実 験 の 部
旋光度は日本分光DIP-360、およびJASCO DIP-1000 K UY (l = 5, 測定温度24~29ºC) を 用いて測定した。質量スペクトル (MS) は日本電子JEOL JMS-DX 303HFおよび HX-110 を用いて測定した。IR スペクトルは、日本電子JIR-6500W赤外線分光計を用いて測定 した。UVスペクトルはU-3200型日立紫外-可視分光光度計により測定した。
1Hおよび 13C-NMRスペクトルは、JEOL GX-400 MHz、α-500MHz spectrometerを用い た。Chemical shift は両者ともtetramethylsilane (TMS) を内標準物質とする δ 値 (ppm) で表示し、結合定数Jはヘルツ (Hz) で表記した。なお、シグナルの表示は次の略号に よった。s: singlet, d:doublet, t: triplet, q: quartet, m: multiplet, dd: double doublet, br: broad.
TLCはKieselgel 60F254 (0.2 mm, Merck) を用い、検出はUVランプ (Ultra-Violet Prod.
UVGL-58, 254/366 nm) および10% 硫酸試薬噴霧後加熱による呈色法で行った。
カラムクロマトグラフィーは、Kieselgel 60 (70-230 mesh, 230-400 mesh, Merck)、
Sephadex LH-20 (25-100 µm, Pharmascia Fine Chemicals), MCI gel CHP-20P (75-150 µm, 三 菱化成), Chromatorex ODS (30-50 µm, Fuiji Silysia Chemical Ltd.), Chromatrex NH (200-350 mesh, Fuji Silysia Chemical Ltd.) を使用した。
第1 章に関する実験
第1節 抽出・分離
小金牛草（乾燥全草、広州市薬材公司から購入し、河北省薬品検験所孫宝恵副主任薬 師によって鑑定された。標本は河北省薬品検験所中薬室に保存する）1.5 kgを95% EtOH を用いて抽出、エキス198.4 gを得た。それを適量のhexaneにて還流して、hexane可溶 部 (148 g) とhexane不溶部 (49.5 g) に分けた。Hexane可溶部の一部2.1 gを取り、さら にMeOH可溶部 (1.5 g) とMeOH 不溶部 (0.6 g) に分けた。 MeOH 不溶部はsilica gel カラムによって、PT-1 (9) を得た。MeOH可溶部はSephadex LH-20 (MeOH) およびsilica gel (C:M=30:1→10:1→C:M:H=9:2:0.1) カラムに掛けて、Telephiose A (1) (10 mg) 、
Telephiose B (2) (8 mg) およびTelephenone E (5) (6 mg) を得た。一方、hexane不溶部 (49.5 g) はDiaion HP-20カラムに付し、H2O→30% MeOH→50% MeOH→80% MeOH→MeOH 漸次溶出して、80% MeOH流出部 (18.4 g) を得た。80% MeOH洗脱部 (2.2 g) は
Chromatotex ODSカラムに付し、30%~50% MeOHで溶出し、Fr. 1~15に分離した。その 中、Fr. 3 (81 mg) からSephadex LH-20 (MeOH) およびsilica gel カラム (C:M:W=8:2:0.1
→7:3:0.5) を経て、さらにTelephenone A (6) (7 mg) とTelephenone C (8) (6 mg) を得た。
Fr. 4 (137 mg) は二度のsilica gelカラム (C:M:W=8:2:0.1→7:3:0.5) (C:M:W=15:5:0.6) によ って、Telephenone B (7) (6 mg) を得た。Fr. 9 (116 mg) はsilica gel (C:M:W=8:2:0.1→7:3:0.5) およびChromatotex ODSカラム (30~40% MeOH) によって、PT-17 (10) (4 mg) を単離し た。Fr. 11 (39 mg) からSephadex LH-20カラム (MeOH) を経て、Telephiose C (3) (11 mg) を得た。さらに、Fr. 14 (191 mg) はsilica gel (C:M:W=9:1:0.1→8:2:0.2→7:3:0.5) および Chromatotex ODSカラム (50~55% MeOH) にかけて、Telephenone D (4) (34 mg) を分離し た。
第2節 成分の解明 Telephiose A (1)
無晶形粉末。
[α]D –11.0° (c=0.45, MeOH).
Negative FAB-MS (m/z): 795 [M-H]-.
1H-NMR: Table 1参照。
13C-NMR: Table 1参照。
Telephiose B (2) 無晶形粉末。
[α]D –17.6° (c=0.40, MeOH).
Negative FAB-MS (m/z): 795 [M-H]-.
1H-NMR: Table 2 参照。
13C-NMR: Table 2 参照。
Telephiose C (3) 無晶形粉末。
[α]D -19.5° (c=0.48, MeOH).
Positive FAB-MS (m/z): 713 [M+H]＋, 735 [M+Na]＋.
1H-NMR: Table 3参照。
13C-NMR: Table 3参照。
Telephiose D (4) 無晶形粉末。
Negative FAB-MS (m/z): 837 [M-H]-.
1H-NMR: Table 4 参照。
13C-NMR: Table 4 参照。
Negative FAB-MS (m/z): 795 [M-H]-.
1H-NMR: Table 5 参照。
13C-NMR: Table 5 参照。
Telephenone A (6) 黄色粉末。
[α]D –10.4° (c=0.35, pyridine).
IR γKBr max cm-1: 3300 (OH), 1616 (C=O).
UV λMeOH max : 211, 314 nm.
Negative FAB-MS (m/z): 437 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 3.69 (3H, s, OCH3), 4.13 (1H, m, glc H-5), 4.40 (glc H-3), 4.44 (glc H-4), 4.44 (glc H-6), 4.48 (1H, dd, J=2.4, 11.6 Hz, glc H-6’), 4.90 (1H, dd, J=8.5, 9.8 Hz, glc H-2), 5.84 (1H, d, J=9.8 Hz, glc H-1), 6.49 (1H, s, H-5’), 6.90 (1H, d, J=8.6 Hz, H-5), 7.70 (1H, dd, J=2.1, 8.1 Hz, H-6), 8.04 (1H, d, J=2.4 Hz, H-2).
13C-NMR: Table 6 参照。
Telephenone B (7) 黄色粉末。
[α]D –14.5° (c=0.30, pyridine).
IR γKBr max cm-1: 3300 (OH), 1615 (C=O).
UV λMeOH max: 210, 314 nm.
Negative FAB-MS (m/z): 451 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 3.68 (3H, s, 4-OCH3), 3.70 (3H, s, 3-OCH3), 4.13 (1H, m, glc H-5), 4.40 (glc H-3), 4.44 (glc H-4), 4.44 (glc H-6), 4.48 (1H, dd, J=2.4, 11.6 Hz, glc H-6’), 4.90 (1H, dd, J=8.5, 9.8 Hz, glc H-2), 5.84 (1H, d, J=9.8 Hz, glc H-1), 6.49 (1H, s, H-5’), 6.90 (1H, d, J=8.6 Hz, H-5), 7.70 (1H, dd, J=2.1, 8.1 Hz, H-6), 8.04 (1H, d, J=2.4 Hz, H-2).
13C-NMR: Table 7 参照。
Telephenone C (8) 黄色粉末。
[α]D +22.8° (c=0.29, pyridine).
IR γKBr max cm-1: 3300 (OH), 1615 (C=O).
Negative FAB-MS (m/z): 423 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 4.01 (glc H-5), 4.31 (glc H-6), 4.40 (glc H-6’), 4.40 (glc H-4), 4.42 (glc H-3), 4.58 (1H, dd, J=9.2, 9.8 Hz, glc H-2), 5.66 (1H, d, J=9.8 Hz, glc H-1), 7.10 (1H, dd, J=7.9, 7.9Hz, H-5), 7.21 (1H, ddd, J=2.4, 2.4, 7.9 Hz, H-6), 7.24 (1H, ddd, J=2.4, 2.4, 7.9 Hz, H-4), 7.81 (1H, dd, J=2.4, 2.4 Hz, H-2).
