(nm/s)
blogD at pH7.4
c57 0.79
(0.31 – 2.0) 1.2 311 3.1
58 1.4
(1.2– 1.8) 69 273 2.0
59 0.18
(0.15– 0.22) 59 142 1.9
60 0.079
(0.069 – 0.091) 49 131 1.7
61 – 58
(47– 71) NT
dNT NT
52 – 5.3
(2.9– 9.4) NT NT NT
54 – 1.7
(0.96 – 3.2) NT NT NT
a n = 2 , 9 5 % c o n f i d en c e i n t er v a l s s h o w n i n p ar e n t h e s e s . bp e r m e a b i l i t y o f c o m p o u n d a t p H7 . 4 m e a s u r ed b y P A M P A . co c t an o l–w a t er p a r t i t i o n c o ef f i c i e n t a t p H 7 .4 . dn o t t e s t e d
113
化 合 物 の 活 性 や 溶 解 性 の 向 上 を 指 向 し て 、 化 合 物 5 7 の 最 適 化 を 進 め た 。 化 合 物 の 疎 水 性 を 低 下 さ せ 、 な お か つ タ ン パ ク 質 の ア ミ ノ 酸 残 基 と 新 た に 水 素 結 合 を 形 成 し 得 る 極 性 官 能 基 の 導 入 を 検 討 し た 。 共 結 晶 構 造 の さ ら な る 分 析 か ら 、 水 素 結 合 を 形 成 す る の に 適 し た ア ミ ノ 酸 ( T h r 1 1 9 7 , S e r 1 1 9 6 , お よ び L y s 1 7 1 6 ) が 、 化 合 物 5 7の 末 端 ベ ン ジ ル オ キ シ 基 の ベ ン ゼ ン 環 3 位 の 方 向 に 位 置 し て い る こ と が 判 明 し た ( F i g u r e 3 - 5 B )。 そ こ で 、 ベ ン ゼ ン 環 を 水 素 結 合 可 能 な ピ リ ジ ン 環 (5 8 お よ び 5 9) や チ ア ゾ ー ル 環 (6 0) で 置 き 換 え た ( T a b l e 3 - 4 )。 化 合 物 5 9 や
6 0 の よ う に 、 窒 素 原 子 が 化 合 物 5 7 の 末 端 ベ ン ジ ル オ キ シ 基 の ベ ン ゼ ン 環 3 位 に あ た る 位 置
に 存 在 す る も の は 活 性 が 向 上 し 、 一 方 で 2 -ピ リ ジ ル 体 5 8 で は 活 性 の 向 上 は 認 め ら れ な か っ た 。
F i g u r e 3 - 5 . 阻 害 剤 が 結 合 し た B r r 2の 共 結 晶 構 造 ( A ) 化 合 物 5 2 と B r r 2 ( P D B : 5 U R K、 緑 色 で 描 画) お よ び 化 合 物 5 7 と B r r 2 ( P D B : 5 U R J、 黄 色 で 描 画) の 重 ね 合 わ せ ( B ) 化 合 物 5 7 の ベ ン ジ ル オ キ シ 基 の 周 辺 の 極 性 ア ミ ノ 酸 残 基
次 に 、I n d u c e d f i t d o c k i n g (S c h r ö d in g er ) を 用 い て化 合 物 6 0と B r r 2の ド ッ キ ン グ モ デ ル
( F i g u r e 3 - 6 ) を 作 成 し た 。 モ デ ル か ら チ ア ゾ ー ル 環 の 窒 素 原 子 と T h r 1 1 9 7の 側 鎖 と の 水 素 結
合 形 成 が 示 唆 さ れ た 。 一 方 で T h r 1 1 9 7 の 側 鎖 は 、2 -ピ リ ジ ル 誘 導 体 5 8 の ピ リ ジ ン 環 の 窒 素 原 子 と 水 素 結 合 形 成 す る に は 幾 何 学 的 に 難 し い 位 置 に あ る と い う こ と が 、 こ の ド ッ キ ン グ モ デ ル に お い て も 確 認 さ れ た 。 化 合 物 5 9お よ び 6 0 は 、 最 も 強 いB r r 2阻 害 活 性 を 示 し た だ け で な く 、 良 好 な 物 理 化 学 的 性 質 ( l o g D , 溶 解 性, お よ び 膜 透 過 性) を 示 し た 。 共 結 晶 構 造 か ら 予 想 さ れ る よ う に 、 置 換 基 が 適 切 な 方 向 に 伸 び な い オ ル ト 置 換 体 6 1は 大 幅 な 活 性 の 減 弱 を 示 し た 。 化 合 物 6 1 は 、 活 性 の 強 い 化 合 物 5 7、5 9お よ び 6 0と 構 造 的 に 類 似 し て い る こ と か ら 、 ネ ガ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と し て の 利 用 価 値 が あ る 。
