岡 山 医 学 会 雑 誌
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(2) 482. 宇. 野. 6名 の 主 常 人 よ りヘ パ リ ン加 静 脈 血 を採 取 し, Ficoll‑Conray法10)に 1640に て3回 RPMI. て リン パ 球 を分 離, RPMI. 洗 浄 後,. 10%胎. 後, FITC標 land, Los. 児牛 血 清 を 含 む. 1640培 養 液 に2×105/mlの. 順 三 郎. 濃度に 浮遊 させ. 識 ヤ ギ抗 人immunoglobulin(Hay Angels)を4℃,. 型 螢 光 顕 微 鏡 で 観 察 し た.以. c) EBV‑associated. 3.. ReedmanとKleinの. 方 法 はPaulyら5)の 即 ち,培. 方 法 に 準 じて お こ な っ た.. 養 株 細 胞(刺. 激 細 胞)をmitomycin. C. 25μg/mlで37℃,. 30分 処 理 し,洗 浄 後,. 10%胎. 牛 血 清 加RPMI. 1640で1.5×106/mlの. 細 胞浮 遊. 液 と し, 1.5×10cmの た.反. 児. 試 験 管 に0.4mlず つ 分 注 し. 応 細 胞 と して 正 常 人 末 梢 リ ン パ 球 浮 遊 液. (2×106/ml)を. そ れ ぞ れ3m2ず つ 加 え た.反. 細 胞 と刺 激 細 胞 の 混 合 比 は,最 と報 告 さ れ て い る1対1の. み で お こ な っ た.対. 照 と し て 反 応 細 胞 に 培 養 液(10%胎 RPMI. 1640)0.4mlの. M(PHA‑M,. 最 終 濃 度1/100に. に 培 養 液3mlを. 児牛 血 清 加. お こ な っ た.細. DIFCO. 加 え た も の,刺. Det 激細 胞. 加 え た もの を用 い た.反 応 は7.5. nuclear. antigen (EBNA). 螢光 抗 体 補 体 法12)に よ り. 胞 塗 沫 標 本 を1晩. 乾 燥 後,. 化 炭 素 で 室 温 に て15分 間 固 定 し,ま たEBNA陽. 体)を. 混 じた も の(い. 濃 度10倍 希 釈)を37℃30分 balanced. 4塩. ず非 働 化 し. 性 血 清 と 非 働 化 し て い な いEBNA. 陰 性 血 清(補. salt solution. 標 識 抗 ヒ トB1c/B1A抗 ジ ャ パ ン,東. ず れ も最 終. 反 応 させ た.次 (BSS)で 体(40倍. 京)を37℃30分. いで. 洗 浄 後FITC 希 釈,ヘ. キス ト. 間 作 用 させ,観. 察. した. d)人thymus‑leukemia. み を加 え た も の,反 応 細 胞. にphytohemagglutin roit)を. 応. 大 反 応 を起 こ す. 下 螢光 抗体 法 の観. 察 に は 全 て 落 射 型 螢 光 顕 微 鏡 を使 用 し た.. 使 用 し た. MLC. 30分 反 応 さ せ,落 射. とB‑cell株. 細 胞 共 通 抗 原(B‑LCLA)14). 家 兎 抗HTLA血 は,坪. antigen(HTLA)13). 清 及 び 家 兎 抗B‑LCLA血. 清. 田 ら の 作 製 し た も の を 使 用 し,膜. 体 間 接 法 に よ り判 定 した.抗HTLA血. 