タバ コモザイクウイルスに対す る トマ ト品種 の抵 抗性 (第 7 報 )

タバ コモザイクウイルスに対す る トマ ト品種 の抵 抗性 (第 7 報 )

TM V蛋 白に よ る抵 抗 性 誘 導 , と くに

トマ ト菓 表 皮 膜 面 の組 織 化 学 ♯ 平井篤造 ･真野良平 ･塩 尻富 久美…

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] 5年10月31E同関西部会

) 7 J.apan l t

pan 4 5

･本報告 の要 旨は昭和5

本研究 の一部 は昭和5年度 文部 省科学研究

･億 学科植 物病理学研究室 ( Ptah loog ab F.,acult r rci luture,nki i gashi kosa )に よった｡

yL yo Ag Ki Unv..Hi a57 8

3 0 6 5

(山 口市 )において講演発表 Lた.

年 6月10日日本植物桶耳学 会大全 (札幌 市 )お よび昭和5 (一般 C)(課題番号5

)

= 第14Lr3･(91糾日

)

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近 畿 入学 農J t部紀 要

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^{トマ ト品種}

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に 対 して罷 病 性 の ト7 ド晶 椎 福

寿 2

号 (

F2

)と, 抵 抗性 の瑞 光 (

K)

を用い 1 緒

蛋札

核酸 , 多糖 類 な どの高 分 子物 質 が

,

柚 物 の た . これ ら品種 の種 [‑は 坂 田植 苗 か ら購 入 した.

ウ イ ル ス抵 抗 性 を誘 導 す る こ とにつ い ては, す で に ウイ ル ス タバ コモザ イ クウ イJLス

r TMV)

の 多数 の 報 告 が あ る. た とえば . タバ コモザ イ クウ イ 普 通 系統 (OM )を使 用 した. 二の ウ イJLスは本 学

で タバ コ上 で継 代 保 存 中 で あ る.

ル ス

L TMV)

蛋 白の 導 入に よ ‑'て

Ni t c o i a nagu l ‑ i nos a

t

葉上 の

TMV

に よ る局 部病 斑 数 か 減 少 す 実験 方 法

TMV

の 接種 法

で述 べ た とお りで, トマ トは 殺 菌 バー一三クラ イ トマ トの 育 成 お よび すべ て前 る 1). また

Tih t rco h i e cum r os e um

か J〕と り出

した 多糖 頬 に よ っ て,

N .

^{報 8})

性 が 誘 導 され た 2㌧ さ らに酵 母

RNA

の 注 射 に よ っ トLで 台 成 し, お お むね 本 葉 5‑ 6枚 の 首 を使 用 し

l

ga uc a

で

TMV

抵 抗

/

て,

N

因子 を もつ タバ コ葉 で

TMV

局 部病 斑 数 が た .TMVの接 椎 はO･2

gml

の カー ボ ラ ン ダム加 用

) 5o

定

光 温 器 内 に納 め た.

RNA

は 試験 植 物 か ら とっ た もの は 無効 で, それ と

対 照 の 無 処 理 葉 よ り も激 減 した 3. 二の ば あ い供 試 摩 擦 接 種 で, 接 相 接 は トマ トを2 C .30,0()lxc71陽

TMV

の 定 量 法 化学 定 量 に よ り, 柴 汁 液 を ク ロ ロ ホ ル ム と振 っ て,

水

層 に きf=ウ イ/レス を()2.5飽 は 関 連 の 少 か

､RNA (f or eg i n RNA

)が 有効 で

あ る とい う 4'. 同 じよ うな抵 抗 性 の 誘 導 は 合成 2本

和 に な る よ う硫 酸 ア ム モ 二 ウ ム を加 え てお と し, こ

鎖 RNA

で あ る,

P l o

られ 5', また ポ リア ク リ′レ酸 な どの

P l o

‑

y I y C

に よ って も得

れ を260nmの 波 長 での 吸 光 度 か ら測 定 した. 最 終 的

l y

O

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に よ

っ て も可 能 で あ る ^6･7) に は ウ イル ス量 を

TMVmgg /

トマ ト牛 車 と して 表 わ Lか しこれ らの報 TE,のす べ て は. ウ イル ス接 椎 葉1 Lた. その 詳細 は 前報 9)で述 べ た.

に局 部 病斑を生 ず る, い わ ゆ る局部 感 染 系 に つ い て

TMV

蛋 白 の 分 離 法 酢 酸 法 に よっ た 8'. す な な され た. したが っ てウ イル ス と宿 生植 物 との 組 合 わ ち酢酸 で

TMV

核 酸 を分 解 して分 離 L, 得 られ た せ は抵 抗 的 で あ り, 抵 抗 性 組 合せ で さ らに抵 抗 性が

TMV 蛋白 ( TMVI P)

を とか し,黄 後 に超 遠 心 に よ

19. /

誘 導 され た こ とに な る. また抵 抗 性 が 誘 導 きれ たか って 不純 な

TMV粒

[‑ OT で あ

O 8 2 . 0 8

を除 い た. そ の純 度 はOD2

‑,た. また OD2 ‑ 1 の と き, ど うか の判 定 は, 接 種 葉 に 生ず る局 部病 床 数 を数 え )250‑

て な され た. 一一一万, 接 種 葉 に病 斑 を作 らな い, い わ ゆ る全 身感 染 系 の ウ イル ス ･宿 生 植 物 の 組 合せ では,

/

TMV

P 呈 1

m ml g

と して計 算 した.

ゲ ル 電 気 泳 動 法 用いた

TMV

I)の分 子

S D S

‑

高 分子 物 質 に よ る抵 抗 性 誘 導 の 報 告 は な い. 量 を測定 す るたれ SDSェゲル電 気泳動 を用 い た .完 わ れ わ れ は さ きに, 抵 抗 性 と罷 病 性 の トマ ト品 棺 6 ()〔

b i s u un

全 な ウ イ ル ス粒 子 の 蛋 白外 皮 の分 子量 は3 ×1〜で を剛 ､,

TMV

蛋 白の 1‑ 8ppm 叫 氏濃度 処 理 で, あ るが , それ が

t

に 分か れ る とす る と,1コ と くに 抵 抗 性 品椎 に お い て抵 抗 性 の 誘 導 が 起 こ る こ

( mo me) no r

の分 子 量 は 175,0 と を, トマ ト体 内 の ウ イル ス量の 化 学 定 量 か ら証 明 そ こで 用 い た

TMV P

か, どの程 度 の 大 き さで あ

t Sb i u un

の ()で あ る.

0 Lた 8). 今 回 は

TMV

蛋 rL1の 濃 度 を上

げ

,]‑〕 OO

ppmを使 用 して実 験 Lた.また そ の 作 用機 作 につ い SDS‑ポ 1)ア クリル ア ミ ドゲ ル電 気 泳動 の方 法 は林 るか を知 ろ う と した.

