IRUCAA@TDC : 口腔扁平上皮癌における第2・3・21番染色体上のヘテロ接合性消失の解析 予後不良因子の可能性
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(2) DlH，i~. I. IJ .] p n .S t o 叫. 口腔扇平上皮癌における第 2・3・2 1番染色体上の ヘテロ接合性消失の解析 一予後不良因子の可能性-. L o s so fh e t e r o z y g o s i t yonchromosomes2 ，3a nd2 1 i no r a ls quamousc e l lc a r c i n o m a -P o s s i b l yapoorp r o g n o s t i cf a c t o rピ ・. 勾 ￨. 本. 大. 鶴. 1 台 光信*. ~、じ.. 原. 孝. 里. 石 LI. 司. 柿. 本. = 口 1 : :. 主 . ， . i l l 主，. 片. A 居. 、. 朗. ヨ 井 三 ヲ 、. 子. 明. 寛 "i~. 上. 彦. NobuharuYAMAMOTO，TsukasaKUROIWA，Y o s h i d o uKAKIMOTO， MitsunobuOOTSURU*.A k i r aKATAKURA.A k i h i r oKANEKO* andT a k a h i k oSBIBABARA. A b s t r a c t L o s so fh e t e r o z y g o s i t y( LOB)i sc o r r e l a t e dw i t hi n a c t i v etumors u p p r e s s o rg e n e . Theaimo ft h i ss t u d ywas p and t o examine whetherLOBo nchromosomes2q，3 21qi sc o r r e l a t e dw i t hap o o rp r o g n o s t i cf a c t o ri no r a l s quamous c e l lc a r c i n o m a (OSC C ) . We a n a l y z e dc h r o pand2 1 qf o rLOBi n1 0 0p r i m a r yOSCCs mosomes2q，3 u s i n g 9 markers and c o n s t r u c t e d ad e l e t i o n map f o r t h e s e chromosome a r m s . S i g n i f i c a n t LOB (>20%) . 1%) o c c u r r e da ta l l e l e si nchromosomeb a n d sD2S1327 ( 30 2 3. 4%) a t3 p 2 5， and D21S369 a t2 q 3 2 3 5， D3S1007 ( .0%) a t2 1 q 1l . l . S i g n i f i c a n ts t a t i s t i c a lc o r r e l a t i o n ( 3l between t h ei n c i d e n c eo fLOB and c l i n i c a ls t a t u swas n o t e d .P o o rp r o g n o s e s( d e a t h s ) wereo b s e r v e di n1 2o f t h e1 0 0p a t i e n t si n v e s t i g a t e di nt h ep r e s e n ts t u d yand. LOBwaso b s e r v e dw i t hah ighf r e q u e n c yi n9o ft h e1 2 d e a dp a t i e n t s( 7 5 . 0 % ) . Thenumbera tmoret h a ntwo LOB l o c i was s i g n i f i c a n tw i t h ap o o rp r o g n o s i s( p= 0 . 0 3 9 0 ) . Thesef i n d i n g sd e m o n s t r a t et h a to r a lSCCe x h i b i t sg e n e t i ca l t e r a t i o n sa tm u l t i p l el o c iandt h a ta l l e l i c l o s sa tmoret h a nt h r e el o c a t i o n si si n d i c a t i v eo fap o o r p r o g n o s i s .T h i ss t u d yd e m o n s t r a t e dt h ep r o g n o s t i cs i g pand2 1 qf o ro r a lc a n c e rand n i f i c a n c eo fLOBa t2q，3 mayh e l pt oi d e n t i f yp a t i e n t swhos h o u l dr e c e i v emore . a g g r e s s l v et r e a t m e nt Keywords:L o s so fh e t e r o z y g o s i t y( LOB) (ヘテロ接 合性消失)， O r a ls quamous c e l lc a r c i n o m a( OSCC) ( 口 腔扇平上皮癌)， P o o rp r o g n o s t i cf a c t o r (予後不良因子)， Chromosomed e l e t i o n (染色体欠失)， Tumors u p p r e s s o r gene (癌抑制遺伝子) [ R e c e i v e dS e p .3 ，2 0 0 7，AcceptedJ a n .1 5，2 0 0 8 J. 東京歯科大学口腔外科学講座(主任:柴原孝彦教授) *東海大学医学部外科学系口腔外科学(主任:金子明寛教授) De ρa r t m e n to fO r a landM a x i l l o f a c i a lS u r g e r y ，To かoD e n t a lC o l l e g e( Ch ie f :P r o . fT aka h i k oSHIBAHARA) 埼 D φ e ρ α f 付t m e n tザ QfOm 匂 αlSu ， 培 "g e 1 η ツ，T ok 初α a iU 1 幻 l I v 辺 e e r 叫 P 〔平成 1 凹9年 9月 3日 受付付 平成 2 0年 1月 1 5日受理〕 ，.
