関す 研究 原発性 転 移性 肺腫 瘍 け 接 着 分子 発現

原 発 性 ^･ 転移 性肺腫瘍^におけ^る接着分 子^{C D 4 4} 発 現に 関す^る研究

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P5 3 蛋白発 現^{と K r a s}点 突 然 変 異との 関 連 ^‑

金 沢 大 学 医学 部 医 学 科 外 科 学 第1講 座 ( 主 任: 渡 辺 洋 字 数 授)

春 原 智 之

C D 4 4分 子^は選 択 的^スプ ラ イ シング機 構に より, 標 準 型C D 4 4 (C D 4 4 sta nda rd fo r m ,C D 4 4s) と変 異 型 C D 4 4 (C D 4 4

V aria ntfo r m ,C D 4 4v6) を 発 現し, 痛 転 移に関連し て^いる と^いわ れ て^いる. 原 発 性 非 小 細 胞 肺 癌11 6例, 転 移 性 肺 腫 瘍^{9 0}例 を対

象^{にC D 4 4s}, C D 4 4v6, p5 3蛋 白 発 現 を 免疫 組 織 染 色 法^を用^い測 定し, また, Kr a s 点 突 然 変 異 (^{コ ドン1 2}) ^の有 無 をドッ ト プ^ロ

ッ ト^ハイプ リ ダ イ ゼ ^ー ショ ン法 を 行^い検 索し, 各因 子 間^の相 関, 臨 床 病理学 的 因 子との関 連 を 検 討し た. 原 発 性 非 小 細 胞 肺 癌 に おける各 因 子の陽性 率^{は C D 4 4s}, 3 4.5 %( 腺 病, 3 0.9 %, 扁 平^上皮 痛, 3 9.6 %) ^{, C D 4 4v6}, 6 0^.3 % (腺 病, 4 4^.1 %, 扁 平上皮 痛,

幻^.3 %), p5 3蛋 白, 4 9^.1 % ( 腺 胤 3 8^.2 %, 扁 平上皮す軋 ^{64.6 %}), &r a s 点 突 然 変 異3 3^.0 % (腺 病, 4 2^.6 %, 扁 平上皮 痛, 2 0.0 %) ^であ

っ た･ C D 4 4s 発 現は高 分 化 型で有 意^に高 く (p^<0.0 5), C D 4 4v6発 現^は腺 病^に比^べ扁 平^上皮 痛^で有 意に高^{か った} (p^<0^.0 5) ^. C D 4 4v6 の発 現と リン パ節 転軌 遠 隔転 移^の有 無^の相 関は認め ら れ な かっ た が, 腺 病で は_p5 3蛋 白 陰 性 症 例, Kr a s 野生型症 例

の両者で, C D 4 4s 発 現は リ^{ン パ}節 転 移 陰性 症 例, 遠 隔転 移^のない症 例で有意に高^かった b^{<0.0 5})^{. Kr a s} 点 突 然 変 異^{と C D 4 4s},

C D 4 4v6発 現に は相 関^は認め ら れ な か^った^. 治 癒 切 除 症 例7 4例^の検 討で は, C D 4 4s 発 現の低^い症 例の予 後^は有 意に不 良であ^っ た ゎ^{<0.0 5).} 転 移 性 肺 臆 壕に おける各因 子^の陽 性 率は C D 4 4s, 2 4.4 % (^上皮 性 腫壕, 3 4.7 %, 非^上皮 性 腫 壕, 1 2.2 %), C D 4 4v6,

3 5.6 % (^上皮 性 腫 瘍, 4 乱0 %, 非^上皮性 腫瘍, 1 9.5 %)^, p5 3蛋 白, 3 5^.6 %(上皮性 腫瘍, 3 4^.7 %, 非上皮性 腫瘍, 3 6^.6 %), Kr a s 点 突 然 変異, 3 3^.3 %(上皮 性 腫瘍, 4 7^.7 %, 非上皮性 膿 瘍, 1 6^.2 %) であ^った^. C D 4 4s, C D 4 4v6 発 現ともに非上皮 性 腫 瘍 肺 転移 巣に比

