は じ め に RA や SLE などの自己免疫疾患においては，T-B 細胞間の相互過剰活性化機構が存在する．B 細胞は， B 細胞レセプター（BCR）よる抗原刺激の受容（1st シグナル），T 細胞からの CD40/CD80/CD86 などを 介した共刺激分子の刺激（2ndシグナル），さらには Toll-like Receptor や，濾胞性 T 細胞から産生される IL-4 や IL-21 などのサイトカイン刺激（3rdシグナル） などにより活性化する1）．逆にB 細胞は抗原提示活 性も有し，自己反応性T 細胞の活性化に強く関与 する．すなわち，自己免疫疾患の発症と病態形成の 過程に於いては，B 細胞は抗原提示の stimulator， 並びに，自己抗体産生のresponder として中心的な 役割を担うことが解明されている（図1 ）．このリ ンパ球相互活性化の制御は，RA や SLE の効果的な 治療戦略となる．このような病態形成に関与する特 定の分子を標的として疾患制御を目的とした生物学
特集：
B 細胞と自己免疫
総 説自己免疫疾患における
T 細胞 -B 細胞相互作用の重要性
岩 田 慈，田 中 良 哉The importance of B cell-T cell interaction in autoimmune diseases
Shigeru Iwata and Yoshiya tanaka
The First Department of Internal Medicine, University of Occupational and Environmental Health, Kitakyushu, Japan （Accepted August 5, 2015）
summary
B cells play a pivotal role in the pathogenesis of autoimmune diseases. In addition, B cells require interaction with helper CD4+ T cells to become activated. We assessed change of gene regulatory network that controls B cell differentiation after stimulation with BCR cross-linking, sCD40L, Toll-like Receptor (TLR) and cytokines such as IL-4/IL-21 in vitro. We found that combination with BCR, CD40 and TLR9 or IL-4/IL-21 signal via tyrosine kinases such as Syk/Btk/JAK caused robust gene expression of AICDA, BCL6, XBP1 and IgG production. We found that levels of Syk/Btk phosphorylation in B cells were preferentially higher in RA and SLE patients compared to healthy subjects. RA patients with higher p-Syk levels were signifi-cantly correlated to strongly positive for anti–citrullinated protein antibodies (ACPAs). Treatment with abatacept signifisignifi-cantly reduced the levels of p-Syk in RA peripheral blood B cells, and also reduced the proportion of follicular helper T (Tfh) cells. We highlight tyrosine kinase such as Syk/Btk/JAK as potential targets for inhibiting B cell-T cell interactions in autoimmune diseases such as RA and SLE. We also state recent evidence of these drugs.
Key words Syk; Btk; JAK; RA; SLE
抄 録
