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河川水中に於ける緑膿菌,大腸菌群および大腸菌に関する研究(第1報)

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Academic year: 2021

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(1)Title. 河川水中に於ける緑膿菌,大腸菌群および大腸菌に関する研究(第1報). Author(s). 青井, 陽. Citation. 北海道教育大学紀要. 第二部. C, 家庭・養護・体育編, 37(1): 1-6. Issue Date. 1986-10. URL. http://s-ir.sap.hokkyodai.ac.jp/dspace/handle/123456789/6648. Rights. Hokkaido University of Education.

(2) . 1年10月 昭和6. 北海道教育大学紀要 (第2部C) 第37巻 第1号. oc t ober , 1986. l Sec i I C)Vo i t fEduca i t t i i on l lo fHokka do Un on( vers Journa ,37 ,l yo ,No. 河川水中における緑膿菌, 大腸菌群およ び大腸菌に関する研究. 〈第1報〉. 陽. 井. 青. 北海道教育大学旭川分校保健学教室. i Stud es of. i forms and Fecal col l col - pse%dの明り7 2αs α8γ錫gz“osα, Tota .. i forms i n the River. Waters (Par tl ). YO AOI f Educa i t i do Un i t i l l kawa Co l on h Sc i s f Hea l ver Depar t ege tmento yo ence , , Hokka , Asah Asah i kawa , 070. Abstract. i formsl lcol i formsandthef eca hetotalnumberofcol fps a Thenumber 2 0伽s 僻γ“郡伽sα e“の” so ,t 5 P d ft h S r e T h MP N 徹α s o 鯛 We i d h e ” i so e e ngt e summer he Ushubetsuriver wereinvestgate dur , . t 1 3 i 1 t l 1 9 8 5 K i 7J e h i d i d e S c l f H v ; r e s e l j n u h o no t y na n n o p / 100mli t ・ n e s e n r o m y s a a { 5and17 n e p , , , ・t l l and f i l t eca l o a i ve y / loomli n on 30 Ju node and Sh n Hi y , The MPNs oft and 5 , respec , 1985 5 6 l i t 1 looml respec ve l y ー i f . The n Hinode on 7 Ju y ,o × 10/ co orms i ,72 × 10 and 7 , were l , 985. i i f l fbothco orms Wereh numberso ghdownstream andlow up stream,. i f Feca lcol orms were detected. ・ th LB Were ft he Psg“do粥o“αs evaluated wi he mountain, The MPNso i nt slocatedi chi at pepan wh 、 th NACB, l l i th s g y higer than those evaluated wi. 緒′. 言. 2~1 4 }に広く分布し ・ 8一1 ) 植物体表面等1 7 ) ヒ ) 土壌6 , 緑膿菌は, 表層水1~5 , , トおよび動物の糞便 ,. 6 ) 1 51 て い る こ と が知 ら れ て お り, こ れ ら が 汚 染 源 と し て 重 要 で あ る こ と が示 唆 さ れ て い る ・ , 緑 膿. 45 ) 菌は河口域や都市域の河川 水中から高率に分離さ れる’ , ただ, 本菌が河川水中の常在菌である 7 ) か 否 か につ い て は不 明 で あ る1 ,. 旭川市街を貫流するすべての河川 は同市周囲の山地に水源をもち, 比較的短い流程の後, 旭川市 周辺または市 内で合流し石狩平野へ流出する, これらの河川は河川水が人間活動によって汚染され (1).