べ上皮 性 膿 瘍月市転 移 巣^で有 意^に高^{かっ た} b^{<0.0 5})^. 特^に大 腸 ^･ 直 腸 痛, 頭腰 部痛^の肺 転 移 巣^で発 現が高 く, 反 面, 腎癌, 軟 部 組織悪 性 腫瘍, 骨^. 軟 骨 悪 性 腫 瘍^の肺 転 移 巣で発 現が低かった^. K r a s 点 突 然 変 異^の頻 度は非上皮性 腺 癌 腫 瘍 肺 転 移 巣に比^べ 上皮性 膿 劇市転 移 巣で有 意に高く b^{<0.0 5}), 特^に大腸 ^･ 直 腸 痛肺転 移 巣^で高^{かっ た.} 無 再 発^生存 率^は, 上皮 性 腫 瘍^に比^べ非上 皮 性 腫瘍で有 意に低 くb^{く0.0 5}), 非上皮 性 腫 瘍ではp5 3蛋 白 発 現 陽性 例で有 意に低か った(p^<0^.0 5)^. 原 発 巣 別に み る と大 腸 ^･ 直 腸 痛で は, C D 4 4s陽 性 例で有 意に低 く (p^<0.0 5), 軟 部 組 織 悪 性 腫 瘍, 骨 ^･ 軟 骨 悪 性 腫 瘍^{で は}p5 3蛋 白 陽 性 例^で有 意^に低^かっ たb^{<0.0 5})^{. C D 4 4v6}発 現 と 無 再発 生 存 率^の間に相 関^はな^かった. 以 上^の結 果か ら, 原 発 性 肺腺 痛^{に おいて は}, p5 3遺 伝 子 異常,

K^‑r a S 点 突 然 変 異^のない症 例^では C D 4 4s 発 現は転移 を抑制 する働 き をし て^いる^こと が示 唆さ れ, 原 発 性 非 小 細 胞 肺 癌^{で は}

C D44s, C D 4 4v6 の発 現^は予 後 予 測 因 子^{に な}り う^{ること が}示 唆さ れ た^{. 一} 方, 転 移 性 肺 腫 瘍で は_, 非上皮 性 腫 瘍でp5 3蛋 白の

発 現が, 大 腸^･ 直 腸 痛で C D 4 4s 発 現が肺 転 移^の発生 に関 与し て^いる可 能性が示 唆さ れ た.

Eey ^{w o r}ds n o n^‑S m all c ell lu ng c a n c e r, m eta Staticlu ng t^{u m o r,}C D 4 4_,p5 3_pr otein

,K r a s

悪 性 腫 瘍^の大 き^な特 徴^{のひ とつ} に転 移 能^の猿 得があ げら れ る^. 転 移は悪 性 腫 瘍^の治 療を困 雉なも^のに し^{て い}る大 きな要 因 であり, 複 雑^な生 物 硯 象^の結果^{と し て}成立 す^る転 移^{の メカニズ} ムを 解 明 す^{る た め}, 多く^の研 究が行わ れ てきた^. 最 近で は, 分 子生物 学の急 激 な 進 歩^{に よ}りこ の分野の研 究 も大 き^な進 展 を^み せ て おり, 特に, 接 着 分 子 群^と痛 転移^の関連に^{つ い}て さま ざま な知 見が集 積 されつ つある. 接 着 分子^は構 造^上の類 似 性か ら イ ンテ グ リン ファ ミ リ ^ー _, カ ド^ヘリ^{ン ファ} ミ リ^ー , セレク チ^{ン フ}

ァミ リ ^ー , イ^{ム ノ}ダロブ リン ス パ ^ー ファ ミ リ ^ー , C D 4 4 ^ファ ミ リ ^ー の5 種 類^に分 類さ れ, そ^の機 能^は多様^であ^る. 転 移^との関 連 とし て は, 食道 癌, 胃 痛, 乳 癌に おける カ ド^ヘ リ^{ン の}発 現 減 弱^{お よ び カ テニ ン の}異 常¹⁾, 大腸 癌, 肺 癌^{に お}ける糖 鎖 抗 原^と セ レ ク チン の関 連^{2 川}, 肺 癌, 腎 痛, 大 腸 痛^{に お}ける インテ グ り

ン^{4 ) ti)}_, な ど が報 告さ れ て^いる.

C D 44 は接 着 分 子^{のひ とつ で}あ り, そ^の遺 伝 子^{に は}少なく^と も2 0の エクソ ンが認め ら れ る^. m R N Aの成 熟 過 程^で, エクソ ン 1 ^､5(^{1s ､5s}) ^{とエ クソ ン1 6 ､2 0}(^{6s 〜1 0 S}) ^が選 択 的^{スプ ラ イ シ}

