃 化 水 銀 カ リウ ム 錯 化 合 物 はmitochondriaに で あ る.著 green. Bを. green. Bの. 限 局 して 認 め られ る と云 うこ と. 者 の 方 法 は 沃 化 水 銀 カ リウ ム 液 でJanus 固 定 す る も の で,こ. の 反 応 はJanus. 分 子 中 のdimethylamino基. の 部 分 に起. る化 学反 応 で あ つ て 色 素 の 酸 化 及 び還 元反 応 とは 関係 が な い.従. つ て 緑 色 の 酸 化 型 の 色 素 も還 元 型 の無 色 の. ず 小 胞 体 を 染 め る と 云 う 事 は 著 者 の 観 察 し た 限 りて は 色 素 も同 じ よ うに 不 溶 の 沃 化 水 銀 カ リウ ム錯 化 合 物 を 他 の 細 胞 に は 認 め られ な い. 作 り得 る.又,無 総 括 並 び に考 案 以 上 の 観 察 結 果 か らJanus ndriaの. green. Bはmitocho. み を 撰 択 的 に 染 色 す る こ と は 明 か て あ る.こ. mitochondria以. 外 の 如 何 な る小 器 管 も 又 如 何 な る. liquid. phaseを. green. Bはmitochondriaを. うBensley62)の. も 染 め る も の で は な い.即. ち, Janus. Janus. 古 い説 は こ こ に は つ き り と した根 拠. green. 特異的. に 染 色 す る こ と に 就 い て は 幾 多 論 争 の ま と と な り学 説. 表 し た の はBensleyの Cooperstein57)で. 染 ま ら な く な る と い う事 か ら,. green. た て た.之. green Janus. green. 染 色 は, mitochondriaの. Bはmitocllondriaの. 色 し,他. and. 彼 等 は 青 酸 を 作 用 きせ て 細 胞 の 呼. 機 能 に 関 係 し て お り,瀰. ば,之. green. 無 色還 元 型 の も の. 胞 質 中 のmitochondria以. 外 の 所 にあれ. は オ ス ミ ウ ム 酸 で 着 色 し,且. 電子 顕 微 鏡 下 に認. め られ る 筈 で あ る. and. CooPerstein57)の. 説は机上. の 空 論 で 全 く 事 実 に 反 す る も の で あ る と 云 え る. 然 ら ば 何 故 に こ の よ う にmitochondriaの sgreen. Bが. は 現 在 の 所 で は 不 明 で あ るが,お riaの. み に. 親 和 性 を も つ て 集 ま る か と い う事. 構 成 々 分 の1ipidが. そ ら くmitochond. こ の 色素 と特 異 的 な親 和性. Bに. を 持 つ て い る も の と 考 え られ る.超. 生 染 され た 細 胞 を. 塗 抹 乾 燥 後 有 機 溶 媒 に よつ て 処 理 す ると色 素 が 容 易 に 溶 出 さ れ る事 は 色 素 とmitochondriaの. Bで よ 酸化. 蔓 性 に 細 胞 内 に 入 つ たJanus 部 分 で は酸 化 され て 発. の部 分 で は還 元 され て 色 を失 う とい う仮 説 を は 現在 一 般 に 信 用 され 定 説 化 して い るよ う. で あ る(Brachet68))。. Bの. のJanus. 近 そ の 代 表 的 な 見 解 を発. 弟 子 で あ るLazarow. 吸 を 止 め る とmitochondriaがJanus. るmitnchondriaの. 少 し で も(そ. Janu. Bがmitocllondriaを. の 問 題 点 と さ れ て 来 た が,最. の よ うな所 見 か らし て. 従 つ てLazarow 特 異 的 に 染 色 す る と云. を 与 え ら れ た こ と に な る. 又.. 酸 化 す れ ば 濃 緑 色 に な る.こ. で も)細. の 色 素 は 骨 髄 で 著 者 が 観 察 し た 細 胞 に 関 す る 限 りで は. 色 の 錯 化 合 物 も 之 を オ ス ミウ ム酸 で. 然 し 著 者 の 実 験 で こ の よ うな. 成 分 との 間. に 特 別 な電 気 的 結 合は 起 つ て お らない 事 を 示 し て お り,唯. 単 にlipidの. 中 に 溶 け て い る状 態 で 存 在 し て. い る事 を 示 し て い る.一 green. Bも. 方,又. 注 意 す ベ き 事 はJanus. 全 て の 細 胞 のmitochondriaを. も の で は な い と い う事 で あ る.例 cllondria,網 染 色 さ れ ず,特. 染 め る. え ば 赤 芽 球 のmito. 赤 血 球 のmitochondriaは. 之によつて. に 網 赤 血 球 に 於 て は小 胞 体 が 染 色 され.
