タバコ・モザイク・ウイルス核酸のオゾン，塩素および紫外線による不活性化
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(2) . 北海道教育大学紀要 （第２部Ｂ） 第３１巻 第１号 ｌｏｆＨｏｋｋａ Ｊ ｉｄｏＵｎ ｉｖｅ ｏｕｒ ｎａ ｉ ｆＥｄｕｃ ｔ ｉ Ｓｅｃ ｒ ｔ ｉ ｓ ｔ ｌ ａ ｏｎ（ ｏｎｌ ＩＢ）Ｖｏ ｙｏ ．３１ ．１ ，Ｎｏ. タ バコ. ◎. Ｓｅｐｔ ９８ ０ ｅｍｂｅ ｒ ，１ 昭和５５年９月. モ ザイ ク ・ ウイ ルス 核 酸 の オ ゾ ン 塩 素 お よ び ， ， 紫 外 線 によ る 不 活 性 化. 由 崎 俊 道 ・テ 也畑. 昭＊. 北海道教育大学札幌分校生物学教室 ＊工業技術院北海道工業開発試験所. ｌｎａｃｔｒｖａｔ ｉｏｎ ｏｆ Ｎｕｃｌ ｉｄ ｏｆ Ｔｏｂａｃｃｏ ハβｏｓａｉｃ Ｖｉｒｕｓ ｅｉｃ Ａｃ ｂｙ Ｃｈｌｏｒ ｉｎｅ ｏｚｏｎｅ ａｎｄ Ｕ１ ｌｅｔ Ｌｉ ｔｒａｖｉｏ ， ｇｈｔ ， Ｔｏｓｈ ｉｍｉ ｉ ＹｏｓＨＩＺＡＫ１ａｎｄ Ａｋ ｉ ｃｈ ｒａＩＫＢＨＡＴＡ＊ Ｂｉ ｌ ｉｃａ ＩＬａｂｏ ｔ ｏ ｏｇ ｌ ｌ ｒ ｉｄｏ Ｕｎ ａ ｏｒｙ ｉｖｅ ｒｏＣｏ ｉ ｅｇｅ ｔｙｏｆ Ｅｄｕｃａｔ ｉ ｒ ｓ ，Ｓａｐｐｏ ｏｎ ，Ｈｏｋｋａ ， Ｓａｐｐｏ ｒ ｏ０６４. Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｎｅｘｐｅｒ ｉｍｅｎｔａ ｌｓ ｔｕｄｙ ｗａ ｓ ｍａｄｅｔｏ ｄｅｔｅｎｎｉｎｅｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆ ｆ ｔｏｆＴＭＶ‐ｐｒｏ ｉｎ ａｇａ１ｎｓｔ ｔｅ ｅｃ ｔｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＴＭＶ‐ＲＮＡ ｂｙ ｏｚｏｎｅ ｃｈｌｏｒ ｉ ｄ ｌ ｔｒａｖｉｏ ｎｅ，ａｎ ｕｌ ｉｇｈｔ ｅｔｌ ， ， ＴＭＶ‐ＲＮＡ ｗａｓ ｑｕａｎｔｉ‐ ｉｖｅｌｙ ｍｉ ｔａｔ ｔｈ ＴＭＶ－ｐｒｏ ｉｎｉｎ ｏ ｘｅｄ ｗｉ ｔｅ ０ ｈ ０ ５Ｍ ｈ ｔ ｂ ｆ ｆ ｌ ｉ ｏ ｓ ａ ｅ ｔ ｐ ｕ ｐ ０ ｅｒｓｏｕ ｏｎ（ ） ＩＭ ， ＰＨ ７ ． ，ａｎｄｉｎ ａ ｏ ，. ｌ ｉ ｔｅｓｏ ２ ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａ ） ｌ ｕｔ ｏｎ（ ｉｏｎｄ ｉｄｎｏ ｔｉｎｄｕｃｅｔｈｅｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｉｎｔｏ ＴＭＶ ｏｒｍｅｒｓｏ ＰＨ７ ｕｔ ． ． Ｔｈｅｆ ｉｃ ｌ ｔ ｅｓ ｆ ｐａｒ ｒｏｍ ＴＭＶ‐ＲＮＡ ａｎｄｉ ｔ ｉｎ，ｗｈ ｉ ｌ ｓ ｐｒｏｔｅ ｅｔｈｅｌａｔｔｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ． Ｅａｃｈｏｆｔｈｅｓｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗａｓｓｕｂ ｊｅｃｔｅｄｔｏｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｚｏｎｅ ｃｈｌｏｒｉｎｅ ａｎｄ ｕｌ ｌｅｔｌ ｔ ｉｇｈｔ ｒａｖｉｏ ， ， ， Ａｆ ｔｅ ｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓｉｎ ｏ００５Ｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆ ｆ ｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗｅｒｅｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｂｙ ａｎ ， ｉ ｉｏｎ ｏｆｏ ｔ ２Ｍ ｐｙ ａｄｄ ｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｏ ２ ｌ ） ， ｉｏｎ（ ＰＨ ７ ｕｔ ｉｖ ｉ ｔ ｉ ｔ ． ． ｌｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｉｎｆ ｅｃ ｅｓｏｆｔｈｅ ｉ ｔ ｔｕｔｅｄ ＴＭＶ， ａ ｒｅｃｏｎｓ ｌ ｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄ ｉ ｌ ｄ ｕｔｅ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｔｏ 配た所Ｚ α”” ｇ‘ “””餌α Ｌ， Ａｓ ａ ｔ ｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆ ｒｅｓｕｌ ｆｅｃｔｏｆｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎｔｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＴＭＶ‐ＲＮＡ ｂ ，ｔ ｙ ｏｚｏｎｅ ｗａ ｓｆｏｕｎｄ ｔｏ ｂｅ ｏ ｆ ａｌｍｏｓｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｄｅｇｒｅｅ ｒｅｇａｒｄｌｅｓｓ ｏｆ ｗｈｅ ｔｈｅｒｔｈｅ ＴＭＶ‐ＲＮＡ ａｎｄｉ ， ｔｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｅｒｅ. ｉ ｔｕｔｅｄ ｏｒｎｏｔｉｎｔｏｔ ｒｅｃｏｎｓｔ ｈｅ ＴＭＶ ｐａｒ ｉｃ ｌ ｔ ｅｓ ｎ ｃｏｎｔｒａｓｔ， Ｔ二Ｍ Ｖ‐ｐｒｏｔｅｉｎ ｄ ｉｄｎｏｔｉｎｔｅｒ ｆ ．ｌ ｔｈｔｈｅ ｅｒｅ ｗｉ ｉｖａ ｉ ｔ ｌｎａｃｔ ｏｎｏｆＴＭＶ‐ＲＮＡ ｂｙｃｈ ｌ ｉ ｌ ｔ ｏｒｎｅａｎｄ ｕｌ ｉｇｈｔｗｈｅｎｔｈｅｙ ｗｅｒｅｎｏｔｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄｉｎｔｏ ｒａｖｉｏ ｅｔｌ ＴＭＶ ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｎ ｏ ００５Ｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆ ｆｅｒｓｏ ｌ ｉｏｎ（ ０ ） ． ｕｔ ｉ ｌ ｉ ＰＨ ７ ｔｙ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ． ． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｂ ｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆＴＭＶ－ＲＮＡ ｂｙｃｈ ａｇａ ｌｎｓｔｔ ｌ ｉｎｅａｎｄ ｕｌ ｔｒａｖｉｏ ｌ ｉｇｈｔｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｌｅａｒ ｏｒ ｅｔｌ ｌｙ ｗｉ ｔｈｔｈｅ ｉｏｎ ｏ ｆｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ＴＭＶ ＴＭＶ‐ｐｒｏｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉ ｉ ｄ ｄ ｈ ｔ ｄ ｉ ｉｎｃｔ ｐｒｏｔｅｃｔ ｎ ｎｏ ｓ ｏｗ ａ ｓｔ ｉｏｎ ａｇａ ． ｉｎｓｔｔ ｈｅ ｉｖａｔ ｉｏｎ ｏ ｌｎａｃｔ ｆ ＴＭＶ‐ ＲＮＡ ｂｙ ｃｈｌｏｒｉｎｅ ａｎｄ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｌ ｉｇｈｔ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｒｅｃｏｎｓｔ ｉ ｔｕｔ ｉｏｎ ｗａ ｓ ｎｏｔ ｉｅｄ ｏｕｔ ｃａｒ ｒ ．. （１ ３ ）.
