RNA代謝に関与するタンパク質CDK12、Brr2およびeIF4A3を標的とした選択的阻害剤の発見

RNA代謝に関与するタンパク質CDK12、Brr2および

eIF4A3を標的とした選択的阻害剤の発見

著者

伊東 昌宏

学位授与機関

Tohoku University

学位授与番号

11301

URL

http://hdl.handle.net/10097/00129441

博士論文

RNA 代謝に関与するタンパク質 CDK12、Brr2

および eIF4A3 を標的とした選択的阻害剤の発見

令和二年度

伊東 昌宏

1 目 次 発 表 論 文 一 覧 3 第 一 章 緒 言 1 . 1 低 分 子 プ ロ ー ブ と タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン 4 1 . 2 .1 R N A 代 謝 5 1 . 2 .2 C D K 1 2 の 転 写 ・ プ ロ セ ッ シ ン グ に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 7 1 . 2 .3 B r r 2 の ス プ ラ イ シ ン グ に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 9 1 . 2 .4 e I F 4 A 3 の N M D に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 1 2 1 . 3 本 研 究 の 意 義 お よ び 得 ら れ た 成 果 の 概 要 1 4 1 . 4 参 考 文 献 1 5 第 二 章 選 択 的C D K 1 2 阻 害 剤 、 3 - ベ ン ジ ル - 1 - ( t r a n s - 4 - ( ( 5 - シ ア ノ ピ リ ジ ン - 2 - イ ル ) ア ミ ノ ) シ ク ロ ヘ キ シ ル) - 1 - ア リ ル ウ レ ア 誘 導 体 の 発 見 2 . 1 化 合 物 探 索 戦 略 、 化 合 物 発 見 ま で の 過 程 お よ び 生 物 活 性 評 価 2 6 2 . 2 評 価 化 合 物 の 合 成 5 5 2 . 3 結 論 5 9 2 . 4 実 験 の 部 6 0 2 . 5 参 考 文 献 9 8

2 第 三 章 選 択 的B r r 2 阻 害 剤 、 4 ,6 - ジ ヒ ド ロ ピ リ ド [ 4 , 3 - d ] ピ リ ミ ジ ン - 2 , 7 ( 1 H , 3 H ) - ジ オ ン 誘 導 体 お よ び ス ピ ロ[ イ ン ド ー ル - 3 ,2 ’ - ピ ロ リ ジ ン ] - 2 ( 1 H ) - オ ン 誘 導 体 の 発 見 3 . 1 化 合 物 探 索 戦 略 、 化 合 物 発 見 ま で の 過 程 お よ び 生 物 活 性 評 価 1 0 3 3 . 2 評 価 化 合 物 の 合 成 1 2 4 3 . 3 結 論 1 3 1 3 . 4 実 験 の 部 1 3 2 3 . 5 参 考 文 献 1 7 7 第 四 章 選 択 的 e I F 4 A 3 阻 害 剤 、 イ ン ド ー ル - 2 - カ ル ボ ン 酸 誘 導 体 お よ び 1 , 4 - ジ ア シ ル ピ ペ ラ ジ ン 誘 導 体 の 発 見 4 . 1 化 合 物 探 索 戦 略 、 化 合 物 発 見 ま で の 過 程 お よ び 生 物 活 性 評 価 1 8 1 4 . 2 評 価 化 合 物 の 合 成 2 0 6 4 . 3 結 論 2 1 4 4 . 4 実 験 の 部 2 1 6 4 . 5 参 考 文 献 2 5 2 第 五 章 総 括 2 5 7 略 号 一 覧 2 5 9 謝 辞 2 6 1

3 発 表 論 文 一 覧 M a s a h i r o I t o e t a l . , D i s c o v er y o f s e l e c t i v e AT P - co m p e t i t i v e eI F 4 A 3 i n h i b i t o r s , B i o o rg . M e d . C h e m . , 2 0 1 7 , 2 5 , 2 2 0 0 – 2 2 0 9 . C o p y r i g h t © 2 0 1 7 , E l s e v i e r L t d . M a s a h i r o I t o e t a l . , D i s c o v e r y o f n o v e l 1 , 4 - d i a cy l p i p e r az i n e s a s s e l e c t i v e an d c e l l - a c t i v e e I F 4 A3 i n h i b i t o r s , J. M e d . C h e m . , 2 0 1 7 , 6 0 , 3 3 3 5 – 3 3 5 1 . C o p y r i g h t © 2 0 1 7 , A m e r i c an C h e m i c a l S o c i e ty M i s a I w a t an i a n d M a s a h ir o I t o e t a l. , D i s c o v er y o f a l l o s t e r i c in h i b i to r s t a rg e t i n g th e s p l i c e o s o m a l R N A h e l i c a s e B r r 2 , J . M e d . C h e m . , 2 0 1 7 , 6 0 , 5 7 5 9 – 5 7 7 1 . C o p y r ig h t © 2 0 1 7 , A m e r i c an C h e m i c a l S o c i e t y M a s a h i r o I t o e t a l . , D i s c o v e r y o f s p i r o [ in d o l e - 3 , 2 ' - p y r r o l id i n ] - 2 ( 1 H) - o n e b a s e d i n h i b i t o r s t a rg e t i n g B r r 2 , a c o r e c o m p o n e n t o f t h e U 5 s n R N P, B io o rg . M e d . C h e m . , 2 0 1 7 , 2 5 , 4 7 5 3 – 4 7 6 7 . C o p y r i g h t © 2 0 1 7 , E l s e v i e r L t d . M a s a h i r o I t o e t a l . , D i s c o v e r y o f 3 b e n zy l 1 ( t r a n s 4 ( ( 5 cy a n o p y r i d i n 2 -y l) a m i n o ) c -y c lo h e x -y l ) - 1 - ar -y l u r e a d e r i v a t iv e s a s n o v e l an d s e l e c t i v e c-y c l i n - d e p e n d e n t k in a s e 1 2 ( C D K 1 2 ) in h i b i t o r s , J . M e d . C h e m . , 2 0 1 8 , 6 1 , 7 7 1 0 – 7 7 2 8 . C o p y r i g h t © 2 0 1 8 , A m e r i c an C h e m i c a l S o c i e t y 図 表 の 転 載 に 関 し て そ れ ぞ れ の 論 文 の 図 お よ び テ ー ブ ル は 、 対 応 す る 雑 誌 の ウ ェ ブ サ イ ト よ り 申 請 し 、 許 可 を 得 た 上 で 転 載 も し く は 改 変 し て 用 い た 。

4 第 一 章 緒 言 1 . 1 低 分 子 プ ロ ー ブ と タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン ( C l e g g e t a l . , 2 0 1 7 ; C o u s s e n s e t a l . , 2 0 1 7 ; H o e l d e r e t a l . , 2 0 1 2 ) は 、 標 的 タ ン パ ク 質 の 調 節 が 期 待 さ れ る 表 現 型 を 誘 起 す る か 否 か 、 言 い 換 え れ ば 標 的 タ ン パ ク 質 と 疾 患 と の 直 接 的 な 関 連 性 を 確 認 す る 創 薬 研 究 の 初 期 プ ロ セ ス で あ る ( F i g u r e 1 -1 ) 。 創 薬 標 的 と 疾 患 の 関 係 に つ い て 確 度 の 高 い 情 報 が 得 ら れ れ ば 、 さ ら な る 研 究 を 行 う 価 値 が あ る か よ り 正 確 に 判 断 で き る ( B u n n a g e , 2 0 11 ) 。 F i g u re 1 - 1 新 し い リ ー ド 化 合 物 お よ び 医 薬 品 候 補 化 合 物 を 見 出 す た め の プ ロ セ ス ( A ) 標 準 的 な タ ー ゲ ッ ト ・ ベ ー ス 創 薬 、( B ) プ ロ ー ブ ・ ベ ー ス 創 薬 ( G . D r e w e s a n d S . K n ap p , Tre n d s B i o t e ch n o l . 2 0 1 8 , 3 6 , 1 2 7 5 – 1 2 8 6 . の 図 を 参 考 に 作 図 し た 。 ) 一 般 的 に タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン は 、R N A 干 渉 に よ る ノ ッ ク ダ ウ ン や C R I S P R - C a s 9 に よ る ノ ッ ク ア ウ ト 、 標 的 タ ン パ ク 質 の 過 剰 発 現 、 ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス 、 あ る い は ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の 表 現 型 解 析 な ど を 用 い て 行 わ れ る ( B e n s o n e t a l ., 2 0 0 6 ; C o u s s e n s e t a l . , 2 0 1 7 ; H o e l d e r e t a l . , 2 0 1 2 ; We i s s e t a l . , 2 0 0 7 ) 。 こ れ ら の 分 子 生 物 学 的 な 手 法 に 加 え 、 標 的 タ ン パ ク 質 を 選 択 的 に 阻 害 す る 低 分 子 化 合 物 （ 低 分 子 プ ロ ー ブ ） を 使 っ た 検 証 も 非 常 に 強 力 な 手 法 で あ る ( F i g u r e 1 - 2 ) ( B u n n ag e e t a l . , 2 0 1 3 ; D r e w e s e t a l . , 2 0 1 8 , G a r b a c c i o e t a l . , 2 0 1 6 , C l e g g e t a l . , 2 0 1 7 ; S c h r e i b e r, 2 0 1 5 ) 。 低 分 子 プ ロ ー ブ は 分 子 生 物 学 的 手 法 の 様 に 標 的 タ ン パ ク 質 の 産 生 を 抑 制 せ ず 、 タ ン パ ク 質 の 特 定 の 機 能 ( 例 : 酵 素 機 能 ) を 可 逆 的 に 阻 害 で き る 。 低 分 子 に よ る 標 的 タ ン パ ク 質 の 阻 害 作 用 は 速 く 、 作 用 が 生 じ る ま で に 時 間 を 要 す る R N A 干 渉 に よ る ノ ッ ク ダ ウ ン の 様 に 二 次 的 な 作 用 を 観 測 す る 懸 念 が 少 な い ( We i s s e t a l . , 2 0 0 7 ) 。 一 つ の 化 合 物 で 、 さ ま ざ ま な 細 胞 や 動 物 モ デ ル に ま た が っ て 、 標 的 タ ン パ ク 質 の 生 物 学 的 な 役 割 や 疾 患 と の 関 連 を 調 査 す る こ と も 可 能 で あ る 。

