無血清培地における下垂体由来 GH3細胞の
プロラクチン産生に対するアクチビンの作用
伊
吹
友
二
は じ め に アクチビンは下垂体の卵胞刺激ホルモン (FSH) の産 生を促進する卵胞液中の因子として発見されたが, そ の後, 様々な組織で種々の作用を発揮する成長因子であ ることが明らかとなった. 下垂体ではプロラクチン (PRL) 産生にも影響することが報告され, ラット下垂体 前葉初代培養細胞では PRL の産生を抑制すること や 血清添加培地ではラット下垂体由来 GH3細胞の PRL 産生を抑制すること が報告された. しかし, 下垂体前葉 初代培養細胞は様々なホルモン 泌細胞を含み, この培 養系を用いた報告は様々な細胞の相互作用の結果を反映 している可能性がある. また, 血清はアクチビン結合蛋 白質で結合によりアクチビン作用を中和することの知ら れているフォリスタチン を含有し, 血清含有培地を用 いた報告はアクチビンと血清成 との相互作用の結果を 反映していると えられる. 一方, GH3細胞はラット下 垂体腫瘍細胞から確立された PRL 産生性の細胞株 で これまでに種々のポリペプチドの作用の研究に用いられ ており, アクチビンレセプターが発現していることも報 告されている. このため,アクチビンの PRL 産生に対す る作用の研究に適した培養系の確立を目的として, 無血 清培養系における GH3細胞のプロラクチン産生に対す るアクチビンの作用を検討した. 方 法アクチビンは recombinant human activin A (Dr. Yuzuru Eto, Ajinomoto) を, フォリスタチンは recom-binant human follistatin-288 (National Hormone and Pituitary Program, NHPP) を用いた. PRL の測定には rat PRL RIA kit (NHPP) を用いた. GH3細胞 (ATCC CCL-82.1) の維持培養には 2 mM L-glutamine, 15％ horse serum,2.5％ fetal bovine serum(FBS)含有,抗生物 質非含有の Hams F-10培地を用いた. 実験には Hams
F-10培地で 3回洗浄した細胞を用い, 無血清培地として 2 mM L-glutamine, 0.1％ (w/v) bovine serum albumin (BSA) 含有, 抗生物質非含有の Hams F-10培地を用い た. 細胞数は ethylenediaminetetraacetic acidで浮遊させ た細胞のトリパンブルー色素の排除による生細胞のカウ ントと,DNA への 5-bromo-2-deoxyuridineの取り込み により計測した. 細胞中の PRL の測定には 0.1％ Triton X-100を作用させた細胞溶解液を用いた. 結 果 無血清培地中での GH3細胞の生細胞率は 96時間の 培養中 80-90％に保たれており, アクチビン添加群, フォ リスタチン添加群, 対照群に有意差を認めなかった. ア クチビンは時間依存性 (24-96時間), 用量依存性 (1-12 nM) に PRL 産生を促進した. フォリスタチンの単独添 加では 72時間まで対照群と有意差を認めなかった. ア クチビンとフォリスタチンの同時添加後 72時間の培養 では, アクチビンによる PRL 産生促進作用をフォリス タチンは用量依存性に抑制し, フォリスタチンとアクチ ビンのモル比が 2以上の用量に於いて, アクチビンによ り増加した PRL 産生は対照群レベルまで抑制された. 129 Kitakanto Med J 2008；58：129∼130 １ 群馬県前橋市昭和町3-39-22 群馬大学大学院医学系研究科生殖再生 化学 平成19年11月27日 受付 論文別刷請求先 〒371-8511 群馬県前橋市昭和町3-39-22 群馬大学大学院医学系研究科生殖再生 化学 伊吹友二
無血清培地へのアクチビンと 15％ horse serum, 2.5％ FBS の同時添加ではアクチビンは PRL 産生を用量依存 性に抑制した. 察 ラット下垂体由来 GH3細胞の無血清培養系を確立し, この培養系を用いてアクチビンが PRL 産生促進作用を 有することを明らかにした. この培養系でフォリスタチ ンはアクチビンの PRL 産生促進作用を抑制し, フォリ スタチンとアクチビンのモル比が 2以上の用量でアクチ ビンの PRL 産生促進作用が中和されたことは, アクチ ビン 1 子に対しフォリスタチン 2 子が結合するとい う従来の報告 と矛盾しない結果であった. この培養系 への血清の添加によりアクチビンは PRL 産生に対し従 来の報告と同じく抑制性作用を示した. 従って今回確立 した無血清培養系はアクチビンの PRL 産生の研究に有 用な培養系と える. 文 献
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