(3) 2 5 4. 山本，黒岩，他. 緒. 口科誌. 2 0 0 8年. で，同一患者の腫蕩に染色体欠失がある場合，対立遺伝子 E. 第 2番 ， 3番 ， 2 1番染色体では食道癌1.2) 肺癌 3-6) 胃. 領域の一方のみが， PCRによって増幅されるため，腫蕩 DNAでは 1本のバンドのみが検出され LOBとして判定. 癌 7.8) 甲状腺癌 9) 乳癌 10) 卵巣癌 11.12) 腎細胞癌 13) な. される O. ど多くの悪性腫蕩において高頻度のヘテロ接合性消失. われわれは，これまで，口腔扇平上皮癌の発生過程につ 1番 19.20) 染 色 体 上 の 欠 失 状 いて第 2番 14-16) 3番 17.18) 2. (LOB:L o s so fB e t e r o z y g o s i t y ) およびマイクロサテライ MSI:M i c r o s a t e l l i t eI n s t a b il i ty ) といった対 ト不安定性 ( 立遺伝子不均衡が高頻度に認められることがすでに報告さ れている D. LOB解 析 は 分 子 遺 伝 学 的 解 析 法 の 一種 で あ り ， 腫 蕩 組織における特異的な染色体の欠失領域を検索することに. 況を LOB法を用いてアレル不均衡の解析を行ってきた 。. 0例の口腔肩平上皮癌患者から 2 qで 2か所， その結果， 4 3 pで 3か所， 2 1 qで 4か所に共通欠失領域が存在するこ と を 明 ら か に し 口 腔 扇 平 上 皮癌の発生に重要な役割を果 たしている癌抑制遺伝子座位を同定してきた 。. q，3 p，2 1 q 今回われわれは，さらに症例 数を増や し 2. よって，その近傍に癌抑制遺伝子が存在することが示唆さ れ，未知癌抑制遺伝子を同定するための第一段階と考えら. 領域の LOBの発現と患者の 予後との相関 について特に. れている O 本解析は， PCR ( p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ) を利用した C (シトシン) A (アデニン)の 2塩基の繰り. 0 0例の原発腫蕩組織を対象に 着目 し，口腔扇平上皮癌 1 LOB解析を行い，臨床的 ・病理組織学的特性とこれらの. 返し配列をマイクロサテライト解析することが一般的であ. 染色体欠失との関連について検討した 。. るO ヒトゲノム中には，. C (シトシン)と A(アデニン). 対象症例お よび方法. あるいは G (グアニン)と T (チミン)の繰り返し配列. 0万か所存在する O この繰り返しの回数は，か が 5から 1. l.対象. 染色体が父親由来であるか母. 1 9 9 8年から 2 0 0 5年の 8年間に東京歯科大学千葉病院口. 親由来であるかを識別するのに有用である O 例えば，父. 腔外科(症例 1~ 4 0 ) および東海大学医学部附属病院口. 親由来の染色体では CAが X 回繰り返され，一方，母親. 腔外科(症例 4 1~ 1 0 0 ) を受診 し 口 腔 扇 平 上 皮 癌 と 診. 由来の染色体では Y 回繰り返されている場合，この領域. 0 0名の患者を対象とし 断され，試料採取が可能であった 1. を PCRにより増幅すると. た(表1)0 全症例とも患者本人および患者家族に本研究. なりの個人差を示しており. X と Yの回数が異なっていれ. ば ， 2本のバンドとして認識される O これをヘテロ接合性. の同意を得ている O また，本研究は両大学の倫理委員会の. ( h e t e r o z y g o s i t y ) と呼び，逆に X と Y が同じであれば 1 本のバンドとして認識され，ホモ接合性 ( h o m o z y g o s i t y ). 承認を得たのち行っている O 検体は手術時(全症例とも化 学療法・放射線療法等の術前治療は加わっていない)ま. と呼ばれる O ホモ接合性を示す場合，たとえ同一患者の腫. 0 0検体，正常細胞 たは生検時に採取した原発腫蕩組織 1. 蕩において染色体欠失があったとしても認識できないため. は同一患者の血液を用いた 。切除組織を 2つに分け，一. n o ti n f o r m a t i v eケースとして分類される O ヘテロ接合性. 方は腫蕩組織から正常組織を慎重に切り落とし直ちに凍. 表 l 患 者 背景 性別. 男 女. 年齢. 範囲 平均. 部位. 3 6~ 8 5歳 6 3 . 7歳. 頬粘膜. 4 8例 4 2例 4例 3例 3例. T 1 T2 T3 T4. 1 9例 4 5例 1 4例 2 2例. 舌 歯肉 口底 軟口蓋. T. 5 6例 4 4例. NO N 1 N2. 6 0例 1 3例 2 7例. I I I I I IV. 1 8例 2 8例 1 4例 4 0例. S t a g e. pN. 予後. ( +) ( -). 2 8例. 良好. 8 8例 1 2例. 不良 予後観察期間. 2 2~ 1 0 8か月. 7 2例.
