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6ンフルエンザ・ビールスの 発育促進物質に就て
金沢大学医学部細菌学教室（主任 谷教授）
土 井
7 amotsu Doi
保
（昭和27年4月25日受附）
第1章緒
Smith， A ndrewes＆Laidhw（1933年）がFerret の経鼻感染1）に成功して，インフルエンザ・ビ ールス研究の第一一歩を踏み出した．その後感受 性のある動物が次々と発見されたのであるが，
就中19斗1年HeDle＆Cl）tunbersによって鰐化鶏 卵尿膜腔内培養法2）が発見されるに及び，大量 のインフルエンザ・ビールス〈以後「イ・ビ」と略 記）が比較的簡輩に入手出阿るようになった．
その後今日迄，との培養法が殆んど完全である
言
かの如く思われて潤た爲か，「イ・ビ」の発育要 素に関する業績3）一一：）は比較的少ないようであ る．著者は由仁院8）が痘毒で，又鰍谷9）がRic−
kettsiaで行った：方法を踏襲して，「イ・ビ」に各 種アミノ酸，ビタミン及びその他数種の物質を 添力比たいわゆる艀化鶏卵添加培養を行い，そ の癸育効果について槍討したのでここに一括報
告する．
第2章 実験材料並びに実験方法
第1節実験材料
1．培養に使用した「イ・ビ」：国立予防衛生研究 所より分譲を受けた「イ・A・ビ」（PR8株）及び「イ
・B。ビ」（Lee株）を夫々11日卵の尿膜腔内に援種 し，36。Cにて48時間培養後直ちに尿液を採取した．
そして4。Cに2〜5日間保存した尿液を使用した．
2．添加物質
a．アミノ酸：グリシン，dl一ヴアリン， dl一一イソロ イシン，d一一グルタミン酸，1・一グルタミン酸ソーーダ，レ ブエニールアラニン，チロヂソ，1一一アルギニンedi一塩 酸オルニチソ，dしチトルリソ，クレアチニン，1一プロ リン）タウリン，塩酸ヒスチヂン，塩酸ペタイソ等で，
これらの濃度は原則として51ug／cc蒸溜水水溶液とし て使用した，ただしd一グルタミ：／酸は10mg／cc，チロ ヂソは2mg／cc7 dl一塩酸オ・ルニチソは2・5mg／ccとし て使用した．なおこれら溶液の滅菌にはザイツ濾過板 による濾過法を用いた，
b．ピタミソ＝ビタミンB1（10mg／cc武田），ビタ ミン：B2（1mg／cc武田），ビタミン。（50mg／cc田辺），
ピタミソB1望（15Y／cc武田），葉酸（15mg／cc武田）等 を使用した．
c．その他の物質：デスオキシリボ核酸（20mg／
cc），焦性葡萄酸（10mg／cc），イヌリン（10mg／cc），
CaC12 ・ 21 120（20mg， cc），インシュリン（20軍位／cc 武田）等を使用した．
3．赤血球凝集反応用赤血球：クエン酸ソーダ加難 血液を3回洗顔し，赤血球の0・25％食塩水浮游液とし て使用した．
第2節実験 ：方法
1，培養法：稀釈しない「イ・ビ」感染尿液に原則 として添加物質の等量を試験管内にて混合し，その混 合液O．2ccを4〜5個の11日卵尿膜腔内に接種し，36。
Cにて48時聞培養の後に各卵の尿液を探取した．なお 対照として生理食塩水を同容童添加した群を設けた．
【 1 コ
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2．判定方法 ：厚生省編纂のインフルエンザ診 断指針10）に從って探取各馬丁の赤1血球凝集価を測定
し，更に対照群と物質を添加した添加群との各々につ いて，Reed＆muenchの方法11）によって50％赤血球
凝集価（以後HAT50と略記）を夫々算記した・この 糠にして得られたHAT50によって上述の2群を比較 し，添加群のIIAT50／対照群のHAT50を以って添加 群の壇殖倍率とした．