(3) . 由崎俊道・池畑. 昭. 言. 緒. オ ゾンのタ バコ． モザイク・ウイ ルス（ＴＭＶ） を不活性化する作用は， 塩素よりも強力 であるこ ＴＭＶ の系統を変えて ９７６ ） とは， す でに報 告したが（由崎．池畑．野村， １ ， オ ゾンの不活性化力は も同じであっ た． これに対し， 塩素の ＴＭＶ 不活性化作用は， ＴＭＶ の系統によっ て明らかに差を示 ＲＮＡ） に対する不活性化作用は， オ ゾンおよ び塩素とも し， ま た ＴＭＶ より分離した核酸 （ＴＭＶ‐ ＴＭＶ 粒子 に系統による差 が認められなかっ たことから，ＴＭＶ の系統の塩素に対する耐性の差は， ＴＭＶ 蛋白とを ） を構成している 蛋白に依存するものと推測した（由崎・池畑，１９７７ ．ＴＭＶ－ＲＮＡ と 成さ れる 再び粒子が構 し ０．ＩＭ ピロ燐酸 溶液中 で混 合すると， ＴＭＶ‐ＲＮＡ に蛋 白小単位が集合 ，. 再 構 成 さ れ な い 低 濃 度 の 燐 酸 溶 液 （０．００５ Ｍ， ＰＨ ７，０） お ｌ （Ｆｒａｅｎｋｅ ‐Ｃｏｎｒａｔ ， １９５５） ． 本 研 究 では，. ） にＴＭＶ‐ＲＮＡ と ＴＭＶ 蛋白とを定量的に混 よ び再構成される溶液 （０．ＩＭピロ 燐酸溶液， ＰＨ７．２ 合し， それぞれの 混合液にオ ゾン， 塩素， および紫外線照射の処理を行ない， ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性 化の程度を調べ， ＴＭＶ 蛋白が粒子に 再構成されなかっ た場合と 再構成された場合との ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性化に対する ＴＭＶ 蛋白の保護効果を比較検討した．. 材料およ び方法 ｌ ｔｅ Ｂｕｒ ｅｙ）に 接 種 し増 殖 さ せ た． ７ ２α ねるα“粥 Ｌ．ｖａｒ ＴＭＶ は 普 通 系 統 を用 い， タ バ コ（亙Ｚの”α ． Ｗｈｉ ＴＭＶ 純 化 し た． ＴＭＶ‐ＲＮＡは， を ｔ ）によっ て ｒ ｅｅ ｅ １９５９ 葉の搾汁液から超遠心分画法（Ｓ. その感染. ，. ｉ ，１９６１） に よ っ て 調 整 し， ＴＭＶ ｌ ｔ ‐Ｃｏｎｒａ ベ ン ト ナイ ト・ フ ェ ノ ー ル 法（Ｆｒａｅｎｋｅ ，Ｓｉｎｇｅｒ ，ａｎｄ Ｔｓｕｇｔａ ＴＭＶ お よ び ＴＭＶ‐ＲＮＡ の 濃 度 は ２６５ ｌ ‐Ｃｏｐｒａｔ 蛋 白 は 酢 酸 法 （Ｆｒａｅｎｋｅ ， １９５７） に よ っ て 調 整 した． ８０ｎｍ の 紫 外 部 吸 光 度 に よ っ て 定 め た （Ｔａｋａｈａｓｈｉ ， ｎｍ の紫外 部吸光度によっ て， ＴＭＶ蛋白は２ ゾ ン 発 生 器 を用 い て 作り， ０ ℃ の純 水に飽和溶解させた． 溶存オ ゾン濃 １９５１） ． オ ゾン は カ ラ ム 型 オ. 度は， 使用の都度チオ 硫酸滴定法によっ て測定した． 塩素の実験においては， 次亜塩素 酸ナトリウ ＩＯ）溶液を用いた．塩素濃 度はオ ゾンと同様に チお硫酸滴定法によっ て使用の都度測定した． ム（ＮａＣ 一定量の ＴＭＶ 試料を共栓付きの試験管に入れ，それに 一定濃度のオ ゾンあるいは塩素溶液を加 え， 十分振湯 し，３０分間 反応させた． 反応中は試験管を氷中に保ち，０．２％の 沃化カリ液を加えて反応を ｉ ｔｙ：２，１６０ｇ Ｗ／ｃｍ２） を 停 止さ せ た． 紫 外 線 照 射 に は 殺 菌 灯 （マ ツ ダ製， 波 長 ：２５３．７ｎｍ， ｉｎｔｅｎｓ 激 用 い， シ ャ ー レ に 試 料 を 入 れ， 管 球 の 中 心 か ら １ｏｃｍ あ る い は ５０ｃｍ の 距 離 か ら シ ャ ー レ を 振 さ. せながら一定時間照射を行っ た． ＴＭＶ は感染性を 示す５％の ＲＮＡ と感染性を有していない９５％ の 蛋 白 さ ら 構 成 さ れ て い る が， ＴＭＶ の 組 成 通 り ＴＭＶ‐ＲＮＡ：ＴＭＶ 蛋 白 ＝ ５ ： ９．５ の 割 合，で，. Ｈ ２） の中にそれぞれ混合させた． ）あるいは ０ ０５Ｍ燐酸 緩衝液（ＰＨ７．０ ０．０ ．ＩＭピロ 燐酸溶液（Ｐ ７． ５Ｍ燐酸緩衝液中に 混合した試料は， ００ ， 混合液にオ ゾン，塩素，あるいは紫 外線処理を行なっ た後，０． ＩＭのピロ 燐酸溶液中に保っ た． ）を用いて０． 再構成を行なうために，０．２Ｍのピロ燐酸溶液（ＰＨ７．２ ＩＭ， すべての試料を再構成された ＴＭＶ（計算値）の濃度が０．５”ｇ／ｍｌになるように燐酸緩衝液（０． 痘病斑数か ら ｏ ｓαの 葉 に 接 種 を 行 な い， ２ ～ ３ 日後に生ずる壊 ｚ ‘霧⑦ ｐＨ７ ０） を用 い て 希 釈 し 亙 ｇ‘ ．. ，. ＴＭＶ の感染力を定めた．. （１ ） ４.