(4) 5 7 巻 3号. 口腔癌の 表. 2 q.3 p.2 1 qにおける LOH解 析. 2 5 5. 2 使用したマイクロサテライト・マーカー S i z eo fPCR p r o d u c t s( b p ). S e q u e n c eo fp r i m e r s. M a r k e r s. L o c a t i o n s. D 2 S 1 3 2 7. 2 q 3 2 3 5. 1 6 2. 5 1 -TGACCAGGGGAAGATACTGA3 1 5 / -TGAATTGAATAATAACACTCTGTGC-31. D 2 S 2 0 6. 2 q 3 6. 1 2 3 1 5 1. 5 / -TTAAAAATTAAGT AGGCTTTTGGTT-31 5 / -GTCCTCATGTGTTTATGCTGT-31. D 3 S 1 0 0 7. 3 p 2 5. D 3 S 9 6 6. 3 p 21 .3. 1 4 7. 5 / -TACCTCCTCAC TGTTTCATATTAG-31 5 / -CACATAGT ATGTCT . c t GGCTAACAG 31. D 3 S 1 0 7 9. 3 p 1 3. 1 3 6. 5 / -GGGAGATAGG TAGTATCATCT-31 5 / -ATCTACCATTAAGGCAACCTG-31. D 2 1 S 3 6 9. . 1 2 1 q 11. 8 1. 1 7 3 2 0 1. 5 / -GAAGGGTCACTTGAGTCTAGGAG-3 1 5 /-ATTTGCCACCATGCCTGGCTAG-31. ~-ATGGCCTTGGC TAA ATGCTG~I. 5 / -CTAAGCTGATATGGTAAGTACA-31. D 2 1 S 2 3 6. . 1 2 1 q 11. 1 0 4 1 2 8. 5 1 一C CCAAATAAAAAAGAGAACAG-31 5 / -CTAAAGAGGACTTCAGAGTAAGG-31. D 2 1 S 1 1. 2 1 q 2 1. 1 7 2 2 6 4. 5 / -GTGAGTCAATTCCCCAAG-31 AGTCAATGTTCTCC-31 5 / -GTTGTATT. D 2 1 S 1 2 5 4. 1 2 1 q 2 2.. 2 6 2 2 7 0. 5 1 AAATACTGATGATCCTTAATTTTGGG-3 1 5 1 -GGTGGCTGAGCGAGAC-31. 0. 結し， DNA抽 出 を 行 う ま で -8 0Cに保存した O もう一方 は， 10%ホ ル マ リ ン で 固 定 し 国 際 腫 蕩 分類に従い病理診 断 を 行 っ た 21 ) 。 臨床病理学的 S t a g e評価は， UICCTNM S t a g e評価システムに従った 22)。. 3 . PCRおよびマイクロサテライト解析法 第 2・3・2 1番 染 色 体 上 の マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト 領 域 の う ち ， わ れ わ れ の こ れ ま で の 研 究 か ら 得 ら れ た LOHが 高 頻 度 に 認 め ら れ る 9か所のマイク ロ サ テ ラ イ ト ・ マ ー. 2.DNAの抽出法. D 2 S 1 3 2 7， D2S206， D3S1007， D3S966， D3S1079， カー (. 患者は全て口腔扇平上皮癌であることを組織学的に同定. D21S369， D21S236， D21S11， D21S1254:I n v i t r o g e n， C a r l s b a d，CA) を用いた(表 2 )0PCR反応液には， 2 5 0 n g の DNAを 鋳 型 と し ， 各 2 0pmolの プ ラ イ マ ー ， 10mM . 0mMMgClz・2 . OmM T r i s H C l( pH8 . 3 ) ・50mMKCl.3 P e r k i n E l m e r， dNTP.0 . 5 u n i tTaqDNAポ リ メ ラ ー ゼ ( Waltham， MA) が 含 ま れ た 全量 2 0 μ lの反応液中で行っ 0 4Cで 5分 間 行 い そ の た。 PCRの条件は，プレヒートを 9 後，変性を 9 4Cで 1分間，アニーリングを 5 3Cで 1分間， 2Cで 1分 間 と し こ れ を 1サイクルとして， 3 5 伸長を 7 サイクルを G eneAmpPCRSystem9 7 0 0( P e r k inElmer) を用いて増幅し，最後に 7 2Cで 1 0分間伸長反応を行った 。 PCR産 物 は ， ホ ル ム ア ミ ド 染 料 混 合 液 (95%ホルムアミ A .0 . 0 5% ブ ロ ム フ ェ ノ ー ル ・ ブ ル ー ・ ド ・ 20mMEDT 0 0 . 0 5 %キシレンシアノール)で希釈した後， 9 8Cで 5分間 熱 変 性 を 行 い ， そ の 後 冷 却 し 6%尿素ーホルムアミドーポリ. し， DNA抽出のための腫蕩検体は 80%以上腫蕩で構成さ れていることを確認した 。採取された腫蕩組織を切除直後 に液体窒素に保存しておき. 新鮮凍結標本から加工・調整. した 。 ま ず ， 組 織 を 液 体窒 素 下 で 粉 砕 した 。 次にゲノム. DNAを TNESb u f f e r (10mMT r i s H C l( p H 8 . 0 )・150mM O m MEDTA .0 . 1% SDS) 1 0 0 0 μ l中に p r o t e i n a s eK Na C l.l 0 )を3 0 μ i加 え 撹 枠 ・ 分 解 し ， 5 0Cの 温 浴 槽 で ( 1 0 0 μ g/ml 一晩消化した。 フェノール・クロロホルム抽出法により. DNAを抽出・精製したのちエタノール沈殿法により洗浄・ s p e c t r o濃 縮 した 。 抽 出 し た DNAの 濃 度 を 分 光 光 度 計 ( h a r m a c i aB i o t e c h，Sweden) p h o t o m e t e r:GeneQuantI I，P に よ っ て 測 定 し ， -8 0Cで 凍 結 保 存 し た D 一 方 ， 対 応 r .Gen す る 正 常 DNAは末梢静脈血白血球より採取し， D TLE@ (タカラノ fイオ(株)， 滋 賀 ) を 用 い て DNAの 抽 出を行った O 各 DNAサンプルを 5 0 n g l μ lの 濃 度 に 調 整 し p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n )を こ れ を 鋳 型 と し PCR法 ( 0. 用いて増幅した 。. 0. 0. 0. 0. アクリルアミド・ゲル上で 3W で 2~3 時間電気泳動し. 銀染色 (DNAS i l v e r S t a i n i n gK i t:AmershamP h a r m a c i a B i o t e c hABSweden) によりバンドを染色した 。 LOHま.
