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Title
Treponema denticola の表層タンパク間の発現調節機構
Author(s)
新居, 由紀; 柴山, 和子; 菊池, 有一郎; 新谷, 誠康;
石原, 和幸
Journal
歯科学報, 116(5): 387-387
URL
http://hdl.handle.net/10130/4108
Right
Description
３８７ 歯科学報 Vol．１１６，No．５（２０１６）
№９：実験的炎症性嚢胞のメカニズムの解明
中内彩乃１），井上 孝２），新谷誠康１）（東歯大・小児歯）１）（東歯大・臨検病理）２） 目的：マラッセ上皮遺残は，歯根形成期にヘルト ヴィッヒの上皮鞘が分断し，根尖部や根分岐部の歯 根膜内に残存したもので，歯根膜腔の恒常性維持に 関与すると言われている。この上皮は，通常細胞休 止期の状態にあるが，種々なる刺激により細胞増殖 を開始し，歯根嚢胞や歯原性腫瘍の起源となること も報告されている。しかし，そのメカニズムの詳細 は未だ不明な点が多い。本研究では，実験的に根分 岐部に感染状態を作り，マラッセ上皮遺残の増殖に 関する動態を免疫組織化学的に検討することを目的 とした。 方法：実験には，生後４～５週齢の SD 系雄性ラッ ト（体重１００－１５０g）を用いた。左右上顎第一臼歯 にラウンドバーを用いて咬合面から露髄させ，つい で２５G 注射針を使用して髄床底を穿孔させた。穿孔 部は開放し，処置１週，２週，３週後に屠殺し，約 ４μm のパラフィン切片を作製し，HE 染色を施し た。また，細胞増殖の指標として PCNA を，上皮 分化指標として CK１９および CK１３を用いて免疫組 織化学的に検索を行った。 結果：いずれの症例においても，穿孔部と付着上皮 との連続性は認められなかった。処置後１週齢で は，穿孔部周囲の組織に，好中球浸潤がみられ，穿 孔部に接するマラッセ上皮遺残の巨大化，穿孔部へ の伸展，象牙質に接触増殖する像が観察された。２ 週齢では，上皮様組織が穿孔部を取り囲む像が観察 された。３週齢では，上皮はさらに肥厚し，上皮直 下には，肉芽組織が観察されるようになった。免疫 組織化学染色の１週齢では，上皮様組織は PCNA に陽性を示したが，CK１９および CK１３には陰性で あった。２週齢および３週齢では，上皮基底細胞層 に１週齢に比べより多くの PCNA 陽性細胞が観察 された。CK１９は結合組織に接する基底細胞層様細 胞に陽性であり，CK１３はそれ以外の細胞に陽性で， ２週齢に比べ３週齢で顕著であった。また，すべて の週齢の上皮様組織の嚢胞腔側に接する細胞にも， PCNA 陽性細胞が観察された。 考察：今回の実験により，静止期にあるマラッセの 上皮遺残の増殖が炎症性刺激により惹起されること が示唆された。通常の分化勾配を持つ上皮組織であ れば，PCNA は基底細胞層に陽性であるが，今回 の実験では，PCNA 陽性細胞が裏層上皮の嚢胞腔 側にもみられた。このことは，基底細胞側と嚢胞腔 側の両方向から細胞増殖が生じており，嚢胞形成の 初期では，嚢胞腔側も基底と認識されていることが 示唆された。№１０：
Treponema denticola の表層タンパク間の発現調節機構
３） ３） ３） １） 新居由紀１），柴山和子２），菊池有一郎２），新谷誠康１），石原和幸２）（東歯大・小児歯） ２） ３） （東歯大・微生）（東歯大・口科研） 目的：Treponema denticola は，慢性歯周炎の病巣よ り高頻度で分離され，その発症と進行に重要な役 割を果たしている。本菌の表層には，major outer-sheath protein（Msp），prolyl-phenylaranine spe-cific protease（Dentilisin）が存在し，その病原性に 関与している。本研究では，２種の病原因子 Msp と Dentilisin 間の相互作用について解析を行った。方法：T. denticola ATCC
３５４０５株（野生株），Den-tilisin および Msp の欠損株 T. denticola K６， T. denti cola DMSP３を供試した。予備培養した T. denticola を TYGVS 培地に接種し，３７℃嫌気条件下で一週 間培養後，集菌した。得られた菌体 を phosphate buffered saline（PBS，pH７．４）に て２回 洗 浄 後， 超音波により破砕し，上清を得た。得られた画分 のタンパク質濃度は BCA 法にて測定した。Dentil-isin 活 性 の 測 定 は，N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide（SAAPNA）を 基 質 と し て，３０分３７ ℃ で反応を行った後，４１０nm の吸光度により測定し た。また，Msp については，３つの菌株から得ら れた画分を用いて，SDS-PAGE と，抗 T. denticola Msp 抗体を用いた Immnoblot により解析を行った。 結果および考察：Dentilisin 活性は，Msp の欠損に より活性が約２５％低下していた。SDS-PAGE では， 野生株で強く認められる５３kD の band が，Msp 欠 損株と Dentilisin 欠損株では明らかな band として は認められず，さらに Dentilisin 欠損株では，１３０ kD と１００kD の band が 増 加 し て い た。Immnoblot の結果，野生株，Dentilisin 欠 損 株 と も に５３kD の band が認められていたが，Dentilisin 欠損株では 明らかに Msp 量の減少が認められた。これらの結 果 は，Dentilisin の 欠 損 が Msp に，Msp の 欠 損 が dentilisin 活性に影響を与えており，２つのタンパ ク質発現の間に何らかの相互作用が存在することが 示唆された。 ― 43 ―
