小豆の加熱に関する研究(第3報) : 小豆熱水抽出液の高速クロマトグラフィー
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(2) . 北海道教育大学紀要 （第２部Ａ） 第３１巻 第１号 ｌ ｌｏ ｆＨｏｋｋａ ｉｄｏＵｎ ｉ ｉ ｆＥｄｕｃａ ｉ Ｓｅ ｉ ｔ ｔ ｔ Ｊ ＩＡ）Ｖｏ ｒ ｓ ｏｎ（ ｃ ｏｎｌ ｏｕ ｒ ｎａ ｖｅ ｙｏ ．１ ．３１ ，Ｎｏ. Ｓｅｐｔ ９８ ０ ｅｍｂｅ ｒ ，１ 昭和５ ５年９月. 小豆の加熱に関する研究 （第３報） －－ 小豆熱水抽出液の高速液体クロマト グラフィ ー －－. ＊ ＊ ＊ ＊ ＊ ＊ 村 上知子＊ ， 武井美智子 ， 中村一十三 ， 伊藤格三 ヰ北海道教育大学釧路分校家庭科教室 ＊ ＊北海道教育大学釧路分校化学教室. Ａ Ｓｔ ｔ３ ｔｈｏｄ ｏｆ Ａｚ”厩 Ｂｅａｎｓ（Ｐａｒ ） ｕｄｙ ｏｎ ａ Ｃｏｏｋｉｎｇ Ｍｅ. ｉｏｎ ｏｆｔｈｅ Ｈｏｔ ＶＶａｔｅｒ Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ａｚ綿々 Ｚ Ｂｅａｎｓ－－一－－ －－－－ＳｅＰａｒａｔ ＊ Ｍｉ Ｔｏｍｏｋｏ Ｍ ｉｋｏ ＴＡＫＥＩ＊＊， Ｈｉｔｏｍｉ ＮＡＫＡＭＵＲＡ＊＊， ＹａｓｕｚｏＩＴＯ＊＊ ［ ＵＲＡＫＡＭＩ ， ｃｈ ＊ Ｈｏｍｅ Ｅｃｏｎｏｍｉ ｉｖｅ ｉｏｎ， ｉ ｌ ｌ ｉｄｏ Ｕｎ ｉ ｆＥｄｕｃａｔ ｔｏ ｔｙｏ ｒ ｃｓＬａｂｏ ｒａ ｒｙ ｒ ｏ Ｃｏ ｅｇｅ ｓ ，Ｋｕｓｈ ，Ｈｏｋｋａ 率 率Ｃｈｅｍｉ ｌ ｉｄｏ Ｕｎ ｉｖｅ ｉ ｆＥｄｕｃａ ｉ ＩＬａｈｏ ｉ ｌ ｔ ｔｙｏ ｔ ｒ ｃａ ｒ ａ ｏ ｒｙ ｒ ｏＣｏ ｅｇｅ ｓ ｏｎ？ ，Ｋｕｓｈ ，Ｈｏｋｋａ Ｋｕｓｈ ｉ ｒ ｏ０８５. Ａｂｓｔｒａｃ ｔ ｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｈ ｉｏｎ ｏ ＳｅＰａｒａｔ ｉｇｈｌ ｉｑｕ ｉｄ Ｃｈｒｏｍａ‐ ｆｔｈｅ ｈｏｔ ｗａｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｏｆ Ａｚ ｚ ｚ励 ｂｅａｎｓ Ｗａｓ Ｃａｒｒ ｔｏｇｒａｐｈｙ． ＩＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏ ｆｔｈｅ ｈｏｔ Ｗａｔｅｒ 、～ｈｅｎ ｗｅ ｕｓｅｄ・ ０％ ａＣｅｔｏｎｉｔｒｉ．ｅ Ｗｉ ｔｈ ａＣｅｔｉＣ ａＣｉｄ ａｓｅｌｕｅｎｔ，ａｌ ｌａｖａｎｏｌｔａｎｎｉｎ． ｉ ｆ ｉ ｌ ｌｒｅｓｏｌｖｅｄ ａｎｄ ａｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆｔｈｅｍ ｗａｓｉｄｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔ Ｗｅｒｅ ｗｅ ｅｄ ａｓ ｆ. 緒. 言. ）で ′ 前報１ ・豆 の加 熱 過 程 に お い て 渋切 り 時 に 捨 て る， 熱 水抽 出 液中 に フ ラ バ ノ ー ル 型 タ ン ニ ン が ．ｊ. 