13C-NMR: Table 8 参照。
PT-1 (9) 黄色粉末。
UV λMeOH max: 206, 240, 257, 315, 362 nm.
Negative FAB-MS (m/z): 421 [M-H]- .
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 4.20 (1H, m glc H-5), 4.43 (glc-3), 4.47 (glc-4), 4.50 (glc-6), 4.59 (glc-6’), 5.24 (glc-2), 6.63 (1H, s H-4), 7.17 (1H, s H-5), 8.12 (1H, s H-8).
13C-NMR (pyridine-d5) δ: 157.6 (C-1), 94.4 (C-2), 165.4 (C-3), 108.9 (C-4), 103.4 (C-5), 152.1 (C-6), 156.1 (C-7), 109.3 (C-8), 180.4 (C-9), 163.3 (C-4a), 145.6 (C-4b), 113.2 (C-8a), 102.9 (C-9a), 75.6 (glc C-1), 72.8 (glc C-2), 80.8 (glc C-3), 72.1 (glc C-4), 83.0 (glc C-5), 62.9 (glc C-6).
PT-17 (10) 黄色粉末。
UV λMeOH max : 210, 257, 354 nm.
H-8), 6.70 (1H, d, J=1.8 Hz, H-6), 7.28 (1H, d, J=8.5Hz, H-5’), 8.05 (1H, dd, J=1.8, 8.5 Hz, H-6’), 8.46 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2’).
13C-NMR (pyridine-d5) δ: 157.6 (C-2), 135.0 (C-3), 178.6 (C-4), 162.6 (C-5), 99.8 (C-6), 165.8 (C-7), 94.6 (C-8), 157.5 (C-9), 105.2 (C-10), 122.6 (C-1’), 116.2 (C-2’), 146.7 (C-3’), 150.7 (C-4’), 117.9 (C-5’), 122.4 (C-6’), 104.5 (glc C-1), 76.0 (glc C-2), 78.6 (glc C-3), 71.3 (glc C-4), 78.9 (glc C-5), 62.6 (glc C-6).
第3節 Telephiose D の安定性実験
0 3 6 (days)
2071025 2069610 2057778
2090470 2080133 2087893
5ºC
2043303 2059331 2063711
23704.23 10401.24 15952.44
35ºC 2071025 2023429 2043303
2090470 2070520 2000133
2043303 2045761 2018615
23704.23 23555.92 21659.22
55ºC 2071025 2011594 1972843
2090470 1991347 1925511
2043303 1997352 1956232
23704.23 10399 24013.97
1937694 1932364 1898538
1905780 1899657 1941410
1930567 1928832 1915611
16751.58 17950.88 21583.5
B35ºC 1937694 1898240 1842777
1905780 1859681 1874520
1930567 1866266 1826415
16751.58 20625.61 24458.89
B55ºC 1937694 1850106 1792255
1905780 1878538 1781511
1930567 1839687 1835996
16751.58 20109.43 28859.79
0 3 6 (days)
2071025 2069610 2057778
2090470 2080133 2087893
5ºC
2043303 2059331 2063711
23704.23 10401.24 15952.44
35ºC 2071025 2023429 2043303
2090470 2070520 2000133
2043303 2045761 2018615
23704.23 23555.92 21659.22
55ºC 2071025 2011594 1972843
2090470 1991347 1925511
2043303 1997352 1956232
23704.23 10399 24013.97
1937694 1932364 1898538
1905780 1899657 1941410
1930567 1928832 1915611
16751.58 17950.88 21583.5
B35ºC 1937694 1898240 1842777
1905780 1859681 1874520
1930567 1866266 1826415
16751.58 20625.61 24458.89
B55ºC 1937694 1850106 1792255
