〈原著〉実験的自己免疫性脳脊髄炎に対するphosphodiesterase阻害剤，cilostazolの治療効果

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(1)*近畿大医誌. 2 9 7. ( M e dJ山. 実験的自己免疫性脳脊髄炎に対する p h o s p h o d i e s t e r a s e 阻害剤， c i l o s t a z o lの治療効果呉城珠里近畿大学医学部内科学教室(神経内科部門). 抄録 P h o s p h o d i e s t e r a s e(PDE) は cAMP，cGMPを加水分解する酵素であるが，様々な PDE阻害薬は多発性硬化 m u l t i p l es c l e r o s i s:MS) のモデル動物である実験的自己免疫性脳脊髄炎 ( e x p e r i m e n t a lautoimmunee n c e 症 ( i l o s t a z o lは PDEI I Iを選択的に阻害し，その血小板凝集抑 p h a l o m y e l i t i s:EAE)を抑制すると報告されている. C i l o s t a z o lには接着分子の発現抑制作用制作用や血管拡張作用により虚血性疾患の治療に用いられている.さらに c i l o s t a z o lの EAEに対する治療効果を検討した. C 5 7 B l / 6マウスをもあると報告されている.今回，我々は c m y e l i no l i g o d e n d r o c y t eg l y c o p r o t e i n(MOG)35-55 で感作し c i 1o s t a z o l含有餌を与えた群と，通常餌を与えた群に i l o s t a z o l群ではコントロール群に比べて有意に EAE重症度， MOG反応性 T細胞増殖や， IFN 分けて飼育した.C γ 産生，血清中可溶性 i n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e c l e lが低下していた.以上より， c i l o s t a z o lは自己反応性 T 細胞増殖や接着分子の発現を抑制することにより EAEを抑制すると考えられる. C i l o s t a z o lは MSの治療薬となる可能性があり，ヒトにおける治療効果や耐用性についてなどさらなる検討が必要である.. Keywords:p h o s p h o d i e s t e r a s e阻害剤， c i l o s t a z o l，実験的自己免疫性脳脊髄炎，多発性硬化症，接着分子， i n t e r c e l s e l e c t i n l u l a ra d h e s i o nm o l e c l e l，P. 緒. モ亘書ト. 酉. P h o s p h o d i e s t e r a s e(PDE)は細胞内セカンドメッセンジャーである環状ヌクレオチド cAMP ，cGMP を加水分解する酵素であり，下流の cAMP-depend e n tp r o t e i nk i n a s e (PKA)・cGMP-dependent p r o t e i nk i n a s e (PKG) シグナルを調節している. PDEはそのドメインに基づいて 1 1種類のファミリ 1のアイソザイムに分類され，アイソザー，さらに 2 0種類以上のバリアントが報告されていイムには 5 る1. C i l o s t a z o lは PDEI I Iを特異的に阻害する抗血小板薬であり，脳虚血性疾患の治療に広く使われている.抗血小板作用 z以外にも，血管拡張作用門血管平滑筋増殖抑制作用 5 も併せ持つ .NF-xBの活性化阻害を介した接着分子 v a s c u l a rc e l la d h e s i o nm o l -. e c u l e l (VCAM-1 ) の発現抑制作用やアポトー e シス抑制作用血管内皮細胞における tumor n c r o s i sf a c t o rα(TNFα)による monocytechemo大阪府大阪狭山市大野東3 7 7 2( 干5 8 9 8 5 1 1 ) 受付平成2 0 年 8月2 7日，受理平成2 0年1 0月2 9日. a t t r a c t a n tp r o t e i n l (MCP-l)産生の抑制8 が報告されている. 多発性硬化症 ( m u l t i p l es c r e l o s i s:MS)は中枢神経ミエリンの慢性進行性の炎症性疾患である. MS では活性化リンパ球と単球/マクロファージが中枢神経へ侵入することが中枢神経の炎症と脱髄に重要であると考えられている.免疫細胞が中枢神経へ侵. 1，i n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e 入するとき VCAM c l e -l (ICAM1 ) ， P s e l e c t i nのような接着分子は重要であると考えられている. 実験的自己免疫性脳脊髄炎 ( e x p e r i m e n t a l. autoimmune e n c e p h a l o m y e l i t i s :EAE) は MSのモデ、ル動物とされており， m y e l i n b a s i c p r o t e i n (MBP) や m y e l i no l i g o d e n d r o c y t eg l y c o p r o t e i n (MOG) をアジュバンドとともに免疫することにより作られる . Amrinone9 や i b u d i l a s t10， mesopraml1，r o l i p r a m山 3 などの PDE阻害薬は抗原特異性 T細胞増殖を抑制し， T細胞よりのサイトカイン産生を Th2に偏侍させることにより EAEを抑.