第3章実験成績
第1節 各種アミノ酸の影響
実験域績は第1表に示す如くで，良好な発育 促進作用を現わすアミノ酸は無く，かえってグ ルタミン酸は発育抑制的に作用し，特に「イ・
B・ビ」の発育を全く阻止した．
第1表：各種アミノ酸の影響 1 一 2 ：一丁L殖一一峯＿
ア、ノ酸1添加量iA型
グ リ シ ン
dl一ヴアリン
dl一イソロイシン d・グルタミン酸
1一グルタミン酸ソーダ
（mg）（PR8）
：O・51 ・2〜1・6 0．5 1
0．9
・．5｛1．・
11．010．04
0．5 1一フェニF一ルアラaソ10・5
チロヂン「0．2
1
1一アルギニン 0．5
dl一塩三三ルニチン10．25
dLチトルリン 0．5 クレアチニン 0．5
1・ プ ロ リ ソ 0．5
タ ウ リ ン 0．5
塩酸ヒスチヂン 0．5
塩酸ペタインro・5
【（Is型1，ee）
8i3
6a
殖牽は次第に減少傾向を示したが，：Lee株は殆 んど影響されなかった．（第3表参照〉
第2表：ビタミンB1の影響
墳 殖添轟量棚藤（蜘
・・25 ｢・・一1・4
0．5 1 1．0
1・O 1 1．6r・一2．5 1・5 1 6．8・v14・8 2．0 1 3．3N3．9
倍 i率
ゆ型（周 1 1．0
1．0
1．3t−v4．0 2．4 v10．5 1．2−v2．5
1．Orvl．80．7tN−1・4
1O．9
1．1
0．7 1．0 1．O
O．7 1．1 1 ．e
1．2 i．i i
1．0
1．O e．g 1．O O．7 0．8 0．9 1．0
第3表：ビタミン：B2の影響 一一＿＿増 殖． 倍＿＿一血
肥轟）量剛・R8）B型岡
O．025 0．05 0．1
O．9 0．5
0．12一一vO．4
O．9 0．8
0．s−vo．g
，．i 1
1．2
第2節 各種ビタミンの影響
1．ビタミンBlの影響：第2表に示すよう
に0．5mg以下の添加では発育促進効果を期待出 來ないが，1 ．Omg以上添加すると促進作用が発現し始め，1．5m9添加の場合に最も著効を示
し，更に2．Omgに於いては却って効力減退の傾 向を示した．殊に15m9添加の際に， PR8株に 対しては6・8〜14・8倍，Lee株に対しては2．4〜
105倍という驚異的な増殖促進作用を示し，凝 集価は最：高40，000に達した．
2．ビタミンB2の影響＝添加B2量を0．025
mgより次第；に」曾加するに從って， PR8株の増3．ビタミンB，及びB2併用添加の影響i：最 も効果のあるビタミン｝ll 1．5m9にB2の種：：々量：
を添加して見たが，：B1それ自身の発育促進作用 が更に増張されるようなととはなかった．（第
4表参照）
第4表1ビタミン：B汲びB2併用添加の影響
噌 殖 倍 寧
玉髄蚤・型（・R8）
B型（Lee）Bl 1．5 B2 O．025
Bl 1．5 B2 O．05
旨B1 1．5 1 Bq O−1
米 （
12．2
（12．0）＊
12．0
（12．0）
5．8
（12．0）
7．9
（＆0）米
8．0
（8．0）
3．9
（8．0）
）内数字はB1軍用の場合，即ちBl対 照の壇殖倍率を示す
［ 2 ］
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4．その他のビタミンの影響：ビタミンB12
及び葉酸は何れも増殖促進効果を期待出來なか ったが，ビタミンCは：Lee；株に対して軽i度では あるが促進的傾向（増殖倍率1．5〜1．8）を示し た，（第5表参照）第5表：その他のビタミンの影響
ビタミン…添加量（mg）
V． B12 v． c 葉 酸
O．OO15 1 1．4
5．0 1 1．3 1．5 1 1．1
一＿＿曾＿殖」言一率 A型（PR8）、：B型（：Lee）
