IRUCAA@TDC : 高脂肪環境下にLPS 刺激が加わった際の歯髄細胞の反応

Posted at the Institutional Resources for Unique Collection and Academic Archives at Tokyo Dental College, Available from http://ir.tdc.ac.jp/

Title

高脂肪環境下にLPS 刺激が加わった際の歯髄細胞の反応

Author(s)

髙田, 佳奈; 田宮, 資己; 杉内, 亜紀奈; 村松, 敬; 古

澤, 成博

Journal

歯科学報, 116(5): 386-386

URL

http://hdl.handle.net/10130/4111

Right

Description

３８６ 学 会 講 演 抄 録

№７：高脂肪環境下に LPS 刺激が加わった際の歯髄細胞の反応

髙田佳奈，田宮資己，杉内亜紀奈，村松 敬，古澤成博（東歯大・保存） 目的：生活習慣病のひとつである脂質異常症は，血 中の脂質量が過剰な状態を示し，後に心筋梗塞や脳 梗塞などの起因となりうる。近年，脂肪が過剰な状 態では細菌受容体である TLR２や TLR４が高発現 となり，この状態に細菌感染が加わると NF-κB 経 路を介した炎症性サイトカインの著明な上昇が認め られ，炎症が増悪することが報告されている。しか しながら，脂肪が歯髄細胞に対してどのような影響 を与えているかは明らかにされていない。本実験で は，培 養 歯 髄 細 胞 を 高 脂 肪 環 境 下 で リ ポ 多 糖 （LPS）刺激をした際の炎症性サイトカインの発現 を検索した。 方法：研究にはヒト歯髄細胞（HDP，広島大学・ 高田隆教授より供与）を Dulbecco ’s MEM（１０％ FBS，１００U/mL penicillin-streptomycin 添加）で培 養したものを用いた。高脂肪環境は Wobser（２００９） の方法にしたがい，培養液中にパルミチン酸を最終 濃度が１００µM になるように添加することで作製し た。HDP を３５mm ディッシュに５×１０４ 個／mL の密 度で播種し，２４時間後にパルミチン酸を添加した群 （Pal 群），LPS（１µg/mL）を添加した群（LPS 群）， パルミチン酸と LPS の両方を添加した群（Pal＋ LPS 群）を作製した。刺激２４時間後に細胞形態を 位相差顕微鏡で観察した後，total RNA を抽出し， TNF-α，IL-１β，IL-６の発現を RT-PCR 法で検索 した。 結果および考察：細胞形態に関し て は，Pal 群， LPS 群，Pal＋LPS 群のいずれにおいても変化は認 められなかった。RNA の発現については，すべて の群において TNF-α ，IL-1β ，IL-6 の発現が認め られた。Pal 群と LPS 群では発現に差は認められな かったが，Pal＋LPS 群においては強発現が認めら れ，特に IL-1β についてはこの傾向が強く認めら れた。以上の結果から，歯髄細胞は高脂肪環境にお いて炎症性サイトカインの発現が上昇し，細菌感染 によってその発現が増強されることが示唆された。 現在，パルミチン酸の濃度ならびに時間依存性変 化，炎症性サイトカインの定量化も検索していると ころである。

№８：Interleukin-６刺激に対するブタ由来 Malassez 上皮遺残細胞の反応

佐古 亮，小林史枝，村松 敬，古澤成博（東歯大・保存） 目的：Malassez 上皮遺残は歯根膜中に存在する歯 原性上皮で，細菌感染などの刺激がない環境では静 止状態を維持し続ける。しかしながら，感染根管か ら細菌の刺激をうけると増殖し，歯根嚢胞の形成に 関与すると言われている。根尖病変からは炎症性サ イトカインの一種である interleukin-６（IL-６）が 検出されており，骨吸収に関与すると考えられてい る。一方，上皮細胞においては IL-６が増殖能や運動 能を調節することが報告されているが，Malassez 上皮遺残にどのような影響を及ぼすかについては明 らかとなっていない。そこで本研究では，Malassez 上皮遺残に対する IL-６の影響を検索する目的で， Malassez 上皮遺残細胞を IL-６で刺激した際の細胞 活性，運動能，細胞接着因子の発現について検討を 行った。 方法：実験に は ブ タ 由 来 Malassez 上 皮 遺 残 細 胞 （北海道医療大学・安彦善裕教授より供与）を D-MEM（１０％FBS，１００ U/mL penicillin-streptomycin 添加）で培養したものを 用 い た。刺 激 は ヒ ト re-combinant IL-６（１００pg/mL）を培養液中に添加し て行った。なお，対照群としては IL-６非添加の培 ４ 養液を用いた。細胞活性は，９６-well plate に１×１０ cells/well の密度で播種し，IL-６を添加し，１２時間 後に WST-１ assay を行い検討した。細胞運動能の ５ 検索は，５×１０cells/dish の濃度で播種した後，ス クラッチを加えて IL-６を添加し，１２時間後に創部 の面積変化を測定した。また同時に integrin α３に対 する免疫蛍光染色を行い，細胞接着因子の局在を観 察した。 結果および考察：細胞活性については，IL-６を添 加してから１２時間以内では低下傾向を認めたもの の，明らかな差は認められなかった。運動能に関し ては，IL-６添加群では対象群に比較して創部の閉 鎖傾向が認められた。また integrin α３は創部に近い 側の細胞辺縁に局在が認められた。これらの結果よ り，Malassez 上皮遺残は免疫応答により生じた IL-６により integrin α３を発現し，細胞運動能が亢進す ることが示唆された。 ― 42 ―