抗結核剤耐性BCGの抗原性に就て

40

（鶴麺…糠麟熱8言）

抗結核剤耐性BCGの抗原性に就て

東京女子医科大学細菌学教：室（主任平野憲正教授） 小

林

バヤシ

千

乎

鶴

ズ

（受付 昭和31年8月29日）

抗結核剤耐性結核菌の抗原性に就て曾て平野， 長田ユ）2［はストレプトマイシン（SM）耐性結核菌 に似て，叉平野，中西，福永5）はイソニコチン酸 ヒドラジッド（1：NAH）耐性牛型結核菌に於ていず

れもBCGよりも抗原性が強い事を報告した。叉

Hobby， Lenceat and Auerbauch4，も1：NAH耐性

同型結核菌の抗原性をBCGのそれと比較して同

様の成績を報告している。私は1．・’AH耐性BCG

と1種：のINAH誘導体及びoxadiazoline化合物

に対するBCG耐性株をえてその抗原性に就て検

討したので以下実験成績を報告する。1NAH誘導

体はIsollicoむiny1−4 hydroxybenzal hydrazone で他の1つは5−pyridyl一ユ，3，4−oxadiazolin−2− oneである。

実験方法

拝聴に用いた菌株は教室保存のBCGとその耐性株 である。即ちINAH耐性株はINAHを加えた小川培 地又はCOwper培地に約2週間毎に継代して次第に 而手性度をあげ約20代後に1000γ／cc以上に耐性となつ たものである。oxidiazoline誘導体及びINAH誘導 体の耐性株は同様にして耐性度をあげ原株の約500倍 耐性となったものである。 菌液作製 BCGのINAH耐性株は100 7／cc INAH 入小川培地に，他の2種の耐性株及び原株は薬剤を加 えない小川培地に2週間培養して菌苔をガラス玉入フ ラスコにかきとり，5分間手振りで磨砕し，滅菌蒸溜 水を加えて1mg／ccの菌液としそれを試験管に移して 約20分放置しその上層の菌液を実験に使用した。 免疫前述の様して作製した菌液を0．1cc宛即ち約 0．1mg宛を15g前後のDD系マウスの皮下に接種し て免疫を行い爾使用した菌液は滅菌蒸溜水で適当に稀 釈して小川培地に定量培養を行って生菌数を計算し た。 攻撃及び免疫効果判定 免疫2∼4週後にH： 7Rvの 2週間培養菌を前と同様にして1mg／ccの菌液とし， その0．1ccを尾静脈より接種して攻撃を行った。（菌 液の生菌数表参照）攻撃後2，5，7，10週後に各群よ り任意に2匹宛屠殺し肺，脾に於ける肉眼的所見並び にこれ等臓器に於ける結核菌の定量培養の成績より免 疫効果を判定した。各臓器の定量培養の方法は小川氏 法により1％Na OHでホモゲナィザーを用いて10倍 乳剤とし，後1％Na OHで適当に稀釈してその0．1cc 宛を各々3本宛の小川培地に培養し，4∼6週後に発 生した集落の平均より換算して臓器0．1nlg当りの生菌 数を計算した。

実験成績

第一回実験ではBCGの免疫菌数が8． 9×106v．u．

であるのに対してINAH R−BCGはその約1／9の

0．1×106v．u．であり攻撃は免疫2週後H37Rvの

2週培養菌の4．6×104▽・u・を尾静脈内に接種して 行った。攻撃画数が少なかったので屠殺は攻撃後 5週同とユ0週目に行い肺と脾を前述の方法で定量

培養を行った。その結果は第1表の如く5週目で

は肺0．1mg当り菌数が耐性株では27であるのに対 して原株では更に多く，脾0．1mg当りの菌数も耐 性株は6．1であるのに原株は21であった。 エ0週目の臓器培養所見ではこれに反して肺0．1

mg当り耐性株に於ては123，原株に於ては遙かに

少く，また脾0．1mg当り耐性株に於ては2．3，原 株に於ては1．1であった。 第二回実験でも原株の免疫菌数は10×10Gv．u． で耐性株の1．3×106v．u．に比して約8倍であっ