(3) . 青. 井. 陽. てゆく様相を端的に表現すると思われる, 著者は前報において, 冬期における旭川市内を貫流する河川水中の緑膿菌および大腸菌の分布に 8 〉 本研究では夏期における牛朱別川水系の緑膿菌 大腸菌群および大腸菌の ついて報告した1 分布 . , について報告する. また, 乳糖 ブイ ヨン培地を用いた最確数法に よる河川水中の緑膿菌の算出につ いて若干の考察を行ないたい.. 材料および方法 1. 採水地点, 採水方法, 日時およ び天候 8 )と同じである (ただ 石狩川支流である牛朱別川水系において採水を行なった, 採水地点は前報1 し米飯については前報より更に上流で採水を行なっ た) , 各採水地点の河水面ほ ぼ中央へ滅菌採水. びんを投 下して, 検水を採取した. 採水日は1985年7月10日およ び30日の2 日 間 で 9 時 か ら13時 , の間に採水を行な っ た. 天候は両日ともに晴, 水温は米飯において7月10日は14 0 . ℃, 7月30日は 14 5℃ で あ り, こ れ 以 外 の 採 水 地 点 に お い て は21℃ か ら24℃ の 間 で あ っ た, . ,. 2. 培地. 使用 した培地は以下の通り である, NAC ブイ ヨン培地 (NACB) , NAC 寒天培地 (NACA) , 乳糖 ブイ ヨン培地 (LB) B G L B 培地 E M 培地 B 普通寒天培地 IM , , , , クリ グラー確認培地, S 培地, シモンズクエン酸ナ トリウム培地, ブ ドウ糖燐酸 ペ プ トン培地 VP 半流動培地 K ngA , , i およびB 培地 (以上栄研化学) . 3. 緑膿菌数. 河川水中の緑膿菌数は以 下の方法によって算出した. 検水1om Bづっを2倍濃度 NACBI0mgへ 5 本, 1 倍 濃 度 NACBI0mゼヘ lmeお よ び0.lmgづ つ そ れ ぞ れ 5 本 接 種 し, 37℃ で96時 間 ま で 培 養 した. 菌の発育 が認められた試験 管から0 gを NACA 平板へ接種 した, 37℃ で48時間培養後発育した .0lm コロニーを, 平板1枚当5~10個釣菌し緑膿菌の同定を行なっ た, 緑膿菌が分離された試験管数か ら最確数を算出し, 検水中の緑膿菌数とした. また, 河川水中緑膿菌の算出について, NACB と LB の性能の比較を行なう目的で以下の実験を 行なっ た. 7月10日において大腸菌群最確数の算出に用いたLB から同時に NACA平板へ0 Bを .0lm 接種し, 緑膿菌の存在の有無を調べた. LB は37℃で7 日間培養を行ない この間1日 3日およ , , び7 日目にNACA平板への接種を行なった. その結果から緑膿菌の最確数を算出した , 4. 緑膿菌同定のための諸試験. 緑膿菌同定のために以下の生物化学的試験を行なっ た, グラム染色, 鞭毛染色 42℃における発 , 育, グルコン酸酸化試験, アルギニン水解試験, K i ngA およびB 培地を用いた色素産生試験, オ キ シ ダ ー ゼ試 験, ア シ ル ア ミ ダー ゼ 試 験, ブ ドウ 糖 お よ び マ ニ トー ル の OF 試 験 シ モ ン ズ ク エ ン ,. 酸ナ トリウム培地によるクエ ン酸利用, クリ グラー確認培地を用いたブ ドウ糖非発酵性 および硝 ,. 酸塩環元試験. 5. 大腸菌群および大腸菌数. LB, BGLB およびEMB 培地を用いた 推定 確認および完全試験を行ない 最確数法によっ , , , て検水中の大腸菌群および大腸菌数を 算出した, BGLB 発育菌中, グラム陰性無芽胞菌 で乳糖を 分解 し酸およびガスを産生 ずるものを大腸菌群とし, また大腸菌はIMVIC テス トによっ て同定し た.. (2).