1905780 1878538 1781511
1930567 1839687 1835996
16751.58 20109.43 28859.79 B5°C
第3 章に関する実験
第2節 マウス血中濃度に金牛草の影響
morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine+PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E
6.61 4.46 3.76 4.57 9.28 3.38 9.06 6.33 7.14 5.77 3.10 2.73 3.11 2.79 2.25 5.25 3.10 5.52
3.45 2.62 2.84 1.97 2.31 3.74 4.58 5.03 1.86 2.85 2.54 0.85 1.29 0.54 3.86 2.95 1.57 0.76
3.01 1.56 1.50 4.50 1.09 0.99 1.30 1.17 3.18 3.05 0.29 1.96 0.46 0.86 0.34 1.80 0.55 1.09
1.52 1.10 1.01 0.48 0.37 0.15 0.22 0.39 0.81 1.33 1.25 0.25 0.20 0.24 0.14 0.00 0.70 0.00
0.49 0.21 0.17 0.13 0.47 0.09 0.47 0.12 0.17 0.19 0.26 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.08 30 min 60 min 90 min 120 min 180 min
morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine morphine+PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E morphine+ PT-E
6.61 4.46 3.76 4.57 9.28 3.38 9.06 6.33 7.14 5.77 3.10 2.73 3.11 2.79 2.25 5.25 3.10 5.52
3.45 2.62 2.84 1.97 2.31 3.74 4.58 5.03 1.86 2.85 2.54 0.85 1.29 0.54 3.86 2.95 1.57 0.76
3.01 1.56 1.50 4.50 1.09 0.99 1.30 1.17 3.18 3.05 0.29 1.96 0.46 0.86 0.34 1.80 0.55 1.09
1.52 1.10 1.01 0.48 0.37 0.15 0.22 0.39 0.81 1.33 1.25 0.25 0.20 0.24 0.14 0.00 0.70 0.00
0.49 0.21 0.17 0.13 0.47 0.09 0.47 0.12 0.17 0.19 0.26 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.08 30 min 60 min 90 min 120 min 180 min
第4 章 に関する実験
第1節 抽出・分離
大金牛草（乾燥全草、広西省柳州市薬材公司から購入し、河北省薬品検験所孫宝恵 副主任薬師によって鑑定された。標本は河北省薬品検験所中薬室に保存する）475 g、
MeOHを用いて抽出、エキス97.2 gを得た。それを適量のhexane にて還流脱脂し、得ら れたエキス94.0 gをH2OとAcOEtで溶媒間分配して、H2O部とAcOEt部 (12.1 g) に分 けた。AcOEt部をsilica gel (C:M=20:1→15:1→10:1→C:M:H=9:1:0.1→8:2:0.2→7:3:0.5→
MeOH) カラムに掛けて、Fr. 1~16 に分離した。その中、Fr. 1 (126 mg), fr. 2 (64 mg), Fr. 3 (601 mg) はいずれも脂肪酸である。Fr.13 (923 mg) は Chromatotex ODSカラムに付し、
40%~60% MeOHで溶出、Fr. 1~4 に分離した。その Fr. 2 (122 mg) はPC-2である。Fr.14 (661 mg) はChromatotex ODSカラムに付し、40%~50% MeOH で溶出、Fr. 1~3 に分離し た。Fr. 2 (93 mg) はSephadex LH-20 (20% MeOH) によって、PC-3 (46 mg) を得た。一方、
水溶出部はDiaion HP-20カラムに付し、H2O→MeOH 溶出して、H2O溶出部とMeOH溶 出部 (17 g) に分けた。 MeOH溶出部 (14.0 g) はSephadex LH-20 (40~75% MeOH) を経 て、Fr. 1~6 に分離した。そのFr. 4 をsilica gel カラム (C:M:W=9:1:0.1→8:2:0.2→7:3:0.5) をかけて、PC-1 (27 mg) を得た。Fr. 6 (1.4 g) はsilica gel カラム (C:M:W=9:1:0.1→MeOH) をかけて、PC-4 (865 mg) を単離した。
第2節 成分の解明 PC-1 (11)
浅黄色粉末。
Negative FAB-MS (m/z): 753 [M-H]-.
