肝 線 推症 進展 関 す 形態 学 的研 究

金沢大 学十 全 医 学会 稚 誌 第9 3巻 第3号 51 3 ⁻5 33 く19 84J

肝

線

す

学

究

A I_pha⁻N aphth_yl⁻Isothio cy ^{a n a}te および 3^，−M ^eth_yl⁻ 4 ⁻D im eth_yla min o a z obe n e z e ne 投 与ラ ^ット 肝^の

光 学 顕微鏡 的 並び に電 子 顕微^{鏡 的 観}察

金沢 大学 医学 部 病理学 第一儲 産 く主任^二中西 功 夫教 授ナ

井 川 正

く昭和5 9年⁵ 月^{1 8}日受 付1

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肝 線 維 症^の進 展 過 程を明ら か^にす る た め^に， alpha⁻n aphthyトis othio cy^{a n a}te くA N m およ び 3^，−^{m ethyl}−⁴−^{d im eth}yla min o a z obe n z e n eく3^I−^{Me−D A Bl 投与ラッ ト肝を光顕 的並びに電顕 的に観察し た一}

A N 汀 投与^によ る肝 線推 症は小葉 問お よ び 小葉 内胆 管の著し^い増 生^に随伴し， 門 脈域^{か ら}線 維 芽細 胞ま た は筋線 維芽細 胞が進入 し膠 原線 維を形 成す る^こと^によ^って進 行し た． この肝線 維 症^にD is s e 腔の伊 東 細胞 が関与す る^こと は少な かっ た．

d 方， 3^，−Me−^{D A B 投 与によ る肝 線 維症で は， まずo v alc ell く電顕 的には}

小葉 内再生 胆 管上皮 細 胞1の増殖が起^こり， 同時に_， この周囲^に伊 東 細胞が mi c r o丘bril を沈 着し， つ いで，

門脈域^から線 推芽 細 胞ま た は筋線 維 芽 細 胞が進入 し^て膠 原線 推を形 成す る と^いう過 程を と^って進 行す る も のと考え ら れ た^． A N I T 投与 群^{に お い}て も，3^INMe⁻D A B 投 与群に お いて も，

一 部^にC e ntrilobula ra br o sis

を^みること が あ^った^{． こ の}線 維 症は， 小 葉 中 心域の伊 東 細 胞のみ な らず 中心静 脈壁^の筋 線推 芽細 胞^が膠 原 線椎を形 成す る^ことによって進 展し て^いる ものと思わ れ た^．肝 線維 症^に伴なって類 洞のC apilla riz atio n を みる^こと があ^っ た が， そ の類洞 内 皮細 胞^に連 続性の基 底膜が形成さ れ る^こと は な か^った． 伊 東細 胞と紳 網

線経と の関 係や， 丘br o u s s ep t^a 内^{に お}け る弾性 線 推 形成^の意 義^{に つ い}て考 察を加え た，

K ey ^{w o r}ds al_ph a⁻n aphth_yトis oth io cy^{a n a}te_，3^，−m eth_yl ヰ di^{m e}th_yla min o a z o⁻

be nze n e，hep^atic fibr o sis_，Ito⁷s c ell

， m y^Ofibr obla st

肝線維 症は， 肝^{に お}け る^コラ ゲ^ン産 生と^コラ ゲン分 解との均衡が くずれ， コ ラ ゲ^ン産 生が優 位^にな り， 膠 原線維が過 剰^に形 成さ れ^{て い}る状 態^であ る^り． 膠 原 線 維^の過 剰沈 着は， 実験 動物^{に お}け る肝線 推 症^の観察や ヒトの肝線 維 化の解 析か ら，1フ グリ ソン掃く門 脈域う，

2う 傷害肝 細 胞 周囲， 3う 増生細 胆 管周囲の3 カ所^か ら初 発す る と考え ら れ て お り， そ れ ぞ れp^{o r}tal f

i br o sis，intr apa r e n ch_ym al 丘br o sis， pe ri du ctula r

A br o sis と呼ば れて いる²¹³¹． こ の よ うに肝 緑 綬 症が 異^っ た部位ま た は領 域^から発症す る^こと を考え る とt

肝^にお け る 膠 原線 維の過 剰 形成は単^{一 の}細 胞 種， た と え ば線 維芽 細胞^によ^っての み行わ れ る と^いう もの では なく， む し ろ複 数^{の コ}ラ ゲ^ン産生細 胞が関与して いる