(4) . 河川水中における緑膿菌, 大腸菌群および大腸菌に関する研究 〈第1報〉. 3. 一般細菌数. 6. 1% ブ ドウ糖加普通寒天を用 いた混釈平板法によって一般細菌数を算出した,. 結. 果. 工. 河川水中の緑膿菌, 大腸菌群, 大腸菌および一般細菌数について Figure l に1 985年7月10日の, また F i r e2に7月30日の, 牛朱別川における緑膿菌, 大腸菌群 gu および大腸菌の最確数 (/loomの および一般細菌数 (/loom e) を示す,. ー3 0. Samp li ngp oints. Sa li l n 1 1 p s 9poinヒ. fPs効はo . z ’ ’の加野 α8mg Fi gure l, The MPNso l df 副 co 避or t 副 … t i e c l o ・ I Q s a o c “osα , i d CFU o ftotalbactedai f n t l onnsa. F i fPs i e”do , “o“ ‘硲 α8 ’似g - gure 2 , The MPNso. I 貢 1 i ter s 中 each sa 」 nP r ver wa g Po中t l i su r ver on lo Ju of Ushubet y ,. i t I山gPo山t r ver wa er s 節 eachsa l 〕 nP s. 1985 .. 1985 ,. i : P,αe粥g ⑩. ”o sα 0 : Tot須co柾orms. . t副 co征orms and f l co l ”o sα o eca - ,t i f lbac i ter t ormsand CFU oft a a ai n f Ushube i t l o su r ver m 30 Ju y ,. ○ : Tot司 co紙orms ◎ : Feca lco騒orms. lco厳orms ◎:Fec a ft t tmba e :CFUo c eda a. e : CFU oft tmbac t a eda. 7月10日において緑膿菌を検出した採水地点は, 旭川市街中心部又はこれより下流に位置する日 出 橋, 新 橋 お よ び江神 橋 で あ り, そ の 数 はそ れ ぞ れ 5 5お よ び1 7×10/loomeで あ っ た (Fiurel) g , , . ,. (3).

(5) . 青. .陽. 井. これ ら以 外の採 水地点 において は緑膿菌 は検出 でき なかっ た. 大腸菌群 は米 飯において3 .3×. 3 10月 mm eで あ り, 端 穂 に お い て は1 .72×10 月oo確 と 急 増 し, 更 に 下 流 へ 向 か う に し た が っ て 増 加 6 して ゆ き, 日 出 橋 に お い て は1 eと 高 い 値 を 示 し た. ま た, 大 腸 菌 は 米 飯 に お い て 微 .72×10/loom. g) 量であるが検出され (2月oom , 大腸菌群同様に下流へ向かうに従って増加してゆき, 日出橋に 5 お い て 最 大 値7 gを 示 し た. ,OXI0/loom. 7月30日において緑膿菌を検出 した採水地点は, 日出橋 および新橋であり, その数はそれぞれ i eで あ っ た (F 1 gure2) .3×loお よ び 5 月oom . これら以外の採水地点において は緑膿菌は検出で きなかっ た. 大腸菌群は米 飯 に お い て7,9×10月oomeで あ り, 以 後 下 流 へ 向 か う に 従 っ て 増 加 して. ・ 大腸菌 6 ゆき, 7月10日同様日出橋から急増し, 最大値は江神橋における1 eであった. .6×10/loom e ) が算出され, 大腸菌群同様下流へ向かうに従って増加してゆき, は米飯において少数 (6月oom 4 3 4 g eで 日 出 橋 に お い て1 .o×10 月oome ,2×10/loom .9×10/loom , 新 橋 で9 , ま た 江 神 橋 に お い て は7 あ っ た,. 虹. 乳糖 ブイヨン培地を用いた最確数法による緑膿菌数の算出. 7月10日における大腸菌群および大腸菌算出のた めに検水を接種 した乳糖 ブイヨン培地 (LB) か ら, 菌液をo BNACA 平板 へ 接種 し 7℃48時 間 培 ,olm. - Tab 2g“餌α e ,. MpNs of pse”のmoれ鯛 解γ ,. 養後 発育 したコロ ニ ー が緑膿菌 である か否かを調べ. i h NACB tMty wi t compa r ethe sens n U 節欲 。 d陀, w欲ぼ md LB,i l u on loJ y . The MPNs were ,1985. こ の 結 果 か ら最 確 数 法 に よ る 検 水 中 の 緑 膿 菌 数 を 算. he tht h NACB and wi t t ev副ua ed wi. 