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(
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7
)
ミズ タニ リヨウ コ
氏名(生年月日〉
本 籍
学 位 の 種 類
学 位 授 与 の 番 号
学 位 授 与 の 日 付
学 位 授 与 の 要 件
学 位 論 文 題 目
論 文 審 査 委 員
水 谷
良 子 (
医学博士
乙第619 号
昭和58 年 7 月 8 日
学 位 規 則 第5条 第2項該当(博士の学位論文提出者〉
ト ロ ン ポ ポ エ チ ン の 巨 核 球 コ ロ ニ ー 形 成 に 与 え る 影 響 に つ い て
( 主 査 〉 教 授 滝 沢 敬 夫
( 副 査 〉 教 授 鎮 目 和 夫 ， 教 授 肥 田 野 信
論 文 内 要 の 要 旨
目的
トロンボポエチンは血小板産生を調節する液性因子
であるがその作用機序，産生部位など未だ明らかでな
い点が多い.本研究は巨核球コロニ一法を用いトロボ
ポエチンの作用機序を究明することを目的とした.
方法
トロンボポエチン活性の高いとされている血小板減
少 マ ウ ス 血 清teletalp( detleepd mouse serum ，
PDMS) を作製した.つまり抗マウス血小板ウサギ血
清teletalpitna( serum ， APS) を生理食塩水で01倍に
希釈し，その0.2ml をBALB/C マウスの腹腔内に注
射し， 21時間後に採血し，血清を分離して用いた.な
おAPS の 作 製 はC3H マ ウ ス の 血 液 を02倍 容 の
EDTA 溶液に入れ，二重遠心法にて血小板を採取し，
その 2X 019
個を週1回計5回ウサギに静注した.最後
の静注後1週目に全採血をし，血清を分離したものを
APS とした
巨 核 球 コ ロ ニ ー の 培 養 は 血 奨 凝 塊 法 を 用 い た .
BALB/C マウスより骨髄細胞を採取し ，10005 μlにな
るようにイーグル培養液で、調製した.この細胞浮遊液
O.lml にウシ胎児血清0.2ml ，NCTC109 培養液O.lml ，
アスパラギン溶液O.lml ，10% ウシ血清アルブミン1.0
ml ， ウ シ 胎 児 抽 出 物O.lml ，コロニー形成刺激因子
(
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-s
t
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l
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n
g rotcaf ， CSF) mlOl. ， PDMS 1.0
ml を加えて，最後にクエン酸ナトリウム加ウシ血奨
O
.
l
m
l を加えてすばやく混和後， 0.4ml をとりプラス
チック培養血の中央に凝固させた.その後血奨凝塊の
周囲に10% ウシ胎児血清を含むイーグル培養液を6.0
ml 入れ，3TC で5
% CO
2のもとで7 日間培養した.
なおCSF はC57 Blマウスの牌細胞を pokeweed o-tim
g
e
n と共に2日間培養した上清を用いた.対照として
PDMS のかわりに正常ウサギ血清を01倍希釈して注
射したBALB/C マ ウ ス の 血 清 を 添 加 し て 培 養 を 行
なった.
培養終了後，一部の培養血でアセチルコリンエステ
ラーゼ染色を行ない，同染色陽性の細胞を巨核球とし，
4 個以上の巨核球の集塊を巨核球コロニーとしてその
数を算定した.
残りの培養血にフオイルゲン染色を行ない，巨核球
コロニーを構成している細胞のDNA 量を顕微分光光
度計を用いて測定した.
結 果
巨核球コロニー数は，対照を100% とすると PDMS
を10% 添加した群で、は260% と増加していた.
巨核球コロニー構成細胞のDNA 量は対照群では4
N50% ， 8N34% ， 16N16% と4N にピークがあり，一方
PDMS 添 加 群 で は4N24% ，8N30% ， 16N32% ， 23
N12% ， 64N2% と16N にピークがあり，対照、ではみと
められなかった32N ，64N の細胞が認められるように
なった
考察
こ の よ う な 事 実 よ り PDMS 中 に 巨 核 球 のen
d
o
m
i
t
o
s
i
s を促す因子の存在が考えられ， このPDMS
作用は主にトロボポエチンによるものと考えられる.
一方，巨核球コロニー形成にはCSF の存在が必要で
ある_ CSF とトロンボポエチンは共に血小板産生調節
-753-1
1
6
因子と考えられるが，両者の主な働きは異なる可能性
がある.
CSF
はコロニー形成に不可欠で，単独でコロ
ニーを形成する.一方， トロンボポエチンのみでは十
分なコロニー形成はみず，
CSF
と共に加えてコロニー
の増加をみる.このことより，
CSF
は
2N
の細胞をその
まま分裂させるのが主な働きで， トロンボポエチンは
一番成熟した
2N
の細胞に働いて
s
i
s
o
t
i
m
-
o
d
n
e
や成熟
を促進するのが主な働きであると考えられた.今後，
両者の異同，作用機序などは，それぞれの純化によっ
て一層明らかにされていくであろう.
論 文 審 査 の 要 旨
本 論 文 は ト ロ ン ボ ポ エ チ ン の 巨 核 球 コ ロ ニ ー 形 成 に 与 え る 影 響 を み た も の で ， 生 体 内 で の 血 小 板 産
生 機 構 お よ び ト ロ ン ボ ポ エ チ ン の 生 理 学 的 働 き を 解 明 し て し 、 く 上 で ， 学 術 上 価 値 あ る 論 文 と 認 め る .
主論文公表誌
トロンボポエチンの巨核球コロニー形成に与える影
響について.
東 京 女 子 医 科 大 学 雑 誌 第
2
5
巻 第
4
号
7
2
5
-7
3
1
頁(昭和
7
5
年
4
月
5
2
日発行〉
副論文公表誌
1)血小板減少マウス血清の巨核球コロニーに及ぼ
す影響について.
医学のあゆみ
1
2
1
)
1
1
(
9
7
6
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-
6
9
昭(
)
7
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2
) トロンボポエチンの巨核球コロニー形成に与え
る影響について
血 液 幹 細 胞 そ の 動 態 と 分 化 一 一
3
0
7
-3
1
7
昭(
)
7
5
3
) 急性前骨髄球性白血病に関する研究
t 1(
5
・
1
7)例の頻度および病像について
臨床血液
3
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(9)
7
7
3
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1
3
-
昭(
5
)7
-754
ー
4
) 急性白血病の寛解率および生存期間に影響する
諸因子について.
臨床血液
1
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(2)
0
1
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4
-
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昭(
)
5
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5
) 思春期貧血.
産婦人科の実際
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2
(3)
5
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1
-180
昭(
)
5
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6
) 急性骨髄性白血病患者の白血病性コロニー形成
細胞に関する研究.
医学のあゆみ
8
1
1
)
1
1
(
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3
1
1
-
1
8
昭(
)
6
5
7)皮膚光線過敏症と赤血球プロトポルフィンの増
加を認めた鉄芽球性貧血の 1 例.
臨床血液
2
2
1(
)
2
6
7
9
1
1
-
7
9
1
昭(
)
6
5
8
) 経過中に脳内腫療を認め，治療により完全寛解
した急性骨髄性白血病の 1 例.
臨床血液
4
2
(2)
7
1
4
2
-
1
4
昭(
)
8
5