(5) 2 5 6. 山本，黒岩， 他 表. 口科誌. 2 0 0 8年. 32 q， 3 P， 2 1 qの LOHの発現頻度. C h r o m o s o m a l l o c a t i o n. L o c u ss y m b o l. LOH (%) ( L O H / i n f o r m a t i v ec a s e s ). 2 q 3 2 3 5 2 q 3 6 3 p 2 5 3 p 21 .3 3 p 1 3 2 1 q l l. 1 1 2 1 q l l. 2 1 q 2 1 1 2 1 q 2 2.. D 2 S 1 3 2 7 D 2 S 2 0 6 D 3 S 1 0 0 7 D 3 S 9 6 6 D 3 S 1 0 7 9 D 2 1 S 3 6 9 D 2 1 S 2 3 6 D 2 1 S 1 1 D 2 1 S 1 2 5 4. 1% ( 2 8/ 9 3) 3 0.. たは MSIを認めた各症例の結果に再現性があることを確. CRマイクロサテライト分析を行った 。 認するため，再度 P 4 . ヘテロ接合性消失 (LOB) およびマイクロサテライ I)の評価法 ト不安定性 (MS 得られたマイクロサテライトバンドをコンビュ ー ター. 1 4.3% ( 1 2 / 8 4 ) 23.4% ( 1 2 / 9 4 ) 7.7% ( 6 1 7 8 ) 7 . 9 % ( 7 / 8 9 ) .0% ( 1 8 / 5 8 ) 31 1 5 . 6 %( 1 4 /9 0 ) 1 4 . 6 %( 1 3 / 8 9 ) 1 9.7% ( 1 4 / 7 l ). 2 1 q l l.1領域 ( D 2 1 S 2 3 6 )で 1 5. 6%，2 1 q 21領域 ( D 2 1 S 1 1 ) で1 4 . 6%，2 1 q 2 2.1領域 ( D 2 1 S 12 5 4 )で 1 9 . 7 %であった(表 3 )02q，3 p，2 1 qにおける LOBおよび MSIの代表例を示 す(図 2 )。. 2 . 臨床病理学的分析. 上にスキャンし NIBi mage ( v e r s i o n1 .6 2 ) によって，そ. 臨床病理学的因子と LOBおよび MSIの存在 に関して検. の強度を数値化した。腫蕩 DNAにおけるシグナル強度を. 討 した結果，部位.S t a g e分類・所属 リンパ節転移いず、 れ. 対応する正常 DNAと 比 較 し シ グ ナ ル 強 度 が 50%以下. に関しても，臨床的病理的指標に関係な く LOBが認めら. を LOBと判定した。対応する正常サンプルにおいて観察. れた。 F i s h e rの直接確率法により， LOBならびに MSIと. されなかったバンドが腫蕩サンプルにおいて観察された場. 臨床病理学的相関について統計的有意差 を検討した結果，. 合，または，対応する正常サンプルと比べて腫蕩サンプル. 統計的有意差 は認められなか った。. のバンドがシフトした場合を MSIと判定した 。. 2 予後と LOBの関係について検討ーした結 果，死亡例 1 症例中 9例 ( 7 5. 0%)に LOBが認められた。LOBの多重. 5 . 統計学的分析. F i s h e rの直接確率法を用いて LOBならびに MSIの頻. 欠失 ( 2か所以上の欠失)と死亡例との聞に統計的有意. 度と臨床病理学的特性(発生部位・ TNM分類等) との関. 差 が認められた 。死亡例の方が予後 良好例に比べ有 意 に. . 0 5 係について統計的有意差を分析した 。許容水準は ρく 0. LOBが高頻度であった (ρ=0 . 0 3 9 0 )( 表4 )0. とした。. 考 察 結 果. 1 . LOBおよび MSIの評価 口腔扇平上皮癌患者 1 0 0例から. 口腔癌を含む多くの悪性腫蕩 は遺伝子変化の 蓄積 の結果 発病する遺伝子病の一つであり，さらに，それら遺伝子変 腫蕩組織と同一患者. 化のバリエーションが腫蕩の悪性度に関係することが明ら. 0 0組，合計 2 0 0個のサンプルを採 の血液(正常 DNA) 1. かにされつつある O 正常細胞の癌化には癌遺伝子の活性化. q，3 p，2 1 q上にマップされた 9種類のマイクロ 取し， 2. と癌抑制遺伝子の機能喪失が必要である O ことに，未知癌. サテライト・マーカーを用いて LOBおよび MSIの有無. 抑制遺伝子の同定・単離は多くの施設で行われており，現. 0 0症例中 6 3例 ( 6 3 . 0%)において検索し を検討した。 1. 0を超える癌抑制遺伝子が発見されている 23-30。それ 在2. た領域中に少なくとも lか所の遺伝子座位に LOBが認め. らのうちほとんどが，癌染色体上での LOBの集中する共. 0 0症例中 2 5例 ( 2 5 . 0 % ) に認められた 。 られた 。 MSIは 1 1 0 0例の欠失地図を作成した結果，染色体 2q，3 p，2 1 q上 にそれぞれ 1か所共通欠失領域と思われる LOBの発現が )0LOBの 高率にみられる遺伝子座位が同定された(図 1 q 3 2 3 5領域の D2S1327 発 現 頻 度 が 高 い 遺伝子座位は， 2 ( 3 0. 1% ) ， 3 p 2 5領域の D3S1007 ( 2 3.4%)，2 1 q l l.1領域の D21S369 ( 31 . 0%) であった(表 3 )0その他の領域の LOB の発現頻度は， 2 q 3 6領域 ( D 2 S 2 0 6 )で1 4 . 3 %，3 p 21 .3領 D 3 S 9 6 6 ) で7 . 7% ， 3 p 1 3領 域 ( D 3 S 1 0 7 9 ) で7 . 9% ， 域 (. 通欠失領域の同定を経てクローニングされたものである O 東京歯科大学口腔外科学講座では，口腔癌における既知癌 抑制遺伝子異常と全染色体上における LOBの検索を行っ. q，3 p，2 1 q上に口腔癌に重要 な役割 ており，その結果，2 を果たしている癌抑制遺伝子と共通欠失領域の部位を明ら かにしてきた 14-20)。 しかし. 口腔癌の予後 に関連するマー. カーは未だ同定されていない。そこで，本研究は，症例数 を増やし東海大学医学部附属病院口腔外科の研究結果と あわせて LOBの発現と患者の予後との関連について特に.