て も

,TMV

蛋 白の トマ ト体 内, と くに葉 の表 皮 膜 面 ‑ の と りこみ , な らび に 膜 面 の 二三 酵 素 系 その他

L

0

%,

･大場 に 準硝 した1㌧ 多 くの ば あ い 7%ゲル を用 い たが , 6 5% な ど も試 み た. ゲ JLえの 添 加 液 は

%

TMV P

を20

Fl(

の 活性 につ い て, 組 織 化学 的 検 索 を行 った. 本報 で ()･2

4 0

FQ )/ゲ ル 1本 で, SDS は これ らの実 験 結 果に つ い て述 べ る. に よ る分 解 は50Co

DS分 解 を行 な わ れ ‑もの (二の ば あ い に は ゲ ル 内 で

2h

rs 行 な っ た. 対 象 と して

S

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j

液 か ら もSTSを除 い た ) を用 い た. 8

mA/

実 験 材 料 約 泳動 し, 泳動 後 ア ミ ドブ ラ ッ クで加 熱染

11 実 験 材 料 お よ び 実 験 方 法 で

hr s

25. 2

1 JI村す る ト7 ト品相 の批 抗伴 (第 7報 ) ()r.う 半片 ･i冊 (･' L, TlLll｡j:クノ､コモザ イ クr7イ′L7

負 (沸騰招 ノ帖 l

l hr

)Lた. その 後 70/o酢酸 て電 気 学 ), セ JLラ‑ ゼ (分 子量4()0.00, from

Tih rco ̲

脱 色

し,

これ を

東

洋 科学 デ ジ タル ･デ ン シ トノー一夕 derma, 東京 化 成 ).オボア /しブ ミン(分 子量450.00, rIつMTTtC )lj3 にか け (旧620で定 量 LtL.:

タ‑ m Eg , キ シダ)

分 1'呈決 定 の t l )t L二 い た用 ,既知 分 JL̀量の 蛋 rlLは ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ (PO)活性 測 定 法 .

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し ‑

WooD a ^{BARBARAの 方法 11}㌧二準 じ,その 詳細 は 荊 報 121‑

d n 3 f･呈130.00,

次 の と1日 で あ る. チ トクロム (分

ma)･ ミオ グロ ビ ン (分

ig 7･述 べ た. cす TLわ. ら FI LT lに示 しf=よ う from Ho e He ,S

7･糾0, Equnie Sk lteealMu t

ar rs

3 O.n(G) 遠 沈 卜 に, 岨 酵 素 液 と してトマ ト鷲汁液 の

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g el ), ぺ 1 シ ン (分 子 量350.00.関 東化

J I

) ( コ

清 を 用い, を基 質 として II 2存在 卜に お

OW RY

i l guaaco

け る 1分 間 に酸 化 され る量 を, 円本 分光 デ ジ タル分 2) を用 い,4

T ' L

( VI)FJC‑ 2()nm

光光 度 計 で cT[)]A光 度 で測 定 し′∴ 圭/=租 酵 素 液 中 の 蛋 白 量 を

L fea

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法】)(Fl,lに 明 記 )で 測定 し, ア ル (γル ) ブ ミンの検 量曲 線 (FlL,J 2)か ら蛋 白 F mlを求 dw

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め た. 結 果 は OD4 mT mz

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ATP I 活 性 測 に 準 じ, MLr2十で活 性 化 さjLる ATP を測定 ア デ ノシ ン三 ホ ス フ ァタ ーゼ

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S 川 MOMURAの 方

定 法 K ASAMO

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Lた .す な わちFIT二日二示 す よ うに,糊酵 素 液 と Lて 0

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高 速 遠 心 の 沈 殿 部 を

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Mg2+(MgC1)を添加 あ る い は 無 添加 の ば あい に, igma)の di dsoium 塩 であ る.

‑ em

ty d iens i lca t p 0nm

0 5 t

a ATPか ら分 離 さ れ る 無 機 りん醸 (Pi)の 量 を高 橋 の 'で定 量 L,結 姐ま ｡U8

6 方法ユ て 表 わ した.

i t roen /

｡

｡ mgp と し P

( dase i

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0 1 / 重量の FITCを,1 0

0 1 / )

0 8 9 近 畿大学農学部紀要 1

4 0 1

4g) ( Leaves

第1号 (

ち %の TMV Pに, 1

加 え,15oCで3.5hrsス ター ラー で帽 拝 した.

‑ 4

02,

l v o

5 (pH 9.

透 析 チ ューブに入れ,上 記バ ッファー を外液 として 3日間透 析 を くりか え した. 3日後 には透 析外液 は

5 1 00.

2g

,

3g

過飽和 にな るまで とかす )

‑

2 これに HgC1を

2

3 g

,脱 イオ ン水 1ml)で lmin染 色 した.

E N O T S R BU )

ase N

R 検 出法

tOH 40ml, 蛍光光 度計 で F520が

0mL'n 液 の FITC量は10ー3ppm以下 であ った. また得 た標 1

3

00. 以下 とな り,この ときの外

)お よび B励起 (励 起 フィル ター DM 500,吸収 フ

‑RFLLB )を用 いた.主 として用 い た励起方法 識 蛋 白には蛍光光度計 で測定 す る と, 蛋 白量の

%の FITCが結合 していた.

0

mg

‑ 2 2 h ly t p h dy roxy (

i

trs me )ami (H7 0〝77 5

3 (BH

はU励 起 (励起 フ ィル ターDM 400,吸収 フ ィル タ‑

L4

ta d t

eco esma ,EDを 検 出 した.す なわ ちギル ソン液

0 t

% EOHまたは1

ウム飽和 )で固定 したの ち, 水洗 し,次の反応液 に 0

7

0 0

ィル ター 053)であ る.対物 レンズ×4以上 には油 浸系 を用 いた.

Fran ek E

% 0 3 (

2 t

0

n で 8‑16hrsトマ ト菓 片 を固定 した.過剰 の HgC1 を除 くため3% E OHで洗 ったの ち,葉 の裏側 表 皮

lue i t yocan 6

(p nb 450ml, 9% H2SO45

0 2

･

9

1 'の 方法 に準 じ,

m1 2‑ 3滴

0 2 2

0

1% MgC1

全量 を脱 イオン水 で50〝77に フ ィルア ップ )2に 5min浸漬, さらに水

) 0 . 0

2 , をは ぎとり オ クタニ ン溶液

2 g hane 2% C C1a

, t no

AMP Slma) O･1〟 トリス (

me )バ ッフ ァー Branst

) b P

( CoNO3

洗後, 1%硫 化 ア ンモニ ウム液 に 2min浸漬 し, 水 洗 して検鏡 した.

e1ml, dinImZ fotrsi‑maleaetbuffer suspen

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FITCの溶媒 は0.5〟 炭酸 ナ トリウム,重炭酸 ナ ト リウムの バ ッフ ァ ー )であ る. これ を

蛍光顕微鏡観察 オ リンパ ス落 射 蛍 光 顕 微 鏡

エ ク トデスマ ーク検 出法 18'ぉ よび

酢酸 10ml,40%ホルマ リン 5ml, しゅ う醸

% KI液 に10‑15min,さ らに硫 酸‑ど

これ を水 洗の ち,検鏡 した.