(4) 760. 中. 本. て い る.こ. の よ うな現 象 は 他 の 細胞 で は み られ な い 所. で あ る.妹. 尾60)に. よれ ば 赤 血 球 及 び 網 赤 血 球 で は. mitochondriaはHemoglobinのHemを. 合成 す. 孝. 3.. Janus. green. Bはmitochondriaを. 特 異的. に 染め るが 有 核 細 胞 の 他 のorganellaeを. 染 め るこ. と は な い.併 し全 て のmitochondriaは. る よ う に 特 殊 の 分 化 を 遂 げ て お り,又 小 胞 体 もglobin. 染 め 出 され るとは 限 らずJanus. と い う特 殊 な蛋 白 を作 るよ うに 分 化 して い る もの と考. な いmitochondriaも. え ら れ る.従. 4.. つ て こ の よ うな場 合 之 等 小 器 管 の 構成 要. 之によ つて. green. Bに. 染 まら. 存 在 す る.. 網 赤 血 球 はmitochondriaを. 持 つが 之 は. 素 が 変 化 し て い る こ と は 大 い に 考 え ら れ る 所 で あ り,. Janus. 赤 芽 球 以 外 の 細 胞 に於 て も こ の よ うな こ とは あ り得 る. され る.こ の よ うな 現 象 は 著 者 の 観 察 した 他 の 骨髄 の. 筈 で あ る.一. 有 核 細 胞 で は 認 め られ な い.. 般 に 非 常 に 未 分 化 な 幼 弱 な 細 胞,例. えば. 腫 瘍 細 胞 の 如 き は 非 常 に よ くmitochondriaが る よ う で あ る.即 driaを. ち, Janus. green. 特 異 的 に 染 め る が,そ. 染ま. Bはmitohon. Bで. Janus. 染 ま らず,こ. green. Bに. の 場 合 小 胞 体 が染 色. よ るmitochondriaの. 色 は 酸 化 現 象 に よ る もの で な く,恐. の 全 て を染 め るも の で. は な い とい う事 を示 す もの で あ る。 結. 5.. green. driaの. 特 異 的 な1ipidに. 染. ら くmitochon. 対 す る親 和 性 を有 す るた め. と考 え られ,不 染性mitochondria及. び 網赤 血 球 に. 於 け る小胞 体 の 染 色 は 之 等 細胞 小 器管 の構 成 々分 の 変. 語. 化 す るこ と に起 因す るも の で あ ると思 わ れ る. 1.. 著 者 は 沃 化 水 銀 カ リウ ム とオ ス ミ ウム 酸 との 混. 本 論 文 の要 旨 は第67回 岡 山医 学 会 総 会,第21回. 合 液 を用 い て 超 生 染 し た 細胞 の 中 の超 生 染 顆 粒 を細 胞 の 微 細 構 造 を 破 壊 す る こ と な く 固 定 し,之. を電 子顕 微. こ の 方 法 を 用 い て 骨 髄 細 胞 のJanus. 超 生 染 像 を 電 子 顕 微 鏡 下 に 観 察 し,一 酸 に よ るJanus. green. Bの. reen. Bが. green. B. 擱 筆 す るに臨 み,終 始 御 懇 篤 な る御 指 導 並 び に御 校. 方又 オスミウム. 閲 を賜 わ りた る恩 師 妹 尾 教授 に 深 甚 の 謝 意 を 表 し ま. 酸 化現 象 を利 用 して光. す.併 せ て 不 断 の 御 教 示 を忝 うせ し本 病 理 学 教 室 小 田. 