ング に より 発 現し た糖 蛋 白 質が標 準 型C D 4 4 (_{C D 4 4 声}^ta nda rd fo r m, C D 4 4s) ^である. C D 4 4sで は党 規さ れ な^いエク^{ソ ン}6 ^､‑¹⁵ (^{1v ､}1 0^v) が選 択 的^スプ ラ イ シング に より^エク^{ソ ン}5sと6sの間 に挿入 さ れ発 現し た分 子が変 異 型C D 4 4 (^{C D 4 4 v a ria ntfo r m ,} C D 4 4v) ^であ り, その中^でも特^{にエクソ ン6vが}挿入 さ れ発 現^し た分 子が C D 4 4v6 と呼ば れ, エクソ ン8v ^〜1 0vが挿人 さ れ発 現し た分 子^{は 上}皮 型^{C D 4 4} (^{C D 4 4 e}pithelial fo r m ,C D 4 4 E) ^と呼^{ば れ} る^{7 ).} 1 9 9 1年ラッ ト膵 痛 由 来 細 胞 株に お^いて, 転 移 能 を 有 する 細 胞 株^と転 移 能^を有^{さ ない}細 胞 株^の遺 伝 子 解 析^{に て}, 転 移 能^を

平 成8 年1 2月9 日受付, 平 成⁹ 年^{2 月4 日}受^理

Abbr evi atio n s : C D 4 4 E, C D 4 4 epi th elial fo r m; C D 4 4s_, C D 4 4 stan d ard fo r m ;C D 4 4v_, C D 4 4 v a ria ntfo r m ;C D 44v6,

C D 4 4 v a rian tfo r m e xp^{r e s s e}d e x o n v6_; D A B, 3,3 1^‑dia min obe n zidin e tetr ah_ydr o ch lbride; D F S ,d is e a s e^‑fre e s u rviv al_; P B S, pho sphate^‑bu鮎r ed sal in e;3生率^{, 3} 年^生存 率^{; 5 生}率^{, 5} 年^生存 率

肺腫 瘍に おけるC D 4 4, p5 3蛋 白, K^‑r a S

有^{す る}細 胞 株に は C D 4 4分 子^の変異が見ら れ, こ の変 異 型^{C D 4 4} を転移 能^がな^い細 胞 株^に導入する と高 頻 度に肺 転 移 巣を形 成 す る^こと が報 告さ れ た^8,. 以 軋 ^{C D 4 4}分 子^と転 移^との関 連^が注^目 さ れ, 特^{にエクソ ン6vの}挿入 さ れ た変 異型C D 4 4 (C D 4 4 v a ria nt f｡ r m e Xpr e S S ed e x o n6,C D 4 4v6) ^と転 移^との関 連^が種^{々 の}悪 性 腫瘍^で報 告さ れ た. し か し, 原 発 性非 小細 胞 肺 癌に お^いて は^い まだC D 4 4 と転 移^との関 係^は明 白^{で な}く 予 後^に及ぼす 影 響 も 未 知^である^. また, 細 胞 株 を 用^い た実 験に お^いて C D 4 4^の発 現^を 制御し て^いる因 子^{と し て}痛 遺 伝 子^{r a sが}あ げら れ る^桝. r a s 遺 伝 子^は点 突 然 変 異に より 活 性 化^し, さま ざま.^{な正常 細 胞に悪 性 形} 質を付 与^{し て}転 移 能 を 獲 得^{さ せ,} 悪 性 腫 瘍^の転 移 能 を 増 強 する^{‑ 叫 1 2).} また, 痛 抑 制 遺 伝 子p5 3の不 活 化^{に よ る}p5 3蛋白 過 剰 発現^{と と}もに, 原 発 性 非 小 細 胞 肺 癌に お^いて発病 機 構に重 要な 役割 を 担^{っ ている と}考 え^{ら れ ている1:l )}■^{1 7)}. し か し な が ら, 原 発 性 非小 細 胞 肺 癌^{に お}けるr a s遺 伝 子 活性 化, p5 3遺 伝 子 不 油 化^と C D 4 4 発 現^の3者^の関 連^{についての}報 告^{は ない.}

悪性 腫 瘍^の転 移に お^いて, 肺に転 移し やす^い腫 瘍, 肝^に転 移 し やすい腫 瘍, 骨^に転 移^{し や}す^い腫 瘍, リン パ節に転 移し やす

い腫 瘍な ど, 転 移^の臓 器 特 異 性があ^{ること が}知^{ら れ ている1 8 )･}

マ ウスを 用^い た実 験で は, 肺に転 移 性 を 有 する細 胞 株と C D 4 4

2 1 5

の発現^の関 連 性が報 告さ れ^{1 t り2 1 )}, C D 4 4 と臓 器 特 異 的 転 移^の関 連が示 唆さ れ てい る^. 臨 席 的に み る と転 移 性 肺 睦 瘍に お^いて,

上皮 性 腫 瘍^の肺 転 移^に比^べ, 非^上皮 性 腫 瘍^の肺 転 移^{は 2} 次 的 な 所 属リン パ節 転 移 を きた し にく く^{3 2 I}, 切 除 後^の予 後 も 非^上皮性 腫 瘍^で不 良^である と^いう 事 実がある^2:‑). こ の相 違を, 生 物 学 的

アプ^{ロ ー} チを 用^い明ら か に し た報 告^は少なく, 転 移性 肺 腫 瘍^に

つ いて C D 4 4 ^の発甥を検 索し た報告 も 極め て少ない^{2 d)}.