1．0
1．5 kvl．8
1 O．8
12）であるイヌリン，無機塩であるCa C1，及び糖 代謝に関与するインシュリン等を夫々添加して 見たが，何れも発育促進効果を示さなかった．
（第6表参照）
第6表：その飽の物質の影響
1物…再⊥盤懸騰l
lデスオキシリボ礫1？・・11・・」・・2
1凹凹半 凾P：1
1．01．1第3節その他の物質の影響
細菌発育素としてしばしば用いられるデスオ キシリボ核酸及び焦性葡萄酸，抵抗減弱化物質
イ・リン B8：ll：1
1．01．2CaClof 2HnO 2．0 i．o 1
インシュリンi躍ll：8
i．e li −1 1．1 1 1．1 l
e
第4章総括並びに考按
さてここで以上の実駿成績を振り返って見る
に，
1．「・f・ビ」のアミノ酸構成につbては：Knight 13）によってすでに分析成績が発表されている．
そして「イ・ビ」のA型及びB型の抗原性の相違 は恐らく構成アミノ酸の量的相違によるもので あろうと述べて居る．そこで著者は「イ・A・ビ」
により多く含有されて居るグルタミン酸ソ■一ダ 及びチロヂン，叉「イ・B・ビ」により多く含有さ れて居る1一アルギ＝ンを添加培養した場合に，
「A・ビ」あるいは「B・ビ」が特異的に増殖促進を
示すかも知れないと考えて実験を行って見た
が，両型の発育程度に：何んらの相違も認められ なかった．2．d一グルタミン酸は「イ・ビ」の発育を強く 抑制したが，これは輩なるPHの影響14）15）と考
えられる．特に「イ・B・ビ」は酸性溶液内でより 容易に不活性化されるから，接種：前の混合試験 管内に於いて酸性であるグルタミン酸の影響を 受けて殆んど完全に不活性化され，從ってその 増殖率が0となったのだと思われる．
3．ビタミンB・の発育促進作用について考察
するに，（tl）焦性葡萄酸の酸化に必要なコカ ルボキシラーゼはビタミンB1のピロ燐i酸エステ ルであって，動物体内では，ビタミン：B1は主と して〜二の形で利用される．（b）Ackermann 7 ｝は Krebsの回路の酵素系を抑制する化学物質によ って，「イ・ビ」の発育抑制に成功して居る．そ して「イ・ビ」の宿主組織内に於ける解糖エネル ギーを利JIJして，「イ・ビ」が宿主細胞内で増殖 するのだろうと述べて居る．以上の事よりビタ ミンBlの大量：投与が直接宿主である尿膜組織の 糖代謝を促進し，その結果生するエネルギーを 利lljして「イ・ビ」の合成が促進されるのかも知 れない．宿主組織の代謝促進と「イ・ビ」の発育 との関係についてはすでにK：alter， Sturt＆
Tepperman 5）によって報告されて居る．即ち宿 主細織の蛋白同化作用を促進する発育ホルモン
あるいはテストステ・ンがマウスの肺に於ける
「イ・ビ」の発 育を促進させると述べて居る．し かしKilboume＆Horsfall S）は，コーチゾンによ って同化作用を低下させた二化鶏卵を使用して
「イ・ビ」及びムンプス・ビPtルスの発育促進を 証明して居る．そしてビールスの増殖をより良
［3 ］
500 土 弁
好ならしめる爲には宿主組織の生理的代謝を不 均衡にする事が必要条件であろうと推論して居 る．そeで著者は糖代謝の不均衡を目的に，イ ンシュリンの比較的大量（2輩位）を使用して見 たが，「イ・ビ」の増殖促進作用を得る事が出來な かった，從ってビタミンB置の発育促進作用も箪 なる糖代謝の不均衡とも考え難い事になる．更 に宿主の代謝と無関係に，ビタミンB，のある構 成部分がビールス合成の基質として：利用される 可能性も考えられるから，Krebsの回路に於け る解糖エネルギーを直接利用するのだと断言も 出來ない．要するにビタミンB1の発育促進機序
はなお不詳であるが，宿主細胞の解糖過程が
