g131e.XDW

(1)

研

東京都立衛生研究所

_{q b}

~

年

ISSN

0082

-

4771

CODEN

TRENAF

報

g1 31

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TORY OF PUBLIC HEALT

H

4

1

9

3

東京術研年報 Ann. Rep.Tokyo Metr.

(2)

序

われわれの住む社会から病気が減っていることは，今では誰しらぬ者のない事実です.まわりくどい説明を省いてしまえば，日本が世界屈指の長寿国になったことが，その端的な証明です.高齢者が増えた分だけ病気も増えているはずだという反論には，病気が減ったから長生きが可能になったのだという答えで充分でしょう. その理由は，これまた詳しい説明を省略すれば，日本の社会が豊かで，安全で、，清潔で、，そのうえ便利になったからです.病気の原因と接触する危険が滅り，日常生活での肉体的負担が軽くなり，飢えの恐怖に曝されることがなくなれば，それらに基づく病気が減るのは理の当然であります.疾病対策の神髄は，医学的な対策の推進と併せて，そうした構造と機能を備えた厚みのある社会を作り上げるところにあります.このような社会の実現が，成員ひとりひとりの，そしてまた地域における行政の，さりげない日常の営みを通して可能になって行くものであることは，いまさら申すまでもありません.この傾向が東京都でとりわけ顕著に現われていることは，もっ!とはっきりと認識されてよいように思います. 衛生研究所は，ひとくちでいえば生活環境の安全性を観測し研究するのが仕事です.既に

4

0

冊を越えたこの年報は，ですから東京都という地域社会の成熟の過程を映す鏡の役割を期せずして果たしてきたと申せます.その主題が地域における危険から安全へと，徐々に重心を移していることに，あるいは気付いていただけたでしょうか.とはいえ，個別にみれば，解決を迫られている問題はまだ決して少なくありません.今までに築かれてきた社会基盤の高い水準を維持しつつ，それらの問題に着実に対処して行くのが，これからの都市行政の努めであり，学術の側面からそれを支える衛生研究所の努めでもありましょう. 年報編集に携わられたみなさんに感謝すると共に，関係各方面の泳らぬご理解とご支援をお願い申し上げる次第です. 平成5年11月東京都立衛生研究所長

倉

手

ヰ

周介

(3)

日

次

報文I 感染症等に関する調査研究リジン脱炭酸反応陰性サルモネラ血清型ParatyphiBによる大規模な食中毒事例・……・・楠淳，甲斐明美，柳川義勢，高橋正樹，新垣正夫斉藤香彦，太田建爾，伊藤武，工藤泰雄，中村明子堀内三吉...・H・..………...・H・...・H・...・H ・...・H ・..……...・H ・...・H ・.. 3 Cam見ylobacter属およびHelicobaoter属によるLーアスパラギン酸の分解性と生成物質の検討 … 新垣正夫，高橋正樹，斉藤香彦，柳川義勢，甲斐明美「太田建筒，寺山武....・H ・...・H ・...・H ・....・…・・……...・H・..…… 13 東京都におけるエコーウイルス30型による無菌性髄膜炎の流行・ …・林宏、直，関根整j台，関根大正，太田建爾 … … 19 東京都内のインフルエンザ検索成績 (1992年11月-1993年 1月) -…-山崎清，伊藤忠彦，関根大正…・・ 25 都内で検挙された売春容疑者における梅毒血清反応検査成績 1981年一 1992年 An間的I型幼虫実験感染群および本虫由来粗抗原経口投与群における Hartley系モルモットの皮内反応特にArthus型アレルギー反応の発現離乳期小児における尿中のパニリルマンデル酸，ホモパニリン酸およびホモゲンチジン酸のクレアチニン補正に関する検討離乳期小児における尿中のパニリルマンデル酸およびホモパニリン酸の排出水準 …・・…石上武，堀幹郎…… 29 …村田以和夫…… 33 …・武士俣邦雄…・・・ 43 …武士

f

呉邦雄…・・・ 50 東京都衛生検査所精度管理調査11年間(1982-1992年)における生化学的検査結果について(第 1報) …...・H ・..…...・H ・...…小林千種，蓑輪佳子，大石向江，皆川彰，亀井幸子，河野均也 … … 56 東京都衛生検査所精度管理調査で用いた血算用試料の分注誤差及び保存状態が施設問変動に与える影響 … 蓑輪佳子，大石向江，小林千種，五十嵐英夫，五味邦英渡辺清明，河野均也…...・H ・...…・……・・・H ・H・....・H ・...………・・… 62 報文E 医薬等に関する調査研究高速液体クロマトグラフィーによるニューキノロン剤の分析 ...長嶋真知子，重岡捨身，宮武ノリヱ，渡辺四男也…… 71 固相抽出を用いる生薬中アラントインの高速液体クロマトグラフィーによる定量 … 萩原輝彦，上原真一，渡辺四男也 … … 76 漢方製剤+全大補湯エキス頼粒剤の安定性 ……高橋奈穂子，安田一郎，瀬戸隆子，浜野朋子，高野伊知郎渡辺四男也，秋山和幸・…… -…...・H・..…・・……...・H ・-…. 80

(4)

2 高速液体クロマトグラフィーによる化粧品中のエデト酸の定量 …....・H・..…・・鈴木助治，岸本清子，雨宮敬，伊藤弘一，中村弘…… 85 キャピラリーガスクロマトグラフィー及び化学イオン化質量分析による化粧品中のグリコール類の分析 … 鈴木助治，池田一夫，雨宮敬，伊藤弘一，中村弘…… 89 化粧品中のアラントインのアルカリによる分解について ……H ・H ・-…・雨宮敬，伊藤弘一，鈴木助治，中村弘…… 94 報文E 食品等に関する調査研究食肉からのサルモネラの検出と分離菌株の血清型別 (1989-1992年の4年間の成績) ・・・……石崎直人，金子誠二，伊藤武，神保勝彦，片岡潤，小久保粥太郎…… 101 シュレッドタイプのナチュラルチーズ及びチーズ加工施設環境のListeriamonoり初'genes汚染実態調査 ……仲真晶子，梅木富士郎，飯田孝，伊藤武，吉成進柳川浩志，白鳥憲行，近藤純子…………-・・…・...・H ・...・...… 105 非加熱食肉製品保存時におけるListeria隅onoりtogenesの挙動 ...・H・..楠くみ子，神真知子，池島伸至，新井輝義，入倉善久鈴木敬子，平田一郎，小久保粥太郎，丸山務…...・H ・...・H ・...111 東京湾産スズキの

PCB

含有量の推移・・植田忠彦，佐藤憲一，中村弘…… 115 ハ W u

-子広光志弘貴明政仁行安部川村守井冠小田司尚隆男一郎賢康和一太沼村木田島藤上勝安二子子江子華さ寛照洋由てふい川田団地合つ石塩嶋菊川ル夫紀美子子チ光麻真美敬ブ久ジ里林田沢野酸中小飯中只レタ夫慶子洋文フ和敏節保博の中藤山端村山カ斉永田嶋牛オ・ウ ⋮ び⋮ 及 ⋮ E h E ・、不ア⋮ 、ンォ ⋮ チ⋮ イノ H J 汁・ ' レチ⋮ J A r -の ⋮ 中⋮ ンイ・ワグレープフルーツから検出されたクマロンーインデン樹脂について・・・H・H・..藤沼賢司，斉藤和夫，中里光男，石川ふさ子，守安貴子上村恵彫，依田修，二島太一郎，田村行弘…...・H ・..………… 128 食品中の銅クロロフイリンナトリウム分析法 ……...・H ・....天川映子，荻原勉，竹内正博，大西和夫，加納いつ … … 131 生鮮野菜等に使用されるリン酸の分析

i

去についてーモリブデンブルー法における定量法の改良 …・・中里光男，斉藤和夫，石川ふさ子，藤沼賢司，守安貴子二島太一郎，田村行弘……...・...………....…・・...・H・・・H・H ・-・・…・ 138 食品中の甘味料の使用実態調査・ … … 藤沼賢司，斉藤和夫，中里光男，石川ふさ子，守安貴子二島太一郎，田村行弘...・H ・H ・H ・...・H ・...………・H・H ・-… 143 野菜・果実類中の残留農薬実態調査一平成4年度一 …...…・・塩田寛子，永山敏!資，小林麻紀，二島太一郎，田村行弘...150

(5)

輸入農産物中の残留農薬実態調査一平成4年度一 3 ………...・H ・小林麻紀，永山敏蹟，塩田寛子，二島太一郎，田村行弘 … … 155 化学物質及び自然毒による食中毒等事件例(第10報) 一平成4年度一輸入食品中の放射能濃度(第4報) 一平成4年度一調理器具からのアルミニウムの溶出 …・・真木俊夫，観公子，橋本秀樹，二島太一郎，田村行弘 … … 162 …ー観公子，真木俊夫，橋本秀樹，二島太一郎，田村行弘・…・・ 166 … 渡辺悠二，金子令子，松井敬子，風間成孔 … … 175 日常食からの