螢光 抗. %CO2ふ ら ん 器 に て6日 間 培 養 後,各 試 験 管 に 3H‑thymidine (specific activity , 2.0Ci/m mole,. cell株 細 胞 と 末 梢 リ ン パ 球 で 吸 収 し作 製 し た も. The. の で, thymocyte,. Radiochemical. center, Amershan)1μCi. 兎 抗MOLT‑4(T‑cell. を加 え,さ. ら に24時 間 培 養 後,液 体scintillation. が,末. てdpmを. 血 清 は 家 兎 抗B‑411‑4(正. triplicateで お こ な っ た.結. て の 実 験 は,. 果 は正 常 人 リ ン パ. 球 の 幼 若 化 反 応(3H‑thymidineの. 取 り込 み)を. 以 下 の 式 に よ り刺 激 束 数(S. I.)と し て 表 わ し た.. S. I.=. C. 細 胞 で 吸 収 し 作 製 した もの で, B.cell. 株 細 胞,慢. 性 リ ンパ 球 性 白 血 病(CLL)細. null‑cell ALL細. a). 養 細 胞の 諸 性格 の検 索 E‑,. EAC‑rosette形. JondalとKleinの. 成 能. b)細. ー. ー カ ー と し て,. EAC‑rosetteに. 家 兎 抗 牛 赤 血 球IgM抗 (補 体)を. B‑cellマ. 成 能 を 検 討 し た.. 洗 浄 羊 赤 血 球 を,. E‑rosetteに. は. Los. FITC標. Angeles)を. 識 用. 30分 お こ な っ た.. deoxynucleotidyl. transferase. NALL‑1,. TALL‑1及. 自 治 医 科 大 学 の 高 久,佐. びBALL‑1細. 胞 に つ き,. 々 木 両 博 士 に よ り検 索. さ れ た.. 結. 果. 体 お よ び新 鮮 マ ウ ス血 清. 反 応 さ せindicator. cellと. し て 用 い た.. saline. 1). MLC. 正 常 人 リ ン パ 球 に 対 す るnull‑cell ALL株. 膜 螢 光 抗 体 間 接 法 に て 検 討 し た.即 buffered. 細 胞 とは 反 応. 2次 抗 血 清 は,. 原 抗 体 反 応 は 全 て4℃, Terminal. は 牛赤 血 球 に. 胞 表 面immunoglobulin(sIg). 胞 をphosphate. 胞, T‑cell ALL株. (TdT). 方 法11)に 準 じ, T‑cellマ. カ ー と し てE‑rosette, EAC‑rosette形. e). 胞,. 胞, B‑cellと 反 応 す るが, T‑cell,. し な い もの で あ る.. い,抗 4.培. 常B‑cell株 細 胞)血 清. をT‑cell株. ヤ ギ抗 家 兎IgG(Hyland,. /反 応 リ ン パ 球 の み のdpm. 胞 と反 応 す る. B‑cellと は 反 応 し な い.抗B‑LCLA. T‑cell ALL細 混 合 培 養 のdpm‑mitomycin 処 理 刺 激 細 胞 の み のdpm. 細 胞)血 清 を, B‑. T‑cell ALL細. counterに. 測 定 した.全. 梢T‑,. ALL株. 清 は家. ち培 養 細. (PBS)で. 洗 浄. 胞(NALL1), び4系. のB‑cell株. T‑cell ALL株 細 胞(BALL‑1,. 細 胞(TALLI)及 JBL,. RPMI. 細.