114 F i g u r e 3 - 6 . 化 合 物 6 0 と B r r 2の ド ッ キ ン グ モ デ ル.
ド ッ キ ン グ モ デ ル は 、5 7 と B r r 2 の 共 結 晶 構 造 ( P D B : 5 U R K ) を 鋳 型 と し て 用 い
S c h r ö d i n g e r s o f t w a r e s u i t e の I n d u c e d f i t d o c k i n g を 用 い て 作 成 し た 。 詳 細 は 実 験 の 部 に 記 載 。
化 合 物 5 7 が B r r 2 の ア ロ ス テ リ ッ ク サ イ ト に 結 合 す る こ と か ら も 示 唆 さ れ る よ う に 、 化 合
物 6 0は 、A T P お よ び R N A の 双 方 に 対 し て 非 拮 抗 型 阻 害 を 示 し た (F i g u r e 3 - 7 )。 次 に 、 化 合
物 6 0 の 選 択 性 を 調 べ た と こ ろ 、D E A D b o x フ ァ ミ リ ー の R N A ヘ リ カ ー ゼ ( e I F 4 A 1 お よ び e I F 4 A 3 ) や D E A H b o xフ ァ ミ リ ー の R N A ヘ リ カ ー ゼ ( D H X 2 9 ) の よ う な シ ン グ ル カ セ ッ ト の ヘ リ カ ー ゼ に 対 し て は 1 0 0 µ M ま で 化 合 物 濃 度 を 上 げ て も 阻 害 活 性 を 示 さ な か っ た ( T a b l e
3 - 5 )。 化 合 物 5 9 も 同 様 に 、 こ れ ら の ヘ リ カ ー ゼ に 対 し て 阻 害 活 性 を 示 さ な か っ た こ と か ら 、
化 合 物 5 9 や 6 0 が B r r 2 に 対 し て 高 い 選 択 性 を 有 し て い る こ と が 示 さ れ た が 、B r r 2特 異 的 か ど う か に 関 し て は 今 後 さ ら な る 検 証 が 必 要 で あ る 。
115
P l o t C o n d i t i o n I C5 0 ( n M )a
B l a c k 5 0 0 μ M AT P / 2 . 5 μ g / m L R N A 2 0 ( 1 0 – 3 9 )
R e d 2 0 0 μ M AT P / 2 . 5 μ g / m L R N A 1 9 ( 1 3 – 3 0 )
B l u e 2 5 μ M AT P / 2 . 5 μ g / m L R N A 1 9 ( 1 6 – 2 4 ) G r e en 2 . 5 μ M AT P / 2 . 5 μ g / m L R N A 1 8 ( 1 4 – 2 4 ) P u r p l e 2 5 μ M AT P / 0 . 2 5 μ g / m L R N A 2 2 ( 8 . 6 – 5 7 )
O r an g e 2 5 μ M AT P / 5 0 μ g / m L R N A 3 3 ( 2 6 – 4 1 )
an = 4 , 9 5 % co n f id e n c e i n t er v a l s s h o wn i n p a r e n th e s e s F i g u r e 3 - 7 . 化 合 物 6 0 を 用 い た 拮 抗 試 験
基 質 濃 度 以 外 の 酵 素 反 応 の 条 件 は 、 化 合 物 評 価 に 用 い た R N A 依 存 A T P a s e ア ッ セ イ と 同 じ も の を 用 い た 。5 0 0 µ M A T P / 2 .5 µg / m L R N A 黒 色; 2 0 0 µ M A T P / 2 . 5 µ g / m L R N A 赤 色; 2 5 µ M A T P / 2 .5 µ g / m L R N A 青 色; 2 .5 µ M A T P / 2 .5 µ g / m L R N A 緑 色; 2 5 µ M A T P / 0 . 2 5 µ g / m L R N A 紫 色; 2 5 µ M A T P / 5 0 / µg m L R N A 橙 色 ( n = 4 , m e a n ± s t a n d ar d d e v i a t i o n ) . そ れ ぞ れ の 条 件 に お け る I C5 0値 ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l s ) を テ ー ブ ル に 示 し た 。
T a b l e 3 - 5 化 合 物 5 9 お よ び 6 0 の 選 択 性
Compound Brr2 ATPase IC
5 0( M)
aeIF4A1 ATPase IC
5 0( M)
aeIF4A3 ATPase IC
5 0( M)
aDHX29 ATPase IC
5 0( M)
a59 0.18
(0.15– 0.22) >100 >100 NT
b60 0.079
(0.069 – 0.091) >100 >100 >100
a n = 2 o r 4 , 9 5 % c o n f i d en c e i n t er v a l s s h o wn i n p a r en t h e s e s . b N T = n o t t e s t e d .