出 し た,. Sa mneset uret sofco旺omsc副t ubes. そ の 結果 を Tab l e l に 示 す. 対 照 と し て. fLB o ・. NAc ブイ ヨ ン (NACB) を用いて算出 した緑膿菌 の 最 確 数 を 示 す.. 培 養 1 日 目, 日 出 橋 に お い て3 .3. s 瀞 蟹 琶. ・ ono o粛と. NACB を 用 い た 最 確 数 よ り も 高 い 値 が 示 さ れ た. ま. MPN/ l o omlb yLB. 賦 鴛ざ. ,。omlby MPN/. N畑. Pe p n a p. o. Mi zuho. o. o ′ o. o. いた時. o. o. 緑膿菌は検出され なかっ たが, LB を 用 い た 場 合 に は培養1 日目に功橋で2個, また香 取橋でも培養3. o i w t v ak e. o. o. o. o. Ka i t K o r. 0. 2. 2. 0. 1 l s ao. 2. 0. 0. 0. 33. 7. 9. 5. た功 橋およ び 香取橋におい ては NACB を 用. 日目に 2 個 算 出 さ れ た,. Hi node. 考. o. Sh i n. 7. 4. 4. 5. i Ko j n. 1 1. 7. 1 1. 17. 察. 本研究で緑膿菌が検出された採水地点は, 7月10日においては日出橋, 新橋および江神橋であり, また・ 7月30日においては日出橋および新橋と, いずれも牛朱別川水系最下流の, 都市域又はこれよ りも下流に位置する個所に限られていた. 冬期においてはこれらの採水地点ばかりではなく, 更に 8 } 検出地点の減少ばかりで 上流に位置する香取橋および功橋においても緑膿菌は検出されている1 . はなく, その算出数も夏期は冬期に比べてほぼ等しいか幾分少ないように思える, 9 ) 貧栄養下でも増殖が可能な細菌 である 蒸留水中でも増殖す 緑膿菌は多くの化合物を代謝し1 , , 0 1 ) ま た 水 温 が30℃ 以 上 に な る と 急 速 な 増 殖 が起 こ る2 2 )と 言 わ れ て い る ・2 る こ と が知 ら れ て お り2 , ,. 夏期における河川水温度は米飯 では約14℃, これ以外の地点では21℃から24℃の間であっ たが, 水 田や溜池等の滞溜水の表面温度はこれよりも高かっ たろう. また, 工場廃水や生活廃水の水温も冬 (4).

(6) . 河川水中における緑膿菌, 大腸菌群および大腸菌に関する研究 〈第1報〉. 期に比較して上昇していたと考えられる, 今回, 夏期において都市域以外の採水地点において緑膿 菌が検出さ れなかったことは興味深い, 大腸菌群および大腸菌についてはその増減はよく一致しており, ともに上流では少なく下流の都 市域において高い値を示した, また人口細密地である功橋と日出橋を境として急激に増加する傾向 が認 め ら れる, 一 般 細 菌 の 増 減 につ いて も 7月30日 に は こ の 2 種 の 増 減 と よく 一 致 して い た. ま た,. . 人間活動による汚染の影響をほとんど受けないと 米飯は森林を植生の主体とする山地内に位置し,. 思われるが, 少数の大腸菌を検出している, これらの現象は大腸菌群および大腸菌は清浄水中にも ′その増加に最も影響を与えるものは人間活動であって 特に都市域においてはその効 存在する が, , 果が端的に現われることを示すものと思われる. うに思わ 緑膿菌数算出のための最確数法用 培地としてLB は, NACB よりも幾分感 受性が高いよ・ れ る.. ・. 、,. LB は乳糖利用菌の増殖に対して有利な培地であるが乳糖非利用菌である緑膿菌もまた良好に発. 8 /癖台 にま で増殖する, こ 育する. 大腸菌と緑膿菌を LB 中で混合培養すると24時間後, ともに10 の発 が緑膿菌数はほ ぼ一定である ( 青井:未発表 ) 一方 NACB・ れ以後大腸菌数は急速に減少する い, 普通 ブイヨンを用いて培養した緑膿菌を用いた場合, 育抑制力 は緑膿菌に対しても相当に強, よりも小さ NACB を用いた最確数法によって算出した菌数 は, 普通寒天を用いた混釈法による数値. くなる (青井:未発表) , NACB では増殖 できない緑膿菌 が河川水中にも存在 しているとしたら NACB は最確数法に用いる培地としては不適であろう,. 河川水中の細菌群がLB に接種された時にどのような挙動を示すのかは不明であるが, 緑膿菌が 102 /細 以 上 に 増 殖 で き る の だ と し た ら, LB を緑膿菌算出用の最確数法培地として用いることがで. きるかもしれない. 