HCH

，

DDT

およびデイルドリン一日摂取量の追跡調査 (1980年から1992年まで) ・・・牛尾房雄，坂牧成恵，高橋巌，横山知子，友松俊夫船山恵、市，高橋邦子，鈴木正幸…...・H・...・H ・-…...・H ・...・H ・...180 バイオジャガイモの栄養成分 ...・H・..坂牧成恵，牛尾房雄，高橋巌，横山知子，友松俊夫船山恵市，田崎透明，小山利夫…...・H ・...・H・...・H ・...・H ・..183 東京都小金井地区の35-70歳女性の骨塩含量と食習慣，生活習慣，血清中25-hydroxyvitamin

D

3

濃度について … 早藤知恵子，友松俊夫，小宮三紀子，宮崎元春，和田ユキ金丸正雄，巌美，小泉修，窪山泉，山崎百合子中里千春，半場武・H ・H ・H・H ・....・H・-……...・H ・....……...・H ・-…・・ 186 報文

ν

生活環境に関する調査研究個人頭髪中の元素含有量(亜鉛，マグネシウムについて) …江波戸製秀，中村弘…… 195 東京湾の環境汚染モニタリング(第11報) 平成3年度スズキ及びウミネコの調査結果について・・…・一大久保智子，瀬戸博…… 199 ディーゼル粒子中のピレンによるマウスIgE抗体産生の充進 . ..・H ・....・H ・...・H ・ - … 鈴木孝人，上林真子，池田真悟，大津誠喜，加納嘉子 … … 202 ディーゼルエンジン排気ガスに新生仔期より暴露されたラットの中枢神経系の病理学的変化・・H ・H ・....・H ・....・H ・-渡辺伸校，林豊…...211 長期型PTIO法 (NO，N02同時測定)のブランク値の扱いについて … 小野塚春吉，福田雅夫，牧野国義，加納嘉子 … … 225 都内幹線道路周辺の大気浮遊粉塵の変異原性 … 斎藤育江，狩野文雄，多田宇宏 … … 231 呼吸器疾患患者発生数への気象、大気汚染の影響 … 牧野田義 … … 237 給湯器の水質に関する調査 … 細川奈津子，中川順一，高橋保雄，土屋悦輝 … … 243

(6)

4 ヮ， d A τ つ ω 雄 + 失野笹輝悦屋土問問山岡一十五寛本間 ) 雄 n M M n H H リ中事ず同凶ハ A a τ 第法橋 ( 方大究析研分査、の調ドるシすキ関ホ申﹂、レ性ス全ル安チのメ質ジ物の学中レ U 川時，る誤け境⋮ お環⋮ 境環皇居外苑濠の植物プランクトン(第5報) 一冬期水の華状態となった藍藻Anabaenatenericaulisの消長一 … … … 渡辺真利代，土屋悦輝 … … 253 報文V 毒性に関する研究マウスの肝と腎に及ぼすべリルアルデヒドの作用 … 中川好男，田山邦昭，宮川弘之，市川久次 … … 261 漢方方剤十全大補湯の雄性マウスの行動に及ぼす影響・…・・田中豊人，市川久次…… 265 マウスを用いた十全大補湯エキスの催若手形性試験・・小!際昭夫，久保喜一，安藤弘，安田一郎，佐々木美枝子 … … 268 六味丸および構成生薬水抽出のお1m仰ellaり仲間unumに対する変異原性について ……藤田博，佐々木美枝子…… 274

Sal刑問ellαか'phi隅unu叩 TA97，TA102を用いた食品添加物の変異原性試験(第8報)

・・…藤田￨専，佐々木美枝子…… 278 クロルプロファムのラットとマウスにおける経口急性毒性・・・・樺島順一郎，市川久次…… 288 d-α トコフェリルアセテート(ビタミンE)のラットによる 13週間経口投与試験(第 2報) … - 坂本義光，安藤弘，池田虎雄，小l嶋昭夫，神谷信行久保喜一，小嶋昭江，高橋博，多田幸恵，田山邦昭長

i

畢明道，林田志信，福森信隆，藤田博，三栗谷久敏矢野範男，湯

i

畢勝広，吉田誠二，藤井孝，市川久次佐々木美枝子・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・ 295 チアベンダゾール

(

T

B

Z

)

の成熱マウスの腎臓に及ぼす影響 … 多国幸恵，藤谷知子，米山允子，佐々木美枝子 … … 307 ラット気管における石綿繊維の動態 … 福森信隆，佐々木美枝子 … … 319 著書及び他誌発表・… …・・H ・H ・...・H・H ・H・-…H・H・...・H ・-…・・ ... ・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・….327 学会発表…・・・-…....・H ・...……'"・H ・-…....・H ・...・H ・...・H ・・・H ・H ・-…-…・…....・H ・..…...・H ・'"… 337

(7)

…

13 An Epidemic of Asepric Meningitis Associated with Echo Virus Type 30 lnfection in Tokyo

…

Y. Hayashi， S. Sekine， H Sekine and K. Ohta

…

19 Prevalence of lnfluenza Occurred in Tokyo (Nov. 1992-Jan. 1993) . . . . ・H・..K. Yamazaki， T. lto， Y. Hayashi， and H， Sekine ... 25 Results of Serological Test for Syphilis in Prostitutes in Tokyo 1981-1992 . . T. lshikami and M. Hori

…

29 Allergic Reaction of Arthus Type on lntradermal Test with Hartley Guinea pig between

Experimentary lnfectious Groups with Live Anisakis simtlex Larvae and Oral Administration Groups with Several Kind of Homogenates from Live or Dead Larvae

Studies on the Creatinine Correction for Urinary Vanillylmandelic acid， Homovanillic acid and Homo-gentisic acid in Weanligs l . Murata.

・

…

33 K. Bushimata

…

43 Studies on the Urinary Excretion Levels of Vanillylmandelic Acid and Homovanillic Acid in Weanlings A Report of External Quality Assessment for Clinical Chemistry by Tokyo Metropolitan Government 1982-1992 (1) • K. Bushimata

…

・

50

... C. Kobayashi， K. Minowa， H. Oishi， A. Minagawa， S. Kamei and K. Kawano

…

56 Effects of Preparation and Preservation in Specimens on lntralaboratory Discrepancy of the External

Quality Assessment for Complete Blood Count at the Registered Clinical Laboratories in Tokyo

. K. Minowa， H. Oishi， C. Kobayashi， H. 19arashi， K. Gomi， K. Watanabe and K. Kawano

…

62 REPORTS Il PAPERS CONCERNING ON PHARMACEUTICAL HYGIENE

High Performance Liquid Chromatographic Determination of New Quinolones .

.

M. Nagashima， S. Shigeoka， N. Miyatake and Y. Watanabe

.

…

・

71 High Performance Liquid Chromatographic Determination of Allantoin in

Crude Drug using Solid Phase Extraction

.

.. T. Hagiwara， S. Uehara

…

76

(8)

6

Stability of Granulated Kampo Extract MedicineてJuzen-taiho-to" .

.

N. Takahashi， .1Yasuda， T. Seto， T. Hamano， 1.Takano， Y.Watanabe and K.Akiyama…・ 80 Determination of Edetic Acid in Cosmetics by High Performance Liquid Chromatography

... S. Suzuki， K.Kishimoto， T. Amemiya， K.Itoh and H. Nakamura

…

85 Analysis of Glycols in Cosmetics by Capillary Gas Chromatography and Chemical Ionization Mass Spectrometry

.

.. S. Suzuki， K. Ikeda， T. Amemiya， K.Itoh and H. Nakamura

…

89 Decomposition of Allantoin with Alkalis in Cosmetics

. .

T. Amemiya， K. Itoh， S. Suzuki and H. Nakamura

.

…

94 REPORTS III PAPERS CONCERNING ON FOOD HYGIENE

The Detection and Serotyping ofSalmonellafrom Commercial Meat from 1989 to 1992 in Tokyo

N. Ishizaki， S. Kaneko， T. Itoh， K. Jinbo， J. Kataoka and Y. Kokubo

…

101 Detection ofListe円日隅anocytogenesin Shred Type Cheese Processed in Tokyo

A. Nakama， F. Umeki， T. Iida， T.Itoh， S. Yosinari， H. Yanagawa， N. Siratori and J. Kondoh ...…・9・・…...".….... ・…... 105

Behavior ofListeria manocytog側，esduring the Storage of Experimentally Contaminated Raw Meat Products K. Kusunoki， M. Jin， N. Ikejima， T目Arai，Y. Irikura， K.Suzuki， 1

.Hirata， Y. Kokubo and T. Maruyama ...…・・…ーー-…... 111 Annual Transition of PCB Cont巴ntsin Seabass from Tokyo Bay

. T. U巴ta，K. Sato， and H. Nakamura ... 115 Determination of Methyl Isothiocyanate in Wine and Dibutyl Phthalate in Vodka

. .