5 F i g u re 1 - 2 低 分 子 プ ロ ー ブ に よ る タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン 低 分 子 プ ロ ー ブ に よ る タ ー ゲ ッ ト バ リ デ ー シ ョ ン の 成 功 は 、 そ れ と 同 時 に 薬 の 種 と な る リ ー ド 化 合 物 を 手 に 入 れ た こ と を 意 味 す る ( F i g u r e 1 - 1 , D r e w e s e t a l . , 2 0 1 8 ) 。 し た が っ て 、 低 分 子 プ ロ ー ブ の 創 出 は 、 生 命 科 学 研 究 か ら 創 薬 研 究 へ と 橋 渡 し を す る た め の 重 要 な プ ロ セ ス と 捉 え る こ と が で き る 。 1 . 2 .1 R N A 代 謝 R N A 代 謝 と は 転 写 、 m R N A プ ロ セ ッ シ ン グ ( m R N A の 5 ’ キ ャ ッ ピ ン グ 、 R N A ス プ ラ イ シ ン グ 、3 ’ ポ リ ア デ ニ ル 化 ) 、 輸 送 / 局 在 化 、 翻 訳 お よ び 分 解 / 品 質 管 理 ま で 、 す な わ ち m R N A の 合 成 か ら 分 解 ま で の 全 て の プ ロ セ ス を 意 味 す る ( F i g u r e 1 - 3 ) 。 転 写 直 後 の m R N A 前 駆 体 は 、 そ の ま ま タ ン パ ク 質 翻 訳 に 用 い ら れ る 訳 で は な く 、 プ ロ セ シ ン グ に よ る 成 熟 を 必 要 と す る 。 つ ま り 、 タ ン パ ク 質 発 現 の 制 御 に お い て 、R N A 転 写 後 の R N A 代 謝 プ ロ セ ス も ま た 重 要 な ス テ ッ プ で あ る 。 こ れ を 裏 付 け る よ う に 最 近 の 研 究 は 、 転 写 後 プ ロ セ ス に 影 響 を 及 ぼ す 遺 伝 的 変 異 が 、 転 写 自 体 に 影 響 す る 変 異 と 同 程 度 に 、 表 現 型 の 多 様 性 に 寄 与 し て い る こ と を 示 し て い る ( M a n n i n g e t a l . , 2 0 1 7 ) 。 転 写 後 の R N A 代 謝 プ ロ セ ス の 異 常 は 、 癌 や 様 々 な 疾 患 の 原 因 と な る ( A g r a w a l e t a l ., 2 0 1 8 ; B a t e s e t a l . , 2 0 1 7 ; B o v a i r d e t a l . , 2 0 1 8 ; C h i n e t a l . , 2 0 1 7 ; C o o p e r e t a l ., 2 0 0 9 ; C u r i n h a e t a l. , 2 0 1 4 ; H o l l er e r e t a l. , 2 0 1 4 ; L a ff l e u r e t a l ., 2 0 1 9 ; M ih a i l o v i c e t a l . , 2 0 1 7 ; U r b a n s k i e t a l ., 2 0 1 8 ) 、 し た が っ て 、 転 写 後 プ ロ セ ス を 調 節 す る 低 分 子 化 合 物 の 探 索 研 究 や 創 薬 研 究 へ の 展 開 は 重 要 と 考 え ら れ る が 、 こ の 研 究 領 域 は ま だ 未 成 熟 な 段 階 に あ る ( D e s t e r r o e t a l . , 2 0 2 0 ) 。

6 筆 者 は 、R N A 代 謝 に 関 す る 生 命 科 学 の よ り 深 い 理 解 に 貢 献 し 、 ま た 選 択 し た 標 的 タ ン パ ク 質 の 創 薬 タ ー ゲ ッ ト と し て の 可 能 性 を 検 証 す る た め に 、R N A 代 謝 、 特 に 転 写 後 の R N A 代 謝 プ ロ セ ス に 関 与 す る タ ン パ ク 質 に 作 用 す る 低 分 子 化 合 物 の 探 索 に 取 り 組 ん だ 。 以 下 、 筆 者 が 注 目 し た ３ 種 の タ ン パ ク 質 C y c l i n - d e p en d e n t k i n a s e 1 2 ( C D K 1 2 ) 、 B a d r e s p o n s e t o r e f r i g e r a t i o n 2 ( B r r 2 ) 、 E u k a r y o t i c i n i t i a t i o n f a c t o r 4 A3 ( eI F 4 A 3 ) が 関 与 す る R N A 代 謝 の プ ロ セ ス に 関 し て 紹 介 す る 。 C D K 1 2 は 主 に 転 写 、 ス プ ラ イ シ ン グ お よ び そ の 他 の R N A プ ロ セ ッ シ ン グ に 、 B r r 2 は ス プ ラ イ シ ン グ に 、 e I F 4 A 3 は R N A プ ロ セ ッ シ ン グ や m R N A の 重 要 な 品 質 管 理 機 構 の 一 つ で あ る ナ ン セ ン ス 変 異 を 持 っ た R N A の 選 択 的 分 解 機 構 ( N M D ) に 関 与 す る タ ン パ ク 質 で あ る 。 F i g u re 1 - 3 R N A 代 謝 の 概 要 と 各 タ ー ゲ ッ ト が 関 与 す る プ ロ セ ス ( 細 胞 の 分 子 生 物 学 第 六 版 p 3 1 5 を 参 考 に 作 図 し た )

7 1 . 2 .2 C D K 1 2 の 転 写 ・ プ ロ セ ッ シ ン グ に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 真 核 生 物 で は 、 三 種 類 の 異 な るR N A ポ リ メ ラ ー ゼ ( I - I I I ) が 存 在 し 、 そ の う ち R N A ポ リ メ ラ ー ゼI I ( P o l I I ) が 、 タ ン パ ク 質 を コ ー ド す る 遺 伝 子 の メ ッ セ ン ジ ャ ー R N A ( m R N A ) へ の 転 写 を 行 う ( F i g u r e 1 - 4 ) 。 P o l I I の 最 大 サ ブ ユ ニ ッ ト の カ ル ボ キ シ 末 端 に は 、 C 末 端 ド メ イ ン ( C T D ) と 呼 ば れ る P o l I I 特 徴 的 な 尾 の よ う な 構 造 を し た 繰 り 返 し 配 列Y S P T S P S ( チ ロ シ ン ‐ セ リ ン ‐ プ ロ リ ン ‐ ト レ オ ニ ン ‐ セ リ ン ‐ プ ロ リ ン ‐ セ リ ン) が 存 在 す る 。 P o l I I の C 末 端 ド メ イ ン は 、 転 写 の 各 段 階 ( 開 始 、 伸 張 、 終 結 ) で ダ イ ナ ミ ッ ク な リ ン 酸 化 を 受 け る ( F i g u r e 1 - 4 ) 。 こ の C 末 端 ド メ イ ン の リ ン 酸 化 状 態 の 変 化 が 、P o l I I を 含 む 転 写 複 合 体 の コ ン フ ォ メ ー シ ョ ン や P o l I I と 他 の タ ン パ ク 質 や 酵 素 と の 間 の 相 互 作 用 に 影 響 を 与 え 、 転 写 の 制 御 に お い て 重 要 な 役 割 を 担 っ て い る ( H ar l e n e t a l . , 2 0 1 7 ) 。 リ ン 酸 化 さ れ たC 末 端 ド メ イ ン は R N A プ ロ セ シ ン グ 因 子 を リ ク ル ー ト し 、 そ れ ら が 結 合 す る た め の 足 場 と し て も 機 能 す る ( F i g u r e 1 - 4 ) 。 こ れ に よ り 、 P o l I I か ら 合 成 さ れ て 出 て き た R N A は 速 や か に プ ロ セ ッ シ ン グ を 施 さ れ る 。 つ ま り 、 P o l I I の リ ン 酸 化 C 末 端 ド メ イ ン は 、 転 写 の 制 御 だ け で な く 転 写 と R N A プ ロ セ シ ン グ を 連 携 さ せ る 上 で も 重 要 な 働 き を し て い る 。 F ig u re 1 - 4 ( A ) R N A ポ リ メ ラ ー ゼ I I C 末 端 ( C T D ) の リ ン 酸 化 に よ る 転 写 調 節 ( 細 胞 の 分 子 生 物 学 第 六 版 , p 3 1 7 の 図 を 参 考 に 作 図 し た )

8 C 末 端 ド メ イ ン の リ ン 酸 化 は チ ロ シ ン や ト レ オ ニ ン 残 基 に 対 し て も 起 こ り 得 る が ( H e id e m a n n e t a l . , 2 0 1 3 ) 、 2 番 目 の セ リ ン ( S e r 2 ) と 5 番 目 の セ リ ン ( S e r 5 ) に 対 す る リ ン 酸 化 が 他 の サ イ ト の リ ン 酸 化 と 比 較 し て 頻 度 が 高 い こ と が 知 ら れ て い る ( S c h ü l l e r e t a l . , 2 0 1 6 ) 。 一 般 的 に 、S e r 5 の リ ン 酸 化 は m R N A の 5 ’ キ ャ ッ ピ ン グ お よ び 転 写 の 開 始 、 S e r 2 の リ ン 酸 化 は 転 写 伸 張 、 転 写 終 了 お よ び3 ’ 末 端 プ ロ セ ッ シ ン グ の 調 節 に 寄 与 し て い る と 考 え ら れ て い る ( H ar l e n e t a l . , 2 0 1 7 ) 。 P o l I I の C 末 端 ド メ イ ン を リ ン 酸 化 す る キ ナ ー ゼ は 、 ま と め て C T D キ ナ ー ゼ と 呼 ば れ て お り 、S e r 5 お よ び S e r 2 の リ ン 酸 化 を 担 う C T D キ ナ ー ゼ と し て 転 写 制 御 に 関 わ る サ イ ク リ ン 依 存 キ ナ ー ゼ ( C D K ) 7 , 9 , 1 2 , お よ び 1 3 が 良 く 研 究 さ れ て い る ( J e r o n i m o e t a l ., 2 0 1 3 ; H a r l e n e t a l . , 2 0 1 7 ; G a l b r a i t h e t a l . , 2 0 1 0 ) 。 こ れ ら の C T D キ ナ ー ゼ は い ず れ も S e r 5 を リ ン 酸 化 す る と 報 告 さ れ て い る 、 一 方 で C D K 9 、 C D K 1 2 お よ び C D K 1 3 の み が S e r 2 の リ ン 酸 化 を 担 っ て い る ( K o h o u t e k e t a l . , 2 0 1 2 ; L i a n g e t a l . , 2 0 1 5 ) 。 C T D S e r 2 を リ ン 酸 化 す る キ ナ ー ゼ の う ち 、 特 に C D K 1 2 ( と そ の ホ モ ロ グ で あ る C D K 1 3 ) は 他 の C D K と 比 較 し て 非 常 に 大 き な タ ン パ ク 質 で あ り ( ヒ ト の C D K 1 2 お よ び C D K 1 3 が ~ 1 6 4 K D a な の に 対 し て 他 の C D K は 3 3 - 5 6 K D a ) ( D i x o n - C l a r k e e t a l ., 2 0 1 5 ; B ö s k e n e t a l. , 2 0 1 4 ; G r e i f en b e rg e t a l . , 2 0 1 6 ; B a u m l i e t a l ., 2 0 1 2 ; B a u m l i e t a l ., 2 0 0 8 ) 、 キ ナ ー ゼ ド メ イ ン に 加 え 、N 末 端 に ア ル ギ ニ ン - セ リ ン リ ッ チ ( R S ) ド メ イ ン を 持 つ ( K o e t a l . , 2 0 0 1 ; E v en e t a l . , 2 0 0 6 ; F u e t a l . , 1 9 9 5 ) 。 R S ド メ イ ン は p r e - m R N A ス プ ラ イ シ ン グ や R N A プ ロ セッシ ン グ に 関 与 す る タ ン パ ク 質 に 頻 繁 に 見 ら れ る 構 造 で あ り 、C D K 1 2 は こ の 構 造 的 特 徴 か ら 示 唆 さ れ る よ う に 、 ス プ ラ イ シ ン グ や 3 ’ - e n d R N A プ ロ セ ッ シ ン グ を 含 む 転 写 と プ ロ セ ッ シ ン グ の 連 携 に 寄 与 す る こ と が 明 ら か と な っ て い る ( B a r t k o w i a k e t a l ., 2 0 1 5 ; D a v id s o n e t a l ., 2 0 1 4 ; E i f l e r e t a l. , 2 0 1 5 ; K o h o u t ek e t a l . , 2 0 1 2 ) 。 さ ら に 、 最 近 の 報 告 に よ れ ば 、 C D K 1 2 は D N A 損 傷 応 答 経 路 に 関 わ る 遺 伝 子 の 発 現 に 関 与 し 、 ゲ ノ ム の 安 定 性 維 持 に 寄 与 し て い る ( B l a z e k e t a l . , 2 0 11 ; D u b b u r y e t a l . , 2 0 1 8 ; L i a n g e t a l ., 2 0 1 5 ; Ti e n e t a l . , 2 0 1 7 ) 。 様 々 な 癌 種 で 、C D K 1 2 の 機 能 に 影 響 を 与 え る 変 異 が 報 告 さ れ て お り 、 そ れ ら の C D K 1 2 変 異 は D N A 損 傷 剤 や プ ラ チ ナ 誘 導 体 、 ア ル キ ル 化 剤 、 D N A 修 復 阻 害 剤 ( PA R P 阻 害 剤 ) に 対 す る 腫 瘍 の 感 受 性 を 高 め る こ と が 知 ら れ て い る ( B a j r a m i e t a l . , 2 0 1 4 ; J o s h i e t a l ., 2 0 1 4 ; N a t r a j an e t a l. , 2 0 1 4 ) 。 こ れ ら の 事 実 は 、 C D K 1 2 が 臨 床 試 験 に お け る 癌 患 者 の 層 別 化 の た め の バ イ オ マ ー カ ー と し て 利 用 で き る だ け で な く 、C D K 1 2 の 阻 害 剤 が D N A 修 復 遺 伝 子 の 発 現 調 節 を 介 し て 、 抗 腫 瘍 作 用 を 示 す 新 た な 薬 剤 と な る 可 能 性 を 示 唆 し て い る ( C h an e t a l . , 2 0 11 , C h i l à e t a l . , 2 0 1 6 ; P a c u l o v á e t a l. , 2 0 1 7 ) 。