116
次 に B r r 2 の A T P 依 存 R N A u n w i n d i n g 活 性 (ヘ リ カ ー ゼ 活 性) に 対 す る 化 合 物 6 0 の 影 響
を 調 査 し た ( F i g u r e 3 - 8 )。 評 価 に は 、U 4 / U 6 の s t e m I I 領 域 周 辺 の R N A 配 列 を 参 考 に 設 計 さ れ た 1 4 - m e r の 二 本 鎖 R N Aモ デ ル を 用 い た ( L e d o u x e t a l. , 2 0 1 6 )。 化 合 物 6 0 は 、B r r 2の ヘ リ カ ー ゼ 活 性 を 濃 度 依 存 的 に 阻 害 し 、I C5 0 値 は 1 . 3 µ M で あ っ た 。 一 方 で ネ ガ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル と し て 用 い た 化 合 物 6 1 は 、 濃 度 を 1 0 0 µ Mま で 上 げ て も ヘ リ カ ー ゼ 阻 害 活 性 を 示 さ な か っ た 。 こ れ ら の 結 果 は 化 合 物 の A T P a s e 阻 害 活 性 と ヘ リ カ ー ゼ 阻 害 活 性 の 間 に 相 関 が あ る こ と を 示 唆 し て い る 。 以 上 の デ ー タ か ら 、 化 合 物 6 0 は B r r 2 の 分 子 プ ロ ー ブ 創 出 の た め の 優 れ た 出 発 点 と な り 得 る 。 共 結 晶 構 造 に お い て 、 未 だ リ ガ ン ド と タ ン パ ク 質 間 の 相 互 作 用 に 利 用 さ れ て い な い ア ミ ノ 酸 (例. T y r 1 6 8 2 ) が 近 傍 に あ り 、 こ れ ら を 利 用 し て 新 た な 水 素 結 合 を 形 成 さ せ れ ば 、 よ り 強 力 な 阻 害 剤 の 発 見 に つ な が る 可 能 性 が あ る と 考 え て い る 。
F i g u r e 3 - 8 . 化 合 物 6 0の ヘ リ カ ー ゼ 阻 害 活 性
(左) B r r 2 の R N A ヘ リ カ ー ゼ 活 性 は 蛍 光 ラ ベ ル 化 し た R N A を 用 い て 測 定 し た 。 単 鎖 お よ び
二 本 鎖 R N A を 電 気 泳 動 で 分 離 し 、 バ ン ド の 蛍 光 シ グ ナ ル を 検 出 し た 。l a n e 1 : 二 本 鎖 R N A の み 、l a n e 2 : 単 鎖 R N Aの み 、l a n e 3 : 化 合 物 非 添 加 ( 1 0 0 % c o n t r o l )、l a n e s 4–8 : 化 合 物 6 0 の 用 量 依 存 的 な ヘ リ カ ー ゼ 阻 害 活 性 の 評 価 、 l a n e s 9 : ネ ガ テ ィ ブ コ ン ト ロ ー ル 6 1 の 1 0 0 µ Mで の 評 価 、l a n e 1 0 : 酵 素 非 添 加 ( 0 % c o n t r o l )、l a n e 1 1 : A T P非 添 加