存在することを報告した． この報告では小豆熱水抽出液を二次元ペーパークロマトグラフィ ー で展 開し， 赤血塩－塩化第二鉄試薬， およびバニリン－塩酸試薬を発色剤として用いると数個のスポッ. トが検出され， そのうち１個は標準 Ｄ－カテキンの位置とほぼ一致 し， その他については未検討 で あ っ た．. ）のペーパークロマト グ 今回，ノ ｉ ・豆熱水抽出液を高速液体クロマトグラフィ ー で分離を試み，前報１. ラフ ィ ー の 結 果 と 比 較 した． 即 ち， 高速 液 体 クロ マ ト グラフ ィ ー では 移動 相 と してメ タノ ー ル一 酢. 酸を用いると， この抽出液は全く 分離しなかっ たが， 移動 相として酢酸酸性アセトニトリルを用い ると３成分に分離した， これらの成分を高速液体クロマトグラフィ ー で分取し， 再び高速液体クロ マ ト グラフ ィ ー， お よ び ペ ー パー ク ロ マ ト グラ フ ィ ー を 行 な っ た． こ れ らの 結 果 に つ い て 報 告 す る． （５５ ）.
(3) . 村上知子・武井美智子・中村一十三・伊藤格三. 実. 験. ｝に従っ た 試料；小豆は 「アカネ大納言」（昭和５ ４年北海道産） を用いた． 小豆の選別は前報１ ． １ ） 小豆熱水抽出液の調製；小豆の熱水抽出は前報 に従っ て行なっ た．即ち，１ ５ｇ の小豆に１０倍量の ｏＣ に達するま で加 熱 した その後直ちに熱水抽出液 （ゆ で汁） を分離した 蒸留水を加 え９ ２ ． ． この操 作を５０回行ない熱水抽出液７．５ ８ を得た． その後抽出液は３ぴＣ 以下 で減圧濃縮し３０ｍｌ以下と し た． 生成した沈殿 をろ別 し， ろ液を試料として用いた． またろ液に倍量のアルコールを加 え一夜放 置後， 生成した沈殿 をろ別し， 沈殿区分とろ液区分 （アルコール抽出液） とに分けた ろ液区分は ． デシケータ中 で減圧濃縮し， 一方沈殿 区分は再び蒸留水 で溶かしデシケータ中 で減圧濃縮し それ ， ぞれ試料として用いた． 装置；装置は ６３５ 日立高速液体クロマト グラフィ ー を使用した カラムには長さ ５０ｃｍ， 内 径 ２．６ ． ｍｍ を使用 した． 充填剤の日立ゲル ＃３０１０は市販品をそのまま使用 し， 移動相と してはメタノー ル一酢酸およ び酢酸酸性１ ０％アセトニトリ ルの２種類を使用 した．. ） に 従 っ て 行 なっ た た だ し ペ ー パ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー ；ペ ー パ ー ク ロ マ ト グラフ ィ ー は 前 報１ ， ．. 二次 元ペーパーク ロマ ト グラフィ ー では 展開溶 媒の組合わせ を酢 酸酸性１０％アセ トニ トリ ルー ２ ％ 酢 酸 お よ び６０％ 酢 酸－ｎ－ブ タ ノ ー ルー水 （４ ： １ ：２ ２ｖ／ｖ） －ｉ ｓｏ－プ ロ パ ノ ー ルー水 （２２：７８ｖ／ ．. ｖ）に変更した．発色は１ ０％バニリ ン・エタノール‐濃塩酸試薬およ び赤血塩－塩化第二鉄試薬を使用 した． 試 薬 ；Ｄ－カ テ キ ン はメ ル ク 製 特 級， ア セ ト ニ トリ ル， 酢 酸， 塩 酸， メ タ ノ ー ル ｉ ， ｓｏ－プロ パ ノ ー. ル， ｎ－ブタノール， 赤血塩， 塩化第二鉄およ びバニリンはすべて和光純薬製特級を使用した ．. 