今後, 緑膿菌の最確数法用培地にLB を 用 いる こ と に つ い て 検 討 を 行 な っ て ゆ く つ も り であ る.. 要. 約. 牛朱別川水系において夏期河川水中の緑膿菌, 大腸菌および大腸菌の分布を調べた, 緑膿菌の最 eであり, 確数は7月10日には日出橋, 新橋および江神橋においてそれぞれ5 .7×10月oom ,5および1 gで あ っ た. 緑 膿 菌 は こ れ 7月30日 に は日 出 橋 お よ び 新 橋 に お い て そ れ ぞ れ1 .3×10お よ び 5 月oom ・. 以外の採水地点からは検出できなかった. 大腸菌群および大腸菌は上流で少なく下流で多かっ た. 人口綱密地においては極めて多く, 7月10日に は日出橋において, 大腸菌群および大腸菌はそれぞ 5 6 れ1 eで あ っ た, ま た, 大 腸 菌 は 山 岳 中 に 位 置 す る 米 飯 に お い て も 少 .0×10 月oom ,72×10 お よ び7. 数算出された. LB を用いた最確数法によって算出された緑膿菌数は NACB によるそれよりも幾分 多 か っ た,. 引用文献 l i i fnuorescentpseudomonadesi l l t t t ‐ rom sur 1, Hoad l so a edf rac er s cso j e o eyA.W,and G.A .Somecha , ,1972 1 i l C M i b 1 8 1 7 6 9 7 7 3 fgrowt ha l t41c J f : ‐ t r n c o o a eo acewa ersandcapab , , ,, . i l i n 2, Hoad l nosal e rsuchungen von Pseudomonas aerug ch cCoy and G, A, Roh ey A. W. . , Unt , 1968 , E, N[. (5).

(7) . 6. 青. 井. 陽. i l 1 f l l ober f t t achengewassern r et enundVerha en ch er o ,152:339‐344 , .Ar . Hyg .Bakt ,1 .Au ft hei i i i 3. Ri 1 denceofpseudomonasaerug rom Va udy o nc nosaf r ous ngen L.昏 .and C. 日.Drake . . A st ,1952 B i l 4 4 1 4 5 l 6 8 8 t J t ‐ , naura sources . , acero. :. 4. 児玉博英ほか1974 , , 河川水からの緑膿菌分離とその血清型分布 感染症学雑誌48:385-392 i 5, 奥田敬一1983 河川水中の Pseudomo r ug no s aの分布状況およびその血清群別, エラスターゼ産生 na sae , 性ならびに薬剤感受性について 感染症学雑誌 57:24一32 , 6. ChoJ l lp l i i ho l t t a ant s as ca r r er s ofPseudomonas aerug nosa opa ogy 65: , , ornament ,J . et a , 1975 , Phy 425 ‐431 . 7. Gr l i l IP 1 i i lasaposs i b l tur eenS cu a ant sandso rf ereservo orPseudomonasaerug 1 nosa r . K,eta , . Ag . ,1974 App l l i i l crob o ,~ ,28:987‐991 , l i i 8, Hoad l nosai n ey A. W. ch ersuchungen von Pseudomonas aerug , , Unt , 1968 , E. McCoy and G. A, Roh l l i ー ober nachengewassern en ch er o .Ar .Bakt .152:328-338 . ,1 , Que , Hyg 1 i l l 1 f lpo l i hegas 9, N t t I l nosai nt r ec sofora nB O 1pseudomonasaerug o- s G.Y ymyx .andB.興 .Kagan . . 丑f ,1954 【 i i E」32 lt t t r ntern ed na ac nt es ,M ,40:2 . ,Ann .l i f i 10 i fPseudomonas aerug i 1 9 6 7 t t fhea tV. and C. W. Lane l hy human Q t uan ca on o nosai nf eces o , Hurs . . , l l hLab i t t adu s , Hea ,Sc ,4:24E」249 . 