(2) 2 9 8. 呉城珠里. 制すると報告されている.さらに，我々は COX-2阻. 時間前に [ 3H] thymidine ( 1 I l -Ci /well)を添加し，. 害薬である c e l e c o x i bにより接着分子 P s e l e c t i n，. r a d i o a c t i v i t yを β-1205c o u n t e r(Pharmacia，Upps a l a，Sweden) にて測定した. 5)サイトカイン産生増殖反応に使用した w e l lの培養上清を用い，サイトカインの測定を行なった.培養4 8時間の培養上清をサイトカイン測定まで -80Cで保存した. IFN γ，TNF-a，I L 4，I L 1 0，I L 1 7の測定は enzyme l i n k e dimmunosorbentassay(ELISA)( a n t i m o u s e. ICAM-1の発現が抑えられ，炎症細胞が中枢神経へ浸潤するのを抑制し EAEの治療につながったと報告した 14 以上より， c i l o s t a z o lは EAEにおいて免疫バランスを調節し，接着分子発現を抑制することにより. EAE症状を軽減させる可能性があると考えた.よって，今回我々は， c i l o s t a z o lによる EAEに対する治. OptEIAK i t s，BDB i o s c i e n c e .SanJ o s e，USA) を. 療効果を検討した.. 用いて測定した.. 方法. 6 ) 可溶性接着分子測定. 1)マウス動物実験は動物の愛護及び管理に関する法律，基本指針に基づいて作成された近畿大学医学部動物実験規定に準じて行なった.野生型 C57B1/6( B 6 )マウスを CLEAL aboratoryAnimals(TokyoJ a p a n ) より購入.固形餌と水を自由に摂取させ，室温， 1 2 時間明暗サイクル下で飼育した.. 2) EAE惹起 EAEは B6マウス (81 2週齢，雌)に MOGペプチド (MOG : M E V G W YRSPFSRVVHLYR35 55 NGK) 1 0 0いgとフロイト不完全アジュノ Tントに結核死菌 ( D i f c oL a b o r a t o r i e s，D e t r o i t，USA) を加. え，エマルジョンを作成，側腹部より皮下注射し感作した.初回感作時及び4 8時間後に，百日咳毒素. ( L i s tB i l o g i c a lL a b o r a t o r i e s， Campbell，USA)3 0 0 i l o s t ng/匹を腹腔内投与した.感作時より 0_1%c a z o l含有固形餌 (Ohtsuka，Tokushima， J a p a n )を与えた群 ( n=28) と，通常餌 (n=28) を与えた群にわけで飼育した. 3) EAE臨床評価臨床症状評価には以下のスコアを用いた.. o:正常垂. 1 尾のトーヌス低下. 3 歩行異常. と後ろ足の完全脱力. 0. 2 尾の完全下. 4 後足の完全脱力. 5 前足. 6 死亡.. 4)抗原特異的リンパ球増殖反応. EAE感作 1 2日日に，出径リンパ節，膝宮リンパ節を採取し 1 0 0いm ナイロンのセルストレイナー. (BD B i o s c i e n e s，Berford，USA) を使って s i n g l e c e l lの状態にした. 1X1 0 6 /welの細胞数にし， 0， 1， 1 0， 1 0 0ぃ g/mlと段階希釈したペプチド MOG35-55 を添加し 3 7 "C， 5% CO 6 穴 2 条件下にて 9 平底のプレート上にて 7 2時間の培養を行なった.なお培養液は， RPMI1 6 4 0( G i b c o， GrandI s l a n d，NY， USA) に 5X1 0 -5M 2-mercaptoethanol，2m ML g l u t a m i n e，1 0 0U/mlp e n i c i l l i n / s t r e p t o m y c i n，1 %自家血清を添加したものを使用した.培養終了 1 8. EAE感作 1 4日， 2 1日， 3 0日目にマウス尾静脈よりガラス管を用いて血液を採取し血清を分離，可溶性接着分子測定まで -80C で保存した.血清中可溶性 ICAM-1(sICAM-l ) ， VCAM-1(sVCAM-l ) ， P s e l e c t i n( s P s e l e c t i n ) の測定は ELISAk i t (R& D Systems，Wiesbaden-NordenstadtGermany) にて行ニなった. 7)マウス脳，脊髄の組織学的検討 EAE感作 1 4日，3 0日目のマウスにエーテル吸入麻酔下で胸腔を切開し心臓を露出，左心室より 10%ホルマリン液で満たした 50mlシリンジをつないだ 2 7 ゲージ翼状針を挿入後，右心耳をメスにて約 3mm 切開し，シリンジ中のホルマリン液で潅流した.その後脳，脊髄を採取.脳と三等分に横断した脊髄を 10%ホルマリンで固定し，パラフィン包埋の後， 4ぃ m で連続切片を作成した.脳，脊髄への細胞浸潤を評価するために h ematoxylinande o s i n(HE) 染色を，脱髄を評価するために Luxolf a s tb l u e (LFB) 染色を，接着分子発現を評価するために免疫染色を行なった.