RNA分解#兼 (

の方法21)に準指 した. す なわ ち トマ ト葉裏側 表皮 を

%中性 ホルマ リン (炭酸 カル シ 370Cで 1昼夜浸漬 した.

反応液 :アデ ノシン5′りん酸 (5‑アデニル酸,

水 洗後, 1%

組織化 学的検 索 ATP分解 酔兼

ma)を用 いた.す なわ

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｡ T S R

ase N 7

%中性 ホルマ リンで国定 し, 水洗後,次 の反応液 に3uCで 3JlrJ浸漬 した, これ を R と同 じ方法

0 i 1

nuorescen g

,

)

t ocyana i tso

作製法に準 じた1.蛍光色 素 としては hi e (FITC Si

ase

(ATP )検 出法 BU 蛍光色素裸徹 TMV蛋 白の作 製法 蛍光 抗体 の の方法21)に準指 した.すなわ ち トマ ト葉裏側表皮 を

7

7

7 平井 ･真野･塩 尻 :タバ コモザ イ クウ イル スに対 す る トマ ト品種 の抵 抗性 (第 7鞭 ) で. 遊 離 した Ptを発 色 させ た. 和 に とか した塩 酸 ベ ン ジヂ ン

反 応 液 :ATP (disodium 反応 液 B :2 %ニ トロプ ル シ ッ ドナ トリ5

5 0 1

塩 ,Sigma) 152

mg

Mパ ル ピ タ‑ ルナ トリウム バ ッ7 7‑

(pH94) . 20

m1

01 .

_{ウム 24}

m[

oH202 1

m

1

/ 0 15.

8M

C1

脱 イオ ン水 2

01 .

Ca 1

0ml

/ 5

〃

25.

) 5

n

p

013 ,,

反 応液

C :9

% ニ トロプ ル シ ッ ドナ トリ

0ml

S

‑ c d

〟

酢酸 バ ッフ ァ‑ ( H5

C ,

c

B

P iero

∩1 .

A,

に それ ぞれ約 1

0mi

浸漬 . 反 応 di Aci hiff(FAS) 2

0ml

全 量 を脱 イオ ン水 で

1 0 0m

lに フ ィル ア ップ

3

_ウム

.

0)

ペ ル オ キ シ ダ ーゼ (po)検 出法 次 の 3つ の

方 法 を併 用 した. 材 料 はすべ て トマ ト茎 また は葉柄 トマ

の横 断切 片 で, 1%中性 ホル マ リンで 固定 した. そ れ ぞれ の 反応 液 に 事 温 (約 2 C )5o で 反応 の 見 られ る

0 ト葉裏 面表 皮 を 05.%過 よ う素酸

に 5

mi n

浸漬 後, 水 洗 し, シ ッフ 試薬 (塩 基性 フ (HIO4･2H20) まで 浸潰 した.

g

脱 イオ ン水 200

ml

, 1N

1 ,

0 2

HC

1

脱 色 後 活性 炭 で精

ml

, クシ ン1

g,

1) V EECHの 方法22 反 応 液 : mo

0) in h l rp o .

‑ ) N

‑

〟

2

5 00 .

異性 重亜 硫 酸 ナ トリウム

oethanesuト ^{製す る )に}

1mi 0 n

, これ を亜 硫 酸 水, さ らに脱 イオ 5

ml

ン水 で洗擬 して, 検 鏡 した.

の検 出法 2 ca (MES

飽 和塩 酸 ベ ン ジヂ ン f ion cid ,pfH

%

01 .

0 1.

ml

_{G]ycosldases 1･23‑24' トマ ト葉 の裏}

H202 面 表皮 を用 い, 1%0 中性 ホ ルマ リンで 固定 ･水 洗 後,

Tablelに示 す 諸種 の gycosl idases )

3

2) ジア ミノベ ン ジヂ ン(DAB )法2 の 反 応 を試 み

l t zoou n

‑a

た. ア ゾ色 素 に よる染 色はすべ て 同時 カ ップ リン グ t GBC (0 mioa 反応 液 :

5 0

H7 p (

m

〝 トリス･HClバ ッフ ァー 1 h d t

era y roc

0

m1

inet hl d

b i no enz )

6 .

0

g

t Garne Fas

3 dimi Sima )を5

mg

/1

ml

反 応

(東京 化 成 )

5mg

^{液 中に加 え た.}

a

3

′‑

,

に よ り, ̲

t, a iazonui d de ene,

i

or m s

l

l b in

l tec

2,

/

0 1.

〝 7

_{レクチ ン ( Ta e2}

S)の 方法24) に あ る 6種 の植 物 起 原 レ クチ ン を用 いた.トマ ト(F ZK)葉 を, 1)

1% H202 ト F什C処理法

3)西 尾 (STRAU

反応 液 A :

01 1M

酢酸 バ ッフ ァ‑( H50)に飽p . TMV接 種, 2)

1 0 0押 m

TMV一

s

hrs der f i ea ep t

p o

01 .

( daseso lycosi c

isoceth in

t t nsra d f d roceuresor e

s Enzyme dase

l T ba

･lgucosi β

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〟 c H5

2 ion I b tncu a

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‑ t trae

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0 .

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‑

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0

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‑

‑ h lo t h

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･lgucuroni β

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‑ h 2 t ‑o

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) 5 .

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5 . i lssoye bt t

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mg

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i

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‑

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‑ D

‑ ) karai

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m

Lofs o wt aet ),santd p

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H5

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C 5

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d s t t eraure, e

f bt t o su srae

f bt tsu srae d

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mg

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)10

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07

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m

L fo uffr.

g40

m

uffr̲ er. b J fo

! in d

J f lo soven at,d g40

〝

uff

6 0

1 第1号

P摩擦, 3)脱 イオ ン水摩擦 の 3区に分 け, 各処理 を と り出 し菓裏 表皮 をは ぎと り, りん酸 バ ッ7 7‑

4

近 畿大学農学部 紀要 (1980)

の 直後8

7‑,pll7.0に とかす )に 1日間浸漬 した. これ pm

0p レ クチ ン溶液 (01.M りん醸 バ ッ7 で よ く洗源 のの ち,1%中性 ホルマ リン で固定 した.

水 洗 の ち,蛍光顕微鏡 で観察 した.主 として

B

励 起 0

2 Le cti lblnsaeedwithfluoresceinisot le

T ba hiocyanate(FITC)usedinthisexperiment

Sources .