自己免疫疾患病態においてB 細胞は病態形成に極めて重要な役割を担うが，その機能発現には T 細胞との相互 作用が極めて重要である．著者らは，ヒト末梢血B 細胞を用いた in vitro 実験により，BCR/CD40/TLR/ サイトカイ ン（IL-4, IL-21）刺激は，Syk, Btk, JAK などのチロシンキナーゼを介したシグナルの活性化により，サイトカイン 産生，分化誘導・クラススイッチに重要なgene network，抗体産生などを多様に制御していることを明らかにした． またRA，SLE 患者末梢血 B 細胞の Syk, Btk のリン酸化は，健常人に比し有意に亢進しており，特に RA 患者にお いては，ACPA 強陽性例において有意に亢進していた．T 細胞選択的共刺激調節剤，CTLA-Ig アバタセプトの投与 により，RA 患者末梢血 CD4 陽性 T 細胞中の Tfh の割合は有意に減少し，さらに B 細胞の Syk のリン酸化も有意 に抑制された．これらの結果より，B 細胞，B-T 細胞の相互作用を標的とした生物学的製剤，さらに Syk, Btk, JAK などのチロシンキナーゼを標的とした阻害剤は自己免疫疾患の制御に有用である可能性が示唆された．本編では， RA や SLE を中心に，B 細胞，B-T 細胞相互作用を標的とした生物学的製剤や Syk, Btk, JAK 阻害剤の最近の知見に ついても概説する．
的製剤，キナーゼ阻害薬による治療が展開されつつ あり，最近の知見についても概説する． B 細胞，B-T 細胞相互作用を標的とした 生物学的製剤による治療 CD20 分子を標的としたキメラ型抗 CD20 抗体リ ツキシマブは，本邦ではCD20 陽性リンパ腫に対 して適応承認されているが，欧米では既にTNF 阻 害薬抵抗性の関節リウマチ（RA）に対して保険 収載されている．治療抵抗性SLE に対し，英国の Leandro，米国の Looney などの報告をはじめ多くの オープン試験で有効性が示され，また本邦でも中～ 重度のSLE を対象とした第 I/II 相試験を実施し， 一定の有効性が認められた2−4）．作用機序に関して は，リツキシマブ投与にて共刺激分子を発現する IgD−CD27−/IgD−CD27+メモリーB 細胞が除去され， ナイーブB 細胞の再構築を生じ，自己抗体産生Ｂ 細胞への分化とB-T 細胞間相互作用を制御して， 自己免疫をリセットした可能性が示唆された5−7）． しかしながら，EXPLORER 試験，LUNAR 試験な どの大規模臨床試験においては有効性を示せず，こ れらの治験のデザインに関してはエントリー基準や プロトコールデザイン，有効性評価基準に再考すべ き余地があると考えられている．ヒト化抗CD20 抗 体オクレリズマブについて，RA については，現在 海外にて治験進行中である（第III 相）8）．一方で， SLE を対象とした臨床試験は一部の症例で効果が認 められたものの，日和見感染症などの問題があり， またヒト型CD20 抗体オファツズマブについても中 止に追い込まれた9）． CD22 は，CD72 や FcγRIIB と同様，B 細胞受容体 （BCR）の抑制性共受容体（co-receptor）としてはた らくことが明らかとなっている．エプラツズマブは ヒト化（IgG1）抗 CD22 モノクローナル抗体である が，そのB 細胞傷害機序として，抗体依存性細胞 傷害（ADCC）による B 細胞除去や，抗体が CD22 に結合することでCD22 が速やかに細胞内に取り
込まれ，non-receptor tyrosine kinase の活性化により CD22 がリン酸化を受け B 細胞のアポトーシスが誘 導されるなどいくつかの機序が想定されている． SLE に対し，現在のところ国内では第 II 相，欧米 で第III 相が終了し，結果が待たれる10）． BAFF は B 細胞活性化因子であり，単球やマクロ ファージ，活性化T 細胞などに発現し，B 細胞上 の受容体と結合し，未成熟B 細胞の生存と分化， 成熟B 細胞の増殖や免疫グロブリンの産生，クラ ススイッチを制御する．BAFF と 33% 相同性を有 し，TNF スーパーファミリーに属する分子として APRIL が知られるが，BAFF と同様に B 細胞の活 性化誘導能を有する．BAFF, APRIL の受容体とし て，BAFF-R, BCMA, TACI の 3 種類が同定され，2 ligands-3 receptor 系を形成する．ベリムマブはファー ジディスプレイ法で作成された完全ヒト抗BAFF 抗体で可溶型のBAFF が受容体に結合するのを妨 げる．ベリムマブは，SLE 患者に対する有効性が 証明され，2011 年 3 月に米国 FDA より承認された （商品名Benlysta）．国内では第 III 相治験が進行中 である．アタシセプトは，BAFF/APRIL が結合する 図1 自己免疫疾患の病態形成における B 細胞の役割