(6) 可憐 ωh w 口需鼠3 N ρ・ω ・ 。. NZFハ廿与が円、()同事当. : L OH 仁二コ. I n f or mative. 仁E口 :Mi cr osatelIi t ei n stabiIi ty 図 1 2 q， 3p， 2 1 qにおける欠失地図. じ亙コ. Not i nfor mative. N印、可. _.
(7) 2 5 8. 山本， 黒岩， 他. 2 0 0 8年. 口科誌. L O H 7 N T. L O H 9. N T. z. . .. M ト. D 2 1 S 3 6 9 ど ・. 除1. ー ・. 園 .. ー ・. ー D 2 1 S 2 3 6. D 2 S 2 0 6 包旦. ~. 2 旦. vy. Uv. N o r m alD N A T u m o rD N A. +L. Y --. u C U 4 1・匂. L'nu. 牛. . ， ， 月. nucu gbnH. u y '. 凸U. 7ιρu. n u. r+L. ・ l. OU--EV'. t+LO. e -ふ し L I l 凸 U 免u MI l l u v m川 み 戸. 1 9uqaz--. F 十. 'h川. L l+. よ. nu--'nHnu. n u q u m川 nu ll nur E・ curtnu. SC. I N F N I. ELMMB1MN. L O H M S I. 図 2 LOHお よ び MSIを認めた代表例 LOHの矢印は正常 ( N ) に対 して消 失あるいはシグナル強度が 50%以上減弱 した腫蕩 ( T ) バン ドを 示す。 MSIの矢印は正常 ( N ) と比べて観察されなかったバンドが腫蕩 ( T ) バンドにおいて観察された場合， ンドを示す。. または，正常 ( N ) と比べてシフトした腫蕩 ( T )バ. 表 4 LOH数と臨床病理学的指標との関係. LOH数 予後. 症例数. 不良 良好. ρ{ 直. LOH ( 三2 ). ) LOH(<1. 1 2 8 8. 8 3 1. 4 5 7. ρ=0 . 0 3 9 0. 4 8 4 2. 1 8 1 4. 3 0 2 8. ρ=0 . 4 2 4 8. 4 6 5 4. 1 5 2 4. 3 1 3 0. ρニ 0. 15 7 8. 2 8 7 2. 1 1 2 8. 1 7 4 4. ρ=0 . 5 7 3 1. 部位 舌 歯肉. S t a g e. 1+I I I I I+IV pN. ( +) (- ).
(8) 5 7 巻 3号. 口腔癌の 2q.3 p.21qにおける LOH解 析. 着目し ，2q， 3p，21q上の異常状況について検討・した O l.第 2番染色体の異常状況. 2 5 9. され，かつ， D21S369は口腔癌の発生に関与する有用な マーカーとして可能性が示唆された 。. 第 2番 染 色 体 の 長 腕 は 甲 状 腺 癌 9) や 頼 粒 細 胞 腫 32) に. 21qにおける MSIは 1 0 0症例中 1 0例(10.0%) に認め. おいて LOHが高頻度に発現している O これまでのわれわ. られた 。 この結果はわれわれのこれまでの報告 19.20)より低. q323 5領 域 の D2S1327と 2q36領 域 の れの研究では， 2. い頻度であり，本領域における MSIの発現と口腔癌との. D2S206の 2か所に共通欠失領域を同定し報告してきた 15)0. 関係は低いことが示唆された 。. 2q3235領 域 の D2S1327は 甲 状 腺 癌 9) で ， 2 q36領 域 の D2S206は 頼 粒 細 胞 腫 32) の 報 告 と 同 様 で あ っ た 。一方，. 4 . LOH発現と予後との関連 2 予後と LOHの関係について検討-した結果，死亡例 1. q323 5領 域 の D2S1327 ( 3 0. 1% ) に の み 高 率 に 今回は 2. 症 例 中 9例 ( 7 5 . 0%)に LOHが 認 め ら れ た 。 LOH の多. LOHが認められた 。 この領域は甲状腺癌 9)で高頻度に欠. 重 欠 失 (少なくともいずれのマーカー 2か所以上の欠失). q32-35領域には口腔癌と甲状腺癌 失が認められており， 2. と死亡例との聞に 統 計 的有意差 が認められ，死亡例の方. に共通した候補癌抑制遺伝子の存在が示唆された 。. 2qにおける MSIは 1 0 0症例中 1 4例 ( 1 4 . 0 %)に認めら. が予 後良好例に比べ有意 に LOHが高頻度であっ た (ρ=. 0 . 0 3 9 0 )0 死亡例 1 2症例につ いてマーカー別に LOHの頻. れた 。 この結果はわれわれのこれまでの報告 16) より低い. 度について検討した結果. 頻度であり，本領域における MSIの発現と口腔癌との関. 1q1l .1領域の D21S369で 1 2症例 6例 ( 5 0 . 0 %)であっ は2. 係は低いことが示唆された 。. 最も高頻度な LOHを認めたの. た。 この領域は，本研究において共通欠失領域と同定され. 2 . 第 3番染色体の異常状況. 1 q 11 .1領域の D21S369は た領域と 一致 していた。従って， 2. 第 3番染色体の短腕は口腔癌を含めた頭頚部扇平上皮癌. 他の領域よりも有用な予後予測マーカーとして期待される 。. において高頻度に欠失が認められている 33引) 。 