本 研 究^は, 原 発 性 非 小細 胞肺 癌^{に お}ける C D 4 4s と C D 4 4v6 の発 現 を 検 索し, 臨床 病 理 学 的 因 子, 転 移お よ び予 後^との関連 を明^{ら か に し}, さ ら に K^‑r a S点 突 然 変 異と C D 4 4 発 現, P5 3黄白 発 現と C D 4 4 発現^に関 連がある か どうか を検 討し た^. また, 転 移 性 肺 膿 瘍^について同様な検 討を行^い, こ れを上皮 性 腫 瘍 肺 転 移 巣^と非上皮 性 腫 瘍 肺 転 移巣^に分 け 検 討 を 行う^{こと に よ り}, 両 者^の生 物 学 的 相 違を明ら か に し, 肺^に形 成さ れ る悪性 腫 瘍^{に お} け る C D 44, p5 3蛋 白, Kr a s 点突 然 変 異^の役 割^を明ら か にする ことを目的と し た^.

対 象お よび方 法

.^{l . 対 象}

1 9 8 8年^〜1 9 91年^の期 間に金 沢 大 学 医 学 部 第¹外 科^{で 切}除さ れ

Tab le l･ C linic op^{a t}holog^{l C a}lfind ing^sin l 1 6 prim a ry ^{n o n‑S m a}llcel1 1u ng c a n c e r ca s e s

Clinic op^{a t}holog^{lC a}l find illg^S

No.(^%)^ofc as e s A

l 1 A denoca. E pi d^{e r m o}i dc a.

No^.ofca ses e x a min ed

A g^e

Sex M ale Fe m ale

e

A B g I

Ⅱ

Ⅲ

Ⅲ

Ⅳ St a

T fac te r

T I T 2 T ニミ

T 4

N fa c ter

N O N l ^､ N 3

M fa c t e r M O M I

D i ff tr entiatio n Well M oderat el y Po o rl y

1 1 6

6 6.4 ± 1 0.4^射

8 4(^{7 2.4}) 3 2(^{2 7.6})

3 2(^{2 7.6}) 1 5(1 2.9) 3 3(2 8.4) 1 4(^{1 2.1}) 2 2(^{1 9.0})

3 0(^{2 5.9}) 5 1(^{4 4.0}) 1 6(^{1 3.8}) 1 9(^{1 (i.4})

5 1(^{4 4.0}) 6 5(5^6.0)

9 6(^{8 2.8}) 2 0(^{1 7 .2})

4 4(^{3 7.9}) 43 ( 37.1) 2 9(^{2 5.}0)

6 8(5 8^.6)

6 4.8 ± 1 1.3^̀l)

4 4(^{6 4.7}) 2 4(^{3 5.3})

2 3(3^3.8) 8(^{1 1.8}) 1 5(^{2 2.1}) 8(^{1 1.8}) 1 4(^{2 0.6})

2 4(^{3 5.3}) 2 8 ( 4 l^.2) 6( ^8.8) 1 (〕(^{1 4.7})

3 0(^{4 4,l}) 38(^{5 5.9})

5 6(^{8 2.4}) 1 2(^{1 7.}6 )

3 5(^{5 1.5}) 1 8( 2^6.5) 1 5(²2.1)

4 8(^{4 1.4})

6 8.6 ± 8.3^a1

4 0(^{8 3.3}) 8(^{1 6.7})^*

9(^{1 8.8}) 7(^{1 4.6}) 1 8(^{3 7.5}) 6(^{1 2.5}) 8(^{1 6.7})

6(1 2^.5)^* 2 3(^{4 7.り}) 1 0(^{2 0.8}) り(^{1 8.8})

2 1(^{4 3.8}) 2 7(^{5 (う.}3)

4 0(^{8 3.3}) 8(^{1 6.}7 )

9(¹8^.8)^* 25 (5 2.1)^* 1 4(²9^,2) Ade n o c a^.,ade n o c a r cin o m a;eP i der m oi d c a･,eP ide r moid c a r cino ma･

a)Y_{e a r s}.言^{± S D .}

*

p^<0.0 5.