実験結果およ び考 察 標準 Ｄ－カテキンの高速液体クロ マト グラフィ ーの結果は第１図ａ ，およ びｂ に示した． 移動相とし. て は メ タノ ー ル－酢 酸 （８０：２０ｖ／ｖ） ， お よ び酢 酸 酸 性 １０％ ア セ トニ トリ ル を 使 用 した． 流速 は １．ｏ ／ｍｉｎ 検 出 ｍｌ ２ は ８ ０ｎｍ な で行 た っ ． 第１ 図 ａ， お よ び ｂ に 示 した よ う に， 標 準 Ｄ－カ テ キ ン は い ず ，. れの移動相 でも単 一のピークを示した． また， 前述の溶媒の組合わせを用 いて行なっ た二次元ペー パー クロ マ ト グラ フ ィ ー でも 単 一 の ス ポ ッ ト を 示 した ．. 小豆熱水抽出液の高速液体クロマト グラフィ ーの結果は第２図， および第３図に示した 第２図は移 ． 動相としてメタノール－酢酸（８０：２０ｖ／ ｖ）を用 い， その他の条件は標準 Ｄ－カテキンの場合と全く同 じである．第２図に示したように小豆熱水抽出液は単一の ピークを示し，その位置は標準 Ｄ－カテキン. の ピークに近接していた． 第３図は移動相 を酢酸酸性１ ０％アセトニトリルにした場合であっ て， 図 に示したように３成分に分離した． ３成分のうち第２ の成分は最大 であっ て， 標準Ｄ－カテキンの ピー ク に 類 似 した． 第３ の 成 分 は 最 小 で あ っ た ．. 小豆熱水抽出液の二次元ペー パー クロマト グラフィ ー では バニリン－塩酸試薬 で発色すると３つ. のスポッ トが検出され， 赤血塩－塩化第二鉄試薬 で発色すると２つのス ポッ トが検出された． そのう ち１つ の ス ポ ッ ト は 互 いに 同 じ位 置 であ っ た．. これらのことから， 試料を繰り返し高速液体クロマト グラフィ ーに供し， それぞれの区分を分取 した．分取した各区分をデシケー タ中 で減圧濃縮した後，各区分を再び高速液体クロマト グラフィ ー （５ ） ６.
(4) . 小豆の加熱に関する研究 （第３報）. ０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ｉ ｍ ｎ. ０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ｉ ｔ ｎ ｎ. 第１図ａ 標準 Ｄ－カテキ ン の 高速 液 体クロマ ト グラフィ ー 条件；充填剤日立ゲル ＃３０１０ ， 移動 相メ タノー ／ｍｉ ル－酢酸 （８０：２０ｖ／ｖ） ｎ ， 圧力 ５０ ， 流速ｌｍｌ ｏ 検出 ＵＶ２８０ｎｍ ０ ３２ ｋｇ／ ｃｍ２ ， ． ， ， 温度 ２０～２５Ｃ ＡＵＦＳ愈. ０. １. ２. ３. 第１図ｂ. 標準 Ｄ－カテ キン の 高速 液体クロ マ ト. グラ フ ィ ー. 条件；移動相酢酸酸性１０％アセ トニトリ ル， そ の他はａと同じ．. ＊Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｕｎ ｉ ｌ ＩＳｃａ ｌ ｔＦｕ ｅの略. ０ １ ２. ４ ｒ ５ ｍｉｎ. 第２図 小豆熱水抽出液 の高速液体クロマ ト グラ フイ ー 条件；第１図ａに 同 じ，. ３ ４. ５. ６. ７. ｎ ｍｉ. 第３図 小豆熱水抽出液の 高速 液体クロマト グラ フイ ー 条件；第１図ｂ に同じ． （５７ ）.