0 l. 000, 2 1

mo Mo wt

30. / les )

FⅠmoTlCel tecin 1)Ar hacihs ypogaea(Peanut

)GL

3)P Ki yb

5)P ms

dne ( ax hoseousvl ugL icrs

i ycnem

' tsu

2 (S boy ean) 06.7 1100,00 4)PhyotLocc meoo rL'COZrO(P ko eweedmitogen) 28. 320,00

Vum ' T t

a (Ga npred

All mp

(前述 )を用 い,時 にU励起 Bによ る TMVIP lesw

sa ereobtaneidf m S maUSAro ig ,

04. 振 と う ･遠沈後上 清 を とる. これに

よ う硫安 を加 え,遠 沈 して沈殿 を集め,脱 イオ ン水

(前述 )を用 いた. 飽和 にな る

Rho ard Tline の標 識 法 Fi に示 した よ うであ る.す なわ ち TMV P と 炭軽 ナ トリウムバ ッフ ァ‑の混合液 に,予め色素 に

4 .

g に とか した17).で きた結合物 は610nmに 最高蛍光

n h do a 度 があ り (R mi

PC1 5

を作用 させ,生 成物 をアセ トン抽 出 した もの 重量比 に して TM VP

e B そtL自 身は575nm ), 3

1 0 00. ) 7

c 5%の色素が結合

を滴下す る. これ を振 とう後 活 性炭 を加 え, さらに していた.

r , hro 05 C. ,g ( e

Dy maGema )ny +

TMV‑P(0.2%)3ml P 5(Cl lg) 十

0.5M Na2CO 3,NaHCO l itpmesxlien

) S a t t orarw dh d tey rae (

t aceone

m

dwihC O4

ith

3

9 ff )67円J bu er(pH .5

d f lbl

roceuresoraein ‑ t h do a neB 4 P gTMVPwihr mi

f 乃 5′

n 3 hk f sae or

d adbyd

0mi

) O0. b t aou (

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｢■ー

n f 1or d ow e b

caro

t aer Ve i t c

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np T3

5mi

n9mJ dw da hk

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a

0mi

乃g

′

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d04s d a

rpm 0 0 90, S fugeat

2 ) i t cenr (NH4 O4

i l issove

ays P iirecp aett

d

l if ayssor Di 3d

0 0 00, 2 1 25.

) ean

0 0 40, 5 2

02. )

ea

l g j F

7 10 (第 7報 )

平井 ･ ,真･野

･

1‑kJ尻 :タバ コモザ イ クウ イルスに対す る トマ ト品種 の抵抗性

Ht 実験 結 果 _{pを吸収 させ た.}

2

日後には脱 イオ ン水 に き りか え, さ らに 4日間 お き,す なわ ち接種 後 6日目にサ ンプ TMV蛋 白によ る トマ ト品種 の抵抗性 誘串 リン グし, トマ ト葉 内の TMV量 を化学定 量 した.

本葉 4‑ 5枚程 度 の トマ トの TMV雁病性 品種 FZ 対照 区は脱 イオ ン水 を吸収 させ た. この間吸収 され お よび 同 抵 抗 性 品 種 ZKを, 各実 験 区 とも4‑ 6 _た TMV‑P量 は10,30,50,100ppm処理 区 で F2 2 7, 0F

Q/ g

トマ ト生重, ZKで

h t ter e

‑ l nocua

i t roen f trw. , /g

b sore Al Ab dp

g h do t h U ie ga b

i t roen

dTMVp yt me ivarsasb bore

lt u

f aysa te

i t ases 1±0

t t

asreae iterw

3±0

i exper

i Ton.

lt nocua

or. 10. 08. 06. 12.

d tan ar T ter f aysa

t nsan

Kr 7±0

o

1±0

MV p nw dfr2d MVi MVt ma d6d f3 me ds derr

it t essan

i Aon v.erageo i

t roe Z

inocualt T

4 .

4 9 2 7

5 8

0 .

.

hy988′

29. 1 8

6 4

1 .

39. 1 1 0

8 1

2 .

8 0 3

4 8

0 .

一991924′0.JhrBtJJJBpaOSq

d･

^HqldML

9 3, 2 0 3,

0 1 ,11 それ ぞれ

1,3,4 で それ ぞれ

8

704=･⁚‑△50

t･‑=●‑･‑‑‑･

⊥■

5() 100Ppm 0

3 10 C

1 78 lo

7 9 3 o幕

4±02. 2±0 52. 47. 40. 38. 45.

8±0 7±0 2±0

4 86 0

7 6 .

3 .

2 2 .

0 6 .

/I:,.

60

10))

リ一

y i t roe ) 1(O

nofTMV p nb

4

I,1

｢うが い処 理｣ ( pl ,loppmの TMV

t ae o

3TMVconcenrt taionintmaoco t le

Tba

ppm 0Zxの定

uOU%

h it Z arey, t are t l h ib o t t ecsor :suscept 2 T F i

Err ea MVintma

ev K:

mme f te i 0 5 本用 いた. TMV‑OM接 種 後 25oC,3_■

2s

0 0 ,

F

S

0

io i fva bsorpt

) t

lt u

l 3

oc 0 0 5, 0 3, 1 ,

C

ivars t C lu

le ib t uscep

i laeyt d

.tJh.IJSrBuJAML

i 5g.

F

4F

Q/ g

トマ ト生垂 であ った･

実験 は 3回 くりか え した. これ らの結果 をま とめ 温器 内に納 め, 直ちに

参照 )に よ り 2日間

f

); ays C io o te

t t oncenra

f b bsore

ay

ion pe, rcen o unrtf t teae h

asure h to

(P i t roen

t t oncenra

a ga

t onen h t

T i l :rces it t it T ressan varey.

ion lle i lt nocua

e U ime d on te c n o MV p )wasa d fr2d . TMV c tw sme d 6d sa ri

dc MV c d(

h d Fo . t l ca he h io

t nbytec mi me

ays. b

b bsore t

onen

‑

′

= i l ranges

‑

opent :TMVPc ta df∫2d

･木綿糸の一端をTMVPを入れ/ト瓶のなかに入 附二さL二み,後に釘はぬきとる .

れ,二の小瓶を‥‑ミクライトのなかに埋める.木綿糸の他の端は針をもって.トマトの地際部の茎の中心

TMVPはた細管現簸て.糸をつたい,トマト茎内の維管束内に注入されることになる.

まず TMV接種 に よ 8

10 _第1

る と Table3お よび Flg.5の よ うで あ る.す TMV蛋 白によ る トマ ト品種 の酵素活性誘導 4号 (1980)

近畿大学農学部紀要

なわ ち F2 ZKともTMV , 50

p

^{ペルオキシダーゼ(OI}

処理 に よ り,対 照区 よ りウイル ス量が減少 した.

リ般 に浪度が高 くな るにつ れ て, 減少度が増加 した

る影響 を試験 した.す なわ ち前記 と同様の トマ ト苗 を用

い ,

^{TMV接 種後}6日目に全葉 をす りつぶ し,

pm

P ,

l4e b か え したが, それ らの平均値 と標準誤差 を Ta ,

に示 した.

0 6 あ った. ZKで は TMV接種 に よって対 照区の1

% と PO活性 が増加 した.一万, F2では接種 に よ 0

りPO活性 はむ しろ低下 し, 対照区の8 %程度 とな った.

