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Title
アテロコラーゲンスポンジと自己組織化ペプチドを用い
た三次元培養方法
Author(s)
志賀, 勇昭; 齋藤, 暁子; 小野寺, 晶子; 篠, 宏美; 柴
原, 孝彦; 東, 俊文
Journal
歯科学報, 116(5): 384-384
URL
http://hdl.handle.net/10130/4101
Right
Description
３８４ 学 会 講 演 抄 録
№３：アテロコラーゲンスポンジと自己組織化ペプチドを用いた三次元培養方法
志賀勇昭１）
，齋藤暁子２）
，小野寺晶子２）
，篠 宏美２）
，柴原孝彦１）
，東 俊文２）
１） ２）
（東歯大・口腔顎顔面外科）（東歯大・生化）
目的：アテロコラーゲンスポンジと自己組織化ペプ
チドは硬組織再生の足場材料として有用と報告され
るが，細胞の接着構造形成に一長一短がある。今回
両者を併用した３次元培養を行い，足場材料として
の有用性を検討した。
方法：細胞はマウス前骨芽細胞様細胞（MC３T３-E１），足 場 材 料 は Atelocollagen Sponge（AS）㈱
KOKEN と Self-assembled Peptide Solution（SP）
㈱３D MATRIX，培地は骨細胞誘導培地（OBM）
をそれぞれ用いた。SP を培養ディッシュ上に２５ μl
滴下し，SP 液滴上に AS を整地し SP を AS 内に浸
潤させた後，MC３T３-E１細胞を１×１０６個を AS
内に播種した。さらに AS を裏返し AS 上部から
SP を滴下させた後に OBM に浸漬培養した。培養
したスポンジをホルマリンで固定し，標本作成，
HE 染色を行い内部の状態を観察した。また培養後
スポンジごと細胞を回収し，遺伝子発現量および骨
芽細胞分化に関係する遺伝子解析，タンパク抽出し
ALP 活性測定を行った。
結果：HE 染色にて細胞のスポンジ内への浸潤を確
認した。さらに３次元培養後の継時的な DNA 量の
増加を認めた。また，Real-time PCR による遺伝子
発現定量解析を行ったところ播種の翌日，４日，７
日でそれぞれアルカリフォスファターゼ（ALP）
オステリクス（OSX），骨シアロタンパク質（BSP）
，
インシュリン様増殖因子１（IGF-１），Runx２の継
，
時的な増加を認めた。また SP にコーティングした
群はしなかった群と比較して ALP，OSX，BSP，
Runx２，IGF-１の発現が促進される傾向を示した。
考察：今回，AS および SP を用いた３次元培養に
おいて MC３T３-E１は SP 内への浸潤と良好な増
殖さらに骨分化マーカーの増高を示した。使用した
AS マイティーは最大３０kPa の圧縮荷重でも崩壊し
ない強度のあるコラーゲンスポンジであり，顎骨な
ど咬合力などの外力がかかる場所への移植する際の
足場材料として有用と考える。一方細胞の接着は速
やかでない。SP を複合することにより骨分化マー
カーが促進した。SP は血管，神経，骨の再生に有
用と報告されており，複合することでより有用な足
場材料になりうる可能性が示唆された。
№４：老化促進モデルマウスを用いた咬筋サルコぺニアの検討
星野照秀１）
，山本将仁２）
，阿部伸一２）
，片倉
目的：近年，要支援，要介護の前段階である「虚
弱」の概念が提唱され，主要因のサルコぺニアが注
目されている。口腔領域では咀嚼機能の低下とサル
コぺニアの関連が報告されており，咀嚼の中心的役
割を果たす咀嚼筋にもサルコぺニアが併発し，咀嚼
機能の低下を招くことが推察される。これまで我々
は，老化促進モデルマウス（SAMP８）を用いるこ
とにより，咬筋のサルコペニアに関する基礎実験を
行ってきた。その結果，４０週齢の SAMP８は対照
群（SAMR１）と比較し筋委縮が起きていることが
分かった。しかし，咬筋に筋委縮が起こる時期や筋
委縮の進行について検討した報告はない。本研究
は，咬筋の筋委縮が発症する時期や，その発症後の
進行について検討するために，SAMP８咬筋の加齢
変化を形態学的観点から経時的に観察した。また結
果から，咬筋サルコぺニアについて考察を試みた。
方法：実験動物は１２週齢（若齢期），４０週齢（老齢
期），５５週齢（老齢後期）の SAMP８を用いた。対
照群は正常老化を示す SAMR１を用いた。評価方
法は体重，筋湿重量，筋線維平均横断面積，免疫組
朗１）
（東歯大・口腔病態外科）１）
（東歯大・解剖）２）
織化学的検索（MyHC-Ⅱa，MyHC-Ⅱb 構成比率）
で行った。
結果：SAMP８の体重は緩やかに増加，筋湿重量は
低下傾向を認めた。また，SAMR１と比較して体重
ならびに筋湿重量はいずれの週齢においても経時
的に減少していた。筋線維横断面積は１２週齢と４０
週齢，１２週齢と５５週齢の比較で有意に減少した。
免疫組織化学的染色では１２週齢と５５週齢の比較で
MyHC-Ⅱa の構成比率が上昇，１２週齢と５５週齢，４０
週齢と５５週齢の比較で MyHC-Ⅱb の構成比率が低
下を示した。
考察：SAMR１の結果と比較し，SAMP８咬筋は早
期に加齢変化が起こることが示唆された。筋横断面
積と筋力は比例するとの報告があり，SAMP８咬筋
の筋力低下は４０週齢までに起き，咬筋サルコぺニア
の進行に繋がることが示唆された。MyHC 構成比
率の変化は下肢の筋肉の変化と一致しており，咬筋
にも同様の収縮特性の変化が起きていることが考え
られた。また，この変化が咀嚼機能に影響を及ぼし
ていることが示唆された。
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