(4) . ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性化. 実験結果 Ｔ １） オ ゾン， 塩素， 紫外線による ＴＭＶ お よ び ＴＭＶ ‐ＲＮＡ の不活性化 一 定濃度の ＴＭＶ に濃度を変えてオゾン水を加 Ｚ物ｏ え，３０分間の反応後，亙 ｇＺ ｚ ‘ ｓαに 接種 を 行 な っ た．壊痘病斑が全く生じなくなるオ ゾン濃度から， 一 定量の ＴＭＶ を完全に不活性化させるに要する. 第１ 表 オ ゾン，塩素，紫 外線処理によるＴＭＶ ＲＮＡの不活性化 量 処. オ ゾン量を求めた。 同様に， 一定量の ＴＭＶ を完 全に不活性化させるに要する塩素量を求めた 同 。 じ実験 を ＴＭＶ‐ＲＮＡ に つ い て 行 な っ た． 第 １ 表. オ. 理 ゾ. 塩. ン. 索. 紫 外 線. に は， そ れ ら の 結 果 と ＴＭＶ お よ び ＴＭＶ‐ＲＮＡ. ＴＭＶ. ＴＭＶ－ＲＮＡ. １１．９～２３．１＊ ２２，３＊ ４，２～ ５，０＊ １０，ｏ＊ ＊ ＊ ＊＊ １ｏｃｍ ５０ｃｍ ，１０分 ，１０分. ＊ オゾンあるいは塩素の１〃ｇに よ っ て 不 活性化さ れた ＴＭＶ およびＴＭＶ‐ＲＮＡ の平均量を示した 。 ＊＊ ５００βｇ／ｍｌのＴ ４Ｖ あるいは ＴＭＶ‐ＲＮＡ が ほぼ ， 完全に不活性化されるに要した紫外線照射量を殺 菌灯から試料までの距離と照射時間とで示した 。. を完全に不活性化させるに要する紫外線量を示し た． 第１表に示すように， オ ゾンの ＴＭＶ およ び ＴＭＶ‐ＲＮＡ を不活性化する効果は 塩素よりも強 ， く， ま た， ＴＭＶ‐ＲＮＡ は ＴＭＶ よ り も オ ゾ ン， 塩. 素， およ び紫外線によっ て容易に不活性化され， 特 に 紫 外 線 に お い て は， そ の 差 が い ち じる しか っ た ．. ２） オ ゾンによる ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性化 ＴＭＶ‐ＲＮＡ と ＴＭＶ 蛋 白 と が そ れ ぞ れ ｌｏｏｇｇ／ｍ１ と １９００”ｇ／ｍｌに な る よ う に ０ ００５ Ｍ 燐 酸 緩 ， ，．. 衝液 （ＰＨ７． ０ ） ２） の２種の溶液中に混合した． この結果， ０ ， および０．ＩＭピロ燐酸溶液 （ＰＨ７． ，Ｉ Ｍ ピロ燐酸溶液中に混合した場合は， ＴＭＶ‐ＲＮＡ と蛋白から粒子が構成されるため試料は白濁し ， 他の溶液 では再構成は起らず， 透明な状態のまま であっ た それぞれの２ｍｌの試料に対し 一定濃 ． ， 度（１～５ｐｐｍ） になるように２ｍｌのオ ゾン水を加えた ３０分間反応させた後 沃化カリを加え反 ． ， 応 を止め， ０ ０５Ｍの燐酸緩衝液中 の試料は， ０． ２Ｍ ピロ 燐酸溶液を加 え再構成させ， 希釈 後 亙 ．０ 郡“ねれ餌αに接種を行なっ た． 第２表には 亙 部のＺ れｏ ｓ αの葉一枚当りの平均壊痘病斑数 を示した． 第 ２表 に 示すよう に， ２種 類 の溶液に お いて 蛋 白 を加 え ら れた ＴＭＶ－ＲＮＡ の 不 活性 化 は オ ， ， 第２表. ＴＭＶ 蛋白＊を混合したＴＭＶ‐ＲＮＡミのオ ゾンによる不活性化. ＼＼＼ ＼ごくき度 溶 媒 ０．００５Ｍ 燐酸. 緩衝液 （ＰＨ ７，０）. ０，ＩＭ ピロ 燐酸. 溶液. （ＰＨ ７， ２）. 再構成させた後の感染力 （壊痘病斑数＊＊） Ｏ. Ｉ. ２. ３. ４. ３７，５. ２５，３. ２３，９. ２３，３. ２２，９. １５．６. ３４，１. ４０，５. ３９，８. ３６．８. ２５，５. ２５，Ｉ. ５Ｐｐｎ ｒ ｌ. ＊ 最終濃度がＴＭＶ‐ＲＮＡ は５ ０βｇ／ｍｌ ０〃ｇ／ｍｌになるように混合した。 ，ＴＭＶ蛋白は９５ ＊＊ ０００ ２Ｍピロ燐酸溶液 （ＰＨ ７． ２）を加えて再構成させ ． ５Ｍ燐酸緩衝液中の試料は， ０． た。 すべての再構成ＴＭＶ は０． ０５口ｇ／ｍｌに なるように希釈し， ８～１ ６枚の亙 ｇ ｚ ｚ ｆ爺 佃徹 の葉に接種し， 葉一枚当りに生じた病斑の平均数を示した。. （ュ５ ）.