1 0 0ppm 0 , 05 , 03 ,

次に TMV‑ 様 の

(

N ㌧T

)0!tqtZ

‑pを 2日間吸収 させ た.次 で,脱 イオ ン水に き りか A, さらに 4日間置 いてサ ン701)ン グ した.すべ て 接種 は行 わない健 全植物 であ る. この とき吸収 され

d d tan ar t

nsan i xper ウイル ス量は対照 区の4 %,つ ま り阻害度 は6%に

達 した. F2は ZKに比 して減少度が少 なかった.

ion.Averag lt

nocua 0

te f ay

O a yw sd mi d6d sa rTMV ine eof3e me ds err

t eer 0

a iivt t c or. P

thTMV

/mg ni t t proen OD/m' ivarsnoci uaeltdwi lt

u

10 79 1

15.

3. 0% io R ta

0 10 99.

2 9

10 7

0%

± 8 . 6.

3 0

0

1 2±7

ty i iV t c Oa

76. 3 ± i 6g.

F O)actiivtyintmaoco t (P

dase i erox

P io R ta

の各処理 で, トマ ト生重 ,

pm

0 67, 93, 9 1,

,10

p

7

融

0 0 5,

to o i P iivt daseact i

erox y(O)ntma 0 3,

た TMVIP量は 1

)by it t ressan , K Z le, ib t suscep 2,

ion lt nocua

/ J g

68, 75,

04, 7F

g

トマ ト生重 で

hanges C T

inp MVi

F ivar t l cu s(

/ tngt. 2士9 OD/m'

0 . rrw. 4.

10 i l dt onnocuae N

2 F

57. 57. 6 ± 1 N ionnocuael dt

K Z

処理 では減少度がやや 回復 した.最 も が

,1 0 0 p pm

の Pの10,30

‑

ion Inocualt Vars

i t C lu

4 P le Tba

i 6g.

F

Ju

!ZLL

J

寸BuL.:GO

15,

± 21. 8 Inocuael dt le

ib t suscep

u!aJ oJ d

PO活性 を測定 した.対照区には脱 イオ ン水 (カ‑

減 少度の 大 きか ったのは ZKの

5 0ppm

処理 区 で, ポ ランダム添加 ) をこす りつ け た.実験 は 3回 くり

す なわ ち対 照 区では F2> ZKと PO活性 が大 で

P処 理 の 影 響 を 実 験 した. 前記 と同

｢うが い処理 ｣ で

1

の TMV

F2では それ ぞれ zKでは それ ぞれ1 あ った.

ays ne t eer iivt t c P : lt nocua

l ou e te f a

Opnc mn O a yd mi d6d ri ion,averageof3expeirmenst

I: l dt nocuae,

non f t percen o o

P ors

i l :rces lle

i F

; d tan ar inocuael dt

and s d err .N:n n i dc O, inocuae.l dt

Od

9 1 0

(第 7報 )

. d e frwr.

86. i t pro/goen Abs bt Hg

88. 1‑

ft aysa er d6d

.tJh .JJ

EJBTlpa

4･‑‑‑△ qdd･A

qJO S

M1 hdo t i a he b i t roen

dTMVp yt Ug me ivarsasb bore

lt u

57. 3 8

16

72.. 3 . 6 1 403

5

平井 ･

真

塩 尻 :タバ コモザ イ クウ イル スに 対 す る トマ ト品椎 の抵 抗 性

e5P (PO)actiivtyintmaoco t

l ,

･

id erox ase

P

l T ba

100ppm 0

5 0 3

IO

t o i t roen P

T t cv das i erox

io d t t nro uc h

Increase b

o

oo

d

C

MVp

s in p e a iity(O)in tmaoc ytei

io R ta

0 1 2 1 l1､4oo鞄 oD/mL/mg

.0 . 'ni t proen

5± 61, 28 28 6

57 3.

46±..± 8

03 0 1 15

te i t ases iivt t c ion.P

o lt nocua d tan ar T ter t nsan

f aysa

MV p nw st dfr2d MV i Oa yw ma 3experime ds derrr

.

o t reae i Aon v.erageor

a i t roe h ienocualt T

t

5 5

8 1 1 . 8.

8 7± 7 8

6 1 56.

Oactiivty

8 0 1 8 . 6.

4 6 3± 4 10

5± 7.4 4.

8 10

4 .. 5 . 45 6 ..

9 7 . 9

18

27 5±± 949 0± 7 0

8 0 1 15

P i R toa

o鞄 3 3 1 1 l14o oD/mL

9±1 22±± 6

5 7

90,.6 0 frw,

. 7.

49.. 1 04 1 11 17

4 . /g 'tn.

92t21土93 2± 9

01.. 0 , 5.. 0.

7 12 15 0

5 it t ressan

MV

10ppm )t n P

‑ T t(rTeame ivars

t C lu

Conr3t0ol F2

0 5 le ib t suscep

0 Conr3tol K

Z

!atOJSzLJu7UdLuL冒J0

士

) it t ressan , K l Ze, ib 2,suscept (F

S i Lva lt u

･ ig F

hdo t i a h i t roe

nofTMV p n byteUg me

il :rces ays. or lt F l aysaer ue. b bsore

‑ T f O

dc MVPa d f 2d

her t ur ne dteer

O t tnen as i l ranges aysan

ope o

d t reae bsorpe a

f t percen ono ,

‑ O T

P

MVPw sa dfr2d dPO w mi df 4d nt (C); nt こC

7

日 日 近 畿 入学 農学 部紀 要

実験 は 3回 くりか え した.結 果 をTと再le 5とFIL,

第1号 日LU)

とカー ボ ラ ン ダムの摩擦 とした.接種1日後 に と り jd

4

Se とl ,

ZK

と も TMV‑Pの吸 出 し. 脱 イオ ン水で洗源 L. 全案 の ATP を測

定 した.

7に示 した.す なわ ち f

収 に よって, 対 照区 よ りも PO活性 が増 加 した. い 2

l1

:わら FJ

ATPとlSeの活性 が か な り高 くf った.

8

に示 Lた. す tJ r)

2 Tと

実験 は 回 くりか え Lた.結 果 を

.

Lr

l Ibe6,ト l

ずれ も TMV P量が増 加す るに Lたが って, PO活 性 の増加 度が大 であ った. F2と ZKの 間 では

‑

2 J: /

zItとい 二接 種 に よ り 一般 に f ()

P , 活性 の増加 度 に大 きな差は なか った.

(ATP e )as

>z

tと活性 が 高か った.

次 に TMVIP吸 収 の 影 響 を 試 験 した.今 回は ｢ ATP分解 酵兼 ます TMV接

I

種 に よる影 響 を実 験 した.トマ ト品 種 F2

ZK

の

全集 に接種 後, 葉片 を 5mm角 に切 りと り, これ を うが い処理 ｣では な く, 短期 間吸収 の効 果 をみ るた

.

,

0,

トマ ト品種 F2ZK の幼 苗の茎 を切 り, 切 口か らTMVIPの 1

0lx下で脱 イオ ン水上 で培養 した. 各実 の葉 片 を用 い, 対照区は脱 イオ ン水

4g

め, 次 の 方法 に よった.

