62 （7） 氏名（生年月日） 本 籍
学位の種類
学位授与の番号 学位授与の日付 学位授与の要件学位論文題目
論文審査委員
シ ミズ トモ エ清水智江（昭和1
医学博十 乙第1085号平成2年5月18日
学位規則第5条第2項該当（博士の学位論文提出者）
Proliferative state and radiosensitivity of h㎜an myeloma stem cens
（ヒト骨髄腫巨細胞の増殖機構と放射線感受性） （主査）教授 滝沢 敬夫
（副査）教授杉野信博，平山峻
論 文 内 容 の 要 旨
目的 近年，骨髄腫コロニー法が開発されたが，それは骨 髄腫幹細胞の性質を調べ，定量的に測定するのに適し ていると考える．私は骨髄腫幹細胞のカイネティクス と放射線感受性を明らかにする目的で骨髄腫コロニー 法を用いて検討した． 方法 1）培養法：9例の多発性骨髄腫患者（lgGκ型7 例，IgGλ型1例， IgAλ型1例）から骨髄穿刺で骨髄 細胞を採取した．この細胞をフィコールコンレイを用 いた比重遠心法で85～95％の骨髄腫細胞を含む単核細 胞層を分離した．1～5×105個の単核細胞を20％ウシ胎児血清，20％のPHA－TCMおよび4・MEM培養液
を含む0．8％のメチルセルローズに埋め込み37℃，5％ CO2，100％の湿度の条件で10日間培養した．コロニー刺激因子として用いたPHA・TCMは，正常ヒト末梢
血からTリンパ球をE・ロゼット法で分離し，1％
PHAと共に3日間培養した上清である． 2）増殖細胞の同定：培養終了後，20個以上の細胞か らなるコロニーを顕微鏡で算定した．各コロニーはパ スツールピペットで取り出し，リン酸緩衝液に浮遊さ せた．その形態をギムザ染色後に観察した，また，細 胞内免疫グロブリンの種類はFITC標識抗血清を用 いて免疫染色し，蛍光顕微鏡で同定した．3）DNA合成期にある細胞の測定：培養前の骨髄
腫細胞を高比活性の3H一チミジンと20分間艀置後に過 量のチミジンを加えた．その細胞を前述の方法で培養 し，骨髄腫コロニーの形成を観察した．加えた3Hチミ ジンの量は20μCi／m1または100μCi／mlである． 4）骨髄腫幹細胞の放射線感受性の測定：培養前の 骨髄腫細胞に60Coで0．5～2Gy照射した．その細胞を 前述の方法で培養し，骨髄腫コロニー数を算定した． 結果 9人の骨髄腫患者から採取した10の骨髄サンプルで は，培養した2x105個の細胞当り，209～2，022個の骨 髄腫コロニーが形成された．コロニー構成細胞はリン パ形質細胞様で，細胞質内免疫グロブリンは培養前の 骨髄腫細胞のそれと一致していた．PHA－TCMの添加 量を増すとコロニー数は直線的に増加し，20～30％の PHA・TCMの添加でプラトーとなった．骨髄腫幹細胞 のうち21～45％がS期にあった．2例の患者で骨髄腫 幹細胞の放射線感受性を調べたが，Doは1．00Gyと 1．63GyでN値は1．6と2．0であった． 考案 骨髄腫幹細胞のうち21～45％がS期にあり，この値 は穎粒球系幹細胞のそれに近く，多能性幹細胞のそれ よりは高い．一方，白血病性幹細胞は50％以上がS期 にあり，多発性骨髄腫幹細胞のそれより高い．この事 実は，急性白血病ではS期に特異的な薬剤を用いる必 要があるが，骨髄腫ではそうではないことを示してい る．骨髄腫幹細胞の放射線感受性を調べるとDoはヒ ト多能性幹細胞や穎粒球系幹細胞のそれと同じであ り，特殊な状況での放射線治療が有効である可能性を 示している． 一672一63
論文審．査の要旨
本論文は，最近開発された骨髄腫コロニー法を用いて，骨髄腫幹細胞のカイネティクスと放射線感受性につ いて検討を行い，骨髄腫幹細胞の21～45％がS期にあること，また骨髄腫幹細胞の放射線感受性は正常骨髄幹 細胞とほぼ同じであることを明らかにしたもので，学術上価値．がある． 主論文公表誌Proliferative state and radiosensitivity of human
myeloma stem cells（ヒト骨髄腫幹細胞の増殖機
構と放射線感受性）
British Journal Cahcer Vo1．45 679－683 頁，（1982年発行）
副．論文公表誌
1）H㎜an myeloma in vitro colony growth：cell kinetics and radiation sensitivity（ヒト骨髄 腫のin vitroにおけるコロニー増殖：、細胞動 態と放射．線感受性）
Acta Haematol J 49（8）：1800－1807，1986
2）Biochemical properties of human urinary magakaryocyte colony－stimulating factQr
and erythropoietin：the role of sulfhydryl groups．and disulfide bonds（ヒト尿由来の meg・CSFとEpoの生化学的特性：スルフヒ ドリル基及びジサルフィド結合の役割） Expl Cell Biol 54：281－286，1986
3）Neuraminidase and hematopoietic factors
from hulnan urine（ヒト尿由来のノイラミニ ダーゼと造血ホルモン）
Expl Cell Biol 54：225－23S，1986
4）Iso】ation and characterization of genomic and cDNA clones of human erythropoietin （ヒトEpo遺伝子cDNAクローンの単離と 特性） Nature 313：806－810，1985 5）家族性高脂血症（WHO IIb型）を有し，飲酒に よりGross Hypertriglyceridemiaを呈した 女子糖尿病の1例 糖尿病 23（12）：1131－1136，1980 6）無踏言様運動を呈したIII・IV Pharyngeal Pouch症候群の1例 東京女子医科大学雑誌 50（12）：1095－1102， 1980 一673一