一次抗体には ICAM-1( C D 5 4 )，VCAM 1( C Dl0 6 )，P s e l e c t i n(CD62-p: BDB i o s c i e n s e， SanD i e g o， USA)を用い，二次抗体には ICAM-1: 抗ビオチン化ノ、ムスター抗体 ( V e c t o r L a b o r a 0. t o r i e s，Burlingame，USA)，VCAMl / P s e l e c t i n: 抗ビオチン化ラット抗体 Vector L a b o r a t o r i e s， Burlingame，USA) を用いた. 8)統計学的解析データはすべて平均値±標準誤差 (SEM)で表示した.すべての有意差検定には Mann-Wh i t n e yUt e s tを用い， P<0.05を有意とした. 結. 果. 1 )c i l o s t a z o lによる EAEの抑制効果コントロール群では， EAE感作後 1 3 . 9土 0 . 5 4日で症状が出現した.最重症スコアは 3 . 5: tO . 1 2で累積ス. 2 . 2土 2 . 7 0( 表 1)であコアは EAE感作 1-30日で4.

(3) 2 9 9. EAEに対する c l i o s t a z ol の治療効果表 1 EAE重症度. c o nt r o l c l io st a z ol. 最重症スコア. 発症日 (日目). 発症頻度(匹). 3 .5: t0. 1 2 2 .9: t0 .2 0本. 1 3 .9: t0. 5 4 1 4. 6: t0 . 7 0. 2 8 / 2 8 2 3/ 2 8. 累積スコア. 4 2. 2 : t2. 7 0 3 6. l : t3. 8 6. データは平均値 : tSEMで表示した . P<0 . 0 5v s .c o n t r ol 群. *:. 3 . 5 3 ~ o 2 . 5. *. ←control. * *. ー※-c i l o s t a z o l. z 8 1.5 ι t n J. .2. υ0 . 5 O. 7 8 9 10 1 1 1 2 13 14 15 1 61 71 81 9 20 2 1 22 23 24 25 26 27 28 29 30. d a ya f t e ri m m u n i z a t i o n 図 1 EAEに対する c l io s t a z olの効果 0 . 1% c l io s t a z ol 含有餌を与えた群 ( n=) ( x ) と通常餌を与えた群 ( n=) ( e)の EAE重症の変移を示す .E AE感作 1 5，1 6，1 7日目においてコントロール群に比較して c i l os t a z o l群で EAE重症度が有意に低下していた . エラーパーは SEM を示す. P<0. 0 5v s.c on tr ol 群. *:. i l os t a z o l群では EAE感作後 14.6: t った .一方，c 0.70日で症状が出現し，最重症スコアは 2 .9: t0 .2 8， 1-3 0日の累積スコアは 3 6 . 1: t3 .86であった .c i l os t -. azolの経口投与により EAEの発症が遅れ，最重症スコア，累積スコアが低下する傾向にあったが，コントロール群との聞に有意な差はなかった . 図 lは. l i n i cals co reの平均を示す.EAE 日別でみた EAEc 感作 1 5，1 6，1 7日の EAEスコアは ci lo st azol群で有. c l io st az ol 群. i lo s t a z ol 群では，意に低下していた .組織学的には c 脳実質内への細胞浸潤は見られるものの，コントロー Jレ群に比べて程度は軽度であった . ( 図 2) 2) MOG特異的 T細胞増殖と Th1サイトカイン. 産生. ci lo s t a z ol 群では，コントロー/レ群に比べ MOG 特異的 T細胞増殖が有意に抑制された(図 3Al.さらに，リンパ節細胞の培養上清で、の IFNγ 産生においても c il o s t a z ol群ではコントロール群に比べ有コントロール群. 意に抑制された ( 図 3Bl . MOG特異的 T細胞増殖. 図 2 マウス脳組織の HE染色コントロール群では，側脳室周囲や脳表において脳実質への細胞浸潤が見られ，一部の脳動脈では周囲への細胞浸潤 ( p er i v as cu la r c u f f i ng )が見られた .一方，c il o st a z ol 群では，脳実質への細胞浸潤は見られるものの，コントロール群に比べ程度は軽度であった . 矢印は細胞浸潤を示す.. ( 図 3A) と I FNγ産生(図 3B) に有意差のある. M OG濃度に一致点は認めないが， I FN γの上昇を，1 0仲g/ mlでは刺激が足りきたすには MOG濃度 1. γ上昇と MOG なかったと思われる . さらに，IFN特異的 T細胞増殖において必要な MOGの刺激濃度が違うと考えている .また，M O G特異的 T細胞増殖. 0 0~g/ml では刺激において一部の細胞では MOG1 が強すぎて，細胞死に至り，増殖反応の数値が低値.