(右) ヘ リ カ ー ゼ 活 性 に 対 す る I C5 0値 は 、 バ ン ド の 蛍 光 シ グ ナ ル 強 度 を 検 出 し 、 阻 害 率 と し て グ ラ フ に プ ロ ッ ト す る こ と で 算 出 し た 。
117
<ス ピ ロ[イ ン ド ー ル- 3 , 2 ’ -ピ ロ リ ジ ン] - 2 ( 1 H ) -オ ン 誘 導 体>
前 節 で は 、 選 択 的 B r r 2 阻 害 剤 4 , 6 -ジ ヒ ド ロ ピ リ ド [ 4 , 3 -d]ピ リ ミ ジ ン- 2 , 7 ( 1H, 3H) -ジ オ ン 誘 導 体 6 0 の 創 出 に 関 し て 議 論 し た 。 筆 者 は 、 も う 一 つ の ヒ ッ ト 化 合 物 ス ピ ロ[イ ン ド ー ル
-3 , 2 ’ -ピ ロ リ ジ ン] - 2 ( 1H) -オ ン 誘 導 体 5 0 の 最 適 化 を 行 い 、 化 合 物 6 0 と は 構 造 的 に 異 な り 、 さ
ら に 強 力 な B r r 2 阻 害 活 性 を 示 す 化 合 物 を 見 出 し た 。 詳 細 を 以 下 に 示 す 。
ヒ ッ ト 化 合 物 5 0 は 、 特 徴 的 な ス ピ ロ[イ ン ド ー ル- 3 , 2 ’ -ピ ロ リ ジ ン] - 2 ( 1H) -オ ン 骨 格 を 有 し て お り 、3 つ の 不 斉 中 心 を 有 す る 。 ま ず 立 体 化 学 が 活 性 に 与 え る 影 響 を 確 認 す る た め に 、 ラ セ ミ 体 5 0 を 光 学 分 割 し 、 光 学 活 性 体 の 活 性 を 調 べ た ( T ab l e 3 - 6 )。 光 学 活 性 体 6 2 a–b の う ち
6 2 a の み が 強 い B r r 2 阻 害 活 性 を 示 し た 。 こ の 結 果 は 6 2 a の 立 体 化 学 が B r r 2 に 厳 密 に 認 識 さ
れ て い る こ と を 示 し て い る 。 一 方 で 、3 ’位 の 異 性 体 6 3 a–b (ジ ア ス テ レ オ マ ー) は い ず れ も 化 合 物 濃 度 を 1 0 0 M ま で 上 げ て も 活 性 を 示 さ な か っ た こ と か ら 、 そ れ ぞ れ の 置 換 基 の 相 対 立 体 配 置 も B r r 2阻 害 活 性 に 重 要 で あ る こ と が 判 明 し た 。
T a b l e 3 - 6 . 化 合 物 5 0, 6 2 a–b お よ び 6 3 a–b の 構 造 活 性 相 関
Compound Optical rotation Brr2 ATPase IC
5 0( M)
a50 racemate 2.7 (2.2 – 3.3)
62a + 1.6 (1.4 – 1.9)
62b − >100
63a + >100
63b − >100
a n = 2 , 9 5 % c o n f i d e n c e in t e r v a l s s h o wn i n p a r en t h e s e s .