(3) Null‑cell白 Table. 1. Blastogenic lymphocytes. 血 病 細 胞 株(NALL‑1)の. response of normal to lymphoid cell. lines. 抗 原性 に 関す る研 究 1788,. CB‑LCL)のone. way. 483 MLCに. おけ る刺. 激 性 並 び に 用 い た 正 常 リ ンパ 球 のPHA‑Mに す る 反 応 性 は, Table NALL‑1細. 胞 は5名. れ 刺 激 指 数(S.. の 正 常 人 リンパ 球 を それ ぞ. I.)27.6,. と刺 激 し, MLCに 得 た.こ. 対. 1に 示 す 通 りで あ る.. 50.0,. 28.8,. 36.2, 30.6. お ける刺激能 を有す る結 果 を. のS. I.はPHA‑Mの. そ れ に 比 しや や 低. 値 で あ るが, B‑ce11株 細 胞 のS. I.と 有 意 の 差 を 認 め ず, NALL‑1細. 胞 に はB‑cell株. 同 等 に,強. いMLC刺. さ れ た.一. 方, B‑cell株. 来 を 異 に す る が,そ た4系. 細 胞 とほ ぼ. 激 抗 原 が 存 在 す る こ とが 示 細 胞 は それ ぞれ その 由. の 由 来 に 関 係 な く,検. 討 し. は 全 て ほ ぼ 同 等 の 刺 激 性 を 有 し て い た.. TALL‑1細 1.4,. 胞 のS. I.は そ れ ぞ れ3.2,. 0.9,. 1.7,. 2.1,. 1.0と 低 値 で あ り,こ の 細 胞 がMLC. 刺 激 抗 原 を 欠 如 し て い る 可 能 性 が 示 さ れ た. 2)培. 養 細 胞 の性 格. 用 い た6系. の 培 養 株 細 胞 のE‑rosette形. EAC‑rosetee形. 成 能, sIg陽 性 細 胞 率, EBNAの. 有 無,抗HTLA及. び 抗B‑LCLA血. 反 応 性 並 び にTdT活 E‑rosette陽 LL‑1細 %で. Table. 2. Properties. 成 能,. 清 に 対す る. 性 の測 定 結 果 を 表2に 示 し た.. 性 率 はTALL‑1細. 胞 で68%,. NA‑. 胞 で0%,. 4系 のB‑cell株. 細 胞 も全 て0. あ っ た.一. 方, EAC‑rosette陽. 性 細 胞 は,. of lymphoid. cell lines. * Epstein-Barr virus determined nuclear antigen ** Humanthymus-leukemia antigen (13) *** HumanB-lymphoid cell line commonantigens (14) **** Terminal deoxynucleotidyl transferase.
(4) 484. 宇. B‑cell株. 細 胞 の 中,腫. 1788とCB‑LCLに. 瘍 細 胞 由 来 で な いRPMI. そ れ ぞ れ68,. B‑cell ALL株. 67%認. 細 胞(BALL‑1),. 腫 株 細 胞(JBL)で 1, TALL‑1細. 野. は と もに0%で. 意 な 差 を 認 め な か っ た.こ. め た が,. Burkittリ. ンパ. 成. JBL, れ ぞ れ96,. 方,. B‑cell株. RPMI. 1788,. 65, 66,. 細 胞. CB‑LC‑. 70%のsIg陽. EBV‑associated 3種. nuclear. びBurkittリ. で 認 め ら れ ず,. 性. antigen. RPMI. (EBNA). 有 す る16)と い うT‑,. 胞 が,. MLC刺. 性,. MLC刺. てB‑LCLA陽. のB‑cell株. に 高 値 で あ りBALL‑1細. 性 で, HTLAは. 陰性 で あ. 性 は, TALL‑1とNALL‑1細 胞 は 低 値 で あ つ た.. 考 ALLの80%を. 胞に高値. way. MLCに. 果,. NALL‑1細. 胞 株(NALL‑1)のone. 方,. T‑cell ALL株. の 結 果 よ り, NALL‑1細. 抗 原)を. 激 性 を有. 細 胞(TALL‑1). に は 他 の 報 告4)〜7)同様MLC刺. 細 胞 と共 通 なMLCに. の結. 4種 の 由 来 を 異 に す るB‑. cell株 細 胞 と ほ ぼ 同 等 の 強 いMLC刺 して い た.一. 理 由 と し て,白. (EAC‑rosette)receptor,. B‑cell株. slg, EBNAもMLC 細胞 の 全 て には証. ず れ もMLC刺. 激抗原. 細 胞 共 通 抗 原(B‑LCLA)は,抗B‑. cell株 細 胞 血 清 をT‑cell株. 末 梢 血B‑cell,. CLL細. に 証 明 さ れ る.今 こ のB‑LCLAが. 矛 盾 しな い.以. 胞 は, B‑ce1l株. 明 さ れ たMLC刺. 激. 胞 は これ を欠如 し. 