9 1 . 2 .3 B r r 2 の ス プ ラ イ シ ン グ に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 真 核 細 胞 に お い て 、 タ ン パ ク 質 を コ ー ド す る 転 写 産 物 は イ ン ト ロ ン を 含 ん だp r e - m R N A と し て 生 成 さ れ る 。 ス プ ラ イ シ ン グ はp r e - m R N A の イ ン ト ロ ン を 取 り 除 き 、 エ キ ソ ン 同 士 を 繋 げ 、 成 熟m R N A を 生 成 す る た め に 必 須 の プ ロ セ ス で あ る 。 ス プ ラ イ シ ン グ の プ ロ セ ス は 、 ス プ ラ イ ソ ソ ー ム と よ ば れ る 低 分 子 リ ボ ヌ ク レ オ タ ン パ ク 質 ( s n R N P ) 複 合 体 に よ っ て 触 媒 さ れ る 。 ス プ ラ イ ソ ソ ー ム は5 つ の 低 分 子 リ ボ ヌ ク レ オ タ ン パ ク 質 ( s n R N P ) - U 1 、 U 2 、 U 4 、 U 5 、 お よ びU 6 と 多 数 の 非 リ ボ ヌ ク レ オ タ ン パ ク 質 に よ っ て 構 成 さ れ る マ ル チ メ ガ ダ ル ト ン の 巨 大 な 分 子 マ シ ン で あ る ( S t a l e y e t a l. , 1 9 9 8 ; Wah l e t a l . , 2 0 0 9 ) 。 ス プ ラ イ ソ ソ ー ム に よ る ス プ ラ イ シ ン グ の 機 構 を 図 に 示 し た ( F i g u r e 1 - 5 ) 。 ま ず U 1 s n R N P が 、 p r e - m R N A の 5 ’ ス プ ラ イ ス 部 位 と 塩 基 対 を 形 成 し 、 分 岐 点 結 合 タ ン パ ク 質 ( B B P ) と U 2 補 因 子 ( U2 A F ) が 分 岐 点 を 識 別 し て 結 合 す る 。 U 2 s n R N P が B B P と U 2 A F に 代 わ っ て 分 岐 点 と 結 合 す る と 、U 4 / U6 s n R N P が U 5 s n R N P と と も に 複 合 体 に 加 わ り 、 ス プ ラ イ シ ン グ 部 位 が 一 箇 所 に 集 め ら れ る 。 次 に 、U 1 が m R N A の 5 ’ ス プ ラ イ ス 部 位 か ら 引 き 離 さ れ 、U 5 の 構 成 成 分 で あ る B r r 2 の ヘ リ カ ー ゼ 活 性 に よ りU 4 と U 6 が 引 き 離 さ れ 、U 4 が リ リ ー ス さ れ る 。 こ れ に よ り U 6 が5 ’ ス プ ラ イ ス 部 位 お よ び U 2 と 結 合 す る こ と が 可 能 に な る 。 こ の 際 にm R N A の 投 げ 輪 構 造 の 形 成 と5 ’ ス プ ラ イ ス 部 位 の 切 断 が 起 こ る 。 続 い て 、3 ’ ス プ ラ イ ス 部 位 の 切 断 と 投 げ 輪 構 造 と な っ た イ ン ト ロ ン 部 分 の リ リ ー ス 、 両 側 の エ キ ソ ン の 連 結 が 起 こ っ て ス プ ラ イ シ ン グ が 完 了 す る 。 F ig u re 1 - 5 ス プ ラ イ シ ン グ の 分 子 メ カ ニ ズ ム ( 細 胞 の 分 子 生 物 学 第 六 版 , p 3 2 0 の 図 を 参 考 に 作 図 し た )

10 B a d r e s p o n s e t o r ef r i g er a t i o n 2 ( B r r 2 , g e n e n am e : s n R N P 2 0 0 ) は 、 ス プ ラ イ ソ ソ ー ム の U5 の 重 要 な 構 成 要 素 で あ り 、 S k i - l i k e R N A ヘ リ カ ー ゼ フ ァ ミ リ ー に 属 す る タ ン パ ク 質 で あ る ( A b s m e i e r e t a l . , 2 0 1 6 ) 。 B r r 2 は 、 U 4 / U 6 s n R N P の R N A 二 本 鎖 を AT P 依 存 的 に 解 く こ と で 、U 4 と U 6 を 引 き 離 す ( F i g u r e 1 - 6 ) 。 こ の プ ロ セ ス は 前 述 の 通 り ス プ ラ イ ソ ソ ー ム の 活 性 化 に 必 須 で あ る 。B r r 2 は ス プ ラ イ シ ン グ の 触 媒 ス テ ッ プ の 後 も 強 固 に ス プ ラ イ ソ ソ ー ム に 結 合 し て お り 、 ス プ ラ イ シ ン グ プ ロ セ ス 全 体 を 通 し て 重 要 な 役 割 を 担 う こ と が 示 唆 さ れ て い る ( A b s m e i er e t a l. , 2 0 1 6 ) 。 F i g u re 1 - 6 B r r 2 に よ る U 4 / U 6 s n R N P の u n w i n d i n g お よ び U 2 / U 6 の 形 成 ( M a e d e r, C . a n d G u th r i e , C . , N a t . S t r u c t . M o l. B i o l . 2 0 0 8 , 1 5 , 4 2 6 – 4 2 8 . を 参 考 に 作 図 し た ) B r r 2 は 2 つ の マ ル チ ド メ イ ン ヘ リ カ ー ゼ カ セ ッ ト で 構 成 さ れ 、 N 末 端 側 の カ セ ッ ト の み が AT P a s e 活 性 と R N A を 解 く 活 性 を 有 し て い る 。 一 方 、 不 活 性 な C 末 端 側 の カ セ ッ ト は c o f a c t o r 様 の 役 割 を 担 っ て 、 カ セ ッ ト 間 の l o n g r a n g e c o m m u n i c a t io n に よ り N 末 端 側 カ セ ッ ト の 働 き を 助 け た り 、 タ ン パ ク 質 - タ ン パ ク 質 相 互 作 用 の 足 場 と し て 機 能 し た り す る と 考 え ら れ て い る ( S a n t o s e t a l . , 2 0 1 2 ) 。 B r r 2 の 変 異 は 、 常 染 色 体 優 性 の 網 膜 色 素 変 性 症 を 引 き 起 こ す ( L e d o u x e t a l ., 2 0 1 6 ; Z h a o e t a l . , 2 0 0 9 ) 。 生 物 学 的 な 重 要 性 が 高 い 選 択 的 な B r r 2 阻 害 剤 を 見 出 せ ば 、 ス プ ラ イ シ ン グ の メ カ ニ ズ ム 解 析 や 網 膜 色 素 変 性 症 の 原 因 究 明 に お い て 有 用 な 分 子 プ ロ ー ブ と な る 。 近 年 、 様 々 な 癌 種 に ま た が る ゲ ノ ム 研 究 に よ り 、 癌 細 胞 に お け る ス プ ラ イ シ ン グ 因 子 の 変 異 が 相 互 排 他 的 で あ る こ と が 明 ら か に さ れ ( D v in g e e t a l ., 2 0 1 6 ) 、 ス プ ラ イ ソ ソ ー ム に 何 ら

11 か の 変 異 を 有 す る 癌 細 胞 は 、 さ ら な る ス プ ラ イ シ ン グ 機 能 の 乱 れ を 許 容 で き な い 可 能 性 が 示 唆 さ れ て い る ( A g r a w a l e t a l. , 2 0 1 8 ; Dv i n g e e t a l ., 2 0 1 6 ) 。 言 い か え れ ば 、 ス プ ラ イ シ ン グ 異 常 を 持 っ た 癌 細 胞 は 、 他 の ス プ ラ シ ン グ 因 子 の 阻 害 剤 や モ ジ ュ レ ー タ ー に よ り 合 成 致 死 ( C h an e t a l . , 2 0 11 ) を 引 き 起 こ し 得 る 。 つ ま り 、 B r r 2 阻 害 剤 は ス プ ラ イ シ ン グ 変 異 を 有 す る 癌 種 に 対 し て 合 成 致 死 を 誘 導 す る 薬 剤 と な る 可 能 性 が あ る ( A g r a w a l e t a l. , 2 0 1 8 ; Dv i n g e e t a l ., 2 0 1 6 ) 。 ま た 、 最 近 、 造 血 幹 細 胞 の 移 植 に よ り ハ イ リ ス ク 急 性 骨 髄 性 白 血 病 ( A M L ) を 克 服 し た 患 者 の B 細 胞 か ら 、 A M L 細 胞 上 の 抗 原 に 特 異 的 に 結 合 す る 抗 体 が 見 出 さ れ た 。 こ の 抗 体 は 、 A M L 細 胞 表 面 の U 5 - B r r 2 複 合 体 を 抗 原 と し て 特 異 的 に 結 合 し 、 非 常 に 興 味 深 い こ と に 、 A M L 細 胞 の み を 選 択 的 に 殺 す こ と が i n v i t r o お よ び マ ウ ス を 用 い た i n v iv o の 実 験 で 明 ら か に さ れ た ( G i l l i s s e n e t a l . , 2 0 1 8 ) 。 通 常 の 細 胞 で は 、 U 5 - B r r 2 は ス プ ラ イ ソ ソ ー ム の 構 成 成 分 と し て 細 胞 内 に 発 現 す る が 、A M L 患 者 の 白 血 病 細 胞 で は 細 胞 膜 上 に 暴 露 し て 発 現 し て お り 、 抗 体 が 結 合 す る と 細 胞 膜 恒 常 性 が 破 壊 さ れ 細 胞 死 に 至 る 。 細 胞 死 を 誘 導 す る メ カ ニ ズ ム は 完 全 に は 解 明 さ れ て い な い が 、B r r 2 阻 害 剤 は 、 A M L 細 胞 表 面 上 に 露 出 し た U 5 - B r r 2 複 合 体 を タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ す る の に 利 用 で き る 可 能 性 が あ る 。 例 え ば 、B r r 2 阻 害 剤 と C D 3 抗 体 の B i s p e c i f i c s m a l l m o l e c u l e - a n t i b o d y c o n j u g a t e ( K i m e t a l. , 2 0 1 3 ) は 、 標 的 A M L 細 胞 の そ ば に 細 胞 障 害 性 T 細 胞 を 誘 導 し 、 そ の 細 胞 障 害 活 性 に よ っ て 癌 細 胞 を 効 果 的 に 除 去 す る 薬 剤 と な り 得 る 。