TACI 分子の細胞外領域と，ヒト IgG1 の Fc 領域の 融合蛋白で，BAFF および APRIL の作用を中和す るとともに，B 細胞上のそれらのレセプターへの結 合を阻害する．現在，SLE に対し第 IIb 相試験が進 行中である． CTLA-4 は CD28 よりも CD80/86 との結合活性が 高いことが知られ，T 細胞に負のシグナルを伝達す る．ヒトCTLA-4 の細胞外領域と，ヒト IgG1 の Fc 領域との融合蛋白であるアバタセプトは，抗原提 示細胞上のCD80，86 からの共刺激シグナルを阻害 する，いわゆるT 細胞活性化経路を標的とした生 物学的製剤で，T 細胞選択的共刺激調節剤といわれ ている．著者らは，RA 患者において B 細胞の Syk のリン酸化が健常人に比し亢進しており，さらに ACPA 強陽性例において顕著であることを見いだ した．アバタセプトのB 細胞に対する効果を確認 するため，アバタセプト投与後のB 細胞の Syk の リン酸化の変化について，Flow cytometry を用いて 確認した．アバタセプトの投与により，RA 患者末 梢血CD4 陽性 T 細胞中の濾胞性 T 細胞（Follicular helper T cell: Tfh）の割合は有意に減少し，B 細胞の Syk のリン酸化も有意に抑制された．以上より，ア バタセプトはT 細胞（特に Tfh）への抑制効果を介 し，間接的にB 細胞への抑制効果を示すことが示 唆された11）．本邦では，RA に対し 2010 年 7 月に承 認され，TNF 阻害剤と同等の高い疾患活動性が示 されている．SLE 治療の可能性も検討されたが，第 II 相試験では主要評価項目である 1 年後の再年率に おいて，プラセボ群との有意差をみいだすことがで きなかった． 低分子化合物の可能性 分子標的治療技術の進歩による生物学的製剤の導 入は，関節リウマチ（RA）をはじめとする自己免 疫疾患の治療へ革新的な変化をもたらした．しか し，治療不応症例の存在，製造コスト，安全性など の問題も残した．このような背景のなか，低分子化 合物による細胞内シグナル分子を標的とした創薬 は，経口内服可能で利便性に優れた治療戦略とし て，最近注目を集めている．そこで，シグナル伝達 を媒介するチロシンキナーゼSyk, Btk, JAK の，特 にB 細胞における役割を中心に，その阻害剤の開 発状況と展望を概説する． Syk の B 細胞における役割とその臨床応用 Syk は 1991 年，Taniguchi らによって発見された 72kDa の非受容体型蛋白質チロシンキナーゼであ る．その発現と活性化は広範囲にわたり，T 細胞， Ｂ細胞，肥満細胞，マクロファージ，好中球等の 免疫担当細胞に発現するFc 受容体や T 細胞，B 細 胞受容体（BCR），インデグリンなどの細胞接着に 関与する分子を介した刺激にも関与している12−13）． BCR に多価の抗原が凝集するとβ 鎖に会合する Lyn がγ 鎖の一部である ITAM モチーフをリン酸化 する．このリン酸化部位とSyk が SH2 領域を介し て会合する．更に，γ 鎖の凝集による自己リン酸化 により活性化が進み，その下流に位置する複数のシ グナル伝達経路を活性化することで，様々な生物活 性を発揮する．著者らは，Syk を介する BCR シグ ナルが，TLR9, TRAF6 の optimal な発現誘導に重要 で，その結果，効率的なCpG シグナルの伝達を促 し，強力な増殖，分化誘導を，特にメモリーB 細胞 に齎すことをヒト末梢血において明らかにした14）． 以上の結果より，Syk は自己免疫疾患の B 細胞依存 性の病態形成において重要な役割を担っている可 能性が示唆された．Syk 阻害剤，R788（fostamatinib disodium; R406 のプロドラッグ）は，Syk に対し高 い特異性を持ち，コラーゲン誘導関節炎マウスにお いて炎症や骨破壊に対する有意な抑制効果が確認さ れたが15），RA を対照とした第 III 相試験において有 効性を示せず，2013 年 6 月に開発を断念した． Btk の B 細胞における役割とその臨床応用 Btk は，1952 年 ア メ リ カ の 小 児 科 医 Bruton に よりはじめて報告された伴性無γ-グロブリン血症