(4) 3 0 0. 呉城珠里. 3 ω2.8 ・ー2. 6. 一・一一一 control 一今←-cilostazol. ど 2. 4. 2 . 2 2 o r1.8 : : : J .1 . 6 0 >. q .. . . . . . x. x " ' -. 0. 1. 4. 受 1.2. /. /. ( n g / m l ) 1 6 0 00 1 40 0 0 1 2 0 0 0 1 0 0 0 0 8 0 0 0 6 0 0 0 4 0 0 0 2 0 0 0. *. ・. • c o n t r o l c i l o s t a z o l. 。. /. day14. day21. ::..~. day30. A. o 1 10 100 MOG(μg/ml) A. 一 → ← cilostazol. *. .cont r o l c i l o s t a z o l. 。 day14. day21. day30. B. ' ' a ヨ一 ) G¥. 弓(ち. nunununununununununu nUAununununuAununu zdnuRdnvRdnuRunvRd. ZIJ. A ﹃ A ﹃ 24qdp﹄ア﹄司. 市一. 一 + -c o n t r o l. ・. ( n g / m l ) 1 6 0 0 0 1 4 0 0 0 1 2 0 0 0 1 0 0 0 0 8 0 0 0 6 0 0 0 4 0 0 0 2 0 0 0. o 10 100 MOG(μgjml) B 図 3 ci l os t az olの MOG35-55特異的 T細胞増殖反応への影響 A はリンパ節細胞を MOG3ト 55 で再刺激し，培養 7 2時間後に [ 3H]t hymidineの取り込みでみた増殖反応を示す.横軸に再刺激した MOG35-55 濃度，縦軸は増殖感度とした .Bは 8時間後の培養上清中の IFN-y産生を培養 4 ELISA法で確認，横軸は再刺激した MOG35-55 濃度とした . コントロー/レ群と c i l os t azol 鮮はそれぞれ 8 匹ずっとした . エラーパーは SE Mを示す. キ:P<0. 0 5 v s .control 群になった可能'性がある . TNF -a，IL-10， IL-17で. ( n g / m l ) 8 0 0 0 7 0 0 0 6 0 0 0 5 0 0 0 4 0 0 0 3 0 0 0 2 0 0 0 1 0 0 0. 。. .con t r o l Eα l o s t a z o l 判ド. day14. day21. day30. C 図 4 EAE感作 1 4日， 21日， 2 8日目の血清中可溶性接着分子を ELISA法で観察した .A は s ICAM1を示す.いずれの時期も cl io st az ol 群で低下傾向にあり， 2 1日目においては有意差を認めた .Bは sVCAM-1を示すが両群間 P-s el e ct i n で差は認められなかった . C は s を示す .1 4日目において ci lo st azol 群で有意に低下していた . コントロール群と c i l os t az ol 群はそれぞれ 1 0 匹ずっとした . エラーパーは SE Mを示す. P<O . 0 5 v s .con t r o l群. *:. は両群で差は認められなかった . また，血清中のサイトカイン，白血球は測定していない.. 3)接着分子 ICAM-lは E AE感作 21日目において，血清中 s sP-s el ect i nは EAE感作 14日目において ci lost azol 群で有意に低下していた(図. 4 ) . 脳，脊髄の接着分. 子発現は免疫染色において両群聞に差は認められなかった .. 考. 提呈 3ヲミ. 本研究において ci l ostazolによる EAE抑制効果が明らかになった . MOG35-55 での再刺激においては抗原特異的リンパ節細胞増殖とそれに伴う IFN-. γ産生が c il os t a z o lにより抑制された . これまでに W 型の PDE阻害薬である mesopramや r o l i o n s e l e c t iveの i b u d i l a s tなどによる EAE pram， n 抑制効果は報告されており 913，免疫システムにお.