K. Saito， M. Nakazato， F. Ishikawa， K. Fujinuma， T. Moriyasu， T. Nagayama， M. Kobayashi， H. Shioda， H. Kamimura， A. Ibe， S. Tabata， M. Iida， T. Shimada， Y. Katsuki， M. Kanmuri，'Y. Shimamura， K.Nakazawa， Y. Kikuchi， K.Yasuda， H. Ogawa， H. Ushiyama， K. Tadano， Y. Kawai， T. Nishima and Y. Tamura ...… ..•. …n・・・ ...・ …... 119

Coumarone-indene Resin Detected in Imported Grapefruits

K.Fujinuma， K. Saito， M. Nakazato， F. Ishikawa， T. Moriyasu， S. Kamimura， O. Yoda， T. Nishima and Y. Tamura ...…."...…."...……....……...・M・... 128

Determination of Sodium Copper Chlorophyllin in Foods

... E. Amakawa， T. Ogiwara， M. Takeuchi， K. Ohnishi and 1 Kano

…

131 Analytical Method of Phosphate Used for Vegetables

一ーImprovementAssay of Phosphate on Molybdenum Blue Method

-"..…. M. Nakazato， K.Saito， F. Ishikawa， K. Fujinuma， T. Moriyasu

T. Nishima and Y. Tamura…"…....・H・…“H・H・...・a・...・M・-…ー…・… 138

Survey of Sweetening Agents in Processed F、口odstuffs

• K.Fujinuma， K.Saito， M. Nakazato， F. Ishikawa， T. Moriyasu， T. Nishima and Y. Tamura ...………… 143 Survey of Pesticide Residues in Vegetables and Fruits -Apr. 1992. - Mar. 1993ー

. .

(9)

Survey of Pesticide Residues in Imported Crops -Apr. 1992. - Mar. 1993一

. .

M. Kobayashi， T. Nagayama， H. Shioda， T. Nishima and Y. Tamura ... 155 Olltbreaks of Food Poisoning of Chemical and Natllrally Occurring Toxicants in Tokyo( X)ー1992一

T. Maki， K. Kan， H. Hashimoto， T. Nishida and Y. Tamura

…

162 Radioactiv巴Contaminationin Imported Foods (N) -Apr. 1992 - Mar. 1993一

• K.Kan. T. Maki. H. Hashimoto. T. Nishima and Y. Tamllra

…

166 Dissolution of Aluminium from Alllminillm Cooking Utensils

Y. Watanabe， R.. Kaneko， K.Matslli and M. Kazama

…

175 Surveys of Levels of Daily HCH DDT and Diedrin Intake throllgh Food from 1980 to 1992

. F. Ushio， N. Sakamaki， Takahashi.1 ， T. Yokoyama， T. Tomomatsll，

K.Funayama， K. Takahashi， M. Suzllki ...・・ e・"....・H・."...・H・... 180

Nutritional Components in Potatoes developed by Biotechnology

N. Sakamaki， F. Ushio， Takahashi.1 ， T. Yokoyama， T. Tomomatsll，

K.Funayama， T. Tazaki and T. Koyama ...・・e ・・・ ... 183

Studies of Bone Mineral Contents， Dietary Habits， Life Styles and Serum Levels of 25-hydroxyvitamin D3 of 35-70-year.old Women in Koganei Distr¥ct Tokyo

C.Hayafuji， T. Tomomatsu， M. Komiya， M. Miyazaki， Y. Wada， M. Kanemaru， H. Iwao， O. Koizumi， 1. Kuboyama， Y. Yamazaki， C. Nakasato， and T. Hanba ...・... 186 REPORTS IV PAPERS CONCERNING O N ENVIRONMENTAL HYGIENE

Elements Content in Private Human Hair (Zinc， Magnesium)

K. Ebato and H. Nakamura ... 195 Survey of Chemical Pollutants in Biota from Tokyo Bay (XI)

Residue Levels in Japanese Sea Bass and Gull in 1991

T. Ohkubo and H. Seto

.

…

199 Enhancement of IgE Antibody Production in Mice by Pyrene in Diesel-Exhaust Particles

. .

T. Suzuki， M. Kanbayashi， S. Ikeda， M. Ohsawa and T. Kanoh

…

202 Pathological Studies on Central Nervous System in Newborn Rats Exposed to Diesel Engine Exhaust

・…… N.Watanabe， Y. Hayashi ... 211 Investigation of Blank Value on the Simultaneous Determination of NO and N02 by PTIO

Method for Long-Term Measurement

H. Onozuka， M. Fukuda， K. Makino and T. Kanoh ...." 225 Mutagenicity of Airborne Particules Matter Coll巴ctednear Main Road in Tokyo

. .

1. Saito， F. Kanoh and T. Tada…… 231 Effects of Weather and Air Pollution on Incident N umber for Respiratory Diseases

K. Makino …・・ 237 Survey on Water Qualities of Hotheating Waters

N. Hosokawa， J.Nakagawa， Y. Takahashi and Y. Tsuchiya ... 243 7

(10)

8

Studies on Environmental Safety of Chemicals(N) Determination of Dimethyl Sulfoxide Environmental Specimens ... N. Ohashi.y.Okamoto. T. Igarashi. Y. Tsuchiya and H. Sasano

…

247 Phytoplankton in Outer Moats around the Imperial Palace V

Anabaena tenericaulisforming water bloom during winter

season-. M. Watanade and Y. Tsuchiya

…

253 REPORTS

V

P APERS CONCERNING ON TOXICOLOGY

Effects of Perillaldehyde on Liv巴rand Kidney of Mice

... Y. Nakagawa. K. Tayama. H. Miyakawa. and H. Ichikawa

.

…

.

261 Effects of Kampo Extract Medicine“Juzen-taiho-to" on Male Mice Behaviour

T. Tanaka and H. Ichikawa ..… 265 Teratological Tests of Juzen-taiho-to Extract in ICR Mice

A.Ogata. Y. Kubo. H. Ando. 1.Yasuda and M. Sasaki ..… 268 Mutagenicity of Wat巴rExtracts of Rokumigan and Component Crude Drugs withSat隅onellatYPhimu門um

ー .H. Fujita and M. Sasaki… 274 Mutagenicity Test of Food Additives withSalmonella tYPhimu門umTA97 and TAI02 (VIIl)

. H. Fujita and M. Sasaki

…

278 Acute Oral Toxicities of Chlorpropham in Rats and Mice

Th加lirt匂:ee印n . . J. Kabashima and H. Ichikawa

…

288 . .

Y. Sakamot凶o.H. Ando仏.T. Ikeda. A. Oga抗ta.N. Kamiya. Y. Kubo.

A. Kojima. H. Takahashi. Y. Tada.K.Tayama. A. Nagasawa. S. Hayashida. N. Fukumori. H. Fujita. H. Mikuriya. N. Yano.

K. Yuzawa. S. Yoshida. T. Fujii. H. Ichikawa and M. Sasaki …… ……・・ 295 Effects of Thiabendazole(TBZ) on the Kidneys of ICR Adult Mice

Y. Tada. T. Fujitani. M. Y oneyama and M. Sasaki ..… 307 Behavior of Asbestos Fibers aft巴rIntratracheal Instillation in Rats

. .

N. Fukumori and M. Sasaki

…

319 PAPERS IN OTHER PUBLICATIONS …...…....…...…....…...…...…....………… 327 THEMES PRESENTED AT CONFERENCES AND SOCIETY MEETINGS ...一...…...337

(11)

報文

I

感染症等に関する調査研究

REPORTS

1

(12)

I

感染症等に関する調査研究

感染症等に関する調査研究として11編の論文が掲載されているが，このうち 6編が細菌，ウィルス，寄生虫及ぴ梅毒スピロヘーターによる感染症に関する論文，他の

5

編はヒトの尿あるいは血中における生化学的成分などに関する論文である.また，これらのうち7編は疫学的調査報告である. サルモネラは都内で発生する細菌性食中毒のうち，最も重要な起因菌の1つである.本菌は，通常リジン脱炭酸試験で陽性反応を示すが 1986年に都内の小・中学校で発生した集団食中毒はリジン脱炭酸反応陰性の

s

.

Paratyphi Bによる珍しい事例であった.この大規模発生の原因菌を特定するに当たっては，広く普及しつつある細菌の保有するプラスミドプロファイルのパターン分析という分子生物学的手法が大きく貢献したことが報告された. ヒトに胃腸炎を起こす Campylobacter属菌には性状の類似する Helicobacter属菌があるが，これらの菌属は Lーアスパラギン酸を利用し，その分解生成物が菌種により異なったことから，この知見が菌種の同定性状として有益で、あることが報告された. 食中毒の発生あるいは疫学調査などの時に，原因菌のいずれの性状を検査すれば菌種の確定に有効であるかは日常検査で重要な問題である. ウィルス感染症について，都内における1990年10月-1991年11月のエコーウイルス30型による無菌性髄膜炎及び1992年11月-1993年1月のインフルエンザ様集団カゼの疫学調査成績が示された.それによると，無菌性髄膜炎の疫学調査ではウイルスの抗原変異に注目しなければならない.調査期間中のインフルエンザ様集団カゼの流行で特徴的であったことは，今季の本疾患ではA型， B型ウィルスによる重複感染が認められたこと，及びウイルスの分離に当たって継代細胞培養法では例年通り分離されたが発育鶏卵培養法では，ほとんど分離されなかったことが明らかにされた. 近年，アニサキスによる集団アレルギー症の発生がみられ，その症状が食中毒症状を示すことから，集団食中毒との類症鑑別の必要性が高まっている.著者らは，モルモットを用いて実験的にアニサキス感染によるアレルギー反応が生じることを証明し，原因不明の食中毒様疾患の解明に有益なデータを提供した. 1981年から1992年の12年間に都内で検挙された街娼について梅毒血清反応を見ると，陽性率は従来30， 40代の年齢で、高かったが，最近の外国人の街娼増加により低年齢化する傾向がみられた.また，検査に当たって，複数の検査法の併用が必要で、あることが示唆された. 厚生省では，生後6ヶ月経過時の小児を対象に，神経芽細胞腫のスクリーニング検査として，尿中のパニリンマンデル酸，ホモパニリン酸及ぴホモゲンチジン酸を定量的に測定し，これらの値を同時に測定したクレアチニン値で補正するという手法を提示している.今まで，このクレアチニンによる補正の実効性は明らかで、なかったが，著者らの調査により，この手法が異常の有無の判断資料として有益で、あることが確認された.なお，離乳期小児の尿中におけるパニリンマンデル酸及びホモパニリン酸の排出量が女児及び男児各600名以上を対象に調査され，これらの物質の平均的水準値が明らかにされた.