(5) . 村上知子・武井美智子・中村一十三・伊藤格三. ０. １. ２. ０. １. ２ ０. １. ２. ０. １. ２. ０. １. ２ ｍｉ ｎ. ・. 第４図ａ 沈殿区分の 高速液体クロマ ト グラフィ ー 条件；第３図に同 じ， 但 し検出は２５０ｎｍ， ２６０ｎｍ， ２７０ｎｍ， ２８０ ｎｍ， ２９０ｎｍ で行なっ た．. ２ ８ ０ｎ ｍ ｌ. 総 . ２ ０ｎ ７ ｍ. ｌ. ２ ６ ０ｎ ｍ １. 帥. ２ ９ ０ｎ ｍ ｌ. ２ ５ ０ｎ ｍ. ｌ. ０ １ ２. ０ ・ ２. ０ １ ２. ０１ ２. ０ ェ ２ ｉ ｍ ｎ. 第４図ｂ ろ液区分の高速 液体クロ マト グラフィ ー 条件；第４図ａに同 じ．. （５ ８ ）.
(6) . 小豆の加熱に関する研究 （第３報）. に供した． その結果， 第１ ， 第２の区分はそれぞれ単一のピークとして現われたが， 第３の区分は検出 さ れ な か っ た． 一 回 の 高 速 液 体 ク ロ マ ト グラ フ ィ ー に 供 しう る 試料 は 最 大 で３０”１な の で， ３０ｍｌの. －プロ パノールを加 濃縮液を全部分離， 分取する為には長時間を要する． そこで濃縮液に倍量のｉ ｓ ｏ ｉ え， 一夜放置後， ろ過を行ない沈殿区分とろ液区分とに 分けた． ろ液区分（ ｓ ｏ－プロ パノール抽出区 分） をデシケータ中で減圧濃縮した． 沈殿区分は再び蒸留水で溶かし， 不溶性の部分を除いた後デ. シケータ中 で減圧濃縮した．. それぞれの濃縮液を試料として高速液体クロマト グラフィ ーを行なっ た， その結果は第４図ａ， およびｂに 示した。 第４図ａに示した沈殿区分は第３図の第１の成分にほぼ一致した， また， 第４ 図ｂに示したろ液区分は第３図の第２の成分にほぼ一致した． さらにまた， それぞれの試料の二次. 元ペー パークロマト グラフィ ーは前述の二種類の溶媒の組合わせ で行なっ た， 展開後， バニリン－ 塩酸試薬， および赤血塩－塩化第二鉄 試薬 で発色した． その結果， ろ液区分は共に同じ位置 で呈色 ｏＣ～９ｏ ｏＣ で した． 特に バニリン－塩酸試薬を噴霧後直ちに淡い桃色のスポッ トが現われ， これを ８０ 短時間加熱すると， より鮮明になっ た． また赤血塩－塩化第二鉄試薬 では青緑色を呈した． 沈殿区 分はいずれの発色剤を噴霧しても全く呈色しなかっ た．また沈殿区分は２ ５０ｎｍ から ３２０ｎｍ の 間 に 全く ピークを示さなかっ た． 一方ろ液区分は２８０ｎｍ 付近に ピークを示した （第４図ａおよ びｂ 参. 照） ．. ）で報告したように小豆熱水抽出液にはフラ バノール型タンニンを含ん で 以上のことから， 前報１. い る こ と が高 速 液 体 ク ロ マ ト グラフ ィ ー に よ っ て も 確 か める こ と が できた，. 小豆熱水抽出液を高速液体クロマト グラフィ ー で分離した報告はまだない。 しかしフラ バノール. ３ ） 中 山４ 〉等 の 報 告 が あ る ｉ と類 似の 構 造 をも つフ ラ ボン 類 の 液 体 クロ マ ト グラ フ ィ ー に つ い て Ｈｏｒ ， ．. この報告によると水酸 基の置換位置， その数， またメトキシ基の位置と数の相違による保持時間の 差は殆ん どないとされている．Ｄ－カテキンには６つの異性体が存在するが， 今回標準として使用した ｌ Ｄ－カ テ キ ン は ３，３′，４′，５，７－Ｐｅｎｔａ ｈｙｄｒｏｘｙ ｆ ａｖａｎ で あ る． ま た 類 似 の 構 造 を も つ ガロ カ テ キ ） に よ れ ば ガロ ｉ －ガロ カ テ キ ン に つ い て は 標 準 品 を 入 手 す る こ と が でき な か っ た． しか し文 献５ ン，ｅｐ. カテキンは， 赤血塩－塩化第二鉄試薬によっ て青色， バニリン－塩酸試薬 では加 熱によっ て深紅色 と さ れて い る．. ろ液区分（第２の成分） は高速液体クロマト グラフィ ー上 では Ｄ－カテキンの結果と一致した． ま たペー パークロマ トグラフィ ー上 での呈色はガロカテキンに類似した． 