12 1 . 2 .4 e I F 4 A 3 の N M D に お け る 役 割 と 阻 害 剤 の 利 用 価 値 転 写 の 誤 り や 合 成 後 に 受 け る 損 傷 に よ っ て 変 異m R N A や 壊 れ た m R N A が 出 現 す る こ と が あ る 。 こ れ ら 欠 陥 の あ るm R N A は 、 細 胞 に 悪 影 響 を 与 え る 不 完 全 な タ ン パ ク 質 や 誤 っ た タ ン パ ク 質 を つ く る 危 険 性 が あ る 。 こ の よ う な 事 態 を 避 け る た め 、 欠 陥m R N A を 認 識 し て 分 解 す る m R N A の 品 質 管 理 機 構 が い く つ か 備 わ っ て い る ( S h o e m a k er e t a l . , 2 0 1 2 ) 。 最 も 良 く 研 究 さ れ て い るm R N A の 品 質 管 理 機 構 は 、 ナ ン セ ン ス 変 異 依 存 m R N A 分 解 ( n o n s en s e m e d i a t e d m R N A d e c a y ( N M D ) ) と 呼 ば れ る 。 本 来 の 終 止 コ ド ン よ り も 上 流 に ナ ン セ ン ス ( 終 止 ) コ ド ン ( U A A , U A G , U G A ) が 認 識 さ れ る と 、 こ の 機 構 が 働 き 、 変 異 m R N A は 速 や か に 分 解 さ れ る ( F i g u r e 1 - 7 ) 。 F i g u re 1 - 7 ナ ン セ ン ス 変 異 依 存 m R N A 分 解 ( n o n s e n s e m e d i a t ed m R N A d e c ay ( N M D ) ) ( 細 胞 の 分 子 生 物 学 第 六 版 , p 3 5 3 の 図 お よ び Ry u I . e t a l . C e l l R e p . 2 0 1 9 , 2 6 , 2 1 2 6 – 2 1 3 9 . e 9 を 参 考 に 作 図 し た 。)

13 m R N A の エ キ ソ ン 接 合 部 に は 、 エ キ ソ ン 接 合 部 複 合 体 ( E J C ) と 呼 ば れ る e I F 4 A 3 を 核 と し た タ ン パ ク 質 複 合 体 が 結 合 し て 、 ス プ ラ イ シ ン グ が 完 了 し た 目 印 と な る 。m R N A が 核 か ら 細 胞 質 へ 運 ば れ る と す ぐ に リ ボ ソ ー ム が 結 合 し 、m R N A が リ ボ ソ ー ム の 解 読 中 心 に 入 る と と も に E J C は 取 り 外 さ れ る 。 正 常 な m R N A で は 、 リ ボ ソ ー ム が 終 止 コ ド ン に 到 達 し て 停 止 し た と き に は 、 す べ て のE J C が 除 去 さ れ て い る 。 一 方 で 、 遺 伝 子 変 異 、 転 写 や ス プ ラ イ シ ン グ の 間 違 い に よ っ て 、m R N A の 途 中 に ナ ン セ ン ス コ ド ン が 存 在 す る と 、 そ れ よ り 下 流 の E J C が 除 去 さ れ ず に 残 る 。 す る とE J C に 結 合 し て い る U p f タ ン パ ク 質 の 介 在 に よ り 、 ナ ン セ ン ス コ ド ン が 認 識 さ れ て 、 こ の 変 異m R N A の 分 解 の 引 き 金 が 引 か れ る 。 E u k a r y o t i c in i t i a t i o n f a c t o r 4 A 3 ( e I F 4 A 3 ) は 、 A s p - G l u - A l a - A s p ( D E A D ) と い う 保 存 さ れ た モ チ ー フ を も つ D E A D - b o x R N A ヘ リ カ ー ゼ フ ァ ミ リ ー に 属 す る タ ン パ ク 質 で あ る ( J a n k o w s k y e t a l . , 2 0 11 ; J a r m o s k a i t e e t a l . , 2 0 1 4 ; L i n d e r e t a l . , 2 0 11 ; Ta n n e r e t a l . , 2 0 0 1 ) 。 D E A D - b o x タ ン パ ク 質 は 、 一 般 的 に 多 タ ン パ ク 複 合 体 の 一 部 と し て 機 能 し 、 R N A 代 謝 、 特 に R N A ス プ ラ イ シ ン グ 、 輸 送 、 翻 訳 、 お よ び 分 解 に 関 与 す る ( R o c a k e t a l . , 2 0 0 4 ) 。 D E A D - b o x タ ン パ ク 質 は 、 R N A に 依 存 し た AT P a s e 活 性 を 有 し て お り 、 そ の AT P a s e サ イ ク ル ( e . g . AT P の 結 合 、 加 水 分 解 、 生 成 物 リ リ ー ス ) は 、 D E A D - b o x タ ン パ ク 質 の R N A に 対 す る 親 和 性 を 変 化 さ せ る ( J a r m o s k a i t e e t a l . , 2 0 1 4 ) 。 こ の 親 和 性 変 化 は 、 短 鎖 の R N A 二 本 鎖 を 解 い た り 、 複 雑 で 構 造 化 さ れ た R N A の 再 配 列 を 促 進 し た り 、 R N A タ ン パ ク 複 合 体 の 再 構 築 を 行 っ た り 、R N A 上 に 長 寿 命 で 高 度 に 安 定 化 さ れ た 複 合 体 ( R N A ク ラ ン プ ) を 形 成 し た り す る う え で 有 効 に 働 く と 考 え ら れ て い る 。 e I F 4 A 3 は 、 類 縁 タ ン パ ク 質 の e I F 4 A 1 や e I F 4 A 2 と 異 な り 、 そ の 名 前 か ら 連 想 さ れ る 翻 訳 の 開 始 に は 関 与 し な い 。e I F 4 A3 は 、 成 熟 m R N A の エ キ ソ ン - エ キ ソ ン 接 合 部 に 結 合 す る タ ン パ ク 質 複 合 体 ( E J C ) の 中 核 を 担 う タ ン パ ク 質 で あ り ( F i g u r e 1 - 7 ) 、 AT P 依 存 的 な R N A ク ラ ン プ と し て 働 き 、 他 の E J C 構 成 要 素 M a g o h , Y 1 4 や M L N 5 1 と い っ た タ ン パ ク 質 を リ ク ル ー ト す る た め の 核 の 役 割 を 担 う こ と が 報 告 さ れ て い る ( L i n d e r e t a l ., 2 0 11 ; S a u l i è r e e t a l . , 2 0 1 2 ) 。 E J C は 、 m R N A の ス プ ラ イ シ ン グ 、 輸 送 、 翻 訳 、 お よ び ナ ン セ ン ス 変 異 依 存 m R N A 分 解 機 構 ( N M D ) ( B a k e r e t a l ., 2 0 0 4 ) に 関 与 す る こ と が 知 ら れ て い る ( F e r r a i u o lo e t a l . , 2 0 0 4 ; L e H i r e t a l ., 2 0 0 8 ; M i ch e l l e e t a l . , 2 0 1 2 ; P a l a c i o s e t a l. , 2 0 0 4 ; R e e d e t a l ., 2 0 0 2 ; S h i b u y a e t a l . , 2 0 0 4 ; Wa n g e t a l ., 2 0 1 4 ) 。 こ れ ら の E J C の 役 割 の 中 で も 、 最 も 良 く 研 究 さ れ て い る の は 先 に 述 べ た N M D で あ り 、 s i R N A を 用 い て E J C の コ ア タ ン パ ク 質 で あ る e I F 4 A 3 を ノ ッ ク ダ ウ ン す る と N M D が 起 き な く な る こ と が 報 告 さ れ て い る ( F e r r a i u o lo e t a l . , 2 0 0 4 ;

14 P a l a c i o s e t a l . , 2 0 0 4 ; S h ib u y a e t a l ., 2 0 0 4 ) 。 e I F 4 A3 を 直 接 的 か つ 選 択 的 に 阻 害 し て N M D を 抑 制 す る 化 合 物 は 、 こ れ ま で 報 告 さ れ て い な い が 、 い く つ か の N M D 阻 害 剤 は 報 告 さ れ て い る ( B h u v a n ag i r i e t a l . , 2 0 1 4 ; D a n g e t a l ., 2 0 0 9 ; D u r a n d e t a l . , 2 0 0 7 ; F e n g e t a l ., 2 0 1 5 ; H u g e t a l . , 2 0 1 6 ; K u r o s a k i e t a l . , 2 0 1 6 ) 。 こ れ ら の 化 合 物 は 直 接 的 な 標 的 が 不 明 瞭 で あ り 、 化 合 物 の 標 的 へ の 直 接 結 合 の 確 認 や 選 択 性 に 関 す る デ ー タ が 十 分 に 示 さ れ て い な い こ と が 指 摘 さ れ る ( 例 . Up f タ ン パ ク 質 と そ の 脱 リ ン 酸 化 を 担 う S M G 5 と の 相 互 作 用 を 阻 害 す る 化 合 物 、 E J C の コ ア タ ン パ ク 質 で あ る e I F 4 A 3 と 何 ら か の 相 互 作 用 を し 、AT P a s e 活 性 を 向 上 さ せ る 化 合 物 、 N M D に 必 要 な 因 子 の 転 写 を 抑 制 す る 化 合 物 な ど) 。 e I F 4 A3 を 選 択 的 に 阻 害 す る こ と に よ り N M D の 抑 制 作 用 を 示 す 化 合 物 を 見 出 す こ と が で き れ ば 、R N A 代 謝 に お け る E J C の 機 能 や N M D の プ ロ セ ス を 理 解 す る 上 で 強 力 な ツ ー ル と な る と 考 え ら れ る 。 い く つ か の 研 究 グ ル ー プ は 、N M D 阻 害 剤 が 遺 伝 性 疾 患 ( K e e l i n g e t a l . , 2 0 11 ; M a r t i n e t a l . , 2 0 1 4 ) や 癌 の 治 療 ( P a s t o r e t a l . , 2 0 1 0 ; P o p p e t a l . , 2 0 1 5 ) に 利 用で きる 可 能 性 を 示 唆 し て い る こ と か ら 、e I F 4 A 3 は 遺 伝 病 や 癌 の 創 薬 標 的 と し て も 魅 力 的 な タ ー ゲ ッ ト で あ る 。 1 . 3 本 研 究 の 意 義 お よ び 得 ら れ た 成 果 の 概 要 筆 者 は 、 生 物 学 的 な 研 究 価 値 が 極 め て 高 い R N A 代 謝 に 関 与 す る 三 つ の タ ー ゲ ッ ト に 対 す る 低 分 子 プ ロ ー ブ の 探 索 を 行 っ た 。 具 体 的 に は 、 ( 1 ) R N A ポ リ メ ラ ー ゼ I I の C 末 端 ド メ イ ン の リ ン 酸 化 酵 素 C D K 1 2 、 ( 2 ) ス プ ラ イ シ ン グ の 制 御 に お い て 重 要 な 役 割 を 担 っ て い る R N A ヘ リ カ ー ゼ B r r 2 お よ び ( 3 ) ナ ン セ ン ス 変 異 依 存 m R N A 分 解 機 構 ( N M D ) の 制 御 の 鍵 と な る R N A ヘ リ カ ー ゼ e I F 4 A 3 を 標 的 と し た 化 合 物 の 探 索 を 行 い 、 そ れ ぞ れ の タ ー ゲ ッ ト に 対 す る 選 択 的 阻 害 剤 を 見 出 し た 。 こ れ ら 化 合 物 は 、 そ れ ぞ れ の タ ン パ ク 質 の 機 能 解 析 に 加 え 、R N A 代 謝 の 要 と な る ス テ ッ プ 、 転 写 、R N A プ ロ セ ッ シ ン グ 、 N M D の 詳 細 な メ カ ニ ズ ム を 解 明 す る た め の 強 力 な 低 分 子 プ ロ ー ブ ( C e n c i c e t a l . , 2 0 2 0 ; M a z lo o m i a n e t a l ., 2 0 1 9 ) 、 も し く は さ ら に 優 れ た 低 分 子 プ ロ ー ブ 創 出 の た め の 基 盤 と な る 。 加 え て 、 い ず れ の 化 合 物 も 抗 癌 剤 や 遺 伝 病 の 治 療 薬 と し て の ポ テ ン シ ャ ル を 有 し て お り 、 創 薬 研 究 に お け る 優 れ た リ ー ド 化 合 物 と な る ( M i z o j i r i a n d C a r y e t a l ., 2 0 1 7 ; M i zo j i r i a n d N ak a t a e t a l ., 2 0 1 7 ; On o e t a l . , 2 0 1 9 ) 。 研 究 開 始 時 点 で は 、 選 択 的 な 阻 害 剤 が 全 く な く 、 創 薬 標 的 と し て の ポ テ ン シ ャ ル も 明 ら か で は な か っ た こ と か ら 、 本 研 究 に よ り こ の 分 野 の 進 展 に 貢 献 で き た も の と 考 え て い る 。