A M orphologi ^{c al Study o n the Progr e s sio n}

ものと考え ら れ る． 従^って， 肝 緑 綬症^の進 展はかな り 複雑^であ ること が十 分推 定さ れ る．

肝 線維 症^に関与す る細 胞^の種類並 びに線 維 症の進 展

に伴う 丘br o u s s ep ta の形 成過 程に つ いて は， これ まで

に多くの実 験 的研 究が な さ れ て^いる． 19 4 0 年O^{r r4I}は pLdi^{m et}h_yトa min o a z obe n z e n e を投 与し た ラッ ト肝 を観 察し， 肝細 胞の変性 脱 落， 胆 管の増 生にひ き^つづ

いて門脈 域^に形成さ れ た肉芽組 織が小葉 内^へ伸 展して

線維 化が進 行す る と述^べて^いる． その後， 3^，−m ethyl

−⁴−^{d im ethyla min oaz ob}e n z e n eく3^，−^{M e}−^{D A Bl な どの}

ア ゾ色 素^5ト7や ， al_pha−^{n a}phth_yl−^{is oth io c}y^{a n a}te

くA N n^lう投 与^{8糊 に}よ る実験 的 肝線 維 症が検 討さ れ，

これ らにお け る肝 線 推 症は細 胆 管の増 生や o v al c ell

of H ep^atic F ibr o sis ニ Ligh ^{t a nd E le ctr o n} M ic r o s c opic O b_{s e r v a}tio n s of the L iv e r s of Rats F ed A l_pha⁻N aphth_yトIs oth io cy^{a n a}te and 3^l−M eth_yl−⁴⁻D im eth_yla min o a z obe n z e n e ^． Ka z u m a s a I ka w a_， D ep^{a r}tm e nt of P ath olog y O

のⁱr e cto r こPr of．I． N aka nis叫，S cho ol of M edici_{n e}

， K a n a z a w a U niv e r si_{t y}，K a n a z a w a，92 0．

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の増 殖^に随 伴^{し て}門 脈域^から進入 す る線 推 芽細 胞がコ

ラ ゲ^ンを産生 す ることによって進 行す る と^いう考え方 が支 配 的^になって^いる． こ のよ う な変 化は ^一般^にcho⁻

ra ngi 0丘br o sis と も呼ば れて いる⁶¹．

一方， 四塩 化炭 素 投与によ^って引き起こさ れ る肝 線 推症で は， 上記薬 剤の場 合と違^って， 小葉 中^JL^J或の肝 細胞が選択 的^に傷 害さ れ， C e ntrilobula ra br o sis と呼 ば れ る線維 症を釆た す^{1 0ト 用}0 こ の場 合には， 類 洞壁^の 伊 東 細 胞^川 くfat⁻StO ring c ell^{1 4卜1 61}， lipo cy te^{1 2}u31

，

pe risin u s oidal c ell^{l Ol}， adv e ntitio u sc o n n e ctiv etis s u e c ell^{1 71}， 脂 肪摂 取 細胞^{1 811 9}りが^コ ラ ゲンを産 生し， 線 推 症を引き起^こす も^のと考え ら れ^{て い}る． ま た， 近年，

アルコ ^ー ル投 与^ヒト の肝 線 推 症^の初 期 像を観 察し た Naka oら^叫は，ア^{ルコ ー} ル性^の初 期 線推 症は大 部 分 中 心 静脈 壁^の筋 線 維芽 細 胞の増 殖と共^におこる もの であ

る と指摘し てしミ_る

． 肝 硬 変 症^{に お}け る 丘br o u s s ep t^a

内^{叫2 21}や， 日本 住血 吸 虫症^によ る肝^の線 維 化 病 巣^2別に は筋線 雄 芽細 胞が し ば しば同定さ れ て^いる． 更に_， 肝

において は， 以上のよう な線緑 芽細 胞， 筋線 推 芽 細 胞，

伊 東細 胞に加え て， 最 近で は肝 細 胞^瑚2引も血 管 内 皮細 胞^抑 も^コラ ゲ^ン産 生 能を も^{つ こ}と が培 養 実 験で確か め ら れ ている． 従って， この よ う な最 近^の知 見を^ふま え て，従来^からchola ngi ⁰丘br o sis で あ る と考え ら れて いた肝 線 維 症を再 検 討す る必 要が あ．^{る よ うに思 わ れ}