激 性を 欠如 して い る 激抗 原. 細 胞,. 胞 及 びnull‑cell ALL細 胞 は,. 陽 性 で あ り, fresh. leukemia. 原 を もつ と い う報 告17)〜19)と. 上 の 結 果 は, NALL‑1細 激 抗 原 が こ のB‑cell株. 胞に証 細胞共. 通 抗 原 と 同 一 で あ る 可 能 性 を 示 唆 して い る. 近 年Minowadaら20)は,慢 急 転 細 胞 由 来 のPh1‑染. 血 病 化 の 過 程 でMLC刺. 細 胞 で充 分吸 収 した. 回 検 討 したNALL‑1細. null‑cellがB‑cell抗. て い る も の と考 え ら れ る. T‑cell株 細 胞 がMLC刺. 激 抗 原 とは 考 え に くい.一 方,. 性 格 と し て 知 られ て い るcomplement. 激性 を認 め な か っ. 関 連 す る抗 原(MLC刺. 保 有 し, TALL‑1細. 胞 に 低 値 で あ っ たTbT. 抗 血 清 で 検 出 さ れ る抗 原 で あ り, B‑cel1株. お け る 抗 原 性 を 検 討 し た .そ 胞 は,. 胞. と は 無 関 係 で あ る.. 胞 の 抗 原 解 析 を 目的 と し て,教 室 で 樹 立 ALL細. びTALL‑1とNALL‑1細. 明 さ れ な か っ た の で,い. 察. 細. 胞 に は存 在 し な い抗 原 で. 刺 激 性 の 認 め られ たB‑cell株. 占め る と言 わ れ て い る15)null‑. さ れ たnull‑cell. HTLA及. は い ず れ もMLC刺 B‑cellの. 胞 とB‑cell株. 胞 の み に 認 め ら れ たE‑rosette. receptor,. 細 胞. 回 の実 験 結 果 よ り. 激 抗 原 は, NALL‑1細. 性 で あ っ た が,. B‑LCLA陰. で あ り, BALL‑1細. 常. 激 抗 原 と今 回検 討 した 各 種 細 胞. あ る. TALL‑1細. っ た.. ALL細. B‑cellの 固 有 の 性 格 を 反 映. 形 質 の 関 係 を 考 察 す る.今. は 陽性. 検 索 で は, TALL‑1細. こ れ と は 逆 に, NALL‑1と4系. TdT活. こ れ を保. 激 抗 原 を有 して い た こ とは,正. 次 に, MLC刺. ン パ 腫 株 細 胞(JBL) 1788とCB‑LCLで. びB‑LCLAの. 胞 はHTLA陽. 常 末 梢T‑cellは. 常 末 梢B‑cellは. 胞 に 存 在 し, TALL‑1細. HTLA及. た,こ. 激 性 を 欠 き,正. 推 測 さ れ る.. NALL‑1,. で あ っ た.. は,全. 激 抗 原 を 欠 き, B‑cell株 細 胞 が そ の 由 来. に 関 係 な くこ の 抗 原 を保 有 して い た こ とは,す. null‑cellの 固 有 の 性 格 を 反 映 し て い る 可 能 性 が. 類 の 白 血 病 細 胞 株(TALL‑1,. BALL‑1)及. 胞が. し て い る も の と考 え ら れ る.同 様 に, NALL‑1細. 細 胞 が 認 め ら れ た.. は,. 激 性 の 欠 如 が 白血 病 化 と 無. 関 係 で あ る こ と を 示 し て い る. TALL‑1細. MLC刺. NALL‑1,. 胞 で と も に 陰 性,一. の4系(BALL‑1, は,そ. 細 胞 のMLC刺. の こ と は, T‑cell A‑. で に 報 告 さ れ て い る よ う に,正. 細 胞 表 面immunoglobulin(sIg)は,. L)に. LL株. MLC刺. あ っ た. NALL.. 胞 に は い ず れ もEAC‑rosette形. を認 め な か っ た.. TALL‑1細. 順 三 郎. 性骨 髄 性 白血病 の 色 体 陽 性 で か つALL特. 異 抗 原 を 有 す るnull‑cell株 細 胞(NALM‑1)を. 樹. 立 し,こ. 激. の 細 胞 もNALL‑1と. 同 様 にMLC刺. を 失 う た め だ と す る 考 え も あ る が4),今 回検 討 し. 抗 原 を 保 有 し て い る こ と を報 告 し た20).し か し. たNALL‑l及. な が ら 現 在 ま でfresh. LL‑1,. び4種. BALL‑1は. のB‑cell株. 細 胞 の 内, NA‑. 白 血 病 細 胞 で あ り,他. は 非 白 血 病 細 胞 で あ る が,そ. の3種. の 間に 刺 激性 の 有. C刺. leukemia. null‑cellにML‑. 激 抗 原 が 存 在 す る か 否 か に つ い て は,な. 一 定 の 結 果 が 得 られ て い な い21) .今 回 のNALL‑1. お.