今回， 3 p25. 結. 領 域 の D3S1007 ( 2 3. 4%)に高率に LOHが認められた。. 3p25上 に は 腎 細 胞 癌 の 癌 抑 制 遺 伝 子 である VHL ( v o n. 白 書. 口腔扇平上皮癌 の病因に関与する未知癌抑制遺伝子が少. H i p p e 1 L i n d a u ) 遺伝子 38)が存在するが，本研究では VHL. なくとも 2q上， 3p上. 遺伝 子 の 口 腔 癌 と の 関 連 性 は 不 明 で あ る O 今 回，共通欠. ことが示唆された 。 さらに， 2q'3p.21q上の LOH解 析. 21q上に それぞれ l種類存在する. p25領域の D3S1007は卵巣癌 12) 失領域と して同定された 3. は口腔扇平上皮癌の発生・進展に深く関与していることが. と腎細胞癌 13) で高頻度に欠失が認められている O これま. 1q11.1領域の D21S369は予後 の予測を 示された。特に ，2. でのわれわれの研究では， 3 p25領 域 の D3S1007， 3p21 .3. 判定する 重要 な情報として期待される O. 領 域 の D3S966，3 p13領 域 の D3S1079の 3か 所 に 共 通 欠 失領域を同定し報告してきた 18)。 これまでと今回の結果を あわせると，共通欠失領域が 3 p25領域の D3S1007の lか 所に限定され，本領域には口腔癌，卵巣癌，腎細胞癌に共 通した. VHL遺伝子とは異なる新規癌抑制遺伝子が存在す. る可能性が示唆された 。. 本論文の要旨は，第 6 1回日本口腔科学会総会 ( 2 0 0 7年 4月 1 9日 ， 神戸市)において発表した 。 本論文は第. 6 1回日本口腔科学 会 総 会 に お い て 発 表 さ れ ， 座 長. から推薦さ れた論文である 。. 引用文献. 3pにおける MSIは 1 0 0症例中 3例 ( 3 . 0 % ) に認められ た。 この結果はわれわれのこれまでの報告 17.18) より低い 頻度であり，本領域における MSIの発現と口腔癌との関 係は低いことが示唆された 。. 3 . 第2 1番染色体の異常状況 1番染色体の長腕は食道癌1.2) 肺癌3.6) 胃癌 7.8) 第2 乳 癌 10) 卵 巣 癌 ll) に お い て 高 頻 度 に 欠 失 が 認 め ら れ て いる O 今 回 ， 2 1q11 .1領 域 の D21S369 ( 31 .0% ) に 高 率 に LOHが 認 め ら れ た。 こ の 領 域 に は 他 臓 器 癌 で は 共 通 欠 失 領 域 と し て は 報告 されておらず，口腔癌に特異的に 関与する領域として期待される O これまで，われわれが. 1q11.1領域の D21S369，21q11.1領 明らかにしてきた， 2 域 の D21S236，2 1q21領 域 の D21S11 . 21q22.1領域の. D21S1254の 4か所の共通欠失領域の結果をあわせると， 1q1l .1領 域 の D21S369の 1か 所 に 限 定 共通欠失領域が 2. 1 ) AokiT . ， M oriT. e ta 1 :A l l e 1 0 t y p estudyo fe s o p h a gea1carcinoma. GenesChromosomesCancer 1 0・ 1 7 7 1 8 2，1 9 9 4 . 2 ) 真 山隆人，西平哲郎 他:ヒト食道扇平上皮癌におけ 1番染色体長腕の高頻度の欠失.癌と化学療法 る第 2. 2 5:4 5 9 4 6 3， 1 9 9 8 . 3 )S a t oS .，NakamuraY .e ta 1 :D i f f e r e n c eo fa l l e 1 0 t y p e betweensquamousc e l lcarcinomaanda d e n o c a r c inomao ft h e1 u n g .CancerRes5 4:5 6 5 2 5 6 5 5，1 9 9 4 . ta 1 :L o s so fh e t e r o z y g o s i t y 4 ) MitsudomiT .，OyamaT.e a t3pi nn o n s m a l lc e l l1 u n gc a n c e randi t sp r o g n o s t i c i m p 1 i c a t i o n .C 1 i nCancerRes2:1 1 8 5-1 1 8 9，1 9 9 6 . 5 ) OtsukaT . ， KohnoT .e ta 1 :D e 1 e t i o nmappingo fc h r o mosome2i nhuman1 u n gcarcinoma .GenesChromosomesCancer1 6:1 1 3 1 1 9，1 9 9 6. 6 ) KohnoT . ， K awanishiM.e ta 1 :Homozygousd e 1 e t i o n .1-q21 .1r e g i o n andf r e q u e n ta l l e 1 i c1 0 s so ft h e21q11 i n c l u d i n gt h eANAgenei nhuman1 u n gc a r c i n o m a ..