学 顕 微 鏡 的 に 超 生 染 細 胞 を 観 察 し,之 果 か らJanusg. アヂ ア血 液 学 会 総 会 並 び に 第47. 回 日本 病 理 学 会 総 会 に於 て発 表 した.. 鏡 下 に 観 察 す る こ と に 成 功 し た. 2.. 血 液 学 会 総 会,第1回. 日本. 等両者の観察結. 御 援 助 を戴 いた 本 学 電 子 顕 微 鏡 室 深 田,林 両 技 師 に 感. 特 異 的 にmitochondria. を 染 め る 事:を明 らか に しLazarow. and. 助 教 授 並 び に教 室 員 各 位 に深 謝 し,又 御 厚 意 あ ふ れ る. Cooperstein. 謝 の意 を呈 し ます.. の 説 を 否 定 し た.. 文 1). 清 野 謙 次:超 南 江 堂,東. 2). Jena. 6). Gustav. Ficher,. Karminspeicherung,. K. et al: Acta. S.: Die. (Kyoto),. Schol.. Med.. Univ.. 杉 山 繁 輝:血. 液 組 織 の 新 研 究 法 と そ の 方 法,南. 江. 液 学 の 基 礎,上. 巻,丸. 善,東. 冊),. P.. 28, 687, 1957.. 9). 血 会 誌,. 口 基 光:日. 105,. Seki,. M.:. Z.. 14). 赤 崎 兼 義:血. 1923.. 林 書 院,東. 剖 学 双 書 第1. Zellforsch, 液 学. 19,. 京, 238,. 1951. 266,. 1935.. 討 議 会 報 告,第7輯,. 121,. 15) Sabin,. E. R.:. 13,. 69,. 1705,. Bull.. Jons.. Hopk.. Hosp, 34. 277, 1923. 16) Cunninghum,. R. S., u. Tokino,. E. H.: Folia. 42, 257, 1930.. 17) Michaelis,. L.: Amer. rev. tbc, 17, 204, 1930.. 18) Michaelis.. L.:. A. f. Mikroskop.. Anat,. 183,. 1956.. 55,. 558, 1899. Y.: J. electron. microscope.. nual ed.), 46, 1957.. 1956. 山 医 学 会 雑 誌,. 17,. 150〜160,杏. 13). 19) Watanbe.. 8) Seno, S. et al: du Sang,. 大 口基 光:岡. 織 検 査 法 と 物 理 化 学,(解. 京,. 1949.. 10). 関 正 次:組. Haemat,. 1952.. 妹 尾 左 知 丸,大. 12). 1939.. 20, 16, 1937.. 天 野 重 安:血. 微 会 誌,. 1954.. S. u. Amano,. von der Vitalfarbung. 京,. 平 川 広:日. 1914.. K., Sugiyama,. Kiyono,. 11). 江 堂,. Imp. kioto,. 堂,東 7). 1921.. 生 体 染 色 の 研 究,第2版,南. K.: Die Vitale. Kiyono, Lehre. 5). 京,. 1929.. 3) Kiyono, 4). 生 体 染 色 の 研 究 及 び 其 の 検 査 術 式,. 清 野 謙 次:超 東 京,. 献. 20). 天 野 重 安,他:日. 21). 渡 辺 陽 之 輔:同. 22). 中 村 雅 男:同. 血 会 誌, 誌, 誌,. 19, 20,. 19, 327,. 255,. 3, 1956.. 1957.. 1956.. 5 (an.