15 1 . 4 参 考 文 献 A b s m e i e r, E . ; S a n t o s , K . F. ; Wah l , M . C . F u n c t i o n s a n d r eg u l a t i o n o f t h e B r r 2 R N A h e l i c a s e d u r in g s p l i c i n g . C e l l C y c l e 2 0 1 6 , 1 5 , 3 3 6 2 – 3 3 7 7 . A g r a w a l , A . A . ; Yu , L . ; S m i th , P. G . ; B u o n a m i c i , S . Ta rg e t i n g s p l i c i n g ab n o r m a l i t i e s i n c an c e r. C u r r. O p i n . G e n e t . D e v. 2 0 1 8 , 4 8 , 6 7 – 7 4 . A l b er t B . , J o h n s o n A . , L e w i s J . , M o rg an D . , R a ff M . , R o b e r t s K . , Wa l t e r P. 細 胞 の 分 子 生 物 学 第 六 版 , N e w t o n p r e s s , 2 0 1 7 , 監 訳 : 青 山 聖 子 、 滋 賀 陽 子 、 田 口 マ ミ 子 、 滝 田 郁 子 、 中 塚 公 子 、 羽 田 裕 子 、 船 田 晶 子 、 宮 下 悦 子 、 斉 藤 英 裕. B a j r a m i , I . ; F r a n k u m , J . R . ; K o n d e , A . ; M i l l e r, R . E . ; R e h m a n , F. L . ; B r o u g h , R . ; C a m p b e l l , J . ; S i m s , D . ; R a f i q , R . ; H o o p e r, S . ; C h en , L . ; K o z a r e w a , I . ; A s s i o t i s , I . ; F e n w i c k , K . ; N a t r a j an , R . ; L o r d , C . J . ; A s h w o r t h , A. G e n o m e - w i d e p r o f i l i n g o f g e n e t i c s y n th e t i c l e t h a l i t y i d e n t if i e s C D K 1 2 a s a n o v e l d e t e r m i n an t o f PA R P 1 / 2 in h i b i t o r s e n s i t i v i t y. C a n c e r R e s . 2 0 1 4 , 7 4 , 2 8 7 – 2 9 7 . B a k e r, K . E . ; P a r k e r, R . N o n s e n s e - m e d i a t ed m R N A d e c ay : t e r m in a t i n g e r r o n eo u s g e n e e x p r e s s i o n . C u r r . O p i n . C e l l B i o l . 2 0 0 4 , 1 6 , 2 9 3 – 2 9 9 . B a r t k o w i ak , B . ; G r e en l e a f , A . L . E x p r e s s i o n , p u r i f i c a t i o n , an d id e n t i f i c a t io n o f a s s o c i a ted p r o t e i n s o f t h e f u l l - l en g th h C D K 1 2 / C y c l i n K c o m p l e x . J . B io l . C h e m . 2 0 1 5 , 2 9 0 , 1 7 8 6 – 1 7 9 5 . B a t e s , D . O . ; Mo r r i s , J . C . ; O l t e a n , S . ; Do n a l d s o n , L . F. P h a r m ac o l o g y o f m o d u l a t o r s o f a l t e r n a t i v e s p l i c i n g . P h a r m a co l . R e v. 2 0 1 7 , 6 9 , 6 3 – 7 9 . B a u m l i , S . ; Ho l e , A l i s o n J . ; Wa n g , L . - Z . ; N o b l e, M . E . M . ; E n d i c o t t , J a n e A . T h e C D K 9 t a i l d e t e r m in e s t h e r e a c t i o n p a t h w a y o f p o s i t i v e t r a n s c r ip t i o n e l o n g a t i o n f a c t o r b . S t r u c tu re 2 0 1 2 , 2 0 , 1 7 8 8 – 1 7 9 5 .

16 B a u m l i , S . ; L o l l i , G . ; L o w e , E . D . ; Tr o i a n i , S . ; R u s c o n i , L . ; B u l l o c k , A . N . ; D eb r e c z en i , J . É . ; K n a p p , S . ; J o h n s o n , L . N . T h e s t r u c t u r e o f P ‐ T E F b ( C D K 9 / c y c l i n T1 ) , i t s c o m p l ex w i t h f l a v o p i r i d o l a n d r e g u l a t i o n b y p h o s p h o r y l a t i o n . E M B O J . 2 0 0 8 , 2 7 , 1 9 0 7 – 1 9 1 8 . B e n s o n , J . D . ; C h en , Y. - N . P. ; C o r n e l l - K e n n o n , S . A . ; D o r s c h , M . ; K i m , S . ; L e s z c z y n i e c k a , M . ; S e l l e r s , W. R . ; L e n g a u e r, C . Va l i d a t i n g c an c e r d r u g t a rg e t s . N a t u re 2 0 0 6 , 4 4 1 , 4 5 1 – 4 5 6 . B h u v a n ag i r i , M . ; L e w i s , J . ; P u t zk e r, K . ; B e c k e r, J . P. ; L e i ch t , S . ; K r i j g s v e ld , J . ; B a t r a , R . ; Tu r n w a l d , B . ; J o v a n o v i c , B . ; H a u e r, C . ; S i e b e r, J . ; H en t z e , M . W. ; Ku l o z i k , A . E . 5 -a z -a cy t i d i n e in h i b i t s n o n s e n s e - m e d i -a t e d d e c -a y i n -a M Y C - d e p en d e n t f -a s h io n . E M B O M o l . M e d . 2 0 1 4 , 6 , 1 5 9 3 – 1 6 0 9 . B l a z e k , D . ; K o h o u t ek , J . ; B a r t h o l o m e e u s e n , K . ; J o h a n s e n , E . ; H u l i n k o v a , P. ; L u o , Z . ; C i m e r m an c i c , P. ; U l e , J . ; P e t e r l i n , B . M . T h e C y c l i n K / C d k 1 2 c o m p l e x m a in t a i n s g e n o m i c s t a b i l i t y v i a r e g u l a t i o n o f e x p r e s s i o n o f D N A d a m a g e r e s p o n s e g e n e s . G e n e. D e v. 2 0 11 , 2 5 , 2 1 5 8 – 2 1 7 2 . B ö s k e n , C . A . ; F a r n u n g , L . ; H i n t er m a i r, C . ; M e r z e l S ch a c h t e r, M . ; Vo g e l - B a c h m a y r, K . ; B l a z e k , D . ; A n an d , K . ; F i s h e r, R . P. ; E i c k , D . ; G e y e r, M . T h e s t r u c tu r e a n d s u b s t r a t e s p e c i f i c i t y o f h u m a n C d k 1 2 / C y c l i n K . N a t . C o m m u n . 2 0 1 4 , 5 , 3 5 0 5 . B o v a i r d , S . ; P a t e l , D . ; P a d i l l a , J . - C . A . ; L é c u y e r, E . B i o l o g i c a l f u n c t i o n s , r eg u l a t o r y m e ch a n i s m s , a n d d i s e a s e r e l ev a n c e o f R N A l o c a l i z a t i o n p a t h w ay s . F E B S L e t t . 2 0 1 8 , 5 9 2 , 2 9 4 8 – 2 9 7 2 . B u n n a g e , M . E . ; C h e k l e r, E . L . P. ; J o n e s , L . H . Ta rg e t v a l i d a t i o n u s i n g ch e m i c a l p r o b e s . N a t u re C h e m . B io l . 2 0 1 3 , 9 , 1 9 5 – 1 9 9 . B u n n a g e , M . E . G e t t i n g p h a r m a c eu t i c a l R & D b a c k o n t a rg e t . N a t . C h e m . B io l . 2 0 11 , 7 , 3 3 5 – 3 3 9 .

