Hep38.7-Tet 細胞の細胞内 HBV 複製能

Hep38.7-Tet細胞のcore DNA産生能を検討するため，5.2.2.と同様な方法で回収した細胞

から精製したcore DNAを測定した。培養開始時，3，6，9及び12日目のcore DNAをreal time

５３

PCR法及びsouthern blot法で測定した結果を図16に示した。Hep38.7-Tet細胞のcore DNA はHBV誘導開始から12日目まで経時的に増加し，HepAD38細胞のcore DNA量と比べて，

いずれの測定時点でも2～4倍高い産生量であった（A）。またsouthern blot法でのHep38.7-Tet 細胞のcore DNAの経時変化はreal time PCR法と同様な結果を示した（B）。

A Core DNA（Real time PCR）

B Core DNA（Southern blot）

図 16 Hep38.7-Tet 細胞の core DNA 量の経時変化

*培養開始時，3，6，9及び12日目のHepAD38細胞及びHep38.7-Tet細胞から精製したcore DNAをreal time PCR法及びsouthern blot法で測定した。HBV DNAであるrelaxed circular DNA（RC），double stranded linear DNA （DSL），single stranded DNA（SS）の泳動位置を示した。

次にHep38.7-Tet細胞のHBV RNA転写能を検討するため，5.2.2.と同様な方法で回収した 細胞から精製したtotal RNA中のHBV RNAを測定した。培養開始時，3，6，9及び12日目 のHBV RNAをRT-real time PCR法及びnorthern blot法で測定した結果を図17に示した。

Hep38.7-Tet細胞のHBV RNAはHBV誘導開始から6日目まで経時的に増加し，HBV誘導 停止した6日目以降は低下した。またHep38.7-Tet細胞のHBV RNA量はHepAD38細胞の

５４

HBV RNA量と比べて，いずれの測定時点でも2～3倍高い産生量であった（A）。またnorthern blot法でのHep38.7-Tet細胞のHBV RNAの経時変化はRT-real time PCR法と同様な結果を示 した（B）。さらに精製したtotal RNA中のpre-core mRNAを測定した。培養開始時，3，6，

9及び12日目のpre-core mRNAをRT-PCR法で測定した結果を図18に示した。Hep38.7-Tet

細胞のpre-core mRNA量はHBV誘導開始から6日目まで経時的に増加し，HBV誘導停止し

た6日目以降も分解されず，細胞内に安定に存在していた。

A HBV RNA（RT-real time PCR）

B HBV RNA（Northern blot）

図 17 Hep38.7-Tet 細胞の HBV RNA 量の経時変化

*培養開始時，3，6，9及び12日目のHepAD38細胞及びHep38.7-Tet細胞から精製したHBV RNAをRT-real time PCR法及びnorthern blot法で測定した。HBV RNAであるHBV pgRNA（3.5 kb），surface mRNAs（2.4 kb， 2.1 kb）の泳動位置を示した。

５５

図 18 Hep38.7-Tet 細胞の pre-core mRNA 量の経時変化

*培養開始時，3，6，9及び12日目のHep38.7-Tet細胞から精製したHBV pre-core mRNAをRT-PCR法で測 定した。

さらにHep38.7-Tet細胞のHBVタンパクの発現能を検討するため，5.2.2.と同様な方法で

HBV誘導した細胞内HBc タンパクを測定した。培養12日目のHep38.7-Tet細胞とHepG2 細胞のHBcタンパクを免疫染色した結果を図19に示した。Hep38.7-Tet細胞はHBcタンパ クが検出されたが，HepG2細胞ではHBcタンパクは検出されなかった。

これらの結果より，Hep38.7-Tet細胞の細胞内ではcccDNA産生，HBV mRNA転写，core DNA産生のウイルス複製が起こっていることが確認された。

図 19 Hep38.7-Tet 細胞の HBc タンパクの検出

*培養12日目のHepG2細胞及びHep38.7-Tet細胞のHBcタンパクを免疫染色した。