118
次 に 筆 者 は 、 化 合 物 5 0 の 3 ’位 の 構 造 活 性 相 関 の 調 査 を 行 っ た ( T a b l e 3 - 7 )。 化 合 物 5 0 の エ ス テ ル 基 を カ ル ボ キ シ 基 (6 4) や カ ル ボ キ サ ミ ド 基 (6 5) に 変 換 し た と こ ろ 活 性 が 大 幅 に 減 弱 し た 。 一 方 で ヒ ド ロ キ シ メ チ ル 体 6 6 は 、 化 合 物 5 0 と 比 較 し て 4 倍 程 度 の 活 性 の 減 弱 を 示 し た 。 こ れ ら の 親 水 性 の 官 能 基 を 持 つ 誘 導 体 (6 4–6 6) と は 対 照 的 に 、 フ ル オ ロ メ チ ル 体 6 7 で は 若 干 の 活 性 の 向 上 が 見 ら れ た 。 よ り 嵩 高 い ク ロ ロ メ チ ル 体 6 8 は 、 6 7 よ り 若 干 活 性 は 弱 い も の の 、 ヒ ッ ト 化 合 物 5 0 と 同 程 度 の 活 性 を 示 し た 。 こ れ ら の 結 果 か ら 、3 ’位 の R -置 換 基 が B r r 2 の 小 さ な 疎 水 性 ポ ケ ッ ト を 埋 め て い る と 推 測 し た 。 そ こ で 、R -置 換 基 を よ り 立 体 的 に 小 さ な メ チ ル 基 (6 9) に 変 換 し た と こ ろ 、 一 連 の 誘 導 体 の 中 で 最 も 強 い 活 性 を 示 し た 。 メ チ ル 体 6 9 は ヒ ッ ト 化 合 物 5 0 が 有 し て い た エ ス テ ル 構 造 を 持 た な い た め 、 化 学 的 に も 代 謝 的 に も よ り 安 定 と 予 想 さ れ る 。
T a b l e 3 - 7 . 化 合 物 5 0 お よ び 6 4–6 9 の 構 造 活 性 相 関
Compound R Brr2 ATPase
IC
5 0( M)
a64 COOH >100
65 CONH
2>100
66 C H
2O H 12 (9.8– 14) 67 CH
2F 1.3 (1.1 – 1.5) 68 CH
2Cl 2.8 (2.4 – 3.3)
69 M e 0.36 (0.32 –0.41)
50 COOMe 2.7 (2.2 – 3.3)
a n = 2 , 9 5 % co n f id e n c e in t e r v a l s s h o w n in p a r e n t h e s e s .
119
続 い て 、 化 合 物 5 0 の 他 の 部 位 の 構 造 活 性 相 関 の 調 査 を 行 っ た 。 化 合 物 7 0–7 3 の ア ッ セ イ 結 果 か ら 、 イ ン ド リ ノ ン 環 の N H 基 、2 -ピ コ リ ン ア ミ ド の カ ル ボ ニ ル 基 、 ピ ロ リ ジ ン 環 上 5 ’ 位 の イ ソ ブ チ ル 基 は 活 性 発 現 に 必 須 で あ る こ と が 明 ら か と な っ た ( T a b l e 3 - 8 )。 次 に 、 イ ン ド リ ノ ン 環 の 4 - 7 位 へ の フ ッ 素 原 子 の 導 入 を 試 み た (7 4–7 5 お よ び 7 7–7 8)。 こ れ ら の 誘 導 体 の 中 で 、5 -フ ル オ ロ 体 7 5 が 無 置 換 体 5 0 と 比 較 し て 強 い 活 性 を 示 し た 。 一 方 で 、 よ り 大 き な 5 -ク ロ ロ 体 7 6 で は 、 活 性 の 減 弱 が 見 ら れ た 。 こ の 結 果 か ら 、 イ ン ド リ ノ ン 環 部 分 が タ ン パ ク 質 の 非 常 に 狭 い 空 間 を 占 有 し て お り 、 イ ン ド リ ノ ン 環 5 位 の 方 向 に フ ッ 素 原 子 を 許 容 す る 程 度 の わ ず か な 空 間 が 存 在 す る も の と 考 え て い る 。
T a b l e 3 - 8 . 化 合 物 5 0 お よ び 7 0–7 8の 構 造 活 性 相 関
Compound R
1X R
2Y Brr2 ATPase IC
5 0( M)
a70 M e O i -Bu H >100
71 H H
2i -Bu H >100
72 H O Me H >100
73 H O Bn H >100
74 H O i -Bu 4 - F 3.4 (3.1 – 3.7) 75 H O i -Bu 5 - F 0.91 (0.81 – 1.0) 76 H O i -Bu 5 - C l 8.0 (4.4 – 15) 77 H O i -Bu 6 - F 88 (75 – 100) 78 H O i -Bu 7 - F 4.3 (3.8 – 4.9) 50 H O i -Bu H 2.7 (2.2 – 3.3)
a n = 2 , 9 5 % c o n f i d e n ce i n t e r v a l s s h o w n i n p a r e n th e s e s .