C,30,0 5o 2

0 0 0 5 ). ( 3 ,1 験 区 とも約

t to f eaveso

6 ATPaseactiivtyofdeatcehdl maoc le

T ba ultivarsnoci uaeltdwihTMV t

ion Inocualt ivars

t C lu

0 1 2

12. N ionnocuael dt

2 F

ty ilv Paseact AT

OD/grrw.t. R taio proenti 8 m OD/ g

08.

io R ta

30 10 5 6

6

̲ 4

t ns. i exper 7 2 5

a ion, lt nocua

3 64.

T ter

0

%

0

%

f aysa

Ⅰnocuael dt

ne

AT as eedtrmi d6d MVi Menof2 me le

ib t suscep

Pasew

0 10 6

06. 0

0 1 6

08, i l dt

onnocuae

K

N

Z

I

ib 2,suscept ion

⁚hU5

ppm を吸収 させ た. 対照 区は脱 イオ ン水 を吸収 さ

R,

, l ih 1S

IS 0 30, せ た.2 C,5o

プ りン グ して, 葉 内の ATPこeを測定 Lた.

実 験 は 3回 くりか え した.結 果 をTと e7 FI 9に示 した. す な わ ち F2で は TMV‑Pの 各処 理 区 と も対照 区 とATPとe活 性 に 有 意 差 は な か っ

OIx下 で 1日置 き, 7=た らにサ ン

た. 一 万,

0 O

Z

‑ S

｡e

K

では TMV Pの 各処理 区 と も対照 区 よ り,ATP か 増 加 Lた. 蛋 白の濃 度が1 ‑5

Se Ei

ATP が増 加 した 区 ではか え って増加 度 が に ぶ っ7= と増加 す るにつ れ て,

o ppm が, loPPm

以上 の TMVJ )処 坪 に よ る, トマ トの 体 内の

清作 の 各変化 を‑･覧 Se

と

r

IM V竜,P()活性, ATPi

N N l

0

F蛸.1の よ うであ る. すなわ ち TMV Pの 各濃度 の処理 に よ り, トマ ト体 内の TMV量 とす る と,

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は無処理 区 に比べ て減 少 した.一 方, P0の 活性 は

｢2.ZK両品 種 と も rrMV‑fJ処 理 に よ って増 加 ir

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したが, ATPEISe活性 は ZKにおい てのみ処理 に よ り増加 し, ｢2では無処理 区 と同 じ水準 であ った.

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F

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1 11 平井 ･真野 ･塩 尻 :タバ コモザ イ クウイル スに対す るトマ ト品種 の抵抗性 (第 7報 )

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7 7 9 9 1

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±06

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F

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‑

SDS

では , 供就 TMV蛋 白の

SD

S ゲル電気泳動 (分子量測定 ) RF

まず 7%ゲル を用 いて TMV‑Pを泳動 した. +

0 (原点吸収 積分値 を10と 1

08. に大 きな吸収

‑

im 0

08. に 2つ のバ ン ドが あ った.

(d ‑

‑ 0

‑ 50, 2 04. Lた とき1 RF‑ 6と RF

前者 は分子 量 3 0で TMV Pの二量体 7% )が 出現 した.‑一万, g.

1

SDS

と

‑SDS

に分 け て泳動 した ところ, Fi 1に示す よ うに,

+ SDS

では原点 の吸収 以 外に ,

2 1

1 _{近 畿 大学 農 ,羊郎 紀 要} 第14号･(醐 ())

D6 l

0 2 ) (

+SDS

S Sn

‑

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1

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O n mO 両 者 の 量 比 は, 原

点

喚 収 の積 分 値 を1

) と考 え られ た . 後 者 は merで あ る.

er

nとす る と,そ mer)の 方 が no

6 2

れ ぞ れ5 %,9 %で, 後 者 ( mo

や や 多 か っ た . 6% ゲル を用 い て実 験 を く りか え 0 t ae 80. ( 0 1.0 (分 + 量6 0) で 4量体 と考 え られ る もの , そ の 他 そ れ よ り も更 に

Pl Lた とこ ろ, ‑SDSで RIT‑

大 きい 蛋 白 と考 え られ る もの な どが 出現 した 1, 3参 照 ).

次 に

c y.C t

以 下 実 験 方法 の 項 で述 べ た既 知 分 mO‑

子 量 の 蛋 白 を用 い て, 6%ゲ ル で分 子 量 の 検 定 線 を TMV‑P の Lr 12). そ の 結 果 ,

求 め た

70. no

(Fl

merは 分 子一畳1 00付 近 と考 え られ た.

( )1 .

以 上 の よ うに 供 試 TMV Pは SDSで分 解 す る

MW (×10 4)

‑ aren

S a 0, 2

7 6 5 4 3 2 1

no

と, 例 外 な しに 分 子 量 1 mo

た . しか し SDSを添 加せ す に 泳 動 す る と, 作 製 し 0

0

70, の merを生 じ

1

･ ig

F 2 C ihg

llt h i eeecrop oress

l lecua T , h t cyocro i b

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eofmo rwe torp y6%SDSg

tC: meC MV in

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mo me､ あ る い は か な り dimerを含 む もの , と きに は 4量 体 か , さ らに高 分 た 試 料 に よ り, 大 部 分

i t roen T

: P

‑ MV p , lll ceuase i

epsn, i Pn e, p

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bu n.

Ovoal : o b:

My my :p CE: ,

Al mi

子 の 蛋 白 を含 む もの な どが 認 め られ た.

‑ ro

半井 ･冊 t卜 塩尻 :タバ コモザ イ クウ イ )レスに 対す る トマ ト品種 の批 抗性 (第 7報 ) 113

蛍 光 色 素 (FITC)標 識 TMV‑P の トマ ト体 内 へ の 導 入

トマ トの 茎 か らの 吸 収 蛍 光 色素 標 識 TMV P (nTC‑TMV‑P)の溶 液 を小瓶 に と り, これ に

トマ ト (F2,ZK )の 小 枝 (葉 5‑ 6校づ き, 根 な し ) をさLた け 1ateT･2参照 )･ これ を25oC,

3, 0 0 0

lx卜に 2Ej聞 置 き. の ち10% 中性 ホ ルマ リン で 固定 Lて, 茎 の構 ･縦 断切 片 を作 り, 蛍 光 顕微 鏡 で観 察 した. 二の と き トマ ト内 にrlA収 され た TMV

‑P凱

よ

0.0

7F Q/ da y/g

トマ ト生 垂 で あ ー‑た. , Pla L TtI . 4に R iJ る よ :, L )に, 茎の横 断切 片 で は遺 管 内部 に 大 き/i:蛍 光物 質 かつ まっ てい るの が 認 め られ た. また縦 断 の 切 片 では, 維 管 束 に そ って

光物 質 は維 管 束 系 畑 ナでは な く. そ オ‖二連 が る 某組 織 細 胞 内, と くに その 膜面 と思 わiLる とこ ろに も分 布 Lた (Pllite I.6,p ). ま た と きに は , 葉 の 表 皮細 蜘 和 二も存 在 Lた ( PlとIt〔JI, 7, 矢印 ).