(5) Null‑cell白 細 胞 がMLC刺 結 果 は,こ. 抗 原性 に 関 す る研 究. 激 抗 原 を 有 し て い る と い う実 験 の 株 細 胞 の 由 来 し たleukemia. cellがB‑cell同 のIa抗. 血 病 細 胞 株(NALL‑1)の. 様MLC刺. 激 抗 原,即. を 得 た.こ. ちマ ウ ス. た.以. 唆 して い る も の と考 え られ る.. ALL細. 胞 株(BALL‑1)並. 胞 同 様MLC刺. 原 類 似 の 抗 原 と考 え ら れ 胞 にIa様. 抗原が. らび に 御校 閲 を賜 っ た恩 師 木 村 郁 郎 教 授 に深 甚 の謝. 胞 はB‑cell. び に 他 のB‑cell株. 意 を表 し ます.ま た 終 始 御 懇 篤 な る御 指 導 を賜 っ た. 細. 三 好 勇 夫 講 師,坪 田 輝 彦 博 士 に 深 謝 し ます.. 激 抗 原 を 有 し て い る と い う結 果. 文 1.. ウ ス のIa抗. 上 の 結 果 はnull‑ALL細. 本 論 文 を擱 筆 す るに あ た り,御 懇 意 な る御 指 導 な. Null‑cell Al1細 胞 株(NALL‑1)のone‑way 激 性 を検 討 し, NALL‑1細. receptor,. び 株 細 胞が腫 瘍 か否 か に 関. 存 在 す る 可 能 性 を 示 し て い る.. 論. MLC刺. TdT及. 係 な く,マ. 原 様 抗 原 を保 有 し て い る 可 能 性 を 強 く示. 結. の 刺 激 抗 原 はcomplement. sIg, EBNA,. null‑. 485. 献. Hiraki, S., Miyoshi, I., Kubonishi, I., Matsuda, Y., Nakayama, T., Kishimoto, H., Machida, K, Masuji, H. and Kimura, I.:. Establishment. of a T-cell line from human lymphosarcoma.. Gann. 69,. 115-78,. 1978. 2.. Hiraki, S., Miyoshi, I., Masuji, H., Kubonishi, I., Matsuda, Y., Nakayama, and Kimra, I.:. Establishment. of an Epstein-Barr. cell line from acute lymphoblastic 3.. leukemia. Cancer. Royston, I., Graze, P. R. and Pitts, R. B.: in mixed leukocyte culture.. 5.. 40, 2131-2135,. human B. 1977.. Han, T.:. 23, 355-359,. 1974.. Disparity of mixed lymphocyte. J. Natl. Cancer. Inst.. Blastogenic response of normal lymphocytes Immunology. 1977.. 53, 361-366,. Pauly, J. L., Minowada, J., Han, T. And Moore, G.E.:. neoplastic cells. 7.. 59, 93-94,. Failure of cultured human T-cell lymphoid lines to stimulate. J. Natl. Cancer. Inst.. tured cells of human T and B lymphoid lines. 6.. nuclear antigen-negative. J. Natl. Cancer. Inst.. P.. Hiraki, S., Miyoshi, I., Kubonishi, I., Matsuda, Y., Nakayama, T., Kishimoto, H. and Masuji, H.: Human leukemic "null" cell line (NALL-1). 4.. virus-determined. T., Kishimoto, H., Chen,. 54, 557-561,. reactivity to cul 1975.. to cultured lymphoid cells and non-lymphoid. 1972.. Weksler, M. E.: Lymphocyte transformation. induced by Autologous cells.. J. Immunol.. 116,. 310-. 314, 1976. 8.. Tsubota, T., Minowada,. J. and Pressman, D.:. rabbit antisera against these lines. 