120
活 性 の 強 か っ た 5 -フ ル オ ロ 体 7 5 を 基 に し て 、 ピ ロ リ ジ ノ ン 環 1 '位 の ア シ ル 基 の 変 換 を 行
っ た ( T a b l e 3 - 9 )。 ピ リ ジ ン 環 の 窒 素 原 子 お よ び そ の 位 置 の 重 要 性 を 確 認 す る た め に 、 化 合 物
7 9–8 1 を 合 成 し 、 化 合 物 7 5 と 比 較 し た 。 フ ェ ニ ル 基 (7 9)、3 -ピ リ ジ ル 基 (8 0)、 そ し て 4 -ピ リ ジ ル 基 (8 1) で は 、 い ず れ も 大 幅 な 活 性 の 減 弱 を 示 し 、2 -ピ リ ジ ル 誘 導 体 7 5 の み が 活 性 を 示 す こ と が 判 明 し た 。 こ の 結 果 か ら 、2 -ピ リ ジ ル 基 の 窒 素 原 子 は B r r 2 の ア ミ ノ 酸 残 基 と 何 ら か の 水 素 結 合 を 形 成 し て い る 可 能 性 が 示 唆 さ れ た 。 こ の 仮 説 を も と に 、 他 の ヘ テ ロ 環 に よ る 2 -ピ リ ジ ル 基 の 置 き 換 え を 試 み た 。 置 き 換 え る ヘ テ ロ 環 と し て 、 古 典 的 な B r ø n s t e d の 指 標 や 最 近 報 告 さ れ た 水 素 結 合 の 塩 基 性 指 標 を 基 に ( L a u r e n c e e t a l. , 2 0 0 9 )、1 -メ チ ル- 1H-ピ ラ ゾ リ ル 基 や 1 -メ チ ル- 1H-イ ミ ダ ゾ リ ル 基 を 選 択 し た*。 こ れ ら の 異 性 体 の 中 で 1 -メ チ ル- 1H-イ ミ ダ ゾ ー ル- 4 -イ ル 誘 導 体 8 4 が 化 合 物 7 5 よ り も 約 8 倍 強 い 活 性 を 示 し た 。 一 方 で 、1 -メ チ ル - 1H-イ ミ ダ ゾ ー ル- 2 -イ ル 誘 導 体 8 3 は 若 干 の 活 性 減 弱 を 示 し た 。 こ の 理 由 と し て 、 イ ミ ダ ゾ ー ル 環 の N-メ チ ル 基 が 立 体 障 害 に よ り 、 リ ガ ン ド の 配 座 に 影 響 を 与 え て い る 可 能 性 が 考 え ら れ る 。1 -メ チ ル- 1H-ピ ラ ゾ ー ル- 3 イ ル 体 8 2 の 活 性 は 8 4 よ り も 弱 く 、8 3 よ り も 若 干 劣 っ て い た 。 こ の 結 果 は 、8 2 の 水 素 結 合 ア ク セ プ タ ー の 周 辺 が 隣 接 メ チ ル 基 に よ っ て 立 体 的 に 遮 蔽 さ れ 、 水 素 結 合 能 が 影 響 を 受 け て い る こ と に 由 来 す る 可 能 性 が あ る 。 こ れ ら の 五 員 環 へ テ ロ 環 誘 導 体 の 評 価 結 果 も 、 一 連 の 誘 導 体 の ヘ テ ロ 環 上 の 窒 素 原 子 と B r r 2 と の 間 に 水 素 結 合 が 形 成 さ れ て い る と い う 考 え を 支 持 す る も の で あ る 。 最 も 活 性 の 強 か っ た 化 合 物 8 4 の イ ミ ダ ゾ ー ル 環 の N-ア ル キ ル 基 の 活 性 へ の 影 響 を 調 べ る た め に 、 無 置 換 体 8 5 お よ び N-ベ ン ジ ル 誘 導 体 8 6 を デ ザ イ ン 、 合 成 し た 。 化 合 物 8 5は 、 化 合 物 8 4 と 比 較 し て 若 干 の 活 性 の 減 弱 を 示 し た 。 一 方 で 、 よ り 疎 水 性 の 高 い N-ベ ン ジ ル 誘 導 体 8 6 は 、 化 合 物 8 4 よ り も 強 い 活 性 を 示 し た 。 こ の 結 果 か ら 、 イ ミ ダ ゾ ー ル 環 上 の N-メ チ ル 基 や ベ ン ジ ル 基 は B r r 2 と 何 ら か の 疎 水 性 相 互 作 用 を し て い る 可 能 性 が あ る 。 前 述 し た 化 合 物 6 9 の 結 果 ( T a b l e 3 - 7 ) と 同 様 に 、3 ' -メ チ ル 誘 導 体 8 7 お よ び 8 8 は 対 応 す る エ ス テ ル 誘 導 体 8 4 お よ び 8 6 よ り も 強 い 活 性 を 示 し た 。
