Tg-Cyp4f39 −/− マウスにおける CE および WE 量の増加

Cyp4f39の欠損によるOAHFAおよびOAHFA代謝物（Type 1/2ω WdiEと

Chl-OAHFA）以外のマイバム脂質産生への影響を明らかとするために，コントロー

ルマウスと Tg-Cyp4f39^−/−マウスのマイバム脂質を順相系の薄層クロマトグラフ ィー（TLC）によって分離した。順相系 TLC では，薄層板表面のシラノール基 との相互作用によって，極性物質がより強く保持されるため，疎水性の高い物質 の移動度は大きくなる。本研究では，マイバム脂質全体を分離するための展開系

（展開系1）とCEやWEといった疎水性の高い脂質の分離を目的とした展開系

（展開系2）の2種類の展開系を使用した。分離の結果，CEやWEはいずれの 展開系でも最も移動度の大きい位置に検出されたことから，マイバム脂質の中 でも最も疎水性が高い脂質クラスであることが確認された（図 26A）。一方の

OAHFAはChlやリン脂質などの高極性脂質と同様に，いずれの展開系でも移動

度は小さかった。OAHFA代謝物については，代謝物間で分離はほとんどみられ ず，CE/WEとOAHFAの中間の移動度の位置に検出された。したがって，WdiE

やChl-OAHFAはCEやWEとOAHFAの中間程度の極性を有していると考えら

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図 25. Tg-Cyp4f39^−/−マウスマイボーム腺における Type 1ω WdiE および

Chl-OAHFAの消失

（A，B）12ヶ月齢のコントロールマウス [Tg-Cyp4f39^+/+（n=3）] とTg-Cyp4f39

−/−マウス（n=3）のマイボーム腺から脂質を抽出し，Type 1 WdiE（A）および Chl-OAHFA（B）についてLC-MS/MSによるMRM解析を行った。Type 1 WdiEを構 成するFA，水酸化FA，FAlおよびChl-OAHFAを構成するFA，水酸化FAの総 炭素数と総不飽和度ごとのピーク面積（A, B 左図）とピーク面積の合計（A, B 右図）を示す。グラフの下に各脂質クラスの簡略化した構造を示す。グラフの値 は平均値±標準偏差を示し，Student’s t-検定によって有意差を求めた。*P<0.05;

**P< 0.01; nd, not detected

れる。

TLCによるマイバム脂質の分離と検出の結果，CEとWEについてTg-Cyp4f39

−/−マウスでコントロールマウスよりも増加がみられた。そこで，増加している分 子種の詳細を明らかとするために，CE について LC-MS/MS による解析を行っ た。コントロールマウスにおいてはC16–30 の飽和 FAおよび C16–36 の一価不 飽和FAを含むCEが検出された（図26B）。一方のTg-Cyp4f39^−/−マウスにおいて は，多くの分子種がコントロールマウスよりも多く検出され，CEの総量ではコ ントロールの約1.7倍に増加していた。また，特に一価不飽和型の≥C32のFAを 含む分子種について顕著な増加がみられた。この結果は，≥C32 FA が通常は

Cyp4f39 の基質として使用されるのに対し，Tg-Cyp4f39^−/−マウスにおいては，

Cyp4f39の欠損によってこれらのFAがω-ΟΗ FAとならずに，CE合成に使用さ

れたためと考えられる。

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図26. Tg-Cyp4f39^−/−マウスマイボーム腺におけるCEとWEの増加

（A）12ヶ月齢のコントロールマウス（Tg-Cyp4f39^+/+）およびTg-Cyp4f39^−/−マウ スの眼瞼からマイバム脂質を抽出し，展開系 1 [hexane/diethyl ether/acetic acid (90:25:1, v/v)] または展開系2 [hexane/toluene (1:1, v/v)] を用いてTLCによる分 離を行い，銅リン酸試薬による検出を行った。アスタリスクは未同定の脂質分子 種を示す。（B）12 ヶ月齢のコントロールマウス [Tg-Cyp4f39^+/+（n=3）] と

Tg-Cyp4f39^−/−マウス（n=3）のマイボーム腺から脂質を抽出し，CE 分子種について

LC-MS/MSによるMRM解析を行った。CEを構成する FAの総炭素数と総不飽

和度ごとのピーク面積と，図中にピーク面積の合計を示す。グラフの下にCEの 簡略化した構造を示す。グラフの値は平均値±標準偏差を示し，Student’s t-検定 によって有意差を求めた。*P<0.05; **P< 0.01; TG, トリアシルグリセロール; PL, リン脂質

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