トマ ト葉 表 皮 か らの 吸収 F什C‑TMV P 液 に

0. / 2gml

の カー ボ ラン ダム

(0 6

O メ ､Lシ ュ ) を' 加 えて , トフ 卜 ( F2.

7K )

の葉 の裏 側 表 皮 に こ す りつ け た. これ を脱 イオ ン水 に 1日間 浮 か べ , そ の 後裏 側 表皮 をは き とっ て, よ く水 洗 後 ホ ルマ リン で 国是 , 蛍 光 顕 微 鏡 で観 察 した. 対 照 は 脱 イオ ン水 とカー ボ ラ ン ダム を こす りつ けた.

その 結 果, plat

cl l

,1‑ 4に 見 らjLる よ うに, 蛍 光 は 1)葉 の 表皮 細 胞の 細 胞 の隅 (す み )や 細 胞 壁 に 治 った部 分 (1, 2矢印 ), お よび 2)核 (仁 を 含 む. 3, 4)に 認め 吊 した.前者 は細 胞 膜 賢 と考 え られ るの で, TMV‑Pは この 方法 で は 主 と して 表 皮細 胞 の 膜 質 お よび核 に導 入す る と考 え られ た . 組 織化 学的検 索

RNA分解 酵 素 (RNase) F汀C TMV P の トマ ト体 内へ の と りこしみ実験 で, 葉の 表 皮 細 胞,

‑

巨細 胞, 葉 柄 の 剥 離 捌 呂な どの 核 /＼ TMV Pが 専 人す る こ とか 観 察 され た. そ こで, 核 に 局 在 す る と い わjLる RNこSleにつ い て, 組 織 化 学 的検 索 を行 tEf

,

‑

〜た.

ト7 ト

晶植 l / 2

,

7 K

の tJ)取 葉 の裏面に

1(P m 0)P

T M V ‑ド (012

g/ ml

か ‑ボ ラ ン ダム 加 用 ) を こ す り/)(ナ

,lc

m fTj相 生の葉 片 をt)Jリ と り, そ の 裏 面 5 C , ))x卜で 1日 を脱 イオ ン 水に浸清 Lて,2 0 3.((〕(l

FEllTい た . 対照 は 脱 イオ ン水 と カーーホ ラ ン ダム で摩 擦 し7二. 二jLらcT)葉 I1‑か ら東面 表 皮 をは き と り,

l

U l'/a

I. マ リン で囲定 後 所定 の 反 応 を試 L lPJJJホ JL, Z+た .

そ の 結 果は , PlllteII, 7‑ 8に 見 らjLる よ う に, 黒 褐 色 の 反応 はすべ て細 胞 内 の核 に 出現 Lた.

核 の 着 色

程

度 か ら推 定 す る と､ 対照 葉 よ り も TMV 1

P処 理 集 の核 で, RN(,Se活 性 か 強 い よ うで あ

‑,た. しか L F2と ZKで は, 実 験 の 範囲 内 で は 着 色程 度 に差 は なか った. 二の こ とは, rrMV Pが 核 に と りこ ま出 る と同時 に, 核 に 局 在 す る RNase 'J)合 成 を誘 導 す る もの と考 え られ た.

ATP分 解 酵 素 (ATPase) 前の酵 素 誘 導 の項 で述 べ た よ うに, M FI2十に よ っ て 活 性 化 され る A′p sr aeをTMV接 樫 ト7 ト葉 片 で測定 Lた とこ ろ, 感 染 に よ り活性 は 高 ま った. ま た ′MV‑r Pの処 理 に よ って ZKでは 無処 理 区 よ り, ATPaseが増 加

Lた. そ こで ATPと1heの 細 胞 内 の 所 在 を知 るため , 前 項 と同 じよ うに, TMV‑P摩 擦 と対 照 の トマ ト 菓表 皮 につ い て実 験 した.

その結 果 , Plate II､5‑ 6にお い て 見 られ る よ うに, ATPとlSeの 細 抱 内所 在 は, 薬 の表 皮細 抱 の 捕 (す み )あ る いは細 胞壁 に沿 っ た部 分 に 見 られ. こ れ らは細 胞 膜 面 と 考え られ た. 試み に 1祝 野 中の 反 応 の現 われ る数 を調 べ た とこ ろ F2,ZKと も TMV

P

処 坪 の も の が ,無 処理区 i り 多か った. F2と ZKの 両 者閲で は拙 者 な 差 は なか ‑,た. す な わ ち, ATPとISeは トマ ト細 胞 膜 面に局在し, それ は TMV

P処理 で誘 導 され る こ とが 明 らか とな った.

ペ ル オ キ シ ダ ーゼ仲0) 酵 素 誘 導 の項 で述べ た よ うに, TMV接 種 トマ ト葉 の PO活 小畑 ま無接 桂 の もの よ り増加 し, また TMV P処 理 に よ っ て L, F2,ZK と い二増加 Lた. そ こで P()の組 織 内 の分 布 を知 ろ うと した.

トマ トの幼 峯の葉 に TMVを接椎 し

,

接 種 直後か ら 2Ll乱 TMV‑Pの

I O Oppm

液 を 茎の 切

L

｣か ら吸 収 させ た. 対 照 は接 相 接, 脱 イオ ン水 を吸 収 させ た.

次 で 基の横 断 切 11を作 り, 中件 ホ ルマ リンで 同定 後, PO 反応 を実 施 した.

実 験方法 の項 で述べ r=よ うに,

3

柚 の PO反応 を 併 用 Lた . まず VEECrlの 方 法 に よ る と, 茎 の 横断 初 )1‑で 反 応 陽性 (青色 )は, 表 皮 乳 内

乾 (no ed ‑ de r mi s)

,道管

部

乗組 削純 ,お よび帥 管 部 であ った.

DAI う

法 では維 管 束 が 褐 色 とな り, 道 管 某組 織 の青 色

反

^{応 と区別}しや す か った か, 反 応 の 強 さは弱 か っ た. これ に対 して 西 尾 (STRAUS)の 方法 では, 坐 い 二不安 定 なベ ンジ ヂ ン青 が ニ トロプ ル シ ドナ トリ ウム に よ ‑ノて キ レー トされ, 反 応 は 強 く安 定 で, 結 果は 良 好 で あ った. た だ この 万法 で は 切 片が よ ご虹 やす い のが 欠点 で あ っ た.

4

11 _第 1号 (

‑股 に師背部の 反応は

,TMVI P

の 処理 で無処理 のみ で染 色す る と,表 皮の発色度はい ち じる しくお 4 1980)

近畿大学農学部紀要

ち, 気孔

孔

辺細胞か僅か弱 い反応 をす るに 止まった.