1H-NMR: Table 9 参照。
13C-NMR: Table 9 参照。
PC-2 (12) 黄色粉末。
Negative FAB-MS (m/z): 593 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 1.50 (3H, s, rha H-6), 4.00 (1H, glc H-3), 4.00 (1H, rha H-3), 4.11 (1H, rha H-4), 4.18 (1H, glc H-4), 4.28 (1H, glc H-2), 4.28 (1H, glc H-5), 4.28 (1H, rha H-5), 4.30 (1H, glc H-6), 4.41 (1H, glc H-6), 4.54 (1H, d, J=9.8 Hz, rha H-2), 5.35 (1H, s, rha H-1), 6.00 (1H, d, J=7.3 Hz, glc H-1), 6.72 (1H, d, J=9.2 Hz, H-5), 6.72 (1H, d, J=9.2 Hz, H-6), 7.29 (1H, d, J=8.5 Hz, H-3’ ), 7.29 (1H, d, J=8.5 Hz, H-5’ ), 8.46 (1H, d, J=9.2 Hz, H-2’), 8.46 (1H, d, J=9.2 Hz, H-6’).
13C-NMR (pyridine-d5) δ: 158.2 (C-2), 135.2 (C-3), 178.7 (C-4), 162.7 (C-5), 99.8 (C-6), 165.9 (C-7), 94.6 (C-8), 157.7 (C-9), 105.2 (C-10), 122.9 (C-1’), 117.9 (C-2’), 146.7 (C-3’), 150.7 (C-4’), 116.3 (C-5’), 122.6 (C-6’), 104.9 (glc C-1), 72.6 (glc C-2), 71.3 (glc C-3), 74.0 (glc C-4), 76.0 (glc C-5), 72.2 (glc C-6), 102.6 (rha C-1), 68.5 (rha C-2), 69.6 (rha C-3), 77.5 (rha C-4), 78.7 (rha C-5), 18.5 (rha C-6).
PC-3 (13) 黄色粉末。
Negative FAB-MS (m/z): 609 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 1.50 (3H, s, rha H-6), 4.00 (1H, glc H-3), 4.00 (1H, rha H-3), 4.11 (1H, rha H-4), 4.18 (1H, glc H-4), 4.28 (1H, glc H-2), 4.28 (1H, glc H-5), 4.28 (1H, rha H-5), 4.30 (1H, glc H-6), 4.41 (1H, glc H-6), 4.54 (1H, d, J=9.8 Hz, rha H-2), 5.35 (1H, s, rha H-1), 6.00 (1H, d, J=7.3 Hz, glc H-1), 6.64 (1H, d, J=1.8 Hz, H-8), 6.68 (1H, d, J=1.8 Hz, H-6), 7.36 (1H, d, J=8.5 Hz, H-5’), 8.12 (1H, dd, J=2.4, 8.5 Hz, H-6’), 8.36 (1H, d, J=2.4 Hz, H-2’).
(glc C-3), 74.0 (glc C-4), 76.0 (glc C-5), 72.2 (glc C-6), 102.6 (rha C-1), 68.5 (rha C-2), 69.6 (rha C-3), 77.5 (rha C-4), 78.6 (rha C-5), 18.5 (rha C-6).
PC-4 = (9) 黄色粉末。
Negative FAB-MS (m/z): 421 [M-H]-.
1H-NMR (pyridine-d5) δ: 4.20 (1H, m glc H-5), 4.43 (glc-3), 4.47 (glc-4), 4.50 (glc-6), 4.59 (glc-6’), 5.24 (glc-2), 6.63 (1H, s H-4), 7.17 (1H, s H-5), 8.12 (1H, s H-8).
13C-NMR (pyridine-d5) δ: 63.0 (glc C-6), 72.1 (glc C-4), 72.9 (glc C-2), 75.6 (glc C-1), 80.7 (glc C-3), 83.0 (glc C-5), 94.4 (C-4), 102.9 (C-9a), 103.5 (C-5), 108.9 (C-2), 113.3 (C-8a), 145.6 (C-7), 152.1 (C-6), 156.1 (C-4b), 157.6 (C-4a), 163.3 (C-1), 165.4 (C-3), 180.4 (C-9).
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