17 C e n c i c , R . ; N a i n e n i , S . K . ; P u g s l e y, L . ; S e n e c h a l , P. ; S a h n i , A . ; P e l l e t i e r e t , J . A C R I S P R -b a s ed s c r e en l i n k s a n i n h i -b i t o r o f n o n s e n s e - m e d i a t ed d e c a y t o e I F 4 A 3 t a rg e t e n g a g e m en t . A C S C h e m . B i o l . , 2 0 2 0 , 1 5 , 1 6 2 1 – 1 6 2 9 . C h a n , D . A . ; G i a c c i a , A . J . H a r n e s s i n g s y n t h e t i c l e t h a l in t e r a c t i o n s i n a n t i c a n c er d r u g d i s c o v e r y. N a t . R e v. D r u g D i s c o v. 2 0 11 , 1 0 , 3 5 1 – 3 6 4 . C h i l à , R . ; Gu ff a n t i , F. ; D a m i a, G . R o l e a n d th e r a p e u t i c p o t e n t i a l o f C D K 1 2 in h u m an c an c e r s . C a n c e r Trea t . R e v. 2 0 1 6 , 5 0 , 8 3 – 8 8 . C h i n , A . ; L éc u y e r, E . R N A l o c a l i z a t i o n : m a k i n g i t s w a y t o t h e c en t e r s t a g e . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a G e n . S u b j . 2 0 1 7 , 1 8 6 1 , 2 9 5 6 – 2 9 7 0 . C l e g g , M . A . ; To m k i n s o n , N . C . ; P r i n j h a, R . K . ; H u m p h r ey s , P. G . S m a l l m o l e cu l e s a n d t h e ir r o l e i n e ff e c t i v e p r e c l i n i c a l t a rg e t v a l i d a t i o n . F u t u re M e d . C h e m . 2 0 1 7 , 9 , 1 5 7 9 – 1 5 8 2 . C o o p e r, T. A . ; Wa n , L . ; D r ey f u s s , G . , R N A a n d d i s e a s e . C e l l 2 0 0 9 , 1 3 6 , 7 7 7 – 7 9 3 . C o u s s e n s , N . P. ; B r a i s t e d , J . C . ; P e r y e a , T. ; S i t t a m p a l am , G . S . ; S i m e o n o v, A . ; H a l l , M . D . S m a l l - m o l e c u l e s c r e en s : a g a t e w a y t o c an c e r t h e r ap e u t i c ag e n t s w i t h c a s e s t u d i e s o f f o o d a n d d r u g ad m i n i s t r a t io n – ap p r o v ed d r u g s . P h a r m a c o l . R e v. 2 0 1 7 , 6 9 , 4 7 9 – 4 9 6 . C u r i n h a , A . ; O l i v e i r a B r a z , S . ; P e r e i r a - C a s t r o , I . ; C r u z , A. ; M o r e i r a , A . I m p l i c a t i o n s o f p o l y a d e n y l a t i o n i n h e a l t h a n d d i s e a s e . N u c l e u s 2 0 1 4 , 5 , 5 0 8 – 5 1 9 . D a n g , Y. ; L o w, W. K . ; X u , J . ; G e h r i n g , N . H . ; D i e t z , H . C . ; R o m o , D . ; L i u , J . O . I n h i b i t i o n o f n o n s e n s e - m ed i a t e d m R N A d e c a y b y th e n a t u r a l p r o d u c t p a t e am i n e A t h r o u g h e u k a r y o t i c i n i t i a t i o n f a c t o r 4 A I I I . J . B i o l . C h e m . 2 0 0 9 , 2 8 4 , 2 3 6 1 3 – 2 3 6 2 1 . D a v id s o n , L . ; Mu n i z , L . ; We s t , S . , 3 ′ e n d f o r m a t i o n o f p r e - m R N A a n d p h o s p h o r y l a t i o n o f S e r 2 o n th e R N A p o l y m er a s e I I C T D a r e r e c i p r o c a l l y c o u p l e d i n h u m an c e l l s . G e n e . D ev. 2 0 1 4 , 2 8 , 3 4 2 – 3 5 6 .

18 D i x o n - C l a r k e, S . E . ; E l k in s , J . M . ; C h e n g , S . W. G . ; M o r i n , G . B . ; B u l l o c k , A . N . S t r u c tu r e s o f t h e C D K 1 2 / C y c K c o m p l e x w i t h A M P - P N P r e v e a l a f l e x i b l e C - t e r m i n a l k in a s e e x t e n s i o n i m p o r t a n t f o r AT P b i n d i n g . S c i . R e p . 2 0 1 5 , 5 , 1 7 1 2 2 . D e s t e r r o , J . ; B a k - G o r d o n , P. ; C a r m o - Fo n s e c a , M . Ta rg e t i n g m R N A p r o c e s s i n g a s a n a n t i c an c e r s t r a t eg y. N a t . R e v. D r u g D i s c o v. 2 0 2 0 , 1 9 , 11 2 – 1 2 9 . . D r e w e s , G . ; K n a p p , S . C h e m o p r o t e o m i c s an d c h em i c a l p r o b e s f o r t a rg e t d i s c o v e r y. Tre n d s B i o t e ch n o l . 2 0 1 8 , 3 6 , 1 2 7 5 – 1 2 8 6 . D u b b u r y, S . J . ; B o u t z , P. L . ; S h a r p , P. A . C D K 1 2 r eg u l a t e s D N A r ep a i r g e n e s b y s u p p r e s s i n g in t r o n i c p o l y ad e n y l a t i o n . N a t u re 2 0 1 8 , 5 6 4 , 1 4 1 – 1 4 5 . D u r a n d , S . ; C o u g o t , N . ; M a h u t e a u - B e t z e r, F. ; N g u y e n , C . - H . ; G r i e r s o n , D . S . ; B e r t r a n d , E . ; Ta z i , J . ; L e j eu n e , F. I n h i b i t i o n o f n o n s e n s e - m ed i a t e d m R N A d e c a y ( N M D ) b y a n e w c h e m i c a l m o l e c u l e r e v e a l s t h e d y n am i c o f N M D f a c t o r s i n P - b o d i e s . J. C e l l B i o l. 2 0 0 7 , 1 7 8 , 11 4 5 – 11 6 0 . D v in g e , H . ; K i m , E . ; A b d e l - Wah a b , O. ; B r ad l e y, R . K . R N A s p l i c i n g f a c t o r s a s o n c o p r o t e in s a n d tu m o u r s u p p r e s s o r s . N a t u re R e v i e w s C a n c e r 2 0 1 6 , 1 6 , 4 1 3 – 4 3 0 . E i f l e r, T. T. ; S h ao , W. ; B a r t h o l o m e eu s e n , K . ; F u j i n ag a , K . ; J ä g e r, S . ; J o h n s o n , J . R . ; L u o , Z . ; K r o g a n , N . J . ; P e t e r l i n , B . M . C y c l i n - d e p e n d e n t k i n a s e 1 2 in c r e a s e s 3 ′ e n d p r o c e s s i n g o f g r o w t h f a c t o r - i n d u c e d c - F O S t r a n s c r i p t s . M o l . C e l l B i o l . 2 0 1 5 , 3 5 , 4 6 8 – 4 7 8 . E v e n , Y. ; D u r i eu x , S . ; E s c a n d e , M . - L . ; L o za n o , J . C . ; P e a u c e l l i e r, G . ; We i l , D . ; G e n ev i è r e , A . - M . C D C 2 L 5 , a C d k - l i k e k in a s e w i t h R S d o m a in , in t e r a c t s w i t h t h e A S F / S F 2 - a s s o c i a t e d p r o t e in p 3 2 an d a ff e c t s s p l i c in g in v i v o . J. C e l l . B i o c h e m . 2 0 0 6 , 9 9 , 8 9 0 – 9 0 4 . F e n g , D . ; S u , R . - C . ; Z o u , L . ; Tr i g g s - R a i n e , B . ; H u a n g , S . ; X i e , J . I n c r e a s e o f a g r o u p o f P T C+ _{t r a n s c r i p t s b y cu r cu m i n t h r o u g h in h i b i t i o n o f th e N M D p a t h w a y. B B A - G en e R eg u l .} M e c h . 2 0 1 5 , 1 8 4 9 , 11 0 4 – 111 5 .

19 F e r r a iu o l o , M . A . ; L e e, C . - S . ; L e r, L . W. ; H s u , J . L . C o s t a - M a t t i o l i , M . ; L u o , M. - J . ; R e e d , R . ; S o n e n b e rg , N . A n u c l e ar t r a n s l a t i o n - l i k e f a c to r e I F 4 AI I I i s r e c r u i t ed t o t h e m R N A d u r i n g s p l i c i n g an d f u n c t i o n s i n n o n s e n s e - m e d i a t e d d e c a y. P ro c . N a t l . A ca d . S c i . U . S . A . 2 0 0 4 , 1 0 1 , 4 11 8 – 4 1 2 3 . F u , X . D . T h e s u p e r f a m i l y o f a rg i n i n e / s e r i n e - r i c h s p l i c i n g f a c t o r s . R N A 1 9 9 5 , 1 , 6 6 3 – 6 8 0 . G a l b r a i t h , M . D . ; D o n n e r, A . J . ; E s p i n o s a , J . M . C D K 8 . Tr a n s c r i p t i o n 2 0 1 0 , 1 , 4 – 1 2 . G a r b a c c i o , R . M . ; P a r m e e, E . R . T h e i m p a c t o f ch e m i c a l p r o b e s i n d r u g d i s c o v e r y : a p h a r m a ce u t i c a l i n d u s t r y p e r s p e c t iv e . C e l l C h e m . B io l . 2 0 1 6 , 2 3 , 1 0 – 1 7 . G i l l i s s e n , M . A . ; K ed d e , M . ; J o n g , G . d . ; M o i s e t , G . ; Ya s u d a , E . ; L e v i e, S . E . ; B a k k e r, A . Q . ; C l a a s s e n , Y. B . ; Wa g n e r, K . ; B ö h n e , M . ; H e n s b e rg e n , P. J . ; S p e i j e r, D . ; v a n H e ld e n , P. M . ; B e a u m o n t , T. ; S p i t s , H . ; H a z e n b e rg , M . D . A M L - s p e c i f i c cy t o to x i c a n t ib o d i e s i n p a t i en t s w i t h d u r a b l e g r af t - v er s u s - l e u k em i a r e s p o n s e s . B l o o d 2 0 1 8 , 1 3 1 , 1 3 1 – 1 4 3 . G r e i f en b e rg , A . K. ; H ö n ig , D . ; P i l a r o v a , K . ; D ü s t e r, R . ; B a r t h o lo m e e u s en , K . ; B ö s k en , C . A . ; A n a n d , K . ; B l a z e k , D . ; G e y e r, M . S t r u c t u r a l a n d f u n c t i o n a l an a l y s i s o f t h e C d k 1 3 / C y c l i n K co m p l e x . C e l l R e p o r t s 2 0 1 6 , 1 4 , 3 2 0 – 3 3 1 . H a r l en , K. M . ; C h u r ch m an , L . S . T h e co d e a n d b e y o n d : t r an s c r i p t i o n r e g u l a t i o n b y t h e R N A p o l y m e r a s e I I c a r b o x y - t e r m i n a l d o m a i n . N a t . R e v. M o l . C e l l B i o l. 2 0 1 7 , 1 8 , 2 6 3 – 2 7 3 . H e i d em a n n , M . ; H i n t e r m a i r, C . ; Vo ß , K . ; E i c k , D . D y n am i c p h o s p h o r y l a t i o n p a t t e r n s o f R N A p o l y m er a s e I I C T D d u r i n g t r an s c r i p t i o n . B B A - G e n e R e g u l . M e c h . 2 0 1 3 , 1 8 2 9 , 5 5 – 6 2 . H o e ld e r, S . ; C l a r k e , P. A . ; Wo r k m a n , P. D i s c o v e r y o f s m a l l m o l e cu l e c an c e r d r u g s : s u c c e s s e s , c h a l l e n g e s a n d o p p o r t u n i t i e s . M o l . O n co l . 2 0 1 2 , 6 , 1 5 5 – 1 7 6 . H o l l e r e r, I . ; G r u n d , K . ; He n t z e , M . W. ; Ku l o z i k , A . E . m R N A 3 ′ e n d p r o c e s s i n g : a t a l e o f t h e t a i l r e a c h e s th e c l i n i c . E M B O M o l . M e d . 2 0 1 4 , 6 , 1 6 – 2 6 .

