OHHO

H

H

N OH O

DLAM-2P

NH N

O H₂N

10

NH N

O H₂N

11

Table 2-3-5

で確認された、

LXXLL

ペプチド等価体であるベンゾジアゼピン化合物の

VDR

阻害活性は、その想定される作用機序から、既存の

VDR

アンタゴニストとは異なる 挙動を示すことが予想された。即ち既存のアンタゴニストはアゴニストと競合的な作用機 序で

VDR

阻害活性を示すため、アゴニスト濃度の増加により

VDR

阻害が減弱するのに対

し、

LXXLL

ペプチド等価体はアゴニストと非競合的な作用機序、即ちアゴニストが

VDR

と結合した後の

VDR

—コアクチベーター相互作用を阻害することで

VDR

阻害活性を示すと 考えられるため、

VDR

阻害活性がアゴニスト濃度に依存せずに一定になるものと予想され た

(Figure 2-3-10)

。

Figure 2-3-10.

想定される作用機序

VDR $

LXXLL $

VDR $

LXXLL

LXXLL

No$transcrip1on VDRE$ TATA$box$

RXR VDR

coac1vator LXXLL

No$transcrip1on VDRE$ TATA$box$

RXR VDR

coac1vator LXXLL

agonist antagonist

VDRE$ TATA$box$

RXR VDR

coac1vator LXXLL

transcrip1on

LXXLL

No$transcrip1on VDRE$ TATA$box$

RXR VDR

coac1vator LXXLL

pep1de$mime1cs

39

そこで、前述の仮説を確かめるべく、アゴニストとして用いた

1,25(OH)

2

D

3の濃度を通 常濃度条件

(3 nM)

と

100

倍の高濃度条件

(300 nM)

で実験を行った結果、

LXXLL

ペプ チド等価体

10

および

11

による

VDR

阻害は、アゴニスト濃度

(3 ~ 300 nM)

の影響をほ とんど受けなかった

(Table 2-3-6)

。一方、セコステロイド骨格を持つ

VDR

アンタゴニス

トである

DLAM-2P

の

VDR

阻害活性は、高濃度のアゴニスト共存によって大きく減弱した

(Table 2-3-6)

。本実験で観察された

LXXLL

ペプチド等価体と

DLAM-2P

のアゴニスト濃 度依存的な

VDR

阻害の挙動の違いは、両者の

VDR

阻害に関する作用機序の違いを示唆す るものと考察している。

Table 2-3-6. VDR

阻害活性に対するアゴニスト濃度依存性評価

compound agonist

IC

₅₀

(µM) IC

₅₀

(µM) 1,25(OH)

₂

D

₃

1,25(OH)

₂

D

₃

(3 nM) (300 nM) 10 17 (68%)

^a

23 (59%)

^a

11 >30 (47%)

^a

30 (53%)

^a

DLAM-2P

^b

0.22 (98%)

^c

3.3 (66%)

^c

a

inhibition ratio at 30 µM,

^b

VDR antagonist,

c

inhibiton ratio at 10 µM

OH HO

H

H

N OH O

DLAM-2P

NH N

O H₂N

10

NH N

O H₂N

11

2-3-7. VDR

以 外 の 核 内 受 容 体 に 対 す る 阻 害 活 性 評 価

LXXLL

配列を介したコアクチベーターによる核内受容体の転写活性化は、核内受容体全

般に共通するメカニズムである。それゆえ創製した

LXXLL

ペプチド等価体の他の核内受容 体に対する選択性を評価するため、

ER

に対するレポータージーンアッセイを行った

(Table 2-3-7)

。その結果、化合物

10

は

ERα

に対してほとんど阻害活性を示さなかったが、

ERβ

に対しては弱いながらも阻害活性を示した。また化合物

11

は

ERα

、

ERβ

の両者に対 してほとんど阻害活性を示さなかった。

Table 2-3-7. ER

に対する選択性評価

LXXLL

ペプチド等価体の各核内受容体に対する選択性の違いは、核内受容体の

LXXLL

配列認識部位の構造差異、および核内受容体と結合したコアクチベーターの活性コンフォ メーションの違いによるものだと考察している。以下に具体的な差異について記述する。

まず核内受容体の

LXXLL

配列認識部位の構造差異

(Figure 2-3-11)

について記す。

compound agonist

ERα ERβ IC ₅₀ ( µ M) IC ₅₀ ( µ M)

estradiol estradiol

10 >30 (8%) ^a 22

11 >30 (8%) ^a >30 (18%) ^a

a inhibition ratio at 30 µM

41

Figure 2-3-11.

各核内受容体における

LXXLL

配列認識部位の構造差異

a)：VDR (PDB ID: 1RK3) 、b)：ERα (PDB ID: 3ERD) 、c)：ERβ (PDB ID: 1ZAF) より作成した。各核 内受容体におけるH12対応部位をピンクで示した。d)：VDR(PDB ID: 1RK3)の拡大図。VDRに特徴的な 部位を黄色で表示した。

a)

b) c)

d)

ドキュメント内 タンパク質間相互作用に着目したVDR阻害薬ならびにPlk1阻害薬の創製研究 (ページ 45-49)