9.. Reaction of T-lymphoid and B-lymphoid cell lines with. J. Natl. Cancer. Inst.. 59, 399-404,. Miyoshi, I., Hiraki, S., Kubonishi, I., Matsuda, Y., Kishimoto, H., Nakayama, and Kimura, I.:. Establishment. of an Epstein-Barr. virus-negative. Burkitt's lymphoma and its serial passage in Hammsters. 10.. 1977.. 辻. 公 美:. 免 疫 実 験 操 作 法,. 11. Jondal, M. and Klein, G.:. I.日. 本免疫学会編. Surface markers. pp. 265,. Cancer 9l,. T., Tanaka, T., Masuji, H.. B-cell lymphoma line from a Japanese 40, 2999-3003,. 1975.. 71.. on human B and T lymphocytes.. J. Exp. Med.. 138, 1365-. 1378, 1973. 12. Reedman, B.M. and Klein, G.:. Cellular localization of an Epstein-Barr. ment-fixing antigen in producer and non-producer lymphoblastoid. virus (EBV)-associated. cell lines.. Int. J. Cancer. comple 11, 499-. 520, 1973. 13. Tsubota, T., Minowada, J., Nakazawa, tion of surface markers. S., Sinks, L.F., Han, T., Higby, R. J. and Pressman, D.: Correla. of cells of human lymphatic leukemias with disease type.. J. Natl. Cancer. Inst..
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(7) Null‑cell白. 血 病 細 胞 株(NALL‑1)の. 抗 原 性 に 関 す る研 究. 487. Studies on antigens of a leukemic null-cell line (NALL-1). I. Stimulatory. capacity in mixed lymphocyte culture Junzaburo. The Second Department. of Internal (Director:. UNO. Medicine, Okayama Prof.. University. Medical School. Ikuro Kimura). A one-way mixed lymphocyte reaction between lymphocytes from normal human donors and mitomycin C-treated cells from a human leukemic null-cell line (NALL-1) was investi gated. Human leukemic T-cell and B-cell lines, an Epstein-Barr nese Burkitt's lymphoma line, and two EBV-positive normal. virus (EBV)-negative Japa B-cell lines were studied in. parallel. Normal lymphocytes were stimulated significantly by the cultured null-and B cells but not by the cultured T-cells. The stimulatory capacity of this null-cell line was approximately equal to that of the leukemic, lymphoma, and normal B-cell lines, and was unrelated to the presence of complement receptor, surface immunoglobulin, EBV-associated nuclear antigen, terminal deoxynucleotidyl transferase or the origin of the cell lines. These results suggest that not only leukemic B-cells but also leukemic null-cells have stimu latory determinants in mixed lymphocyte culture..
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