(5) 超生体 染色顆粒 の電 子顕 微鏡 的研究 23) 花 岡 正 男:細. 胞 化 学 シ ム ポ ジ ウ ム,. 5,. 71,. biochem.. 1957. 本 陣 良 平:同. 25). 田 代 裕,他:同. 26). 小 倉 光 夫,他・. 27). 妹 尾 左 知 丸,吉. 28) Dalton. Inst,. 誌,. 5,. 109,. 誌, 6,. 1957.. 89,. ・同 誌,. 6,. 109,. 沢 浩 洋:岡. experimental. 1957. 1957.. 山 医 学 会 雑 誌,印 刷 中.. Netherland,. A. A. &. Bloom.. of Histology. delphia.. 46). 佐 口 栄:医. 学 と 生 物 学,. 49) Gross.. 1955.. phila. 51) Parat.. of the. Society. NO. X. P.. 148-159. The. Cambridge. 34) Palade.. experimental. biology.. University. Press.. and. G. E.:. ibid. 1, 567, 1955.. 36) Karrer.. H. E.:. ibid. 2, 241, 1956.. 40) Claude.. 12,. 73,. 29,. 103,. 55). 田 上 清 貞:十. 全 会 推 誌,. 58). ibid 3, 249, 1957.. W. C.: J. biol.. 60) Seno.. 真3:. M. S. C. et al.:. た 好 中 球.細. Janus. green. る が,一 写. 真4:赤. 写. 真5:. chem.. chem.. 61). 183,. 223,. 1949.. &,. 165,. 1213,. J. biophys.. 1952.. 1930.. and. biochem,. Bで. densの. S.: J. histoc. 1, 234, 1953.. 本 孝 他:日. 血 会 誌,. 20,. 311,. T. et. al.:. Falia. Acta. Haemat.. Japan.. 21. (2). 中 本 孝:本. 文,第3編,本. R. R.:. 誌.. Trans.. chicago.. path.. Soc.. 8, 78, 1910.. 176, 259,. J. biophys.. Y.:. Academic. and 附. 図. 説. biochemical. Press. Cytology.. Inc. New York.. p. 58.. 1957.. 明 ス ミ ウ ム 酸 液 の 等 量 混 合 液 で 固 定(方. 法は本文参. 胞 質 は よ く 保 存 さ れ て い る事 が 解 る. 染 色 し 同 上 の 固 定 液 で 超 生 染 色 素 を 固 定 し た 好 中 球. 厚 い 壁 を 持 つ たho1e又. はring或. はmassと. mitochondria(M)は. し て 現 わ れ る.好. 中 顆 粒 及 び小 胞. は 明 ら か に 区 別 で き る.. green. Bで. 染 色 さ れ て い るmitochondriaを. 部 は 尚 判 つ き り と 二 重 膜 及 びcristaeを. 芽 球 のmitochondriaはJanus Janus. 1, 305, 1925.. Suppl. 351, 1958.. 髄 細 胞 を 染 色 し な い で 沃 化 水 銀 カ リ ウ ム 液 と2%オ 照)し. Janus. de la. neue Folge. 2, 270, 1958.. S.:. 63) Brachet.. 体(Er)と 写. 35,. S. &. Nakamoto.. Haematol.. ibid. 3, 851, 1957.. G. H. et al.: J. biol.. electron. Rendes. A. and Cooperctein.. 妹 尾 左 知 丸,中. 59) Seno.. 第1編. 真2:. 15,. M. A.:. Bd.. 1957.. 1948.. 写. Anat.. 11. 315, 1925.. 誌,. 57) Lazarrow.. biochem.. 123, 1950.. 43) Birbeck.. 19,. 1928.. F. A.: Am. J. path. 血 会 誌,. 62) Bensley.. 42) Schneider.. Comptes. 長 谷 川 実:同. A.: J. exp. Med. 80, 19, 19, 44.. 41) Hogeboom.. f. path.. d. Wiss. Biologie.. 横 田 政 信:日. 56) Epstein.. 37) Luse. S. A.: ibid. 2, 531, 1956. M. A.:. al.:. hem. & Cytochem.. 35) Palade.. H. et al.:. Mikro.. 54). Cytol. 1, 59, 1955.. 39) Epstein.. f. wiss.. Cytol. 4, 567, 1957.. J. bophyis.. 38) Ruska.. 1943.. 91, 7, 1902.. 53). 1957.. G. E.:. 551,. Archiv.. Beitrag. de Biologie.. 52) Mc Junkin.. Felix. M. D.: Symposium for. 1918.. p. 485, Berlin.. M. et. Societ6. F. S.. Int. Rev. of. Cytol. 5. 455. A. J. and. 4,. T.: Methodik. I. Morphologie.. 1956. 33) Dalton.. 925,. Zeitschr.. W.: Ziegler. 50) Peterfi.. 1957.. 32) Sjostrand.. 37,. 51. 528. 1911.. W.: a textbook. 7th ed. 1957. Saunders.. Univers. 1957.. A.: Pflugers E.:. for. 176. 1902.. publ.. V. et al: Exp. Cell, Res. 7, 415, 1954.. 31) Maximow.. 全 会 雑 誌,. on fine Struc. 16-30, 1956. P.Noordhoff. ltd. Groninger-The 30) Hanzon.. 塚 本 茂:十. 48) Golovine.. F. S.: Symposium. of cells.. 45). Society. no. 10. The. Cambridge.. 47) Gurwitsch.. 11, 439, 1950.. of the. biology.. ity press.. A. J. &. Kahlen. K.: J. Natl. Cancer.. 29) Sjostrand.. 写 真1:骨. Cytol. 2, 609, 1956.. 44) De Duve. C.: Symposia. 24). ture. 761. green. Bで. green. 染 色 し た 網 赤 血 球.凝. く 色 素 液 に よ る破 壊)の. Bで. 強 拡 大 す る と,そ 認 め る こ と が だ き る(矢. 印)。. 染 ま つ て い な い.. 集 し た 小 胞 体 がcristaeの. 周 囲 に 認 め られ る.. の 内 部 構 造 は 殆 ん ど 破 壊 され. 破 壊 し たmitochondria(恐. ら.