(5) . 由崎俊道・池畑. 昭. ゾンの最高濃度５ｐｐｍ において も完全に不活性化されることはなかっ た． ０ ．ＩＭピロ燐酸溶液中 で の ＴＭＶ‐ＲＮＡ と 蛋 白 と が 完 全 に 再 構 成 さ れ た と す れ ば，そ の 最 終 濃 度 は １，ｏｏｏｇｇ／ｍｉ と な り，５ｐｐｍ. の濃 度 では完全な不活性化が起らないことは， 第１表のオ ゾンによる不活性化 ＴＭＶ 量 （オ ゾン量 ）からも推測 できる．ＴＭＶ‐ＲＮＡ 単独の場合 では， ５ｐｐｍ 濃 ３．１ １． ９～２ １に対し不活性 化 ＴＭＶ 量１ 度のオ ゾンによっ て不活性 化される ＴＭＶ‐ＲＮＡ 量 は， オ ゾ ン 量 の ２２ 倍 す な わ ち ５ ×２２＝１１０ｇｇ で あ り， こ の 実 験 の ＴＭＶ－ＲＮＡ 単 独 の 濃 度 では， ５ｐｐｍ の オ ゾ ン に よ っ て 完 全 に 不 活 性 化 さ れ る こ と. ＴＭＶ 蛋白を混合することに よっ て， ＴＭＶ‐ＲＮＡ は明らかである （第１表） ． 第２表に示すように， のオ ゾンによる 不活性化は保護される． しかし， ＴＭＶ 蛋白が ＴＭＶ‐ＲＮＡ と再構成されても， され なくても， その保護効 果には， 大きな差が認められなかっ た． この結果は， 次に示す塩素および紫 外線の ＴＭＶ‐ＲＮＡ 不活性化効果と明らかに異なっ ていた． ３） 塩素による ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性化 ） と を ０．００５ ） と ＴＭＶ 蛋 白 （１９００ｇｇ／ｍｌ オ ゾ ン の 実 験 の 場 合 と 同 様 に， ＴＭＶ‐ＲＮＡ （１００”ｇ／ｍｌ. ２ ） の２種類の溶液に 混合し， それぞれ ０ ） および０．ＩＭピロ燐酸溶液 （ＰＨ７， Ｍ燐酸緩 衝液 （ＰＨ７． 反応させた後， 沃化カリ液を加えて ｌ 氷中 ０分間 で３ ２ｍｌの試料に一定濃度の塩素水を２ｍ 加えた． ） を等量加えて ２ ２Ｍピロ燐酸溶液 （ＰＨ７． 反応を止め，０． ００５Ｍ燐酸緩衝液中に混合した試料は， ０， 結果を第３表に示した 乙諺物ｏ αに接種を行なっ た． その ｓ 再構成させ， 希釈後， 亙 ｇ ． 塩素の場合は， オ ゾンと異なり，ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性 化は，混合した ＴＭＶ‐ＲＮＡ と ＴＭＶ 蛋白とが再構成された場 合と再構成されなかっ た場合と では， 大きな差 を示した． すなわち， ＴＭＶ‐ＲＮＡ と蛋白とが再構成 さ れ な い 溶 媒 ０．００５ Ｍ 燐 酸 緩 衝 液 中 の ＴＭＶ‐ＲＮＡ は， ５．０ あ る い は ７．５ｐｐｍ の 塩 素 濃 度 に よ っ て. 完全に不活性化された．ＴＭＶ‐ＲＮＡに対するこの塩素量との 比率は，ＴＭＶ‐ＲＮＡ ：塩素＝５０：５（あ と蛋白 と の 総和 に 対 しての 塩 る い は ７．５） で， す な わ ち １０～６．７： １ であ り， 試 料 中 の ＴＭＶ‐ＲＮＡ・ 素 量 の 比 は ５００： ５ （あ る い は ７．５） で， す な わ ち １００～６６．６： １ であ っ た． ＴＭＶ 蛋 白 が 再 構 成 さ. れない場合では， 塩素による ＴＭＶ‐ＲＮＡ 不 活 性 化 効 果 を， ほ と ん ど減 退 さ せ な か っ た． ０．Ｉ Ｍ ピロ 燐酸液中 で再構成され ＴＭＶ 粒子となることによっ て塩素に対する耐性が増加 した， ＊ ＊ 第３表 ＴＭＶ蛋白 を混合したＴＭＶ－ＲＮＡ の 塩素によ る不活性化 ＊＊ 再構成させた後の感染力 （壊痘病斑数 ）. ＼＼ さそ度 ＼ 溶 媒 ０．００５Ｍ燐 酸. 緩衝液 （ＰＨ ７． ０）. ０．ＩＭ ピロ 燐. ２ ） 酸溶液 （ＰＨ ７．. Ｏ. １．Ｏ. ２，５. ５．Ｏ. ７，５. １０，ｏｐｐｎ 〔 Ｉ. ８０．２. ５４，７. ７．５. ０．４. ０．２. ０．Ｏ. ５４，Ｉ. ４４．４. ５７，３. ６３，５. ３５，６. １５．Ｉ. ０口ｇ／ｍｌになる よ う に 混合 し ＊ 最終濃度が ＴＭＶ‐ＲＮＡ は５０ｇｇ／ｍｌ ，ＴＭＶ 蛋白は９５ た。 ２ ）を加えて再構成させ ２Ｍピロ燐酸溶液（ＰＨ ７． ＊＊ ０． ００５Ｍ燐酸緩衝液中の試料は， ０． ‘ ｓ α ｏ５ ｚ ‘””ｏ た。 すべての再構成ＴＭＶはｏ， ”ｇ／ｍｌになるように希釈し８～１６枚の亙ｇ の葉に接種し， 葉一枚当りに生じた病斑の平均数を示した。. （１ ） ６.