(13)

2 骨粗しょう症に関して， 35~70才の女性 26名を対象に，骨密度，血清中 25-hydroxyvitamin D3レベル及び食習慣や運動習慣などの疫学的関係を調査した.その結果，若い食品のアンバランスや運動習慣の欠如が骨粗しょう症の発生を早める要因であることが示唆された. 当衛生研究所では，生化学検査について都内の登録検査機関の検査精度向上を目的とじて，

1

9

8

2

年から外部精度管理調査を実施しているが，測定機器の自動化及ぴ日常の精度管理に対する姿勢の向上により検査精度の向上がみられた.また，精度管理調査に用いてる血算用試料は配布試料の保存状態により，特に白血球数とへマトクリット値が影響を受けていることが明らかにされた.

(14)

東京衛研年報Ann.Ret. Tokyo Metr. Res. Lαb. P目H.，44，3 -11， 1993

リジン脱炭酸反応陰性サルモネラ血清型

Paratyphi

Bによる

大規模な食中毒事例

楠

i

享 * ，甲斐明美 * ，柳川義勢 * ，高橋正樹 * 新垣正夫 * ，斎藤香彦 * ，太田建爾 * ，伊藤武 * 工藤泰雄 * 中村明子 * * 堀内三吉 * * * Outbreak of Food Poisoning caused by Lysine開decarboxylase

Nagative SalmoneUa Paratyphi

B

*

"'Ir r"l.r"T T TfT¥r"<T r T "Cr ^"'1'11.，...11."'''1'^

*

JUN KUSUNOKI~ ， AKEMI KAI~ ， YOSHITOKI YANAGAWA ~， MASAKI TAKAHASHI

*

MASAO SHINGAKI~ ， KAHIKO SAITO~ ， KENGI OHTA ~， TAKESHI ITOH

*

Y ASUO KUDOH ~， AKIKO NAKAMURA ~ ~， SANKICHI HORIUCHI

Between July28-31， 1986， an outbreak of gastroenteritis occurred in studens and staff at 12 elemenat -ary schools and 1 junior high school in Tokyo， who had eaten the lunch delivered by a caterer during a study tour of Nikko， Tochigi Prefecture. Of 1，492 students and staff members， 531 (35.6%) were affected

Sal刑問ellaser.Paratyphi B was isolated from 179 of 252 patients (students and staff members) and 1

leftover lunch

S. Champaign， C.jeju制 andE. coli0146: H7 were also isolated concomitantly from 7， 9 and 20 patients，

respectively. Epidemiological anaysis showed that there was close correlation betweenSalmonellainfection and consumption of the lunch， but not for C.jのuniand E. coliinfections， indicating that there might have been another route of transmission.

The major outbreak strain， S. Paratyphi B， from patients and the leftover food had an atypical character -istic in that it was nagative for lysine decarboxylation， although other characteristics were typical ofSal -monellasubspecies 1.Further examination of antin山robials¥日 eptibilityto 6 drugs (chloramphenicol， tetracy

-cline， streptomycin， ka田町cin，ampicillin and suifamethoxazole-trimethoprim)， bacteriophage typing and plas

-mid analysis also showed the homeg巴neityof the outbreak strain， ei..， all strains tested had single drug resist

-anc巴totetracyclin巴，phagetype Dundee and single large plasmid (ca. 200kb)

These findings clearly indicate that the outbreak was caused mainly by S. Paratyphi B and the lunch del -ivered by a carterer was the source of infection. Keywards:サルモネラ Salmonella，食中毒foodpoisoning，胃腸炎 gastroenteritis，非定型菌 atypicalstrain，フ。ラスミドplasmid 緒言 1986年7月，東京都内の小学校12校と中学校 1校計13 校の児童・生徒が某県に旅行した際に発生した集団食中毒は，患者数531名を超える大規模なものであった.本食中毒は，その疫学的，細菌学的調査から同一施設で調理・提供された昼食弁当を原因とするサルモネラ血清型 *東京都立衛生研究所微生物部細菌第一研究科 169東京都新宿区百人町 3-24-1

*

The Tokyo Mertopolitan Research Laboratory of Public Health 24-1， Hyakunincho 3 chome，Shinjuku-ku，Tokyo， 169 Japan **国立予防衛生研究所細菌部

(15)

4 Ann. Rep. Tokyo MetγRes. Lαb. P.H.， 44， 1993 Paratyphi B (5. Paratyphi B)による食中毒と推定されたが，分離された 5.Paratyphi Bはこれまでに殆ど報告された事のないリジン脱炭酸反応陰性の非定型的な菌株であったこと，また一部の集団では同時に他のサルモネラ血清型 Champaign(5. Champaign)，またこれに加え，更にカンピロパクター・ジェジュニ(C.j句iuni)あるいは病原血清型大腸菌 0146: H 7の検出をみた複数感染源を示唆する興味ある事例であった. 本報では，本事例の発生状況，並びに細菌学的成績，特に感染源調査のために検討した S.Paratyphi Bのファージ型別，プラスミドプロファイルや薬剤感受性パターン等の成績を中心に報告する. 被検材料および方法 1.被検材料食中毒発生の見られた 13校のうち小学校10校および中学校l校の生徒および教職員の発症者ふん便252件を対象に細菌学的検査を実施した.

2 .

病原菌の分離と同定糞便について， SS寒天， DHL寒天， C1N寒天，マツコンキー寒天， TCBS寒天， MYP寒天，卵黄加マンニット食塩寒天， Skirrowの血液寒天，卵黄加 C W寒天による直接分離培養，ならぴにセレナイト培地，

2

%食塩加アルカリペプトン水，チオグリコレート培地による増菌培養を実施して既知の腸管系伝染病菌および食中毒起因菌の検索を行った.検出したサルモネラ，大腸菌およびカンピロパクターの同定は善養寺らの方法1)および、微生物検査必携2)に準拠して行った. 3.血清型別試験サルモネラの血清型別は市販 ( デンカ生研および Difco)の O ならぴに H診断用抗血清を用いた.大腸菌については市販(デンカ生研)および自家調製したOならびにH抗血清により型別を行った.カンピロパクターは，斎藤ら3)が開発したスライド凝集反応による型別システム (TCKシステム)によった. 4.

S

.

Paratyphi

B

の生化学的性状試験リジンおよびオルニチンの脱炭酸反応，アルギニン加水分解，尿素分解，有機酸塩(マロン酸， d-酒石酸，粘液酸，クエン酸)の利用性，炭水化物からの酸産生の各試験は，微生物検査必携2)に従って実施した .

s

ーガラクトシターゼ試験は ONPGディスク(日水)を使用した.

F

田グルクロニターゼおよびy-グルタミルトランスフエラーゼ言え験は LeMinorら4，5)の方法によった.

5 .

ファージ型別試験ファージ型別試験は国立予防衛生研究所において行われた.分離した 5.Paratyphi Bについては Felixら6Iの方法に従づて 11種のファージを用いて型別を行った. 6.薬剤感受性試験クロラムフェニコール (CP)，テトラサイクリン (TC)，ストレプトマイシン (SM)，カナマイシン (KM)，アンピシリン (ABPC)および、スルファメソキサゾール・トリメトプリム (ST)合剤に対する分離株の感受性は，化学療法学会法7)に従いその最小発育阻止濃度 (M1C)を求めた. 7.プラスミドプロファイルの検討分離された 5.Paratyphi Bの 7菌株について， Kado8₎ の方法に従ってプラスミドを抽出した.得られたプラスミドを 0.7%のアガロースゲルを用い， 100Vで 2時間電気泳動後，エチジウム・ブロマイドによる染色を行った. プラスミドサイズの測定は Macrina91の方法に従った. プラスミドサイズマーカーとしては E.coli V-517， E. coli K-12 CSH(NR 1 )およぴ 5.Enteritidis L-156t朱を使用した.また検出されたプラスミドの伝達性を混合培養法10) メンブランフィルタ一法10b)および形質転換法10bl により+食言すした. 1.疫学的調査成績 1 )発生状況成績本食中毒は 1986年 7月28日から 30日の 2泊 3日間栃木県日光地方に旅行したS区内の小学校3校(A，B，C)，および 7月29日から 31日にかけて上記と同一地域に旅行した同区内の小学校 3校 (D，E，F)，K区内の小学校 6校 (G，H，I，J， K，L)並ぴに中学校 1校 (M)の合計 13校の児童・生徒およぴ教職員らに発生したものである.旅行参加者1，497名中 531名(35.5%)が発症した.発症率は学校によって大きな差が認められ， F小学校では 81.8%と非常に高率であったが， C小学校では 3.6%と低率にとどまった (Table 1 ).