(9) 2 6 0. 山本，黒岩，他. GenesChromosomesCancer2 1:2 3 6 2 4 3，1 9 9 8 . 7 )S a k a t aK . ， TamuraG .e ta 1 :Common1yd e 1 e t e dr e g i o n sont h e1 0 n garmo fchromosome2 1i nd i f f e r e n t i a t e da d e n o c a r c i n o m ao ft h es t o m a c h .GenesC h r o mosomesCancer1 8:3 1 8 3 2 ， 11 9 9 7 . 8 )N i s h i z u k aS .，TamuraG .e ta 1 :L o s so fh e t e r o z y g o s i t y d u r i n gt h edeve10pmentandp r o g r e s s i o no fd i f f e r e n t i a t e dadenocarcinomao ft h es t o m a c h .JP a t h o 1 o g y 1 8 5:3 8 4 3，1 9 9 8 . 9 )W i l l i a m sS .T . ， Doug1asW . S .e ta 1 :A l l e 1 0 t y p eo ff o 1 l i c u 1 a rt h y r o i dc a r c i n o m a sr e v e a 1 sg e n e t i ci n s t a b i l i t y c o n s i s t e n tw i t hf r e q u e n tn o n d i s j u n c t i o n a 1chromosoma11 0 s s.GenesChromosomesCancer1 9:4 3 5 1， 1 9 9 7 . . ， I i d aA .e ta 1 :Mappingo fanewt a r g e t 1 0 ) OhgakiK r e g i o no fa l l e 1 i c1 0 s st oa6-cMi n t e r v a 1a t2 1 q 2 1i n primaryb r e a s tc a n c e r s .GenesChromosomesCancer 2 3:2 4 4 2 4 7，1 9 9 8 . 1 1)C 1 i b yW.，R i t 1 a n dS .e ta 1 :Humane pi t h e 1 i a 1o v a r i a n c a n c e ra l l e 1 o t y p e .CancerRes5 3:2 3 9 3 2 3 9 8，1 9 9 3 . 1 2)MandersonE . N .，PresneauN .e ta 1 :Comparative a n a 1 y s i so f1 0 s so fh e t e r o z y g o s i t yo fs p e c i f i cc h r o m o some3 ，1 3，1 7，andX 1 0 c iandTP53m u t a t i o n si nh u mane p i t h e 1 i a 1o v a r i a nc a n c e r .Mo1C a r c i n o g3 4:7 8 9 0，2 0 0 2 . 1 3 )G i r o 1 a m iF .，P a s s e r i n iI .e ta 1 :M i c r o s a t e l l i t ea n a 1 y s i s o fchromosome3 pr e g i o ni ns p o r a d i cr e n a 1c e l lc a r c in o m a s .P a t h o 1O n c o 1Res8:2 4 1 2 4 4，2 0 0 2 . 1 4)YamamotoN .，Mizoe] .e ta 1 :A l l e l i c1 0 s so fc h r o m o some2i nhumano r a 1squamousc e l lc a r c i n o m a :c o r r e 1 a t i o nw i t h1ymphnodem e t a s t a s i s .O r a 1O n c o 13 9・ 6 4 6 8，2 0 0 3 . 1 5 ) YamamotoN .，Mizoe] .e ta 1 :A l l e 1 i c1 0 s sonc h r o m o somes2q，3pand2 1 q :p o s s i b 1 yap o o rp r o g n o s t i cf a c t o ri no r a 1s quamousc e l lc a r c i n o m a .O r a 1O n c o 13 9 7 9 6 8 0 5，2 0 0 3 . 1 6 ) 柿 本吉堂，沼津秀之， 他:ヒト口腔扇平上皮癌におけ る第 2番染色体長腕上のヘテロ接合性消失とマイクロ 1:3 7 4 サテライト不安定性について日口外誌 5. 3 8 ， 1 2 0 0 5 . 1 7 )A r a iK . ， S h i b a h a r aT .e ta 1 :Frequenta l l e 1 i c1 0 s s/ i m b a 1 a n c eont h es h o r tarmo fchromosome3i nt o n g u e c a n c e r .B u l lTokyoDentC o l l4 2:1 5 1 1 5 7，2 0 01 . 1 8 )A r a iK . ， S h i b a h a r aT .e ta 1 :Thep r e s e n c eo fc a n d i d a t etumors u p p r e s s o rgene1 0 c ia tchromosome3p f o ro r a 1s quamousc e l lc a r c i n o m a s .O r a 1O n c o 13 8 7 6 3 7 7 ， 12 0 0 2 . 1 9 ) YamamotoN .，Uz awaK .e ta l :Frequenta l l e 1 i c1 0 s s/ i m b a 1 a n c eont h e1 0 n garmo fchromosome2 1i no r a 1 c a n c e r :e v i d e n c ef o rt h r e ed i s c r e t etumors u p p r e s s o rgene1 0 c i .Onco1ogyR e p o r t s6:1 2 2 3 1 2 2 7，1 9 9 9 . 2 0 ) YamamotoN .，NomaH .e ta 1 :A l l e 1 i ci m b a 1 a n c eo nt h e 1 0 n garmo fchromosome2 1i nhumano r a 1squamous c e l lc a r c i n o m a :R e 1 a t i o n s h i pbetweena l l e 1 i ci m b a 1 ances (LOHandMSI ) andc l i n i c o. 口科誌. 2 0 0 8年. 2 2 ) UICC:TNM悪 性 腫 蕩 の 分 類 . 第 6版， 日本語版， 0 0 2， p .2 2 2 6 . 