(6) . ＴＭＶ‐ＲＮＡ の不活性化. ４） ＴＭＶ 蛋白を混合した ＴＭＶ‐ＲＮＡ の紫外線による不活性化 上記の実験と同様に， ＴＭＶ‐ＲＮＡ（５０”ｇ／ｍｌ ）と ＴＭＶ 蛋白（９５０”ｇ／ｍｌ ） とを０ ０５Ｍ燐酸緩衝 ．０ Ｈ 液 （Ｐ ７． ０ ） および０ ） の２種類の溶液中に混合し， これらの試料に殺 ．ＩＭピロ燐酸溶液 （ＰＨ７ ，２ 菌灯の管球から５ ０ｃｍ の距離を保っ て紫外線照射を行なっ た．÷定時間毎に試料をとり，０，０ ０５Ｍ燐 酸緩衝液を用いた試料には， 等量の０．２Ｍピロ燐酸溶液 （ＰＨ７． ２） を加え再構成を行なっ た。 一定 ‘ 濃度に希釈した後， 亙 ｇ ‘ “””ｏ ｓ αに接種を行なっ た． 亙 ｇ “ね物ｓ αの葉一枚当りの 平均病斑数を第４ 表に示した．紫外線照射においても，ＴＭＶ‐ＲＮＡ と蛋白とが再構成されない溶液での ＴＭＶ－ＲＮＡ の 完全な不活性化は， ７ ０分間 で起こり， この結果は， 第１表に示した ＴＭＶ‐ＲＮＡ 単独の不活性 ．５～１ 化の場合とほぼ同じ照射量 であっ た．０ ，ＩＭピロ燐酸によっ て ＴＭＶ 蛋白と再構成された場合 では， 紫外線に対する耐性は， いちじるしく増加することが認められた． 第４表 ＴＭＶ蛋白＊を混合 したＴＭＶ－ＲＮＡ＊の紫外線照射＊＊による 不活性化. ＼＼＼塾ミ 纏 選 溶 媒 ０，００５Ｍ燐 酸. 緩衝液 （ＰＨ ７． ０） ０．ＩＭ ピロ 燐. 酸溶液 （ＰＨ ７．２）. 再構成させた後の感染力 （壊痘病斑数＊＝） ０，Ｏ. ２．５. ５，Ｏ. ７．５. １０．Ｏ. ２５．Ｉ. ４，７. ０，２. ０．２. Ｏ. Ｏ. ３０，１. ２９，Ｏ. １６，７. １８．８. ７．８. ５，７. １２，５ 分. ＊ 最終濃度が ＴＭＶ－恥ＪＡは５０”ｇ／ｍｌ ＴＭＶ 蛋白は９５ ０〃ｇ／ｍ になるように混合した。 ， ＊＊ 殺菌灯から５ ０ ｃｍの距離を保 って照射した。 ”＊ ０． ００５Ｍ燐酸緩衝液中の試料は， ０． ２Ｍピロ燐酸溶液 （ＰＨ ７， ２）を加 えて再構成させ た。 すべての再構成ＴＭＶは０． ０５〃ｇ／ｍｌになるように希釈し８～１ ６枚の 亙 部班ズ ７ｍｓ ｑ の葉に接種し， 葉一枚当りに生じた病斑の平均数を示した 。. 論. 議. 一池畑・野村 ＴＭＶ に対するオ ゾンの不活性化効果は 塩素よりも はるかに強力 であり（由崎・ ， ， ， １ ） ９ ７６ ，この不活性化力の差はオゾンおよび塩素 の示す酸化力の差によるものと考えられる，ざ らに， オ ゾンは ＴＭＶ の系統に対する不活性化作用に差を示さなかっ たが， 塩素は ＴＭＶ の普通系統より も他の系統をより少ない塩素量 で不活性化させた（由崎・池畑， １ ９７７ ） ． 紫外線による不活性化効果 は ＴＭＶ の 系統 に よ っ て 異 な る こ と が知 ら れて い る （Ｓｉｅｇｅ ｌａｎｄ Ｗｉ ｌ ｄｍａｎ ｉｍａ ，１９５４； ｏｓｈ ，ｏｈａｒａ ， １ ９ ７ １ ＴＭＶ ａｎｄ Ｕｍｅｋａｗａ ＲＮＡ ） し か し ‐ では 系 統 に よ っ て 紫 外 線 に 対 す る 耐 性 に 差 が なく（Ｓｉ ｌ ， ｅｇｅ ， 。 ， Ｇｉｎｏｚａ ａｎｄ Ｗｉ ｌ ｄｍａｎ １ ９ ５ ７ ＴＭＶ ） ま ＲＮＡ た 塩 素 による 不 活 ‐ の 性 化 ， にお いても系 統 によ て 耐 性 が ， ， っ 異 なることはなかっ た（由 崎・池 畑，１９７７） Ｓｔ ｄｏｎ（１９６８ ‐ ｏ ｒ ）は紫外線に対する耐性の異なる ． ｒｅｅｔｅｒａｎｄ Ｇ ＴＭＶ の Ｕ， 系統 と Ｕ２ 系統の ＲＮＡ と蛋白とを組み換えて再構成させ 紫外線に対する耐性を調べ ， ， 耐性 の 差 は 外 被 蛋 白 に 依 存 し て い る こ と を 認 め た さ らに， ｏｓｈ ｉｍａ ｉ ，ｏｈａｓｈ ，ａｎｄ Ｕｍｅｋａｗａ（１９７１） ，. は ＴＭＶ の他の系統を用い， 同様な報告をしている。 本研究においては， 再構成され粒 子を形成す ることによっ て，ＴＭＶ 蛋白は紫外線あるいは塩素の不活性化作用に対して強い保護効果を示した 。 （１７ ）.