2 )

原因食品本事例では後述のごとく，各学校の患者糞便からリジン脱炭酸反応陰性の 5.Paratyphi Bが高率に，また一部からは 5.Champaignも検出されたことから，原因食品として共通する飲食物が有るものと考えられた. 7月28 日から 31日に旅行に参加した上記13校について調査された旅行スケジュール，各校の宿泊施設および旅行期間中の昼食などの喫食状況を Tabl巴1に示した. D校と E 校，G校と H校，1校と

J

校の各小学校はそれぞれ別の同一旅館に宿泊していたが，その他の学校はそれぞれ異なる旅館に単独で宿泊していたことより，旅館は原因施設から除外された.A， B， Cの各小学校は7月28日に東

(16)

東京衛研年報 44，1993 5

School No. of

Table 1. Outline of Gastroenteritis Outbreak Due to Salmonella

Hotels stayed: Schedule No. of Lunch on目 J

一

・

一

-H

一

・

G

一

・

F

一一

. .

E

一一-D

一一

・・

C

一・一

B

一・一

A

一・ ⋮

一叩

一一

・・

v d 一一 U 一一

一泊一・・・一

お一

A

，

訓

的

一

必

，

J

刈

心

﹄

川

局

刈

m A 1 リ一 4 3 3 干 a 2 1 9 2 2 0 3 8 5

出

悦

一

任

は

(

一

性

ωω00ωωOQQ

a--i4& 戸 U 二日 Q U A せヴ t ウ ' 司 υ ヮ，つ μ つム OO F b -F h d 1 i -R υ R υ ハ U ワム M 1 よ弓 t q ο A 生ワ臼ワ ω -F 1 E 4 n 吋一 os-4IOU-05793nu--402 a o -i ハ U ﹃ υ 目 1 i q u ワ ω に U F U ヴ 4 0 ・ u つ ω ワ ω 0 0 r p

一

1 1 1 1 1 1 1 1 1 噌 X

一

γ L r ρ 白こ n u -i n べ υ -n ぺ υ O D -q d つ u o h ソ -ワム︼ λ λ λ Z

んゲ，ん

v u -V M

h

一

u 目** * 一 * * A B C

一

D E F G H I J K L M 3 schools 2 schools 2 schools July 30-Aug.1 July 31-Aug.2 Aug. 1-2 561 245 277 ハ U ハ U n U

••• ••

• •

*

:

E. coli0146 : H 7 was also isolated from patients

*

:

C.jej叫niwas also isolated from patients. 京を出発し，翌 29日の昼食に M 仕出し屋の弁当を喫食しており，同様に 7月29日に東京を出発した他の 10校

(

D

，

E

，

F

，

G

，

H

，I，J ，

K

，

L

，

M)

も30日の昼食に同じ

M

仕出し屋が調製した同一内容の弁当を喫食していた.一方，これらの学校とは別に， 7月30，31日 8月 1日にそれぞ、れ東京を出発し，同一地域に同じ旅館を利用して旅行したが， M仕出し屋の弁当を喫食しなかったS区内の7 校の小学'校の 1，083名では食中毒患者の発生は認められなかった.以上の疫学調査成績から M 仕出し屋が調製した弁当が原因食品と推定された. 7月29日と 30日の弁当内容は同一で，米飯，豚肉煮付け，錦糸卵，しいたけ，きんぴら，かんぴょう，酢ばす，しめじ，ふき，帝よしょうが，ィ、梅，おしんこであった. これらの弁当内容の内，病原菌で汚染されていた食品を特定することはできなかった. しかし，弁当残品等の検査を実施した栃木県の検査成績では，患者由来菌と同ーのリジン脱炭酸反応陰性の S.Paratyphi

B

が弁当残品から検出されており，細菌検査成績からも本弁当が原因食品であったことが証明された.なお M仕出し屋で調製された弁当残品から S.Champaignは検出されなかった. 他方 A小学校では S.Paratyphi B以外に後述のごとく患者ふん使から E.coli0 146 : H 7が，また D校と E 校では S.ParatyphiB以外に C.jej仰u血清型 TCK20/21 が同時に検出された. これらの菌はいずれも同じ旅館を利用している小学校の児童に限って認められている之とら，その感染源はそれぞれ宿泊した施設にあるものと推定された. 3 )潜状時間本食中毒事例ではその原因菌がサルモネラ単独のグループ，サルモネラと C.jejuni，あるいはサルモネラと E. coli0 146 : H 7の混合感染のグループに分けられたため，

i

替状時間と主要臨床症状は各グループごとにまとめた. サルモネラ単独感染による F校および I校の 113名の患者発生は， Fig 1に示したとおり M仕出し屋の弁当を喫食 4-84時間に認められ，そのピークは44時間，平均

i

替状時間は40時間であった. サルモネラと

C

.

jejuniとの混合感染が認められた

D

校および

E

校の合計81名の潜状時間は

4-75

時間で，そのピークは 31時間，平均潜状時間はサルモネラ単独の場合より短く 38時間であった. サルモネラとE.coli0 146 : H 7の混合感染と推定された A校の患者33名についての調査結果では，発症のピークは31時間，平均潜状時間は43時間であった.

4

)主要臨床症状患者 322名の臨床症状を検出菌のグループごとに

(17)

6 Ann. Rep. Tokyo MetγRes. Lαb. P.H.，44， 1993 40 30 20 10 20 0':: 10 0 。 Z 10 School A (Sa.l川lIel/a& E.(Oli) Fig .1. Incubation Time of Outbreaks by Groups Tabl巴2. Main Clinical Symptoms

Symptom School

F&I* D&E** A*** n=145 (%) n=102 (%) n=75 (%) Diarrhea 122( 84，1) 91 ( 89.2) 32 ( 42.7) Fever 117 ( 80.7) 102(100，0) 27 ( 36.0) Headache 88 ( 60.7) 71 ( 69.6) 20 ( 26.7) Abdominal pain 85 ( 58.7) 67 ( 65.7) 19( 25.3) Malaise 83 ( 57.2) 56 ( 54.9) 22( 29.3) Chilis 56( 38.6) 32 ( 31. 2) 11( 14.7) Nausea 44( 30.3) 39( 38.2) 10( 13.3) Vomiting 25( 17.2) 19( 18.6) 3 ( 4.0) * : Salmonella was isolated from patients. * * : Salmonella and/or C. jej叫niwas isolated from patients. * * * : Salmonella and/or E. coli0 146 : H 7 was isolated from patients. Table 2にまとめた.サルモネラ単独感染の F校および I校の発症者 145名の主要臨床症状は，下痢 122名 (84.1% )，発熱 117名 (80.7%)，頭痛 88名 (60.7%)，腹痛85名(58.7%)，倦怠感83名(57.2%)であった. サルモネラと C.jり附tの混合感染のD校およびE校の発症者102名の主要症状は，発熱102名 (100%)，下痢 91名 (89.2%)，頭痛71名(69.6%)，腹痛67名(65.7%)，倦怠感 56名 (54.9%)であった.サルモネラと E.coli 0 146 : H 7の混合感染の A校の発症者75名では，下痢 32 名(42.7%)，発熱27名(36.0%)，倦怠感22名(29.3%)，頭痛20名(26.7%)，腹痛19名(26.3%)であった.その他，悪寒，

n

医気， n~ 吐等の症状が一部に認められた.下痢の便性状は水様便および軟便が主であったが一部粘液便を，呈した者もいた. 2.細菌学的調査成績 1 )患者糞便からの病原菌検出状況発症者ふん使252件を対象に病原菌検査を行った結果， 177件 (70.2%)から S.Paratyphi B， 5件から S.Champaign， 2件からは S.Paratyphi B と S.Champaignの 2菌型のサルモネラが同時に検出された (Table 3). S. Para. typhi Bは検査を実施した 11校のすべて， S. Champaigrt は，

A

，

D

，

E

，

F

，

H

の

5

校の患者から検出された.この他， A校の患者39名中 20名からはE.coli

0

146 : H 7が，さらに D校の患者41名中 7名およびE校の患者47名中 2 名からは C.jejuniが検出された.その血清型は TCK 20/21が 7株， TCK 20， TCK 1が各 1株であった. 2) S. Par叫yphiBの生化学的性状原因菌と推定された S.Paratyphi B菌はおおよび DHL寒天平板上では，中心部が黒変する典型的なサルモネラの集落であったが，リジン脱炭酸反応陰性であった.分離した 20菌株を対象に更に糖分解，アミノ酸分解等29種の生化学的性状を検討した結果，リジン脱炭酸反応を除いて，Salmonella enterica subsp.ωtericaの典型的な生化学的性状を示した (Table4 ).なお，本菌は d-酒石酸反応、が陽性であった.また血清型別試験では04 群抗原を持ち，日抗原は b: 1 ， 2であったため S.Para回 typhi Bと同定した. 3) 薬剤感受性供試した， S. Paratyphi B 20菌株の薬剤感受性パターンはすべて同ーであった.すなわち， TCに対しては MICが100μg/ml以上で高度耐性， SMに対する MICは 25μg/ml， CP， STに対しては 3.12μg/ml，KMと ABPC に対しては1.56μg/mlで感受性であった.