日本 TNM分類委員会， 2 2 3 )F r i e n dS .H . ， BernardsR .e ta l :A humanDNAs e g mentw i t hp r o p e r t i e so ft h egenet h a tp r e d i s p o s e st o r e t i n o b l a s t o m aando s t e o s a r c o m a .N a t u r e3 2 3:6 4 3 6 4 6，1 9 8 6 . 2 4 )C h i b a， . IS h i n d o hM.e ta 1 :M u t a t i o n si nt h ep 5 3gene andhumanp a p i l l o m a v i r u si n f e c t i o na ss i g n i f i c a n t p r o g n o s i sf a c t o r si nsquamousc e l lc a r c i n o m a so ft h e o r a lc a v i t y .Oncogene1 8:1 6 6 3 1 6 6 8，1 9 9 6 . 2 5 )C a l lK.M.，G 1 a s e rT .e ta l :I s o l a t i o nandc h a r a c t e r i z a t i o no faz i n cf i n g e rp o 1 y p e p t i d egenea tt h ehuman chromosom~ 1 1W i 1 m s ' t u m o rl o c u s .C e l l6 0:5 0 9 5 2 0， 1 9 9 0 . 2 6 ) KambA .，S h a t t u c k E i de n sD .e ta l :Anal y s i so ft h e p16gene (CDKN2) a sacandi da t ef o rt h echromo some9 pmelanomas u s c e p t i b i 1 i t yl o c u s .NatGenet8 : 2 3 2 6，1 9 9 4 . 2 7 ) Groden， . ]T h l i v e r i sA .e ta 1 :I d e n t i f i c a t i o nandc h a ra c t e r i z a t i o no ft h ef a m i l i a ladenomatousp o 1 y p o s i s c o 1 ig e n e .C e l l6 6:5 8 9 6 0 0，1 9 91 . 2 8 ) HahnS . A .，S c h u t t eM.e ta l :DPC4，ac a n d i d a t et u mors u p p r e s s o rgenea thumanchromosome1 8 q 21 . 1 . S c i e n c e2 7 1:3 5 0 3 5 3，1 9 9 6 . 2 9 ) OhtaM.，I n o u eH .e ta l :TheFHITgene，s p a n n i n g t h echromosome3 p 1 4 . 2f r a g i l es i t eandr e n a 1c a r c i noma a s s o c i a t e dt( 3;8 )b r e a k p o i n ， ti sabnormali n d i g e s t i v et r a c tc a n c e r s. Cel8 4:5 8 75 9 7，1 9 9 6 . 3 0 )L i， . ] YenC .e ta 1 :PTEN，ap u t a t i v ep r o t e i nt y r o s i n e p h o s p h a t a s egenemutatedi nhumanb r a i n，b r e a s ， t andp r o s t a t ec a n c e r .S c i e n c e2 7 5:1 9 4 3 1 9 4 7，1 9 9 7. 31 )S t e c kP . A .，PershouseM.A.e ta l :I d e n t i f i c a t i o no f ac a n d i d a t etumorsuppressorgene，MMAC ， la t chromosome1 0 q 2 3 . 3t h a ti smutatedi nm u l t i p l ea d vancedc a n c e r s .NatGenet1 5:3 5 6 3 6 2，1 9 97 . 3 2 ) WatsonR且， RoyW . ] .J r .e ta 1 :L o s so fh e t e r o z y g o s i t ya tt h eα i n h i b i nl o c u sonchromosome2qi sn o t af e a t u r eo fhumang r a nu l o s ac e l lt u m o r s .G y n e c o 1 O n c o l6 5:3 8 7 3 9 0，1 9 9 7. 3 3 )L iX .，LeeN .K.e ta l :Ale 1 i c1 0 s sa tchromosomes3 p， 8p，1 3 q，and1 7 pa s s o c i a t e dw i t hp o o rp r o g n o s i si n headandneckc a n c er .JNa tCancerI n s t i t u t e8 6 9 9 4 . 1 5 2 4 1 5 2 9，1 3 4 ) Roz， . L Wuc . L .e ta l :A l l e l i ci m b a l a n c eonc h r o m o some3 pi no r a ld y s p 1 a s t i c1 e s i o n s :a ne a r l ye v e n ti n o r a lc a r c i n o g e n e s i s .CancerRes5 6:1 2 2 8 1 2 3 1，1 9 9 6 . 3 5 )P a t r i d g eM.，E m i l i o nG .e ta l :LOHa t3 pc o r r e l a t e s w i t hap o o rs u r v i v a li no r a lsquamousc e l lc a r c i n o m a .BrJCancer7 3:3 6 6 3 7 ， 11 9 9 6 . 3 6 )P a r t r i d g eM.，E m i l i o nG.e ta l :L o c a t i o no fc a n d i d a t e tumours u p p r e s s o rgene1 0 c ia tchromosomes3 p，8p and9 pf o ro r a 1squamousc e l lc a r c i n o m a s .I n tJCanc e r8 3:3 1 8 3 2 5，1 9 9 9 . 3 7 ) SungN . S .，Z e r 同.
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図
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