20 H u g , N . ; L o n g m a n , D . ; C a c e r e s , J . F. M e c h an i s m an d r e g u l a t i o n o f t h e n o n s e n s e - m e d i a t e d d ec a y p a t h w a y. N u c l e i c A c i d s R e s . 2 0 1 6 , 4 4 , 1 4 8 3 – 1 4 9 5 . J a n k o w s k y, E . R N A H e l i c a s e s a t w o r k : b in d i n g a n d r e a r r a n g in g . Tre n d s B i o c h e m . S c i. 2 0 11 , 3 6 , 1 9 – 2 9 . J a r m o s k a i t e , I . ; R u s s e l l , R . R N A h e l i c a s e p r o t e i n s a s ch a p e r o n e s an d r e m o d e l e r s . A n n u . R e v. B i o ch e m . 2 0 1 4 , 8 3 , 6 9 7 – 7 2 5 . J e r o n i m o , C . ; B a t a i l l e , A . R . ; R o b e r t , F. T h e w r i t e r s , r ea d e r s , an d f u n c t i o n s o f t h e R N A p o l y m er a s e I I C - t e r m i n a l d o m a in c o d e . C h e m . R e v. 2 0 1 3 , 11 3 , 8 4 9 1 – 8 5 2 2 . J o s h i , P. M . ; S u t o r, S . L . ; H u n to o n , C . J . ; K a r n i t z , L . M. , O v ar i a n c a n c er - a s s o c i a t e d m u t a t i o n s d i s a b l e ca t a l y t i c ac t i v i t y o f C D K 1 2 , a k i n a s e t h a t p r o m o t e s h o m o lo g o u s r e co m b in a t i o n r ep a i r a n d r e s i s t a n c e t o c i s p l a t in a n d p o l y ( A D P - r ib o s e ) p o l y m e r a s e i n h i b i t o r s . J . B i o l. C h e m . 2 0 1 4 , 2 8 9 , 9 2 4 7 – 9 2 5 3 . K e e l i n g , K . M . ; B e d w e l l , D . M . S u p p r e s s i o n o f n o n s e n s e m u t a t i o n s a s a th e r a p eu t i c a p p r o a c h to t r e a t g e n e t i c d i s e a s e s . Wi l e y I n t e rd i s c i p . R e v. R N A 2 0 11 , 2 , 8 3 7 – 8 5 2 . K i m , C . H . ; Ax u p , J . Y. ; L a w s o n , B . R . ; Yu n , H . ; Ta r d i f , V. ; C h o i , S . H . ; Z h o u , Q . ; D u b r o v s k a , A . ; B i r o c , S . L . ; M a r s d en , R . ; P i n s t a ff , J . ; S m i d e r, V. V. ; S c h u l t z , P. G . B i s p e c i f i c s m a l l m o l e c u l e – a n t i b o d y c o n j u g a t e t a rg e t i n g p r o s t a t e c a n c e r. P ro c . N a t l . A c a d . S c i. U S A 2 0 1 3 , 11 0 , 1 7 7 9 6 – 1 7 8 0 1 . K o , T. K . ; K e l l y, E . ; P i n e s , J . C r k R S : a n o v e l c o n s e r v ed C d c2 - r e l a t ed p r o t e i n k i n a s e t h a t c o lo c a l i s e s w i t h S C 3 5 s p ec k l e s . J . C e l l S c i. 2 0 0 1 , 11 4 , 2 5 9 1 – 2 6 0 3 . K o h o u t ek , J . ; B l a z e k , D . C y c l i n K g o e s w i t h C d k 1 2 an d C d k 1 3 . C e l l D i v. 2 0 1 2 , 7 , 1 2 . K u r o s a k i , T. ; M a q u a t , L . E . N o n s e n s e - m e d i a t e d m R N A d e c a y in h u m an s a t a g l a n c e . J . C e l l S c i . 2 0 1 6 , 1 2 9 , 4 6 1 – 4 6 7 .

21 L a ff l eu r, B . ; B a s u , U . , B i o l o g y o f R N A s u r v e i l l a n c e i n d ev e l o p m e n t a n d d i s e a s e . Tre n d s C e l l B i o l . 2 0 1 9 , 2 9 , 4 2 8 – 4 4 5 . L ed o u x , S . ; G u t h r i e, C . R e t i n i t i s P i g m e n t o s a m u t a t i o n s i n B a d R e s p o n s e t o R e f r i g e r a t io n 2 ( B r r 2 ) i m p a ir AT P a s e an d h e l i c a s e a c t i v i t y. J . B i o l . C h e m . 2 0 1 6 , 2 9 1 , 11 9 5 4 – 11 9 6 5 . L e H i r, H . ; A n d e r s e n , G . R . S t r u c t u r a l i n s i g h t s i n t o t h e e x o n j u n c t i o n c o m p l ex . C u r r. O p in . S t r u c t . B i o l . 2 0 0 8 , 1 8 , 11 2 – 11 9 . L e H i r, H . ; S é r a p h i n , B . E J C s a t t h e h e a r t o f t r an s l a t i o n a l c o n tr o l . C e l l 2 0 0 8 , 1 3 3 , 2 1 3 – 2 1 6 . L i a n g , K. ; G a o , X . ; G i l m o r e , J . M . ; F l o r en s , L . ; Wa s h b u r n , M . P. ; S m i t h , E . ; S h i l a t i f a r d , A . C h a r a c t e r i z a t io n o f h u m a n cy c l i n - d e p e n d e n t k i n a s e 1 2 ( C D K 1 2 ) an d C D K 1 3 c o m p l e x e s i n C - t e r m i n a l d o m a in p h o s p h o r y l a t i o n , g en e tr a n s c r i p t i o n , an d R N A p r o c e s s i n g . M o l . C e l l . B i o l . 2 0 1 5 , 3 5 , 9 2 8 – 9 3 8 . L i n d e r, P. ; J a n k o w s k y, E . F r o m u n w i n d i n g t o c l a m p i n g — t h e D E A D b o x R N A h e l i c a s e f am i l y. N a t . R e v . M o l . C e l l B i o l . 2 0 11 , 1 2 , 5 0 5 – 5 1 6 . M a e d e r, C . ; G u th r i e , C . , M o d i f i c a t io n s t a rg e t s p l i c e o s o m e d y n a m i c s . N a t . S t r u c t . M o l . B i o l. 2 0 0 8 , 1 5 , 4 2 6 – 4 2 8 . M a n n i n g , K . S . ; C o o p e r, T. A . T h e r o l e s o f R N A p r o c e s s i n g i n t r a n s l a t i n g g en o t y p e to p h e n o t y p e. N a t . R e v. M o l . C e l l B i o l . 2 0 1 6 , 1 8 , 1 0 2 – 11 4 M a r t i n , L . ; G r ig o r y a n , A . ; Wan g , D. ; Wa n g , J . ; B r e d a , L . ; R i v e l l a , S . ; C a r d o z o , T. ; G a r d n e r, L . B . I d en t i f i c a t i o n a n d ch a r a c t e r i z a t io n o f s m a l l m o l e c u l e s t h a t i n h i b i t n o n s e n s e m e d i a t ed R N A d e c a y a n d s u p p r e s s n o n s e n s e p 5 3 m u t a t i o n s . C a n c e r R e s . 2 0 1 4 , 7 4 , 3 1 0 4 – 3 11 3 . M a z l o o m i a n , A . ; A r ak i , S . ; O h o r i , M. ; E l - N a g g ar , A . M. ; Y a p , D. ; B a s h a s h a t i , A . ; N a k a o , S . ; S o r e n s en , P . H . ; N a k an i s h i , A . ; S h a h , S . ; A p a r i c io , S . , P h a r m a co l o g i c a l s y s t e m s a n a l y s i s d e f i n e s E I F 4 A 3 f u n c t i o n s i n c e l l - c y c l e a n d R N A s t r e s s g r an u l e f o r m a t i o n .

22 C o m m u n i ca t i o n s B io l o g y 2 0 1 9 , 2 , 1 6 5 . M i c h e l l e , L . ; C l o u t i e r, A . ; To u t a n t , J . ; S h k r e t a , L . ; T h i b au l t , P. ; D u r a n d , M . ; G a r n e a u , D . ; G e n d r o n , D. ; L ap o i n t e , E . ; C o u tu r e , S . ; L e H i r, H . ; K l i n c k , R . ; E l e l a , S . A . ; P r i n o s , P. ; C h a b o t , B . P r o t e i n s a s s o c i a t ed w i t h t h e e x o n j u n c t i o n co m p l ex a l s o c o n t r o l t h e a l t e r n a t i v e s p l i c i n g o f a p o p t o t i c r e g u l a t o r s . M o l . C e l l . B i o l . 2 0 1 2 , 3 2 , 9 5 4 – 9 6 7 . M i h a i l o v i c , M . K . ; C h en , A . ; G o n z a l e z - R i v er a , J . C . ; C o n t r er a s , L . M . D e f e c t i v e r ib o n u c l e o p r o t e i n s , m i s t a k e s i n R N A p r o c e s s i n g , an d d i s e a s e s . B i o c h e m i s t r y 2 0 1 7 , 5 6 , 1 3 6 7 – 1 3 8 2 . M i z o j i r i, R . ; N a k a t a, D . ; S a to h , Y. ; M o r i s h i t a , D . ; S h ib a t a , S . ; I w a t a n i - Yo s h i h a r a , M . ; K o s u g i , Y. ; K o s a k a , M . ; Ta k ed a , J . ; S a s a k i , S . ; Ta k a m i , K . ; F u k u d a , K . ; K a m a u r a , M. ; S a s a k i , S . ; A r a i , R . ; C a r y, D . R . ; I m a e d a , Y. , D i s c o v er y o f n o v e l 5 ( p i p e r a z in e 1 -c a r b o n y l ) p y r i d in - 2 ( 1 H ) - o n e d er i v a t i v e s a s o r a l l y e I F 4 A3 - s e l e -c t i v e i n h i b i t o r s . A C S M e d . C h e m . L e t t . 2 0 1 7 , 8 , 1 0 7 7 - 1 0 8 2 . M i z o j i r i, R . ; C a r y, D . R . ; H i r ay a m a , T. ; I t o , M . ; Ta n a k a , T. ; I m a ed a , Y. S a s a k i , S . ; Ta k am i , K . ; F u k u d a, K . ; K am a u r a, M . ; Mo r i s h i t a , N . H e t e r o c y c l i c co m p o u n d . J P 2 0 1 7 / 2 2 2 6 2 6 , D e c . 2 1 , 2 0 1 7 . N a t r a j an , R . ; Wi l k e r s o n , P. M . ; M ar c h i ò , C . ; P i s c u o g l i o , S . ; N g , C . K . Y. ; Wa i , P. ; L a m b r o s , M . B . ; S a m a r t z i s , E . P. ; D e d e s , K . J . ; F r a n k u m , J . ; B a j r a m i , I . ; K o p e c , A . ; M a c k a y, A . ; A ' H e r n , R . ; F e n w i c k , K . ; K o za r e w a , I . ; H a k a s , J . ; M i t s o p o u lo s , C . ; H a r d i s s o n , D . ; L o r d , C . J . ; K u m a r - S i n h a , C . ; A s h w o r t h , A . ; We i g e l t , B . ; S a p i n o , A . ; C h i n n a i y a n , A . M . ; M a h e r, C . A . ; R e i s - F i l h o , J . S . C h ar a c t e r i z a t i o n o f t h e g en o m i c f e a tu r e s a n d ex p r e s s e d f u s i o n g en e s i n m i c r o p a p i l l ar y c a r c in o m a s o f t h e b r e a s t . J . P a th o l . 2 0 1 4 , 2 3 2 , 5 5 3 – 5 6 5 . O n o , K . ; I t o , M . ; Ta n ak a , T. ; A s a n o , M . ; H i r a y a m a, T. ; F u j i m o t o , J . ; S a k a u c h i , N . ; H ir a t a , Y. ; To i t a , A . ; M o r i s h i t a , N . ; K o k u b o , H . ; I m a e d a , Y. ; M a e za k i , H . ; C a r y, D . R . ; M i z o j i r i , R . ; C h o , N . ; B a n n o , H . ; To k u h ar a , H . ; A r i k a w a , Y. H e t e r o cy c l i c c o m p o u n d . P C T I n t . A p p l. W O 2 0 1 9 / 1 8 9 5 5 5 A 1 , O c t . 3 , 2 0 1 9 .