4 )

ファージ型 7校 (B，D，E，F，G，H，K)の患者から検出された S.Pa ratyphi Bの19株と，栃木県での検査で弁当残品から検出された S.Paratyphi B 1株の計20株についてファージ型別試験を実施した結果，全株が同ーの Dundee型であった.

(18)

東京衛研年報 44，1993 7 Table 3. Results of Becteriological Examination of Fecal Specim巴ns No.of No. of positives Other pathogens School speclmens examined S. B* A 39 24 B 14 7 D 41 28 E 47 35 F 65 54 G 18 13 H 2 7 5 14 8 K 4 1 L l Total 252 177 * : S.B=Salmonella Paratyphi B * * : S.C=S，αlmonellaChampaign S. C* * 2

。

1 1

。

l

。

5 Table 4. Characteristics of S. Paratyphi B Strains Isolated Lysine Arginine Ornithine Urea Malonate Test Tartrate， Jordan's Mucate Citrat巴(Simmon's) ONPG D-Glucose， gas D-Glucose， acid L -Ara binose Cellobiose Lactose Maltose Raffinose L-Rhamnose Sucros巴 Tr巴ralose D-Xylose Adonitol Dulcitol D-Mannitol D-Sorbitol Glycerol Salicin myo寸nositol

s

-gluculonidase Y-glutamil transferase *n=20 Result (%) * 一( 0) 一( 0)

+

(100) 一( 0) 一( 0)

+

(100)

+

(100)

+

(100) 一( 0)

+

(100)

+

(100) 一( 0) ( 0) 一( 0)

+

(100) 一( 0)

+

(100) 一( 0)

+

(100)

+

(100) 一( 0)

+

(100) 十(100)

+

(100) ー( 0) 一( 0) 一( 0) ( 0)

+

(100) detected S. B & S. C Total (%) (No. of patier出) 1 27( 69.2) E. coli 0146 : H 7 (20)

。

7 ( 50.0) 1 29 ( 70.7) C.jejuni (7)

。

36( 76.6) C.jりuni(2)

。

55( 84.6)

。

13( 72.2)

。

2 (100 )

。

5( 71.4)

。

8( 57.1)

。

1 ( 25.0)

。

1 (100 ) 2 184 ( 73.0)

5

)プラスミドプロファイルファージ型別に供試した S.Paratyphi B株のうち患者由来の 7菌株についてプラスミドプロファイルのキ食言すを行った. Fig 2に示すごとく 7株すべてから約200Kbの同一サイズのプラスミドが検出された.検出された大きなプラスミドは伝達性R因子である可能性があるので，混合培養法，メンブランフィルタ一法および形質転換法によって検討したが，非伝達性のプラスミドであった. 考察本食中毒は 13校の小中学校が同一地方に旅行した際に発生した大規模食中毒事例であった.本事例では一部に共通する施設の利用もあったが，各校が異なった旅館に宿泊し，スケジ、ュールも異なっていた. しかし，各学校の患者から分離された S.Paratyphi Bはリジン脱炭酸反応陰性の非定型的性状を示すサルモネラであり，それぞれの薬剤感受性，ファージ型並ぴにプラスミドプロファイルもすべて同一パターンであったため，同一原因食からの感染であることが強く示唆された.さらに詳細な疫学調査の結果，患者発生のあった各校に共通して同一仕出し屋で調製された弁当が，その提供日は異なるものの出されていたことより，これが原因食として疑われた. その後，栃木県の検査で原因食品と推定された弁当残品から同一性状を示す S.Paratyphi Bが検出されたことにより，この昼食の弁当が原因であった事が明確にされた. しかし，汚染された食品の品目を特定することはできなかった. 29日に弁当を喫食した A，B，Cの 3校の患者の発病率は，大腸菌との混合感染であった A校では 44.7%と高

(19)

8 Ann. Rep. Tokyo Metr. Res. Lab. P.H.，44， 1993 率であったが，サルモネラ単独感染のB校， C校では各々13.9%，3，6%と低く，食品を汚染していたサルモネラ菌数はそれほど多くはなかったものと推定された. 一方， 30日の弁当喫食者の発病者は， 15.3% ~8 1. 8% と 29日の喫食者の発病率よりもはるかに高い.これは 29日と30日の両日とも同一内容の弁当であったことから，サルモネラによって汚染された29日の惣菜を 30日まで保管し，その聞に食品中でサルモネラが増殖し，菌量が多くなっていたものと推察された. また，サルモネラ単独感染，サルモネラと C.jejuni，サルモネラと E.coli 0 146 : H 7の混合感染の 3グループの平均

i

替状時間はそれぞれ40時間， 38時間， 43時間とであり感染源、などの疫学的解析に極めて有効な方法と考えられる. 結論 1986年 7月28日から 30日の 2泊 3日間栃木県に旅行した小学校3校，および 7月29日から 31日にかけて上記と同一地域に旅行した小中学校10校の生徒および教職員総計1，497名中 531名 (35.5%)が急性胃腸炎症状を呈した. 疫学調査結果から， 29日と 30日に各々同一施設で調理され，昼食用に提供された弁当が主原因であったと推定されたが，食品を特定するには至らなかった. 発症者ふん便252件を対象に病原菌の検索を行った結果， 177件 (70.2%)からサルモネラ血清型ParatyphiB，近似するものの，発症のピークはサルモネラ単独感染事 5件から Champaign，2件からはParatyphiBとCham一例では44時間であったのに対し，混合感染事例ではいず paignが同時に検出された.本食中毒の主原因菌と推定れも31時間と単独感染事例に比して短い結果であった. された.Paratyphi Bは全株リジン脱炭酸反応陰性の非これらのうちC.jej附 zとの混合感染の2校は同一旅館定型性状を示すサルモネラであった.また，分離されたを同じ日に利用し，

E

目coli

0

146 : H 7の検出されたグ Paratyphi B株は同ーのファージ型で，かっ同ーのプラループは，他のグループと異なった旅館を利用していた. スミドファイルを示すことが確認され，これらの方法が混合感染グループの潜状時間のピークは単独感染グルー疫学解析に非常に有効である事が示唆された.一方，ープに比べて短いこと，また検出菌と宿泊施設との関係か部の学校の患者からはサルモネラ以外にE.coli0 146 : ら，混合感染のグループは

2

日目の弁当喫食以前に旅館

H7

及び

C

.

jej附 tも同時に検出されたが，それらの感染の飲食物に依る C.jejuniまたは E目coli0 146 : H 7の感染があった事が推察された. サルモネラの基本性状であるリジン脱炭酸反応，乳糖分解性，硫化水素産生性などが非定型的な性状を示す菌は，集団下痢事例や散発下痢症例から稀に検出されている11-16) 著者からもこれまでにリジン脱炭酸反応陰性のサルモネラ血清型Typhimurium，Heidelbergおよび Thompsonを散発事例から検出している.また1971年にはリジン脱炭酸反応陰性の Enteritidisによる患者数23 名の食中毒事例にも遭遇している.非定型性状を示すサルモネラの同定は生化学性状検査に加え， 0抗原や H抗原の検査が重要である.最近ラテックス凝集反応17)によってサルモネラを検出できる迅速診断キットが開発されており，本キット等は非定型的性状を持つサルモネラ同定の一助として有効である. 従来からのサルモネラ疫学的解析に，ファージ型あるいは生物型別が利用されているが，著者ら18.19)は更に DNAプラスミドプロファイルが疫学的解析に応用出来ることを報告してきた.今回のS目 ParatyphiBについてもファージ型と併せてプラスミドファイルを検討した結果，供試した全株が同ーのプラスミドファイルを示すことから，原因菌は同ーの起源をもっ菌であることが示唆された.プラスミドファイルの解析は比較的容易な方法 j原はS.Paratyphi Bのそれとは異なるものと推定された. 謝辞本事例につき疫学調査資料等を提供して頂いた，東京都衛生局環境衛生部食品衛生課食中毒調査係，世田谷区衛生部，北区衛生部の関係各位に深謝いたします. 文献 1 )善養寺

i

告，坂井千三，寺山武，他:腸管系病原菌の検査法 4版， 1985，医学書院，東京. 2 )金井興美:微生物検査必携，細菌・真菌検査(第3 版)， 1987，日本公衆衛生協会，東京. 3 )斎藤香彦，高野伊知郎，高橋正樹，他:日本細菌学雑誌， 42， 499-512， 1986. 4) Le minor， L.， Buissiere， J.G.:Ann. Microbiol.(Inst. Pasteur)， 1298， 155-165， 1978. 5) Le minor， L.， Buissier，巴J. and Brault， G.:Ann. Micro -biol.(Inst. Pasteur)， 1308， 305-312， 1979. 6) Felix， A:B久間ed.あul.，7， 155-162， 1951. 7 ) 日本化学療法学会 MIC測定法改訂委員会 : Chemothera虫y，29， 76-79， 1981. 8) Kado， C.L.and Liu， S.T.: ]. Bact. 145， 1365-1373， 1981. 9) Macrina， F.L.， Kopeckoo， D. J.， Jones， K. R.， et al.: Plasmid.1， 417-420， 1978.