（X-linked agammaglobulinemia: XLA）の責任遺伝子 として，1993 年に同定された16）．Btk は，Tec ファミ リーに属する非受容体型チロシンキナーゼであり， 主としてB 細胞に発現し，初期 B 細胞の分化，な らびに成熟B 細胞の活性化と生存，BCR 刺激後の Ca2+動員に重要な制御分子である．したがって， XLA では B 細胞の分化，成熟を欠損するが T 細胞 には異常がなく，細菌感染症に特徴づけられる重症 免疫不全症を呈する17）．Btk は，B 細胞の分化を制 御しており，自己免疫疾患の有力な治療標的分子と なりうる．Btk を過剰発現させたマウスでは，胚中 心の形成，自己抗体産生，形質細胞の増加を認め， SLE 様の症状を呈する18）．SLE モデルマウスにおい
て，Btk の欠損，阻害は疾患進行において顕著な改 善をもたらす19）．またBtk により BCR, TLR7/9 の核 酸認識閾値が低下されることが報告された20）．著者 らは，SLE 患者 B 細胞において，健常人に比し， Btk のリン酸化が有意に亢進していることを明らか にした21）．さらにB 細胞の分化，抗体産生の誘導に おいて，BCR-Btk を介するシグナル伝達は，JAK-STAT シグナルの伝達，特に を介するシグナル伝達は，JAK-STAT1 の核内リン酸 化に影響を及ぼし，IL-21-STAT1 経路を増幅するこ とを明らかにした22）．Btk 阻害薬については，現在 RA に対し，2 つの Btk 阻害剤において臨床試験が 行われている（HM71224; 第 I 相，CC-292; 第 II 相）． JAK の B 細胞における役割とその臨床応用 細胞内チロシンキナーゼのJanus kinase（JAK） にはJAK1, JAK2, JAK3, tyrosine kinase 2（Tyk2）が 知られている．サイトカインがレセプターに結合す ることにより，レセプターに恒常的に会合してい
るJAK がリン酸化され，レセプターのチロシン残
基をリン酸化する．すると細胞内に存在するSTAT
（signal transducer and activator of transcription） が， リン酸化されたレセプターのチロシン残基と会合 し，STAT のチロシン残基のリン酸化がおこる．リ ン酸化されたSTAT は 2 量体を形成し，核内に移行 して転写因子として標的遺伝子の転写活性化を誘導 することにより，細胞の活性化が起こす．JAK 阻 害剤であるtofacitinib は移植の拒絶反応を抑制する 目的で開発された．当初JAK3 に対する特異的阻害 剤と考えられていたが，JAK1, JAK2 に対しても作 用することが知られ，最近ではJAK 阻害剤として 認識されている．B 細胞における役割については不 詳であるが，今回著者らは，ヒトB 細胞において， BCR/CD40/IL-4 の刺激は，AICDA/BCL6/XBP1 など の分化誘導因子を強力に誘導，逆にBACH2 の発現 を抑制し，tofacitinib はそれらの変化をリセットし， 抗体産生を抑制することを明らかにした23）．本邦で もMTX 治療抵抗性の RA に高い有効性が示され， 2013 年 3 月に承認された．その他，JAK1/JAK2 阻 害剤であるruxolitinib は RA に対し，第 II 相試験 が終了している．同じくJAK1/JAK2 阻害剤である baricitinib は，第 III 相試験において MTX や TNF 阻 害剤に抵抗性を示すRA 患者に対し有効性が認めら れた24, 25）． 著者らのin vitro 実験の検討から，ヒト B 細胞に おいて，Syk, Btk は BCR のシグナル伝達に重要で あるとともに，TLR やサイトカインシグナルにも 影響を及ぼし，B 細胞の活性化や分化誘導において 極めて重要な役割を担っていることが明らかとなっ た（図2 ）．Syk, Btk, JAK などのチロシンキナーゼ はRA や SLE などの自己免疫疾患における，B 細 胞を介した病態形成において極めて重要な役割を 担っており，有望な治療標的であると考えられた． お わ り に 近年の免疫シグナル研究の進歩は，新たな分子標 的の解明とその特異的阻害による革新的な治療戦略 を創出した．しかし，その阻害による長期安全性に 関してはエビデンスの蓄積が必要である．今後，分 図2 自己免疫疾患における B 細胞活性化の機序
子標的治療はさらに拡大するものと期待されるが， 基礎研究と臨床研究のトランスレーションによって 分子標的の妥当性を検証していくことが求められる．
文 献
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