(5) EAEに対する. c i l o s t a z o lの治療効果. 3 0 1. いて cAMPを上昇させる薬剤が IFN-yや TNF-. であり，また抗原特異的 T細胞増殖においても重要. a，I L 2などの Th1サイトカイン産生の抑制することは明らかとなっている 15-19 I I I型と I V型の PDE. であるとしている 21 さらに， MS患者では内皮細胞. の違いはそのドメインに基づく.また，それぞれ主な組織発現部位が違い，個々の組織において作用が. I I I型 PDEは主に心臓，平滑筋，脂肪変わってくる . 細胞，血小板，免疫細胞に存在し， I V 型は主に脳，免疫細胞などに存在する.このように免疫細胞には. I IとI Vが存在する 20. B i b i a n aらは， c i l o s t 主に PDEI a z o lと同じ凹型 PDE阻害薬である c i l o s t a m i d eと I V型の r o l o p r a mはヒト末梢リンパ球の抗原特異的 F N γ 産生を抑えると報告しており，そこ増殖と， I ではこれらの抑制効果は r o l i p r a mのほうが強かったとしている.その理由のーっとして， cAMPの分. での ICAM-1や VCAM-1発現の増強 22 血清中. sICAM-1，sVCAM-1の増加が認められている 23ペ c i l o s t a z o lによる接着分子への影響は今までに多く報告されている. NIDDM患者においては c i l o s t a z o lの経口投与により血清中 sICAM-1と sVCAM 1 ，s P s e l e c t i nが低下する 25 又 c i l o s t a z o lによる高血糖下の患者における NO産生促進を介した ICAM1，P s e l e c t i n発現抑制作用 26 TNF一α産生抑制による NF-xBの活性化阻害を介した血管内皮上の VCAM-1の発現抑制作用 6 も報告されてい. 1，s P s e l e c t i n る.本研究においても血清中 sICAMはc i l o s t a z o l投与群において低下しており上記報告. 解経路が違うことを挙げている.. と矛盾ない.接着分子は血管内皮細胞や，免疫細胞. I I I型 PDE阻害薬による EAE抑制効果の報告は i l o s t a z o lがはじめてであり，その理由のひ今回の c とつとして他の PDE阻害薬と同様に T h1サイトカ F N γ 産生が抑制され， Th2への偏侍インである I がおこったためと考えている.従来， EAEでは Th1jTh2バランスが Th1にシフトすることが発症に関わっていると考えられてきた.しかし最近， I L 1 7を産生する Th17細胞が最も重要な自己免疫細胞であると言われている.本研究においても I L 1 7 産生について検討したが， c i l o s t a z o l経口投与によりI L 1 7の低下は明らかでなかった. 選択的 COX-2阻害剤である c e l e c o x i bは炎症性細胞が中枢神経へ侵入するのを防ぎ，さらに ICAM 1と P s e l e c t i nの発現を抑えることが報告されて. など様々な細胞上に発現する.以前， COX-2阻害剤. e l e c o x i bが BBBでの接着分子発現をおさである c えることにより中枢神経への炎症細胞の侵入を防いだと報告した 14 今回， EAEの重症度で統計学的に. 5日目， 1 6日有意差が認められたのは， EAE誘導後 1 目，および1 7日目であった . 1 5日目はおおよそ， EAE 症状の出はじめの時期(表1)と考えられる.つまり MOG特異的 T細胞が BBBを通過しミエリンを攻撃する時期であり， c i l o s t a z o lによりここが抑制されると考えれば，今回の結果のようにこの時期に最も差が出やすいと思われる.以上より，今回も同様の機序を考えているが，接着分子の局在など詳細な検討は行なえていない.前報告のように BBBでの発現抑制の他に，抗原提示細胞上の接着分子発現. いる.その機序として接着分子発現を抑えることに. をおさえシグナル伝達を抑えた可能性なども残さ. より細胞浸潤が抑制されると考察されている 14. れ，今後のさらなる検討が必要と考えている.. EAE発症においてはまず血液脳関門 ( b l o o db r a i n b a r r i e r:BBB)の破綻が重要な初期のステップであり，炎症性細胞が BBBを通過し中枢神経へ浸潤する過程において，炎症性細胞はまず BBBを構成す r o l l i n g ) し，次に強る内皮細胞上に緩やかに接着 ( 固な接着 ( a t t a c h m e n t )がおこり，最後に内皮下へ遊走 ( m i g r a t i o n )する.これらの過程で重要となるのが P s e l e c t i nのようなセレクチン族や ICAM-1. 以上より， c i l o s t a z o lは Th1jTh2バランスを Th2に偏侍させるだけでなく，接着分子発現抑制を. EAEの抑制効果を認めたことより今後， MSの再発. などの接着分子と炎症性サイトカインである.接着. 予防に有効な治療薬となる可能性がある.ヒトに対. 分子発現は炎症性サイトカインによりさらに増強さ. する用量的な認容性の問題や，他薬物との併用につ. れ，炎症性細胞の流入は促進され，侵入した炎症性. いてなどのさらなる検討が必要と思われる.. 細胞は再び局所で炎症性サイトカインを p a r a c r i n e に放出する. B u l l a r dらは ICAM-1のいずれのアイソフォームも発現しない ICAM1n u l lmutantマウスでは中枢神経への T細胞浸潤と I F N γ 産生が抑制されることにより EAEが抑えられると報告し，. ICAM-1はT細胞が中枢神経に浸潤するのに必要. 介して中枢神経へ炎症細胞が侵入するのを防ぐことで EAEを抑制している可能性があると考えられる.. c i l o s t a z o lは経口可能な薬剤であり，すでに虚血性疾患の治療に広く使われている.今回の研究で. 謝. 辞. 稿を終えるに当たり，ご指導ならびに御稿閲いただいた近畿大学医学部神経内科学教室宮本勝一講師，楠進教授に深謝申し上げます.また，終始ご協力いただきました神経内科学教室員各位に感謝申し上げます..

(6) 3 0 2. 呉城珠里. 文献. 1 .L u g n i e rR ( 2 0 0 6 )C y c l i cn u c l e o t i d ep h o s p h o d i e s t e r a s e s u p e r f a m i l y :anewt a r g e tf o rt h edevelopmento fs p e c i f i ct h e r a p e u t i ca g e n t s . PharmacolTher1 0 9 :3 6 6 3 9 8 2 . Kimura Y，TaniT，KanbeT，WatanabeK ( 19 8 5 ) 巴g a t i o nande x p e r i . E f f e c to fc i l o s t a z o lonp l a t e l e ta g g r o r s c h . / D r u gR e s3 5 : mental t h r o m b o s i s . Arzneim・F 1 1 4 4 1 1 4 9 19 8 5 )E f f e c t 3 . KawamuraK，WatanabeK，KimuraY ( n t i t h r o m b o t i cdrug，onc e r e b r a l o fc i l o s t a z o l，anewa c i r c u l a t i o n .A r z n e i m . . F o r s c h . / D r u gRes3 5 :1 1 4 9 1 1 5 4 4 .S h i n t a n iS， WatanabeK，kawamuraK，MoriT， Toba u j i t aS，AogiT， T，SasabeH，N a k a g i r iN，Hongoh0，F 19 8 5 ) KidoY，UmezatoM，I s h i k a w aM，HiyamaT ( G e n e r a r lp h a r m a c o l o g i c a lp r o p e r t i e so fc i l o s t a z o l，a newa n t i t h r o m b o t i cd r u g . A r z n e i m F o r s c h . / D r u gRes 3 5 :1 1 6 3 1 1 7 2 KF u j i w a r a， R MaedaH，Hayashi 5 . TakahashiS，Oida， 19 9 2 )E f f e c t S， TakaiH， TamaiT，NakaiT， MiyaboS( y c l i cAMPp h o s p h o d i e s t e r a s ei n h i b i t o r， o fc i l o s t a z o l，ac ont h ep r o l i f e r a t i o no fr a ta o r t i csmoothm u s c l ec e l l si n c u l t u r e . JC a r d i a v a s cPharmacol2 0 :9 0 0 9 0 6 6 . Ots u k iM，S a i t oH，XuX，S u m i t a n iS，KouharaH， 2 0 01 )C i l o s t a z o lr e p r e s . KurabayashiM，KasayamaS ( s e sv a s c u l a rc e l la d h e s i o nm o l e c u l e 1genet r a n s c r i p t i o n v i a i n h i b i t i n g NF-xB b i n d i n g t o i t s r e c o g n i t i o n s e q u e n c e .A t h e r o s c l e r o s i s1 5 8 :1 2 1 1 2 8 2 0 0 2 )I n h i b i . 7 . KimKY，S h i nHK，C h o iJM，HongK W( t i o no fl i p o p o l y s a c c h a r i d e . i n d u c e da p o p t o s i sbyc i l o s t . a z o li nhumanu m b i l i c a lv e i ne n d o t h e l i a lc e l l s . JP h a r macolExpTher3 0 0 :7 0 9 7 1 5 8 .N i s h i o Y，Kashiwagi N，Takahara N，Hidaka H， h o s p h o d i e s t e r KikkawaR ( 1 9 9 7 )C i l o s t a z o l，acAMPp t t e n u a t e st h ep r o d u c t i o no fmonocyte a s ei n h i b i t o r，a c h e m o a t t r a c t a n tp r o t e i n 1i nr e s p o n s et otumorn e c r o s i s f a c t o r 1i nv a s c u l a re n d o t h e l i a lc e l l s . HrmMetabRes 2 9 :4 9 1 4 9 5 TakayanagiT ( 19 9 8 )I n h i b i . 9 . TamaruT，SuzumuraA， t o r ye f f e c t so fp h o s p h o d i e s t e r a s ei n h i b i t o r sone x p e r i . mental autoimmune e n c e p h a l o m y e l i t i s . Neuroim munology6 :1 5 4 1 5 5 1 0 .F u j i m o t oT，SakodaS，F u j i m u r a H，YanagiharaT ( 19 9 9 )I b u d i l a s t，ap h o s p h o d i e s t e r a s ei n h i b i t o r，a m e l i o 巴n t a l autoimmune e n c e p h a l o m y e l i t i si n r a t e s experim DarkAugustr