(20)

東京衛研年報 44，1993 9 10) 中谷林太郎 :Rプラスミドの分子遺伝学的実験法 (日本細菌学会教育委員会編)， 8-10， 1983，菜根出版，東京. 10b) 中谷林太郎 :Rプラスミドの分子遺伝学的実験法， 52-54， 1983，莱根出版，東京. 11)赤羽荘資，浅川豊，岩本喜久子，他:静岡県衛生研究所年報， 59， 13-21， 1972. 12)小野泰美，岩本サカエ，青木喜也，他:食衛誌， 26， 295-299， 1985. 13)塩沢寛治，秋山真人，佐原啓二，他:静岡県衛生環境センタ一報告， 27， 97-102， 1984. 14) 木村薫，山口英世，西田陽一，他:感染症誌， 62， 123-129， 1987. 15)Santha D. Dube :].Clin. Microbiol.， 17， 698-699， 1989. 16)Hall， M.，.LThrelfall， E.

J

.

and Rowe， B田Lancetii， 1197-1198， 1978. 17)伊藤武，平田一郎，池島伸至，他最新検査， 36， 351-355， 1989. 18)堀内三吉，稲垣好雄，中谷林太郎，他:感染症誌， 62， 154， 1988. 19)堀内三吉，稲垣好雄，中谷林太郎，他:感染症誌， 63， 352-362， 1989.

(21)

200 k b _ 90 kb

一

-60 kb

一

ー

1. 5 kb-

一

『

静

2 3 4 5 6 7 Fig.2 Plasmid Profile of Isolated Strains Lane 1 : E. coli K -12 CSH -2 (N r-1) 2 : S. Enteritidis L -156 8 3-10 : S. Paratyphi B isolated from patients 9 10

(22)

東京衛研年報Ann.Rep. Tokyo Metr. Res. Lab. P目H.，44，13】18，1993

C

α

mpylob

α

cter

属および‘

H

elicobacter

属による

しーアスパラギン酸の分解性と生成物質の検討

新垣正夫 * 高橋正樹 * 斉藤香彦 ¥ 柳川義勢 *

甲斐明美 * ，太田建爾 * 寺山武 *

Biosynthsis of fumaric acid and L-Malic acid from L-aspartic acid by genus Campylobαcter

and genus Helicobacter

MASAO SHINGAKI*， MASAKI TAKAHASHI*， KAHIKO SAITO*， YOSHITOKI YANAGAWA ，* AKEMI KAI ，* KENGI OHT A * and T AKESHI TERA Y AMA *

Keyword:カンピロパクター Cam砂lobacter，ヘリコパクタ -Helicobacter， L-アスパラギン酸 L-asparticacid，フマル酸fumaricacid， L-リンゴ酸 L-malicacid，高速液体クロマトグラフィー high同performanceliquid chroma -tography 緒言 Cam砂lobacterは酸素分圧 5-10%の濃度で発育するが，その際炭水化物を酸化的にも発酵的にも分解することが 1 出来ないため，他の有機化合物のアミノ酸や有機酸等を利用して発育に必要なエネルギーを獲得していると考えられている1) これまでに，アミノ直俊ではLーアスパラギン酸を利用することがすでに明らかにされているが2.3)，L-アスパラギン酸の分解生成物の種類やその量的な分析はほとんど行われていない.またL-アスパラギン酸の利用性は C.jり仰i，C.coli

，

C.fetω等限られた菌種について検討されているにすぎないし4.5)，Campylo -bacter属と類似する Helicobacter属菌についてはまったく

1

食言すされていない. そこで今回我々は，Campylobacter属及ぴ Helicobacter属の多数の菌株を対象にして， L-アスパラギン酸の分解能及びその分解生成物についての分析を高速液体クロマトグラフィーを用いて行った.その結果，これらすべての菌株がレアスパラギン酸分解能を有すること，その分解生成物はフマル酸とL リンゴ酸であるが，両者を生成する菌種とフマル酸のみを生成する菌種があることが明らかに出来たのでその成績について報告する. 材料及び方法

1 .

供試菌株と培養今回の実験に用いた菌株を表lに示した.C.jejuniの 7株と C.coliの 6株は，すべて散発下痢症の患者糞便から分離した菌株である.C. jejuni subsp. doyleiの 1株は，海外旅行者由来糞便から分離した菌株である. C. fetω は， type株の 1株と散発下痢症の患者及ぴ健常者の糞便より分離した3株の計4株である.ウレアーゼ陽性の“C.lari variant ..は， Dr. Boltonより分与された 2 株である. H. pyloriは， Dr.Marshallから分与された refer巴nce株の1株と我々がヒトの胃粘膜より分離した 4株の計 5株である .H. mustelaeは， Dr.Owenより分与された re -ferece株 1株， Dr.Tompkinsより分与された 3株の type株，そして我々がフェレットの胃粘膜より分離した1株の計5株である. 各菌株の培養は，普通寒天に馬血液を 5%に加えた血液平板を用いて3TC，微好気条件下

(

0

2 :

5

%，

CO

2 : 10%， N2: 85%)で行った .Cam妙lobacter属の各菌株は 2日間，Helicobacter属は4日間培養した. 2. L-アスパラギン酸分解試験 L-アスパギン酸分解能の試験は，Campylobacter属及び Helicobacter属のそれぞ、れの菌株について継代培養を 2回 *東京都立衛生研究所微生物部細菌第一研究科 169東京都新宿区百人町3-24-1 * The Tokyo Metropolitan Research Laboratory of Public Health

(23)

14 Ann. Rep. Tokyo Metr. Res. Lab. P.H.，44， 1993 表1.L-アスパラギン酸分解試験に用いた Cam砂lobacter属と Helicobacter属の供試菌株菌種菌株数菌株 C. jejuni subsp. jejuni 7 HP7672. HP7682. HP7691.HP7701 HP7768. HP7807. HP7808 C. jejuni subsp. doylei l CF89-1 C. coli 6 HP7674， HP7675， HP7707， HP7713 HP7740， HP7742 C. fetus subsp.

J

e

tus 4 HarveyC-3 CF-1121， HP6953， CP91-58 C. hyoint回tinalis 3 CF88-274， CP92-6， CP92-52 C. lari 2 729，1723/NTCC1l52 "C. lari varian t" 2 10231/7/83，3980/1/83 C‘upsaliensis 3 0167& 0217& 02225 C.ゆutorum biovar sputorum 1 A3564 biovar bubulus 1 A31l5 biovar fecalis 2 A31l2， A3667 H.cinaedi 1 CLO-1 H.fennelliae l H.pylori 5 H. mustelae 5 言十 44 繰り返した後，その血液平板培養菌苔を 1

%

L-アスパラギン酸ナトリウム溶液の 0.5mlに McFar1andturbidity standard no. 3に相当するように懸濁し，その菌液を

3TC

の恒温

i

曹で 20時間反応させた. L-アスパラギン酸の分解能の有無は，反応液を遠心後，フィルター(東洋

i

慮、紙， 0.20μm)でj慮、過した上清を試料として，後述する高速液体クロマトグラフイー (HPLC)による L-アスパラギン酸及ぴその分解生成物の分析を行うことにより確認した.

3 .

L

-

アスパラギン酸及びその分解生成物の分析 HPLCによるレアスパラギン酸及ぴその分解生成物の分析は，コスモシール 5C18 ARカラムを用いて行った

i

容出は， 50mM リン酸 Buffer pH2. 4を用い， 0.8ml/minの流速で行った.検出は， UV spectrophoto -meterを用いて波長210nmで行った. L-アスパラギン酸の定量は，標準溶液のピーク高と retentωntimeから検量線を作製し，これに試料のピークを当てはめることにより算出した.また L-アスパラギン酸の分解生成物の分析は，反応後の試料に新たに出現したピークの HPLC パターンをフマル酸， Lーリンゴ酸，コハク酸及びクエ CLO-2 NCTC1l639 PCL55， PCL56， PCL58， PCL60 NCTC12032 F6. F7. F10 F1 ン酸ナトリウムの既知低分子有機酸の標準溶液のパターンと比較することにより推定した. 成績

1 .