即ち， 赤血塩－塩化第二鉄 試薬 で青緑色， バニリン－塩酸試薬 で淡い桃色， そして加熱すると濃い鮮かな桃色となっ た。. 高速 液 体 ク ロ マ ト グラ フ ィ ー， お よ び ペ ー パー ク ロ マ ト グラ フ ィ ー に よ っ て， 小豆 熱 水 抽 出 液 に. フ ラ バ ノ ー ル型 タ ン ニ ン の 存 在 を 確 認 でき た が， そ の 種 類 を 同 定 す る こ とは でき な か っ た。 ま た 含. ま れ るフ ラ バ ノ ー ル 型 タ ン ニ ン を Ｄ－カ テ キ ン と 仮 定 す る と 小 豆 熱 水 抽 出 液 に は ０ ３％含ま れる ００ ．. ことになる． 今後， 大量の小豆熱水抽出液を調製し， 抽出液中に含まれるフラ バノール型タンニン を結晶化し， その構造を機器分析によっ て明らかにし報告する．. 要. 約. ０％アセ 高速液体クロ マトグラフィ ー で小豆熱水抽出液の分離を試みた。 移動相として酢酸酸性 １ ２ トニトリルを用いると， 抽出液は３成分に分離した．３成分のうち一番大きな成分は第 の成分であっ. た． この成分は小豆熱水抽出液にｉ ｓ ｏ－プロ パノールを加 えて得られたろ液の成分と高速液体クロマ （５ ９ ）.
(7) . 村上知子・武井美智子・中村一十三・伊藤格三. トグラフィ ー， および二次元ペーパークロマトグラフィ ー上 で一致した 第１の成分は沈殿の成分 ． と高速液体クロマトグラフィ ー では一 致したが， 二次元ペーパークロ マト グラフィ ー では確認でき. なかっ た． 第３の成分は高速液体クロマト グラフィ ー で分取濃縮した後 再び高速液体クロマトグ ， ラ フ ィ ー を 行 な っ た が確 認 でき な か っ た ． 第 ２ の 成 分 は フ ラ バ ノ ー ル 型 タ ン ニ ン であ る こ と が確 か め ら れ た が そ の 種 類 を 同定 す る こ と が ， でき な か っ た．. ・豆をご恵与下さっ た， 十勝農業協 同組合連合会種 子センターに深謝する ．. 献. 文. １） 村上知子． 北教大紀要１ ＩＣ， ２ ８（ ２ （１ ） ） ９７ ８ ， ３１ ． ２） 中林敏郎， 木村 進， 加藤博通．“食品の変色とその化学”光琳書院・東京・ （１ ９７ ２）ｐ ６一７７ ．７ ． ｉ ３） Ｍ．Ｈｏ ｒ １９６９ ｃ ） ．Ｃ庇 伽，Ｓｏ ．超卿〃， ４２ ，β”” ． ，２３３３（. ４） 中山 充， 平岡三津子， 松尾昭彦， 林 修一 鷹野重成 “日立ゲル応用例 （学会 学会誌発表論文集） ”日製産 ， ． ， 業株式会社・日立・ （１９ ７５ ）ｐ 一 ５ ９ ６ ２ ． ． ｔ ｛ ｉｏｎａｒ ｏ ”ＶＯＩ １ Ｅ ｒ ５） Ａ．Ｈ．Ｃｏｏｋ ｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉ ｙ ｆｏｒｇａｎ ｔ ｔ ．ＢｕｎｂｕｒｙａｎｄＤ．Ｈ．Ｈｅｙ， Ｄｉｃｔ ，Ｈ，Ｍ ｓｗｏｏｄｅ ｙｅ ＆ Ｓｐｏ ． Ｐｕｂ ｌ ｉ １９６４ Ｉ ｓｈｅｒ ｓＬＴＤ，Ｌｏｎｄｏｎ（ ）ｐ １９６４ ）ｐ ．２ ．５７２ ．１４９５ ． ，ＶＯ ，（. （６ ） ０. ，.
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