る．

そこで， 著 者は A N I T 投与ラット肝と 3^，−M e⁻D A B 投与ラット肝を光 学顕 微 鏡 く光 顕J 並 びに電子顕 微 鏡

く電 顕う を 用^{い て}経 時 的^に観 察し， 肝 線 維 症^の進 展 過 程を精査し た の でこ こ に報 告す る^．

材 料およ び方 法

実 験 動 物と し て W ista r 系 雄ラットく体 重^こ約2 0 0 gう を用^いた．

1 ． A N n ^l投 与群

0^．1％の^，割 合で A N I T くA l drich C he mic al Co．，

U S AIを混じ た飼料^でラッ ト を飼 育し， 投 与 開 始 後5，

7， 1 3， 18， 2 0， 2 5， 3 0， 3 5， 5 0， 65，7 2 日 の ラッ ト を と殺し， その肝組織を光顕並 びに電 顕用試料と し た^． ま た， 投 与後9 0，1 0 0，12 0 日目^のラット^の肝 組 織は光頗 的観 察^{の みに}供し た．

光顕用試料 作 成^こ肝 組 織の ^一 部を 1 0 中 性緩 衝^ホ

ルマリ^{ン で}固定， パラフ ィ ン包埋， 薄 切し， へマ ト キ シリ^{ン． エ}オ ジンくH ⁻El，pe riodic a cid−^{Schi ff}くP A SI，

エ ラスチ カ^{． ワ ン}ギ^{ー ソ ン}くE V GI， ア ザ^ン， 鍍 銀 染色 を施し て観 察し た．

電顕用試 料作成^二肝 組 織の ^一部を細 切し，2 ．5％グル タ^ー ルアルデヒドく0．1 M カコ ジ^ル酸 緩 衝 液，pH 7^．射

で 4 ⁸C， 6 0 分 間前 固 定し， つ い で 2 ％オス ミウム酸 く0^．1 M ^カコ ジ^ル酸 緩衝 液， p月⁷⁻4う^{で 40}C， 90 分間 後 固 定を行った0 材 料を ア^{ルコ ー ル}系 列脱水 後， エボ ン812 に包埋 し た． 超 薄切片は ダ イ ヤモ ンド ナイフを 用 ^いて ウ^ル ト ラ ト ^ームくL K B 8 8 0 0 型フ^で作製し， 酢酸 ウ ラ^ニル ^．鉛^二重染 色 並 び^にタ^{ンニ ン}酸染 色^{2 7J} _を施

し て 日 立 H−^{5 0 0}型 電子顕 微 鏡 く⁷5 E VI ^で直 接倍 率 9 00 ^へ 10^．0 0 0 で観 察し た．電 顕 試 料観 察^に先立^って，光 顕所 見と対比 さ せ る た め^に各ブロ ックか ら 1ノ上切片を 作 成，1％ト^ルイ ジンブル ^ー で染 色を行^い， 光顕 的に病 変 部を チ^ェック し た．

2 ．3^，qM e⁻D A B 投 与群

0 ^．0 6％3^I−^{M e}−^{D A B} 含有 固形 飼 料け リ^{エ ン}タ^ル酵 母 社 製， 東 京フで ラット を飼 育し， 投 与 開 始後⁷，20，

3 0， 4 0， 45， 5 0， 6 0， 7 5， 8 0 日目のラットの肝 組織を 採 取し， 光顕 並 び^に電 顕用試料と し て 用^いた． ま た，

投 与 後9 0， 1 00， 11 0， 11 5， 120， 15 0， 2 0 0 日日^{の ラ}ッ

ト^の肝組 織を光 顕 的^に観 察し た^．

光顕 用試 料 作 成^こ採 取さ れ た肝 組 織^{の 一} 部を A N 工丁投 与群の場 合と同様^に， ホ ルマ リン固定， パ ラ

フ ィ ン切 片を作 成し， 各 種 染色を施し て観 察し た^． 電 顕 用試 料 作 成^こ電 顕用試 料も A N n^l 投 与群の場 合と同 様の方 法で作成し た．