(7) . 由崎俊道・池畑. 昭. しかし， オ ゾンに対する ＴＭＶ 蛋白の保護効果は ＴＭＶ‐ＲＮＡ と再構成さ れなかっ た場合と再構成 ・ された場合とで， ，それ程大き な差がなく， この結果はオ ゾンの強い酸化力によるものと考えられる． 一方， 塩素およ び紫外線の作用においては， 再構成されなかっ た ＴＭＶ 蛋白には， ほとんど妨害さ ．となく ＴＭＶ‐ＲＮＡ は不活性化されるが ＴＭＶ‐ＲＮＡ が蛋白と結合し粒子となると耐性が，い れるこ ， ちじるしく 増加する． この原因が， 塩素あるいは紫外線が外被蛋白を通過 し難いのが原因なのか， あるいは ＴＭＶ‐ＲＮＡ と蛋白との結合に対する作用が弱いため なのかは不明 である．. 要. 約. ＴＭＶ‐ＲＮＡ のオ ゾン， 塩素， および紫外線による不活性化に対する ＴＭＶ 蛋白の保護効果につい ） あるいは０．ＩＭピ ０ て研究を行なっ た． ＴＭＶ‐ＲＮＡ と ＴＭＶ 蛋白とを０ ．００５Ｍ燐酸緩衝 液（ＰＨ７． ＴＭＶ 粒子に Ｒ ＮＡ ＴＭＶ と蛋白とから ‐ ）に定量的に混合した． 前者の溶液 では ロ 燐酸溶液（ＰＨ７．２ 再構成されないが， 後者の溶液 では再構成され， 粒子が形成される． これらの試料にオ ゾン， 塩素 ０５Ｍ燐酸緩衝液を用いた試料は０．２Ｍピロ燐酸溶 およ び紫外線照射の処理を行なっ た．処理後，０．０ ７ ２ α ２） を加えて再構成させた． すべての 試料は希釈 後， 感染性 を比較するために 配Ｚの”α 液 （ＰＨ７ ． ＴＭＶ 蛋 Ｒ ＮＡ の不活性 化に対する ｇ‘””％ｏｓα Ｌ ．に 接 種 を 行 な っ た そ の 結 果， オ ゾ ン に よ る ＴＭＶ‐ ．. 白の保護効果は， それらが再構成されても， されなくとも， ほぼ同じ程度 であっ た． これに対し， ０５ 塩素あるいは紫外 線に対する保護効果は再構成されることによっ て， いち じるしく 増加 した．０ ．０ 外線に対する保護 ＴＭＶ 蛋白の塩素あるいは紫 た場合は Ｍ燐酸緩衝液を用いて再構成させなかっ ， 作用 は， ほ と ん ど 認 め ら れ な か っ た．. 引用文 献 ｌ ｉｄ ｉｃａＣ ｉ ｉ ｔ ｔｈａｃｅ ｒｏ ｏｇｙ４：１－４ ｉｏｎｏｆｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａ ｌ ｔ Ｃｖ ｒｕｓ Ｗｉ Ｆｒ ｔ ． ‐Ｃｏｎｒａ ． Ｖｉ ａｅｎｋｅ ． Ｄｅｇｒａｄａ ，Ｈ．１９５７ ｉｖｅ ｉ ｔ ｉ ｔ ｂ ｆ ｉ ｉ ｔ ｒｏｍｉ ｓｉｎａｃ Ｒ ｉ ｔ ｃＶ ｒｕｓｆ Ｃ ｔ １ ９ ｍ ｏ ｓ ａ ｔ ｔ ｉ ｌ ｌ ｉ Ｒ ５ ５ ｏ ａ ｃ ｃ ｏ ｄＶ Ｖ ａ ｃ ｖ ｅ ｌ ｌ Ｆｒａｅｎｋｅ ｔ ａｍｓ －Ｃｏｎｒａ ， ｅｃｏｎｓ ｕ ｏｎｏ ，ａｎ ，， ， ， ，ｒ １ ９ ４ ４ ７ ６ ９ ０一６ ｉ ｈ Ｂ ｉ ｄ ｌ ｉ ｔ ｉ ｄ ｌ ｌ ｌ ： ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｅ ｎ ｓ ｏ ｏｅｎａｎ ｎｕｃｅｃａｃ ｃｏｍｐ ． ． ‐ ｐｒ ． ｉ ｆ ｂｅｎｔｏｎ Ｉ ＲＮＡ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏ ｔ ｆｖ ｉ ｉｏｎ ｏ ｅ ｉ ｆ ｉ ｔ ｒ ｉ ａ ｔａ ｃａ ｌ ｉｎｇｅｒ ． Ｆｒ ｔ ａ ａｅｎｋｅ ‐Ｃｏｎｒ ． Ｐｕｒ ， Ａ． ，１９６１ ， Ｓ． ，ａｎｄ Ｔｓｕｇ ，Ｓ ， Ｈ． ｌ Ｖｉ ｒ ｏ ｏｇｙ１４：５４－５８ ． ｉｃ ｉ ｉ ｔｈｏｇｅｎ ｉｎｓｏ ｆｔｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａ ｒ ｔ ｃｖ ｕｓ ｉ ｌ ｎｅｓ ｒａ ｏｓｈ ｉｍａ ａ ｓｈ ，ｐａ ；Ｙ． ，Ｍ． ，ａｎｄ Ｕｍｅｍｕｒ ，Ｎ． ，ｏｈａ ，１９７１． Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｓｏ ３ ７ ユ ２ ５ ｔｈ Ｊａｐａｎ ：３ ９－３ ． ｉ ｆ ｌ ｔ ｏｐａ ｏｃ ｒｕｃ ｅｒｐ ａｎｔ ｓ ， ｙｔ ．Ｓｏｃ ． ．Ｐｈ ． Ａｎｎ ・ ｉ ｉ ｆｔ ｉｎｓ ｏ ｒｕｓ ｉ ｉｐｓ・ａｍｏｎｇ ｓ ｔ ｃｖ ｗｉ ｌｒｅ ｌ ｓａ ｏｂａｃｃｏ ｍｏ ｔ ｒ ａ ｌ ｔｕｒａ ｄｍａｎ ｉｅｇｅ ｌ ａ ｏｎｓｈ Ｓ ． ・ Ｇ． ． Ｓｏｍｅ ｎａ ， １９５４ ，Ｓ ， Ａ． ａｎｄ ｌ Ｐｈｙｔ ｔｈｏ ｏｇｙ４４：２７７一２８２ ｏｐａ ． ・ ｉ ｉｃｖ ｉ ｆｉｎｆ ｔ ｔｈｔ ｒｕｓ ｌ ｏｎ ｗｉ ｏｂａｃｃｏ ｍｏｓａ ｉ ｌ ｄｍａｎ ｅｃ ｓｏ Ａ ｉ ｒ Ｓ ｉｅｇｅ ｌ Ｇ ｙ ｅｖｅｎｔ ｎ ｏ ｚ ａ ． Ｔｈｅｅａ ， Ｇ． ，１９５７ ，Ｓ ，Ｖ． ，ａｎｄ 帆′ ， ． ， ３ ４－５ ５ ９ ｉ ｌ ５ ５ ｌ ｉ ｉｄ Ｖ ： ｎｕｃ ｒ ｏ ｏ ｅ ｃａｃ ｇ ｙ ． ． ｉ ｌ ｉｏｎｏ ｆｐ ｉ ｆ ｉ ｒｕｓＲｅｓ ｔ ｒｕｓ Ｓｔｅｅｒ ｅｓ ａｎｔｖ ｃａ ．６：１－７３ ． ｅ ． Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎ Ｖｉ ． Ｔｈｅｐｕｒ ，Ｒ．Ｌ． ，１９５９ ｉｏｎｏ ｆ ｉ ｉｖａｔ Ｃ ｔ ｉ ｉ ｔｏ ｆｔ ｈ ｔ ‐ ｎａｃ ｉ ｆｒ ｌ ｔｐｒｏｅｎ ｎｔｈｅ Ｕ．Ｖ．ｐｈｏ Ｓｔｕｄ Ｐ． １９６８ ｏ ａ ｄ Ｇ ｄ ｅ Ｓｔ Ｄ Ｇ Ｍ ｏ ｅｏ ｅ ｓｏ ｔ ｒ ｏ ｎ ａ ｎ ｏ ｒ ｅｒ ｅｅ ． ． ． ， ， ， ， ・ ２ ｉ ｌ ８ ８ １－９ Ｐ ｈ ｂ ｈ Ｐ ｈ ｔ ｔｏｃ ｅｍ． ｏｏ ｏ． ： １ Ｕ（ ｏ ）ａｎｄ Ｕ（２）ｓｔｒａｉｎｓｏｆＴＭＶ． ． ｉｎ ｌ ｉ ｉ ｔ ｏ ‐ ｅ ｉ ｅｏ ｅｏｐｒ ａｖ ｌ ｃＶ ｒｕｓｎｕｃ ｉｏ ａ ｏｂａｃｃｏ ｍｏｓ ｉ ｔ ｔａｄｓｏ ｅｏｆｔ Ｔａｋａｈａｓｈ ｒｐｔ ｏｎａｓａ ｍｅａｓｕｒ ． Ｐｈｙｔ ｒ ｅ ． Ｕ１ ， Ｗ．Ｎ． ，１９５１ ｌ ｔｈｏ ｏｇｙ４１ｉ１４２一１４５ ｐａ ．. 北海道教育 ゾ ９７６ 由崎俊道・池畑昭・野村邦重， １ ， タバコ ・モザイク・ウイル スに対するオ ンおよび塩素の影響． 大 学紀要 ２６： ５ ～１１ ．. 不活性化． 北海道教育大学紀要 ゾ 由崎俊道・池畑昭， １ ９ ７７ ． タバコ・モザイク・ウイルスのオ ンおよび塩素による ２８： ３～ ６．. （１ ） ８.
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