「イ・ビ」の発育にある意味を持つように思える．
4．ビタミンCがPR8株よりLee株の発育に
幾分効果的である理由を考察するに，Magill＆：Francis 3）は嫌気的状態にてPR8株の組織培養 を行うと発 育が悪くなると報告して居る．又幅 見，砂川6）はLee株を同様の条件で培養すると 幾分発育が良好になると述べて居る．從ってビ タミンCの：Lee株に対する効果は低電位物質を 添加したという意味に於いて有意義であったの
カ〉も失ロれなV・．
『第5章結
インフルエンザ・Aビールス（PR 8株）及びB ビールス（Lee株）に各種アミノ酸，ビタミン及 びその他i数種の物質を添加し，艀化鶏卵脈絡尿
膜腔内培養を行った処，次のような知見を得
：た．
1・15種類のアミノ酸を使用したが，何れも 発育促進作用を示さなかつfz．
2．ビタミン：B10．5m9以下の添加の場合には
促進作用を示さなかったが，LOmg以上添加す
ると促進作用が発現し始め，1．5in9で最も著効 を示した． 更に2．Omgに於いて：は幾分効力減弱 の傾向を示した．
論
5．ビタミンB2 O．lmg添加に於いてはPR8株 に対し増殖抑制を示したが，Lee株に対しては 殆んど影響を示さなかった．
4．ビタミンBl及び：B2併用添加を行って見た が，B1軍用の場合との間に著明な相違を認め なかった．
5．ビタミンB；？）ビタミンC，葉酸及びその 他アミノ酸，ビタミン以外の5種類の物質につ いて添加培養を行ったが，何れも著明な促進作 用を認める事が出來なかった．
欄筆するに臨み恩師谷教授の御懇篤なる御指導並び に御校閲に対し深く感謝します．
文
1） Smith， W．， Andrewes， C． H． amd Laidlaw，
P． P．： Lancet ， （II）：66 （1933） 2） Henle，
W． and Chambers， L． A．： 1 roc． Soc． Exp．
Biol． Med．， 46； 713 （1941） 3） Magill，
T． P． and Francis， T． Jr．： J． Eyp・ Med・，
63：803（1936） 4）富盛秀雄・砂川澄子：伝 研予研学術集団会演述（昭和23・4） 5）Kalter，
S． S．， Stuart， D． C．， Jr． and Tepperman，
J．： 1 roc． Soc． Exp． Med．， 74：605 （1950）
6） Kilbourne， E． D． and Horsfall， F． L．，
Jr．：Proc． Sec． Exp． lliol． Med．， 76：116
（i951） 7） Ackermann， W． W． ： J． E： p・
Med・，93＝635（1951） 8）貴宝院秋雄i＝京
旧
都府立医大雑誌，20：1458（1937） 9）溺谷 喜兵衛：十全医学会雑誌，51＝191（1949）
10）七生省編纂＝衙生槍査指針，（1【）＝160（19 50）協同医書出版砒， 11）Reed， L． J． and Muench， A．： Am． J． Ilyg．， 27：493 （1938）
12）大島俊雄：日本衛生学維誌，5，（2）：6（19 50） 13） Knight， C． A．： J一 Exp． Med．，
86：125 （1947） 14） Briody， B． A．：
Bacteriological Rev．， 14：65 （195e） 15）
Horsfall， F． L．， Jr．： Vira］ and Rickettsia］
Infections of Man． Edited bv T． M． Riverg ： 303 C1948） J． B． ljippincott Co．， 1 hiladelphia．
［4 ］