成 績

工． A N エー投与群 1 ^． 光 頗所 見

A N 工丁投 与ラットの肝 病 変は投 与 期 間と ほ ぼ平行 し て進 行す る が， 若干^の個 体 差が あ る ので本 論文では 肝 線 推 症^の進展に基いて， 5 日， 7 日， 13 日目^の病変 を病 期I くStag^e I， e a rlystagel， 18 日， 2 0 日，25 日， 3 0 日目^の病 変を病 期II くS^tag^eII， inte r m ediate Stagel， 3 5 日， 5 0 日， 65 日， 7 2 日 日^の病 変を病期1II くStag^eIII， adv a n c ed stagel と分 類し， 各 病期 卸^こ ま と めて記載す ることにす る． 病 期工 は， 門 脈域と門 脈 域との間を結ぷ細網 線 維ま た は膠原線 推^の細^い隔壁 く丘br o u s s ep t^al が み ら れ るくP−^{P brid}gel 程度^の肝 線 椎 症^の病 期を， 病 期II は，P−^{P brid}g^e のみ な らず，

門 脈 域と小葉 中心域との問に細 網 線 維ま た は 膠原線維

から成る 丘br o u s s ep t^a が形 成さ れ るtP−^{C brid}g^ej 肝 線 維 症の病 期を， ま た， 病 期IIl は， P−^{P brid}ge およ

び P−C b^ridge に加えて， 弾 性線 稚が fi br o u s s ep ta内

に出 現す る病 期を 示 し て^いる．

1う 病 期工

門 脈 域^には 胆管上皮 細 胞の腫大， 軽い胆管^の増生お よ び胆 管周囲^の線 維症がみら れ る． し ば し ば， 浮腫や 円形 細 胞 浸 潤が認め ら れ る． 小 葉周辺域^{や Zo n e12 別に}

肝 線 維症^の進展に関す る 形態 学 的研 究

沿^{っ て 小}葉 内胆 管 く細 胆 酎 ^が増生 す る^． 細 胆 管を小 葉中心域にみ る^こと は少ない． 紹 胆管^の増生部位^には

。V al c ell が少数 混 在している． 細 胆管^{や o v al c ell は} 珊網線 維^によっ て と り ま か れ て^おり， 隣接 類 洞壁^に比

べて紳 網線 維^が増 加し^{て い}る．

一部で は門 脈 域^から隣 接門脈 域^まで細 胆 管が連 珠 状^に配 列し， これに沿^って p⁻P b^ridge が形 成さ れ て^いる く図1l． ま た，

一部^の

細 胆管^の外周^には門脈域と連 続す る膠 原線 椎が存 在す る． し ば し ば， 細 胆 管 周 囲^に単核 細 胞や好 中 球の浸 潤 を認め る^こと が で き る． 肝 細 胞^の壊死 や核 分 裂が散 見 さ れ る^． 変性 肝細 胞は 小葉 周辺域や細 胆管^に接し^てみ

5 1 5

と め ら れ る傾 向がある． 単 核細 胞の集在が小 葉 内^に少 数散 見さ れ る^．

21 病 期H

門脈域^の胆 管の増 生^およ び線維 症^は進 行す る． これ に伴^って門脈 域は拡 大し， 限界 板は不 規則と な る． 門 脈 域^には単核 細 胞^の他^に紡錘 形^の結合 組織 細 胞が増 加 す る． 小 葉 内^では細 胆 管の増 生が著し く， 小 葉周 辺 域 の み な らず小葉 中心域^にも多数^の細胆 管を み る^{． o v a}l

c ell は相 対 的に減 少し て^いる． 細 胆管の増 生と共^に線 維症は進 行す る． こ の病簸で は細 胆管の周 囲^に膠原 線 継が増加し， 同時^に細 胆管の走行に沿って紡 錘 形の細

F ig^．1． Po rto−^{Po rtal B br o u s s e}p t^atP⁻P bri dgelin a s s o ciatio n with pr olife r atingd^{u ctu}le sin theliv e r of r ats fed a−n aphthyトis othio⁻ cya n at_e 仏^{N I T}lfo r1 3 days．S ilv e rimpr eg^{n a}tio n， X2 5 0−

Fig^．2． P−^{P bridge a nd po rto}p^{c e ntr al fi br o u s s ep ta}くP−C b^ridgeliⁿ theliv e r of r atsfed A N I T fo r25 days．Silv e rim pr eg^{n a}tio n，X lO O．