た。攻撃は免疫2週後にH，，Rvの2週聞培養菌

を尾静脈に1．3×106v．u．接種して行った。その結 Chizu KOBAYASHI （Depar’tment of Bacteriology， Tokyo Women’s Medica］ College） ： On the anti−

genicity of antituberculoug． drug−resistant BCG．

41

第ユ表 INAH耐性BCGの抗原性 マウス1

免疫BCG8．9×10 e）▽．u．皮下 R・BCG⑪．1×106v．u．皮下 攻撃H．e7Rv 4 e 6×104v．u．2週後静脈 集落 数 （臓器0．1mg当）

攻 撃 後 5

週1・・

マウスNo． 1 2 1 週 2 耐 性 株 肺 23 32 1 lso 96 脾 7．51 5．1 3．6［ Ll

B

C

G

肺 28 1 576 35

L9

脾 10 肺』 e4”’ 53 i．sl o．3 対 照 99 ＋d一 1 7so ユe7 4。8

に於て著明であった。第3表では5週目迄しか定

量培養の結果を示さなかったが，これは原株免疫

群が10週迄に9匹結核死を来したので10週目の臓

器の培養を行う事が出来なかったからであり，同

期血中耐性株免疫群では2匹結核死を見たのみで

あった事から老えて10週迄耐性株の免疫効果が勝 れていたであろうと思われる。 脾 58 19

果は第2表に示す様に攻撃2週後，5週後に於け

る免疫効果は耐性株の方が旧株よりすぐれている

と考えられるが10週後になると逆になり特に肺

0．1rng当りの集落数は耐性株に於けるより遙かに 少なかった。

第2表 INAH耐性BCGの抗原性 マウス2

免疫BCG 10×106v．u．皮下

R−BCG工．3×106v．u．皮下 攻撃H37Rv 3×10fiv．u．2週後静脈

1集落数（臓器0．1mg当）

、攻撃卸 鋤・ 画・・週

マウ・N・．r・12 ・ 2 ・ 2

第3表INAH耐性BCGの抗原性 マウス3

免疫BCO1．1×105v．u．皮下

BCG−R 9．6×105v．u．皮下 攻撃H： 7R▽1．7×106v．u．4週後静脈 集 蕗二 数 （臓器＝0．1mg当）

攻撃後12

週 5 週 マウスNo． 1 ／ 1 2 而手 性 株 肺 150 83．7 ［ 9n．．3 1 141．6

B

C

G

対 照 耐 性 株

脾135・3168

7．gl’ i，．一， 肺 十 十 十十十 柑・

脾 430［99．3 ＋

r

195 肺 十十 寺十÷ 暦十

酬・δ・i…

十 十十

肺・・1・・＋1＋｛＋＋1…

脾・6・・「・6・ラ・7を1・9「司・・

ピ■壁・・1’・8坦＋！72い凹

・圏・gl・8・・1・4．・1・…2・・…

対 照

剛…1＋睡・刑死死

脾95｝・㌧｝・5gj22・1死．L・E一．． 第三回実験では耐性株免疫菌数が原株より多い 揚合であって即ち県立1．1×105v．u．に対して耐

性株は9．6×105vu．で免疫を行い，免疫4週後

H37Rvを1．7×106v．u．尾静脈に接種して攻撃を

行った。その結果は第3表に示す様に攻繋2週

後，5週後の臓器の定量培養の結果は明らかに耐

性株免疫群に於て集落数が少く特に5週後の所見

第四回実験では原株と耐性株の回数が同じか叉 は耐性株が少し少い位免疫を行った吐合，大量の

攻撃菌に対してどの様な効果を示すかを検討し

た。攻撃は免疫3週後にH：37Rvを4．1×1e6v．Ud 又は4．5×10Gvu．尾静脈より接種して行った。免

第4表 INAH耐性BCGの抗原性 マウス4

免疫BCGl。8×106v．u．皮下

BCG−R 1．8×106v．u，皮下 攻撃Htl 7 Rv 4．1×106v．u．3週後静脈

集落数（臓器0・1mg当）

雇後1・

週 5

週110

！ 週

・ウ・N・巨1・IL・

肺・2・・L・3・・336司・・廿

2 1 2 耐 性 株

B

c

G

対 照 脾 6．8 肺 15．6 P 48．7） 39．31 34．61 ＋ 4．4−P ×x F＋＋ 1 ＋＋“ i＋ 1 ＋’i’