11 l i l fPseudomonasaerug t i t eyA. W.andB. McCoy onontheeco ogyo nosaandi s . Hoad . ,Someobserva ,1968 i lt ima l C l IV t t 5 8 3 4 ← ÷ 3 6 3 t 5 occur rencei nthei rac nt es na sofan s o r n e e : . , . i fEscher l 12 i i l i i i l taL,1971 l t ono so erR.A.e a ch aco nosa rom f ebs e af ood . Shoot ,l ,Pseudomonasaerug ,and K1 i i l d h l L 0 2 t t 3 9 3 9 t2 nhosp a s c n r a e e s a n s c o o s a n c e ; ‐ . , , , 13 l i i b l i ls i fpseudomonas t t erR,A,eta cament sasposs esour r cesofhosp a a nso , Shoot .Foodand med , ,1969 i aerug nosa .Lancetl:1227-1229 . 14 l i i lv i t l l t noss nt roduc onofPseudomonasaerug l nosai ntoa hosp a ave弾t ab es . Komi . D. eta . .l , App , , 1972 i l Mi c rob o .24:567‐570 , i ロ i i i 15 i l dow. t t t r ng ne mas scausedby Pseudomona saerug nosa on V. A.and E. M.Gi , Cher ,j . Bov . AI . , 1931 l Vet ed .鮎 . Assoc .79:803‐808 , l 16 hr t t doorswimmi lus i i i i t an W.W.andJ en udyofanout ngpoo ngi od nef orwa erd s n ‐ . Cont ,B.Ha . .A s ,1962 f i S d M d 4 t t 1 0 9 3 5 0 2 u ec on e : - . . . . 17 l l i IAspec i l i i t t t ey A, W og ca sandPa entCo on za oned . Hoad . , V, M, ,1977.in Pseudomonasaeruginosa:Eco Young .RavanPress .31 , , New Yorkp. 18 . 青井. 陽 1985 河川水中における緑膿菌および大腸菌群に関する研究. 北海道教育大学紀要 (第二部. C) 36:13一20 . 19 fM.and N.J l l i i lo fDet i l t t eron n Bergers Mannua ermi na ve Bac er o ogy . Doudorof , .i ,Pa , ed , R, E. , 1974 Buchananand N,E.Gi bbons T h i l l i W & W i i C l k B l i 2 1 2 7 4 3 t e m a s n s o a m o r e ‐ p . , , . , 20 i hi i i l l t i l i t t nosa:growt nd s ed wa erf rom hosp a s ence173: . Favero M,S ,etaL,1971 .Pseudomonasaerug .Sc 836‐838 . 21 i l i i fanu leva l l i i l l i t l t t t t i l t er o ca ua og ono rapure wa erd s ngsys em. App cr ob o , KayserW.V. . Bac ,1975 , Mi .30 :704-706 . 22 l i l i IAspec i l i i t t tCo ey A, W, n pseudomonasaerug nosa: Eco og ca sandPa en t oned on za , Hoad .i . V. M. ,1977 Young Y k 4 N 3 e o r w p ,RavanPress , . ,. (6).

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