a t s . JNeuroimmunol9 5 :3 5 4 2 1 1 .D i n t e rH，TseJenny，H a l k s . M i l l e r M，Asarnow D， O n u f f e rJ ，F a u l d sD，M i t r o v i cB，K i r s c hG，L a u r e n tH， E s p e r l i n gP， SidelmannD， OttowE， S c h n e i d e rH， Tuohy VK ， WachtelH，P e r e zHD ( 2 0 0 0 ) Thet y p eIVphos p h o d i e s t e r a s e s p e c i f i c i n h i b i t o r mesopram i n h i b i t s e x p e r i m e n t a lautoimmunee n c e p h a l o m y e l i t i si nr o d e n t s . JNeuroimmunol1 0 8 :1 3 6 1 4 6 1 2 .M a r t i n e z1 ，P u e r t aC，RedondoC，G a r c i a . M e r i n oA ( 1 9 9 9 ) TypeI Vp h o s p h o d i e s t e r a s ei n h i b i t i o ni ne x p e r i mental a l l e r g i c e n c e p h a l o m y e l i t i s o f Lewis r a t s : 目. d h e S e q u e n t i a lgenee x p r e s s i o na n a l y s i so fc y t o k i n e s，a s i o nm o l e c u l e sandt h ei n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e .J N e u r o lS c i1 6 4 :1 3 2 3 1 3 . MooreCS， E a r lN， F r e n e t t eR， S t y h l e rA， ManciniJA， o b e r t s o n GS N i c h o l s o n D W，Hebb ALO，Owen T，R ( 2 0 0 6 ) P e r i p h e r a l p h o s p h o d i e s t e r a s e 4 i n h i b i t i o n 4B i s d i f luoromethoxypheny1 )-2 producedby4-[ 2 -( 3，ふ3， 3-h e x a f l u o r o-2-hydroxypropan-2-yl ) [ 4-( 1 ， 1 ，1 p h e n y l Je t h y l J3 m e t h y l p y r i d i n e 1 o x i d e( L 8 2 6，1 41 ) p r e v e n t se x p e r i m e n t a lautoimmunee n c e p h a l o m y e l i t i s . JPharmacolExpTher3 1 9 :6 3 7 2 1 4 . MiyamotoK，MiyakeS，MizunoM， OkaN， Kusunoki 2 0 0 6 ) S e l e c t i v e COX-2 i n h i b i t o r S，Yamamura T ( c e l e c o x i bp r e v e n t se x p e r i m e n t a l autoimmune e n c e p h a l o m y e l i t i st h r o u g h COX2 i n d e p e n d e n t pathway. B r a i n1 2 9 :1 9 8 4 1 9 9 2 1 5 . ClaveauD，ChenSL， O ' K e e f eS， Z a l l e rD M， S t y h l e rA， 2 0 0 4 ) L i u S，Huang Z，N i c h o l s o n D W，Mancini JA ( ，b u tn o tT h e l p e r2 ， P r e f e r e n t i a li n h i b i t i o no fT h e l p e r1 c y t o k i n e si nv i t r obyL 8 2 6，1 4 1[ 4 {2 -( 3， 4 -B i s d i f l u r )-2-{ 4-0， 1 ， 1 ， 3， 3， 3-h e x a f l u o r o-2omethoxyphenyl )p h e n y l }e t h y l }3 m e t h y l p y r i d i n e hydroxypropan-2-yl 1 o x i d e la p o t e n tands e l e c t i v ep h o s p h o d i e s t e r a s e4 i n h i b i t or . JPharmacolExpTher3 1 0・7 5 2 7 6 0 toA，YoshikawaM，SawadaM ( 19 9 9 ) 1 6 . SuzumuraA，I r o d u c t i o nbyG l i a sc e l l s I b u d i l a s ts u p p r e s s e sTNFa p f u n c t i o n i n g mainly a st y p eI I Ip h o s p h o d i e s t e r a s ei n h i b i t o ri nt h eCNS. B r a i nRes8 3 7 :2 0 3 2 1 2 toA，MizunoT ( 2 0 0 3 )P h o s p h o d i e s t e r 1 7 . SuzumuraA，I a s ei n h i b i t o r ss u p p r e s sI L 1 2p r o d u c t i o nw i t hM i c r o g l i a . MultS c l e r9 :5 7 4 5 7 8 andT h e l p e r1development 1 8 .B i e l e k o v a B，L i n c o