23 P a c u l o v á , H . ; K o h o u t e k , J . , T h e e m e rg in g r o l e s o f C D K 1 2 i n t u m o r ig e n e s i s . C e l l D i v. 2 0 1 7 , 1 2 , 7 . P a l a c i o s , I . M . ; G a t f i e l d , D . ; S t J o h n s t o n , D . ; I z a u r r a l d e , E . A n e I F 4 A I I I - c o n t a i n i n g c o m p l e x r eq u i r ed f o r m R N A l o c a l i z a t i o n a n d n o n s e n s e - m ed i a t e d m R N A d e c a y. N a t u re 2 0 0 4 , 4 2 7 , 7 5 3 – 7 5 7 . P a s t o r, F. ; Ko l o n i a s , D . ; G i a n g r a n d e , P. H . ; G i l b o a , E . I n d u c t i o n o f t u m o u r i m m u n i ty b y t a rg e t ed i n h ib i t i o n o f n o n s e n s e - m e d i a t ed m R N A d e c a y. N a tu re 2 0 1 0 , 4 6 5 , 2 2 7 – 2 3 0 . P o p p , M . W. ; M a q u a t, L . E . A t t e n u a t io n o f n o n s e n s e - m e d i a t e d m R N A d e c a y f ac i l i t a t e s t h e r e s p o n s e t o c h e m o t h e r a p eu t i c s . N a t . c o m m u n . 2 0 1 5 , 6 , 6 6 3 2 – 6 6 3 2 . R e e d , R . ; H u r t , E . A c o n s e r v ed m R N A e x p o r t m a c h i n er y c o u p l e d t o p r e - m R N A s p l i c i n g . C e l l 2 0 0 2 , 1 0 8 , 5 2 3 – 5 3 1 . R o c a k , S . ; L i n d e r, P., D E A D - b o x p r o t e i n s : th e d r iv i n g f o r c e s b e h in d R N A m e t a b o l i s m . N a t . R ev. M o l . C e l l . B i o l . 2 0 0 4 , 5 , 2 3 2 – 2 4 1 . Ry u , I . ; Wo n , Y. S . ; H a , H . ; K i m , E . ; P a r k , Y. ; K i m , M . K . ; K w o n , D . H . ; C h o e , J . ; S o n g , H . K . ; J u n g , H . ; K i m , Y. K. e I F4 A 3 Ph o s p h o r y l a t i o n b y C D K s A ff e c t s N M D d u r i n g t h e C e l l C y c l e . C e l l R e p . 2 0 1 9 , 2 6 , 2 1 2 6 – 2 1 3 9 .e 9 . S a n t o s , K . F. ; J o v i n , S . M . ; We b e r, G . ; P e n a , V. ; L u h r m an n , R . ; Wa h l , M . C . S t r u c tu r a l b a s i s f o r f u n c t i o n a l c o o p er a t i o n b e t w e en t a n d e m h e l i c a s e c a s s e t t e s i n B r r 2 - m ed i a t e d r em o d e l in g o f t h e s p l i c e o s o m e . P ro c. N a t l . A c a d . S c i . U . S . A . 2 0 1 2 , 1 0 9 , 1 7 4 1 8 – 1 7 4 2 3 . S a u l i è r e, J . ; M u r i g n eu x , V. ; Wa n g , Z . ; M a r q u e n e t , E . ; B a r b o s a , I . ; L e To n q u è ze , O . ; A u d i c , Y. ; P a i l l a r d , L . ; C r o l l i u s , H . R . ; L e H i r, H . C L I P - s e q o f eI F 4 A I I I r ev e a l s t r an s c r i p t o m e - w i d e m a p p i n g o f th e h u m a n ex o n j u n c t i o n co m p l ex . N a t . S t r u c t . M o l . B i o l. 2 0 1 2 , 1 9 , 11 2 4 – 11 3 1 . S c h r e i b e r, S . L . ; K o t z , J . D . ; L i , M . ; A u b é , J . ; A u s t i n , C . P. ; R e e d , J . C . ; R o s e n , H . ; W h i t e , E . L . ; S k l a r, L . A. ; L i n d s l e y, C . W. ; A l e x an d e r, B . R . ; B i t t k e r, J . A . ; C l e m o n s ,

24 P. A . ; d e S o u z a , A . ; F o l e y, M . A . ; P a l m e r, M . ; S h a m j i , A . F. ; Wa w e r, M . J . ; M c M an u s , O . ; Wu , M . ; Z o u , B . ; Yu , H . ; G o l d en , J . E . ; S c h o e n en , F. J . ; S i m e o n o v, A . ; J a d h a v, A . ; J a c k s o n , M . R . ; P i n k er t o n , A . B . ; C h u n g , T. D . Y. ; G r i ff i n , P. R . ; C r av a t t , B . F. ; Ho d d e r, P. S . ; R o u s h , W. R . ; R o b e r t s , E . ; C h u n g , D . - H . ; J o n s s o n , C . B . ; N o a h , J . W. ; S e v e r s o n , W. E . ; A n a n t h an , S . ; E d w ar d s , B . ; O p r e a, T. I . ; C o n n , P. J . ; H o p k i n s , C . R . ; Wo o d , M . R . ; S t a u ff e r, S . R . ; E m m i t t e , K . A . ; B r a d y, L . S . ; Dr i s c o l l , J . ; L i , I . Y. ; L o o m i s , C . R . ; M a rg o l i s , R . N . ; M i ch e l o t t i , E . ; P e r r y, M . E . ; P i l l a i , A . ; Ya o , Y. , A d v a n c i n g b i o l o g i c a l u n d er s t a n d i n g a n d t h er a p e u t i c s d i s c o v e r y w i t h s m a l l - m o l e cu l e p r o b e s . C e l l 2 0 1 5 , 1 6 1 , 1 2 5 2 – 1 2 6 5 . S h i b u y a , T. ; Ta n g e , T. O . ; S o n e n b e rg , N . ; M o o r e , M . J . e I F4 A I I I b i n d s s p l i c e d m R N A i n t h e ex o n j u n c t io n c o m p l e x an d i s e s s e n t i a l f o r n o n s e n s e - m ed i a t e d d e c a y. N a t . S t r u c t. M o l . B i o l. 2 0 0 4 , 11 , 3 4 6 – 3 5 1 . S h o e m a k e r, C . ; Gr e e n , R . Tr a n s l a t i o n d r iv e s m R N A q u a l i t y c o n t r o l . N a t . S t r u c t . M o l. B i o l. 2 0 1 2 , 1 9 , 5 9 4 – 6 0 1 . S t a l e y, J . P. ; G u t h r i e, C . M e c h an i c a l d e v i c e s o f t h e s p l i c e o s o m e : m o t o r s , c l o c k s , s p r in g s , a n d t h in g s , C e l l 1 9 9 8 , 9 2 , 3 1 5 −3 2 6 . S c h ü l l e r, R . ; F o r n é, I . ; S t r au b , T. ; S ch r e i e c k , A . ; Te x i e r, Y. ; S h a h , N . ; D e c k e r, T. - M . ; C r a m e r, P. ; I m h o f , A . ; E i c k , D. H e p t ad - s p e c i f i c p h o s p h o r y l a t i o n o f R N A p o ly m e r a s e I I C T D . M o l . C e l l 2 0 1 6 , 6 1 , 3 0 5 – 3 1 4 . Ta n n e r, N . K . ; L in d e r, P. D E x D / H b o x R N A h e l i c a s e s : f r o m g en e r i c m o t o r s t o s p e c i f i c d i s s o c i a t i o n f u n c t i o n s . M o l . C e l l 2 0 0 1 , 8 , 2 5 1 – 2 6 2 . Ti e n , J . F. ; M a z l o o m i a n , A . ; C h e n g , S . W. G. ; Hu g h e s , C . S . ; C h o w, C . C . T. ; C a n a p i, L . T. ; O l o u m i , A . ; Tr i g o - G o n z a l e z , G . ; B a s h a s h a t i , A . ; X u , J . ; C h a n g , V. C . D . ; S h a h , S . P. ; A p ar i c i o , S . ; M o r i n , G . B . C D K 1 2 r e g u l a t e s a l t e r n a t i v e l a s t e x o n m R N A s p l i c i n g a n d p r o m o t e s b r e a s t c an c e r c e l l i n v a s i o n . N u c l e i c A c i d s R e s . 2 0 1 7 , 4 5 , 6 6 9 8 – 6 7 1 6 .

25 U r b a n s k i , L . M . ; L e c l a i r, N. ; A n c z u k ó w, O . A l t e r n a t i v e - s p l i c i n g d e f e c t s i n c an c e r : s p l i c i n g r eg u l a t o r s a n d t h e i r d o w n s t r e a m t a rg e t s , g u id i n g t h e w a y t o n o v e l ca n c e r t h er a p eu t i c s . Wi l e y I n t e rd i s c i p . R e v. R N A 2 0 1 8 , 9 , e 1 4 7 6 . Wah l , M . C . ; Wi l l , C . L . ; L ü h r m a n n , R . T h e s p l i c e o s o m e : d e s i g n p r i n c ip l e s o f a d y n am i c R N P m a c h i n e. C e l l 2 0 0 9 , 1 3 6 , 7 0 1 − 7 1 8 . Wan g , Z . ; M u r i g n e u x , V. ; L e H i r, H . Tr an s c r i p to m e - w i d e m o d u l a t i o n o f s p l i c i n g b y t h e e x o n ju n c t i o n c o m p l e x . G en o m e B i o l. 2 0 1 4 , 1 5 , 5 5 1 . We i s s , W. A . ; Tay l o r, S . S . ; S h o k a t , K . M . R e c o g n i z i n g a n d e x p lo i t i n g d i ff e r e n c e s b e t w e en R N A i a n d s m a l l - m o l e c u l e in h i b i t o r s . N a t u re C h e m . B io l . 2 0 0 7 , 3 , 7 3 9 – 7 4 4 . Z h a o , C . ; B e l l u r, D . L . ; L u , S . ; Z h ao , F. ; G r a s s i , M . A . ; B o w n e , S . J . ; Su l l i v a n , L . S . ; D a i g e r, S . P. ; C h e n , L . J . ; P a n g , C . P. ; Z h a o , K . ; S t a l e y, J . P. ; L a r s s o n , C . A u t o s o m a l -d o m i n an t r e t in i t i s p i g m en t o s a c au s e -d b y a m u t a t i o n i n S N R N P 2 0 0 , a g e n e r eq u i r e-d f o r u n w i n d in g o f U 4 / U 6 s n R N A s . A m . J . H u m. G e n e t. 2 0 0 9 , 8 5 , 6 1 7 – 6 2 7 .