* L a u r e n c e e t a l. , 2 0 0 9 よ り 抜 粋 、p K BH B +, ピ リ ジ ン の 値 = 5 .2 0 , 1 -メ チ ル イ ミ ダ ゾ ー ル の 値 = 7 . 1 2 , お よ び 1 -メ チ ル ピ ラ ゾ ー ル の 値 = 2 . 0 6 , p KB H X, ピ リ ジ ン の 値 = 1 . 8 6 , 1 -メ チ ル イ ミ ダ ゾ ー ル の 値 = 2 .7 2 , お よ び 1 -メ チ ル ピ ラ ゾ ー ル の 値 = 1 .8 4 )
121 T a b l e 3 - 9 . 化 合 物 7 5 お よ び 7 9–8 8 の 構 造 活 性 相 関
Compound R
1R
2Brr2 ATPase
IC
5 0( M)
a79 COOMe >100
80 COOMe >100
81 COOMe >100
82 COOMe 4.6 (4.3 – 4.9)
83 COOMe 1.7 (1.5 – 1.9)
84 COOMe 0.11 (0.10 – 0.12)
85 COOMe 0.39 (0.34 – 0.46)
86 COOMe 0.044 (0.041 – 0.047)
87 Me 0.042 (0.040 – 0.045)
88 Me 0.024 (0.021 – 0.026)
75 COOMe 0.91 (0.81– 1.0)
a n = 2 , 9 5 % co n f id e n c e in t e r v a l s s h o wn i n p a r e n t h e s e s .
122
最 も 強 力 な 活 性 を 示 し た 化 合 物 8 7 お よ び 8 8 を 光 学 分 割 し 、 そ れ ぞ れ の 光 学 活 性 体 (8 9 a -b お よ び 9 0 a - b) の プ ロ フ ァ イ ル を 評 価 し た ( Ta b l e 3 - 1 0 )。 ( 3S3 'R5 'S) -異 性 体 8 9 a お よ び 9 0 a が よ り 強 い 活 性 を 示 す 異 性 体 ( eu t o m e r ) で あ る こ と 、 活 性 が 弱 い 異 性 体 ( d i s t o m e r ) 8 9 b お よ び 9 0 b よ り も 3 0 0 0 倍 以 上 強 い 活 性 を 示 す こ と が 判 明 し た 。 E u t o m e r 8 9 a お よ び 9 0 a
は 、AT P a s eア ッ セ イ に お い てe I F 4 A 1 , e I F 4 A3 , お よ び D H X 2 9と い っ た 他 の ヘ リ カ ー ゼ に 対
し て 阻 害 活 性 を 示 さ ず 、 優 れ た B r r 2 選 択 性 を 有 し て い る こ と も 明 ら か と な っ た 。 ま た 、 化
合 物 8 9 a お よ び 9 0 a は 、 サ ブ マ イ ク ロ モ ー ラ ー の I C5 0値 で B r r 2の ヘ リ カ ー ゼ 活 性 を 阻 害 し
た (8 9 a: I C5 0 = 0 . 4 8 M お よ び 9 0 a: I C5 0 = 0 . 3 5 M , F i g u r e 3 - 9 )、 一 方 で d i s t o m e r 8 9 b お
よ び 9 0 b は 1 0 0 M の 化 合 物 濃 度 で も B r r 2 の ヘ リ カ ー ゼ 活 性 を 阻 害 し な か っ た 。 加 え て 、
化 合 物 8 9 a お よ び 9 0 a は 優 れ た 溶 解 性 と 膜 透 過 性 を 示 し た 。
T a b l e 3 - 1 0 . 光 学 活 性 体 8 9 a–b お よ び 9 0 a–b の 活 性 、 選 択 性 、 物 性 プ ロ フ ァ イ ル