(6) 762. 中. Electronmicroscopic Part. 1.. Studies. A New Method Stained the Janus. 本. for. on. 孝. Supravitally-Stained. of Fixation. for Dyes of Supravitally. Electronmicroscope. Green. B Granules. Takashi. Granules. and by this. Observation. of. Methods.. NAKAMOTO. Department of Pathology Okayama University Medical School (Director: Prof. Satimaru Seno) The auther successfully fixed stained granules of the supravitally stained bone marrow cells by the use of mercuric potassium iodide solution for quantative determination of NH3. Insoluble complex of the dye can be produced by the reaction between dimethylamino rdaicals of the dye and mercuric potassium iodide. The fine structure of the protoplasma can be retained by using mercuric potassium iodide solution added an equal volume of 2% osmic acid solution (pH 7.4) for the fixation. Electronmicroscopic observation on the bone marrow cells stained supravitally with Janus green B and fixed by the solution just mentioned revealed that Janus green B granules appear as electron dense mass or rings having thick walls and it has been proved these granules are nothing but the mitochondria themselves, from the morphologic pictures of those less electron dense granules. The electron density of the granules should be given by mercury. As the reaction of the dye with mercuric potassium iodide should occur in both colored and non-colored leuco-Janus green as well, because the reaction has no relation with reduction or oxidation of the dye, then, the results, show that Janus green B stains mitochondria selectively, but on other elements of cytoplasma. Osmic acid is proven to have an ability to oxidize the leuco-Janus green B to a colored one in vitro, and the light microscopic observations of the cells treated with the fixatives just mentioned showed only the green mitochondria without any coloration of other cytoplasmic area. This again shows the Janus green enters into mitochondrira sele ctively. These observations refute the theory propored by Lazarow and Cooperstein in which they claim that the Janus green entors into the cytoplasma diffusely, but mitochondria only can be recognized as the stained granules by the oxydation of Janus green B. But, there are some of mitochondria remain without staining. Any other cytoplasmic elements are not stained by Janus green B as far as the cells the auther observed. As an exceptional case, in reticulocyte, Janus green stains endoplasmic reticulum but not the mitochondria, giving the picture of Substantia Granulo-Fiamentosa (SGF), themselves. This may mean the changes in chemical components of the organellae in reticulocytes as they are differentiated to synthesize haemoglobin..
(7) 超 生 体 染 色顆 粒 の電 子 顕 微 鏡 的 研 究. 第1編. 1. 2. 763.
(8) 764. 中. 本. 孝. 3. 4. 5.
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