脾・・1＼＼瞬1・・r・殉・b14

肺 脾

・鼠・＋ 司＋＋予＋＋什

2f．5111g．61 ss．611／ ＋ 1 2s．si io．3 一 533 一

4・2 疫忌数は原意ではし8×106v・u・及び5．3×106v・u であり，耐性株に於ては1．8×106v．u．及び3．6× 106v．u．である。結果は第4表，第5表に示す様

に攻撃2週後，5週後では耐性株の方がやや勝れ

た免疫効果を示しているが，7週で同程度となり

10週では旧株の方がやや勝れている様に思われ

る。

第5表INAH耐性BCGの抗原性 マウス5

免疫BCG5．3×10“v・u・皮下 BCG−R 3．6×106v．u．皮下 攻繋H37Rv 4．5×106v．u．3週後静脈 集 落 数 （野川0．1mg当）

攻撃後［・

週 5 週 7 週

’…N・・巨

2 1 2 1 2

馨齢淵9i一：諜ド。鴛

B

C

G

対 照 肺・7・・1・2・・1・・骨［・・8・3195野 脾32．632・336．・1・2・・・…5・・61 月置 53．3 26．0 十｝卜 十十十 十 十

脾＋＋1・tL・33S・・陣皇1．．・・6

以上はBCGとそのINAH耐性株の免疫実験で

あっだが次に他の種の耐性株の免疫効果に就て述 べる。 5−pyridyl−1，3，4−oxadiazoline−2−one耐性B 第6表 5−Pyridy］一1，3，4−oxadiazoline−2−one

耐性BCGの抗原性 マウス

免疫BCG2．1×loe’v．u．皮下 R・BCG U．6×106v．u．皮下 攻撃H3TRv17．1×10Gv．u．3週後静脈 CGの抗原性，免疫回数は受株2．1×106v．u．，耐 性株0．6×106v．u．で耐性株は受株の約％である。 攻撃は免疫3週後H37Rvの17．1×106v．u．を尾静

脈より接種して行った。その結果は第6表に示す

様に攻撃後2週目，5週目の臓器定量培養に於て

耐性株は原株に匹敵する免疫効果を示している。 Isonicotinyl−4−hydroxybenzol hydrazone而寸 性BCGの抗原性，免疫菌数は原株6．1×ユ06v．u．， 耐性株3．4×106v．u．で耐性株は原株の約1／2であ る。攻撃は：免疫3週後H37Rvの1．7×106v．u．を

尾静脈より接種して行った。その結果は第7表に

示す様に攻撃2週後，5週後迄は耐性株は原株と

同程度の免疫効果を示したが7週後では肺，二二

に原株が勝れた効果を示している。 第7表 Isonicotiny1−4−hydroxybenzol

hydrozone耐性BCGの抗原性 マウス

免疫BCG6．1×106v．u．皮下 R−BCG 3．4×106v．u．皮下 攻撃H，1τRv 1．7×106v．u．3週後静脈 集 落 数 （臓器0．1mg当）

攻撃後 2

週 5 週 7 週 マ・・No・1・ 2 1 2 1 2 耐 性 株

B

C

G

対 照

肺1・5・・1 …＋＋＋

脾56・142 24・3…34・39・3」15・6

肺「・21・・85・・＋・837・・

kes 1 16． 31 11． 3i 13． 61 32． 61 s _{6． 3} 集落 数 （臓器0．1mg当） 攻 撃 後 2 週 5 週 マウスNo． 1 2 1 1 1 2 236 十十午 十十 7S．61 31．11 98

肺641・8．5畑田＋＋＋÷＋＋＋

脾．1．＋［＋＋H・7・・緬・

耐 性 株

B

c

G

肺 173

脾 76

肺「336

99 十 350 脾 4s． 6 ［ 67 i’ 19 21 対 照 川廿 _柵 十十 1・F一 且卑 十 390 126 総括及び老按

SM耐性BCGで曾て平野，長田12）がモルモ

ットに就て行った実験及び，平野，中印 福永5）

がINAH耐性牛酸菌でマウスに就て行った実験に

比べると今回私の行った INAH耐性BCGの実験

の成績は前二者の口合の様な著明な抗原性の差を 認める事は出来なかった。しかしこれは実験動物 の種類の相異及び菌株の相異によるものであると 思われる。従来マウスは結核の免疫には不適当で あると考えられていたが大量の菌を静脈内より感 染させれば短期開内に結核症を起す事が分ってよ