の もの よ りは 強 く現 われ た

( Plt ae

3)し たが って前述 の

PO

活性 の測定か ら, 隈病性

F

,

.

2 l

ll, 1‑

配糖体 分解酵 素 (

gycos t i des )

実験方法 の

) t t , g ( lu da s e l t i ga cos ,

(I)

da s e l i guc os ,

項 で示 した

抵抗性

ZK

とも

,TMV P

処理 に よ り無処理 の もの

‑ T ( da s e V)

につ

i

n

･l guc os a

(Ⅲ)

, a c ey t l mi da s e

i c ur on

よ り

PO

活件 が高か った少な くとも一部 の原因は,

いて. 各反応 を調べ た.材料は

PAS

反応で使用 し 師管部の反応が

TMV P

に よって促進 または誘導 さ

れ た こ とに よるもの と考 え られ た. た もの と同 じである.

エク トデスマーク (

ED)

植物 の表皮細 胞壁

(I) (l l) 日1

日の反応 とも紫 ‑赤紫 であるが,接 種

‑

P

区,

TMV P

摩擦 区 とも

, AS

反応陽性部 と同 じ く どか らで きて いるが, 少な くともその一部が摩擦 な 表皮細胞の破壊部 お よび砂粒状 変性細 胞に反応が認

は ワ ックス, クテ クラ,ペ クチ ン, セ ルロー ス層 な ,

3‑ 5)

.一

万

,( Ⅳ) t ae t

ae

め られた (

Pl

に付 着 した維管束に強 い反応が現 われ

,(Pl

Ⅳ,

Ⅳ, は表 皮

どで破壊 され た とき,内部 の細胞の原形質が 外面 と 連絡す る管が EDである と考 え られている. それ ら

は

HgC1 2

の 還 元で コロイ ド状

Hg

が沈殿す るこ と ⁶⁾,その他 の部分 には 大 きな変化はなか った.

か ら,光学顕微鏡 で検 出 され る. EDの数 は植物の なお ここにい う砂粒状変性細 抱の本体 を明 らか に

Zn

す るため, 同 じ材料 でセル ロー ス反応26)

(

ど

,KI

16 を飽和 させ

0

ウイルスに対す る感受性 とよ く一致 し, ウ イルス粒 ^{C 12}5

2

17〝〟,これに

1

,脱 イオ ン水

子 の細胞へ の付 着す る部位 を代 表す る もの と考 え ら

0)

g

上滋 を使用 ) を施 Lた ところ, 一般 の表皮細胞 では れ た ^18･1912

‑

トマ ト品種

F K

を用 いて

,TMV P

摩擦 区 と

対照の脱 イオン水摩擦 区につ いて ED検 出 を試みた. 粒状変性細胞では,基質は無色 であった. そ こで こ

Pl

2 , Z t

ae

細胞壁 を除 いて細胞全体 に青色の反応が生 じた.砂

れは表皮のセル ロー ス膜が破れた もの ではないか と

I

II,

4 ‑ 5

にそのあ りさまを示 したが,

思 われ る.

loo

,

( F , 71.

試み に ED数 を数 える と 2蛋 白処理 区6

±

(177%),同対 照区388. ‰)

ZK

蛋 白処理 区 34. 1 89.

レクチ ン･FITC結合物 の反応 レ クチ ン

n

t

(

ec

4 1.

(l

lS) とは糖 蛋 白の一種 で,細胞膜面 の糖 蛋

乃2であった.す なわち両品種 とも

TMV P

処 白 と結 合す るため, その検 出に用 い られ る31 32)

99.

%), 同対照区2 ^土 5

0 2 ( 86.

± 13.

6 100%)個 /00.

理 に よって, ED数 は約倍数近 くに増加 した. 本報 では植物起債の レ クチ ン と蛍光色素 (FITC ) の結 合物 を周 い, レ クチ ンを導 入 した トマ ト葉表皮

)

の反応

016〝〃

細 胞内のその所在 を蛍光顕微鏡 で検 出 した.

des d i l i gycos

i c id pero

(

Ac

配糖体

実験 方法 の項 で述べ たよ うに

, TMV

接種

, TMV P ‑ )

AS

反応

は 多糖類 を過 よ う素酸 で酸 化 しアルデ ヒ ド基 を生 じ 摩擦, 脱 イオン水摩擦 の3区につ き実験 した.その

P

i

S h c f ft

この反応

させ , これ を

S h c f i

f 試薬 (塩 基性 フ クシンを還元 結果, 反応陽性 (蛍光 顕微鏡 の B励起 では黄色,

U

t Z ae

.

して無色化 した もの)で検 出す る方法 であ る. 励 起 では 白緑 色 ) を示 したのは,細 胞破壊部 の膜面 トマ トの F2

K

両品種 を用 い, 前述の よ うに接 の一部 と, 前述の砂粒状変性 細胞 (

Pl

Ⅳ

,7

,

‑

t

ae

8)であった. またその反応 は対照の脱 イオン水の 摩 擦 区に もか な り強 く現 われ

,(Pl

Ⅳ,1

‑

種 区

,TMV P

摩擦 区,対照の脱 イオン水寧操 区 に

分け,葉の裏側 表皮 で反応 を行 な った.その結果, 4)

一般 に表皮 の気孔孔辺細胞が赤色の陽性 反応 を示 し 接種 お よび

TMV P ‑

摩擦 区ではか え って反応が弱 ま た.按種 区,

TMV‑ P

摩擦 区では, そのほか表皮細 る傾 向が 見 られ た.

F2

と

ZK

の両 トマ ト品種 の間 胞の ところ どころに細 胞の破壊部が見 られ, この部 では, 反応の出方に本質的な差異は なか った.

レ クチ ンの種類 に よる反応の強 さにつ いては,別

.

I I I , t ae

(Pl 6)

また , その

周辺 に細胞 内が砂粒状 変性 を起 こ した ものが あ り, に定 量的に と り扱 ったの では ないが, 大体 の傾 向 と が 部 分 的 に 赤 愛 した

して, ナ ンキ ンマ ノ‑エ ン ドウニ>コム ギ‑インゲン

t

ae

(

Pl

7)

.この よ うな

PAS

陽性 の砂粒状変性細 胞は,接 > ダイ ズ‑ヤマ ゴボウの順序 に反応が強か った. こ これは細胞一面 に強 い陽性 を示 した IIl,

‑

種 区 と

TMV P

牽擦 区で見 られ,対照 区では弱 い砂

粒状変性 はあって も反応は現 われなか った. したが に対す る反応 にやや特 異性が あ るよ うであったが, って陽性細 胞の出現 は単 なる摩擦 の影響 ではない. この特 異性 は絶対 的 な ものでは なか った.つ ま り, の よ うに レ クチ ンの種類 に よ り, トマ ト菓表皮膜面

F2

と

ZK

間では反応 の出か たに大 きな差異はなか 全然反応の出ない レ クチ ンは供 試の範囲 では見出せ った. また過 よう素酸 で分解せず に,

S h c f i

f試薬 なか った.