L

-

アスパラギン酸及びしーアスパラギン酸分解生成物に由来する低分子有機酸の検出・定量に用いる標準溶液の HPLCの検討標準溶液の L-アスパラギン酸ナトリウム，フマル酸ナトリ‘ウム， L リンゴ酸について HPLC測定条件に従い検量線を作成した.その結果，各標準溶液は原点を通る直線が得られた . 相関係数 (R)はいずれも 0.999であった.図 1に L-アスパラギン酸ナトリウム，フマル酸ナトリウム， L-リンゴ酸の溶液の検量線を示した. 図 2に1.0%Lーアスパラギン酸ナトリウム， 0.5% L リンゴ酸， 1.0%クエン酸ナトリウム， 1.0%コハク酸そして0.05%フマル酸ナトリウム標準溶液の HPLCパターンを示した.各標準溶液の retentiontime (分)は，それぞれ6.607，9.975， 18.517， 19.925そして 21.88であった. 2. Cαmpylobα

c

t

e

r

属菌の Lーアスパラギン酸分解能の検討成績 Campylobacter属菌にづいての HPLCの Chromatogram

(24)

15 44， 1993 報年耳 A Z 別偉I 京東フマル酸ナトリウムレリンゴ酸レアスパラギン酸ナトリウム r = 0.999 r = 0.999 言。 ) 岨 10 r = 0.999 れ :l.J フマル酸ナトリウム各標準溶液の

HPLC

測定条件における 0.5 0.3 0.4 度 (μg) 0.2 滋日l 10 15 度 ( 凶 ) 濃図l. L-アスノfラギン医変ナトリウム， L-リンゴ匝jt，検量線 20 15 (μg) 。度濃 5 標準溶液 C. jejuni (HP7672) 3 対照例 @ 巾 w . A W 4 10. 20 30 Retention time (minutes) 10 20 30 Retention time (minutes) 10 20 30 Retention time (minutes) ラ、 p u ω ω m H u r l ' nU8 斗 -t p o U ﹁ D n v q δ B A A

l

pb " “ ω 制同 ω ω

C

.

fetus (HarveyC-3) C.coli (HP7707) 10 20 30 Retention time (minutes) 10 20 30 Retention ti聞e (minutes) 5 フマル酸) 4 コハク酸，図2. Campylobacter属菌の

L

ーアスパラギン酸分解生成物の

HPLC

パターン標準溶液 (1 : L-アスパラギン酸， 2 : L-リンゴ酸 3 クエン酸，対照 (1%L-アスパラギン酸ナトリウム)

(25)

16 Ann. Rep. Tokyo Metr. Res. Lab. P.H.，44， 1993 を図2に示した.菌を添加しない対照の反応液のLーアスパラギン酸の Chromatogramに対して，Cam見ylobacter 属の各菌種では，減少した L アスパラギン酸のピークの他に新たなピークの生成が認められ， L-アスパラギン酸が分解されたことが示された.標準溶液の HPLCパターンとの比較より， C・jejuni，C.coli， C.Jもtusの新たなピークは，大ピーク (Retentiontime 22.0分)が低分子有機酸のフマル酸，小ピーク (R巴tentiontime 9.9分)はレリンゴ酸であると推定された.これに対して，

C

.

ψ

utor -um biover sputorumではフマル酸の大ピーク (Retent問l time 22.1分)のみが認められた.このことから， C. je -juni， C.coli， C.fetωはL-アスパラギン酸を分解してフマル酸と L-リンゴ酸を生成し， C. sputorum biover sputor umはフマル般のみを生成した.

3 .

H

e

l

i

c

o

b

α

c

t

e

r

属のレアスパラギン酸分解能の検討成績 Helicobacter属菌について HPLCを行った Chromato-gramを図 3に示した . 図に示した H.pyloriの Chro -matogramからは，フマル酸と Lーリンゴ酸のピークの生成が認められたが，H. mustelae及び H.cinaediではフマル酸に相当するピークだけが認められ， L-リンゴ酸に相当するピークは認められなかった. Cam砂lobacter属及ぴ Helicobacter属の全供試菌株 (441朱) についての成績を以下にまとめると，Cam砂lobacter属で Lアスパラギン酸を分解して L-リンゴ酸とフマル酸を生成した菌株は，

c

・Jそjuni( 7株)， C.coli ( 6株)， C. 'd，りl叫

H

朱)， C.fetus ( 4 *朱)， C.hyointestinalis ( 3 *朱)， C.lari ( 2株)，“ C.lari variant" (2株)そしてc.up -H.pylori (PCL55) H.mustela巴 (NCTC12032) saliensis ( 3株)であった. これに士すして， C. sputorum biover sputorum ( 1

t

;jc)， C.

ゅ

utorum biover bubulus ( 1株)， C.s戸utorumbiovar fecalis ( 2株)はフマル酸だけを生成した. Helicobacter属でフマル酸と Lーリンゴ酸を生成した菌株は，H.Jもnnelliae( 1 株)， H.のlori(6株)であった.これに対してH.cinaedi ( 1株)， H. musutelase ( 5株)はフマル酸だけを生成した. 以上の成績から，Campylobacter属及ぴ Helicobacter属商のすべての菌株は L アスパラギン酸分解能を有することが明らかになったが，その分解生成物については菌種によりフマル酸と

L

-

リンゴ酸の

2

つを生成するものと，フマル酸だけを生成するものに分かれた.

4 .

分解生成物のレリンゴ酸及びフマル酸の定量的検討 Campylobacter属及ぴ Helicobacteγ属の菌株の合計44株について， HPLCによる L アスパラギン酸の定量と生成したレリンゴ酸及びフマル酸の生成量を検討した成績を表 2に示した.全供試菌株44株のレアスパラギン酸の量は，コントロール値 (20μg)に対して全体で 7 % -50%に減少した. L-リンゴ酸の生成量は， L-アスパラギン酸20μgに対して， 4.1μg-6.7μgで、あった.フマル酸の生成量は L-アスパラギン酸を分解してフマル酸と L-リンゴ酸を生成した菌株で 0.9μg-1.5μg、であった.これに対-してフマル酸だけを生成した菌株では， 3.9μg-4.1μgで、あって，フマル酸と Lーリンゴ酸を生成した菌株よりも約 2倍以上の生成量であった .H. fen -nelliaeについては， L-アスパラギン酸を分解したものの， H.cinaedi (CLO-l) q ﹂ F m w 図 3. Helicobacter属菌による L-アスパラギン酸分解生成物の HPLCパターン 10 20 30 Retention time (mint比es)

(26)

東京術研年報 44，1993 17 表 2. Campylobacter属およびHelicobacter属菌のL-アスパラギン酸分解生成物菌稜 C.jejuni subsp. jejuni subsp. doylei C. coli C.fetω subsp.Jもtus C.!.りoiねtestinalis C.lαli “C. lari variant" C.u戸saliensis C. sputorum biover sputorum biovar bubulus biovar fecalis H. cinaedi H. fennelliae H. pylori H. mustelae *菌株数，

*

* 検出せず供試菌株分離株(7)

*

分離株(1 ) 分離株(6 ) HarveyC-3 分離株(3 ) 分離株(3 ) 729 1723/NTCC11352 10231/7/83 3980/1/83 D1673 D2173 D2225 A3564 A3115 A3112 A3667 CLO-1 CLO-2 NCTC 11639 分離株(4) NCTC 12032 F6 F7 F10 分離株(1 ) 生成したフマル酸と Lーリンゴ酸の量は他の菌株と比較して約1/2と低くそれぞれ0.4μg，2.4μgで、あった. 考察 Lアスパラギン酸は，生体内でT.C.Aサイクルに取り込まれてエネルギー源となり，また核酸合成にも関与する.重要なアミノ酸であることが知られている.今回の実験から Cam汐lobacter及びHelicobacterのすべての菌株がLアスパラギン酸分解能を有することが明らかにされたことから，これらの菌株の菌体内でも同様にエネルギー源，核酸合成に L-アスパラギン酸を利用していることが示唆された.Lアスパラギン酸の分解生成物は低分子有機酸のフマル酸とリンゴ酸であったが，生成物生成量(μg) Lアスノ Tラ L-リンゴ酸フマル酸ギ、ン酸 10.3-12.0 5.2-6.5 1.2-1.5 11.5 5.8 1.1 11.3-14.0 4.6-6.7 1.1司1.4 14.0 4.9 1.0 10.0-11.9 4.9-5.9 1.1-1.3 11.4-13.9 4.1-5.2 0.9-1.9 10.3 5.4 1.1 10.6 5.0 1.3 11.2 5.3 1.2 12.1 5.8 1.1 14.1 5.0 1.0 13.3 5.1 1.1 14.0 4.9 1.1 18.3

*

2.3 18.0 2.4 18.6 2.4 17.4 3.0 16.0 3.1 15.5 2.4 0.4 13.3 5.7 1.0 12.9-13.8 4.6-5.0 0.9 17.5 3.1 15.6 3.1 18.2 2.3 15.6 4.1 16.1 3.1 の量を比較すると，フマル酸のみを生成する菌株とフマル酸とリンゴ酸を生成する菌株では相違が認められる. すなわちフマル酸のみを生成する菌株めフマル酸量は2 -3μgで、あるが，フマル酸とLーリンゴ酸を生成する菌株のフマル酸量は0.9-1.5μgで，前者の約1/2量である. このことはフマル酸とL-リンゴ酸を生成する菌株は，生成されたフマル酸がさらに分解されてレリンゴ酸が生成されたことが推察された. 菌種によりレアスパラギン酸の生成物の相違が認められたことは，生成物により菌種同定の性状として利用できると考えられる. Campylobacter属のうちカタラ ? ゼ陽性群の C.jejuni

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東 京 都 立 衛 生 研 究 所

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0082

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東京都立衛生研究所

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