り9）実験に用いられ，マウスを以てするBCGの

研究も行われる様になった。即ちマウスを以てす 一534一

43

るBCGの研究でSiebenmann5）はBCGlmgを

マウス皮下に接種し42日後に人型結核菌H：b・ 7Rv O． 5mgで尾静脈より攻撃したところ，攻撃33日目 では免疫群の生存率100％であり対照群は66。6％ であったと云う。叉石原6）も同じくマウスを以て

するBCGの研究の論丈でマウスではBCG接種

後20∼30日頃結核菌重感染に対して免疫が獲得さ れ．免疫効果の比．較の基．準として死亡日数の中央 値，臓器の定量培養及び組織的検索を以てするの が望ましいと述べている。又佐藤7）は同一菌種を 接種した場合でも肺，肝，脾内生菌数の動態曲線を みると臓器の異なるに従って夫々異った曲線を示 すから菌力の程度を関係ずけるには2臓器以上の 動態の相互関係をみる事が必要であるとのべてい

る。私はマウスを用いて抗結核剤耐性BCGの種

々の菌量で免疫を行いBCGとの免疫効果を比較

したのであるが，効果の判定には肺，脾の肉眼的 所見及び定量培養の成績を以てし，死亡日数の中 央値，体重減少曲線等は参老程度とした。その結

果は前述の如くINAH耐性B C Gは免疫乱数が原

株に比して非常に少い揚合でも攻撃5週迄は原株

と同程度の免疫効果を示し，：免疫品数が多い揚合 は原株以上の免疫力を持っているが，10週になる と耐性株の免疫菌数の多い場合を除いて原株の方

が勝れた成績を示している。結核の免疫特にBC

Gの免疫能に出てはいろんな人により検討が加え られ攻撃方法（菌株，菌量，経路，免疫後攻撃迄 の期間等），免疫方法（菌量，経路，回数），動物

の種類により所見は必ずしも一定ではないがBC

Gがある程度の免疫能を与える事は明らかであ

る。小森8）は免疫菌数が多ければ免疫力が強いと 述べているが私の実験の場合の様に耐性株は原株 の約ソ1。の菌数であるにも拘らず原話と同程度の 免疫能を示している事は興味ある事と思われる。 しかしそれが長く続かず攻撃5週目位迄なのはな ぜであろうか。この点に就ては今後の研究にまた なければならない。 結 論

1． BCGの玉NAH耐性株を用いてマウスに就

て免疫実験を行い，耐性株は免疫菌数が原株の約 1／10の場合でも攻撃．5週迄は原株と同程度の免疫 能を有する成績をえた。

2。 BCGのINAH耐性株は原株より非常に多

量を免疫に用いれば原株より以上の免疫能を有す ると思われる。

3． BCGのINAH誘導体及びoxadiazoline

化合物に対する耐性株の免疫能は原株と同程度と 思われる。 （以上は第29回日本細菌学会で発表したものである。） 終りに終始御懇篤なる御指導と御校閲を贈った平野 憲正教授及び種々御助言を頂いた中西清子助教授に厚 く御礼申し上げます。 女 献 1）平野憲正，長田富香：日本細菌学雑誌，8，337 （昭28） 2）平野憲正，長田冨書：口本細菌学雑誌，8，743 （昭28） 3）平野憲正，申西清子，門守慶子：第六回日本細 菌学会誌東支部例会（昭29）

！1／／） ffobby， G．k， kencert， wtF． and Auerba，cbe， O．：Am． Rev． rA’”uberc． 70， 527 （1954・）

5） Siehermm，ftnn， ￠．（le．：J． of ltnmudp．ol． 67， 1’37

（IC一 51）

6）石原定次；結核，説，22（欝56） 7） 佐藤蕊行：結核，30，455（1955） 8）小森武彦：結核，31，6（1956）

9） Pierce， C．， Dubos， R．」． and lwaiddlebroeEg，

G．： 」． Exp． Med． 86， 159 （1947）