l n A，Mcfarland H，Martin R ( 2 0 0 0 )T h e r a p e u t i cp o t e n t i a lo fp h o s p h o d i e s t e r a s e 4 and3i n h i b i t o r si nTh1-mediatedautoimmuned i s e a s e s . JImmunol1 6 4 :1 1 1 7 1 1 2 4 1 9 . YoshikawaM，SuzumuraA，Tamaru，TakayanagiT， 19 9 9 )E f f e c t so fp h o s p h o d i e s t e r a s ei n . Sawada M ( h i b i t o r so n c y t o k i n ep r o d u c t i o nbym i c r o g l i a . MulS c l e r 5 :1 2 6 1 3 3 2 0 . EkholmD，HemmerB，GaoG，V e r g e l l iM，MartinR ( 19 9 7 )D i f f e r e n t i a le x p r e s s i o no fc y c l i cn u c l e o t i d ep h o s . p h o d i e s t e r a s e3and4a c t i v i t i e si nhumanT c e l lc l o n e s s p e c i f i cf o rmyelinb a s i cp r o t e i n . JImmunol1 5 9 :1 5 2 0 1 5 2 9 2 1 .B u l l a r dDC，HuX，SchoebTR，C o l l i n sRG，B e a r d e t 2 0 07 )I n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e c u l e AL，BarnumSR( e x p r e s s i o ni s r e q u i r e donm u l t i p l ec e l lt y p ef o rt h e development o f experimental autoimmune e n c e . p h a l o m y e l i t i s . JImmunol1 7 8 :8 5 1 8 5 7 R Dragovic L ( 1 9 9 3 ) 2 2 .D o r e D u f f y P，Washington ， E x p r e s s i o no fe n d o t h e l i a lc e l la c t i v a t i o na n t i g e n si n m i c r o v e s s e l sfromp a t i e n t swithm u l t i p l es c l e r o s i s . Adv ExpMedB i o l3 3 1 :2 4 3 2 4 8 2 3 .S h a r i e fMK ， No o r iM A，C i a r d iM，C i r e l l iA，Thomp 吋 l e v e l so fc i r c u l a t i n gICAM1i n s o nEJ( 1 9 9 3 )I n c r e a s serumandc e r e b r o s p i n a lf 1u i do fp a t i e n t sw i t ha c t i v e.

(7) EAEに対する c i l o s t a z o lの治療効果 m u l t i p l es c l e r o s i s . C o r r e l a t i o nw i t h TNFa l p h a and 3 :1 5 b l o o d b r a i nb a r r i e rdamage. JNeuroimmunol4 2 1 u r c h h a r d tM，A l b r e c h tM， 2 4 . RieckmannP，NunkeK，B 明T i l t f a n gJ ，U lr i c h M，F e l g e n h a u e rK ( 19 9 3 )S o l u b l e i n t e r c e l l u l a ra d h e s i o nm o l e c u l e 1i nc e r e b r o s p i n a lf l u i d: a ni n d i c a t o rf o rt h ei n f l a m m a t o r yimpairmento ft h e 7: b l o o d c e r e b r o s p i n a lf l u i db a r r i e r . JNeuroimmunol4 1 3 3 1 4 0 2 5 . NomuraS，ShouzuA，OmotoS，HayakawaT，Kag-. 3 0 3. awaH，NishikawaM，I n a d aM，F u j i m u r aY，I k e d aY， FukuharaS( 19 9 8 )E f f e c to fc i l o s t a z o lons o l u b l ea d h e s i o nm o l e c u l e s and p l a t e l e t d e r i v e dm i c r o p a r t i c l e si n p a t i e n t sw i t hd i a b e t e s . ThrombHaemost8 0 :3 8 8 3 9 2 H OkayamaN，S h i m i z uM，FukutomiT，Na2 6 . Omi ， K OkouchiM，I t o hM ( 2 0 0 4 )C i l o s t kamuraA，Imaeda， a z o l i n h i b i t s h i g h g l u c o s e m e d i a t e d e n d o t h e l i a l n e u t r o p h i la d h e s i o n by d e c r e a s i n ga d h e s i o nm o l e c u l e e x p r e s s i o nv i aNOp r o d u c t i o n .M i c r o v a s cRes6 8 :1 1 9 1 2 5.

(8)