過去 6 年間に検出した腸管出血性大腸菌（EHEC）のPFGEパターン
4 結 果 4. 1 AOC の季節的変動
4 結 果
より優位に高値を示した。この時期，植物プランクト ンのAnabaena sp.が異常発生しアオコ形成が観察され た。このことは，上流におけるAOC上昇はアオコ形成 と関連すると考えられ，プランクトン発生により細菌 に同化されやすい有機炭素が増加した可能性が示唆 された。
以上のことから，AOCは環境水の検査にも応用が可 能であることが示されたが，試験法の簡便化と被検菌 の改良が必要と考えられた。
参 考 文 献
1 ） 佐々木久雄，小山孝昭，粟野健，三沢松子，阿部
郁子，大庭和彦：宮城県保健環境センター年報，22，
169，（2004）．
2 ） 金子光美： 飲料水の微生物学 ，（1992），（技報 堂出版）．
3 ）Kooij D.van der, Veenendaal H. R.: Determination of the Concentration of Easily Assimilable Organic Carbon
（AOC）in Drinking water with Growth Measurements Using Pure Bacterial Cultures, THE AOC manual,
（1995）,（KIWA）．
4 ） 上水試験方法 解説編，p935（2001），（社団法人 日本水道協会）．
1 は じ め に
生あん中のシアン化合物については，食品衛生法に おいて「シアン化合物の検出されるものであってはな らない」と定められている。また，その場合の検出法 として，穀類・豆類・果実等のシアン化合物試験法を 準用している。即ち，生あん中に含有するシアン及び シアン配糖体中のシアンを遊離シアン総量として測定 する方法で，本県ではそれに基づき標準作業書（SOP）
を作成し，生あんの検査を行っている。
今回，生あんの収去検査で，定性試験（ピクリン酸 紙法）で陽性を示したが，定量試験（硝酸銀滴定法）
で陰性となった事例があり，その原因調査を行った結 果，漂白剤として使用された次亜硫酸ナトリウムが，
二酸化硫黄として残存したことによる疑陽性であった ことを確認したので報告する。
2 方 法
2. 1 シアン化合物の検査法
シアン化合物の定性試験はピクリン酸紙法（図1 ） で，定量試験法は硝酸銀滴定法（図2 ）で行った。
2. 2 二酸化硫黄の検査法
二酸化硫黄の検査は，滴定法と比色法1）があり，本 来はまず滴定法で測定し，滴定量0.1ml以下の物につ いては比色法を用いるようにしている。今回はどの程 度二酸化硫黄が含まれているか見当がつかず，また検 体量の残量が少なかったことから初めから比色法で行 うことにした。比色法は食品衛生検査指針をもとに作 成した標準作業書（SOP）に従い行った。この方法は，
二酸化硫黄として0.05〜2.0μg/mlの範囲で直線性があ り，定量下限値は0.5mg/kgである。
2. 3 二酸化硫黄の影響確認試験
シアン化合物，二酸化硫黄のいずれも検出されなかっ
た生あんに，シアン化合物定性試験で陽性を示した生 あんの製あん所で使用していた漂白剤（製品名ハイド ロサルファイト，次亜硫酸ナトリウム94％含有）及び 二酸化硫黄標準品を添加し，定性試験における影響を 検討した。
水と生あんをブランクとし，シアンの絶対量で0.2，
1.0，5.0，10.0，15.0μgを水に添加して標準対照とした。
添加確認試験は，今回シアン化合物定性試験法で陽性 を示した生あん中に残存していた二酸化硫黄の濃度が 0.024g/kg即ち24μg/mlであったこと，添加物使用基 準として定められている二酸化硫黄としての最大残存
生あん中のシアン定性試験で疑陽性反応を示した事例
A Case of False Positive for The Determination of Cyanide in Bean Paste Using Picric-acid Method
佐藤 由紀 千葉 美子 H岡 勝悦 川向 和雄＊1
Yuki SATO，Yoshiko CHIBA，Syouetsu KUZUOKA Kazuo KAWAMUKAI
＊1 現 食と暮らしの安全推進課
キーワード：生あん；疑陽性反応；ピクリン酸紙法
Keywords：bean past；false positive；picric-acid method
生あん（乾燥重量として10g）
│ ←クエン酸緩衝液（pH5.9）50ml ピクリン酸紙を吊るしたコルク栓で密栓
│ 25〜35℃ 3 時間放置
│ │ ←酒石酸 2g
再び密栓
│ 50〜60℃ 1 時間放置 ピクリン酸紙の色調を判定
（陰性:黄色 陽性:淡褐色から赤褐色）
図 1 定性試験（SOP № C022-2）
生あん（乾燥重量として 10g）
│ ←クエン酸緩衝液（pH5.9）200ml 密栓，混合
│ 25〜35℃ 3 時間放置 水蒸気蒸留
1%KOH 5ml でアルカリ捕集 溜液 150ml を採取
│ ← p-ジメチルアミノベンジリデンローダニン溶液 0.5ml 0.01N 硝酸銀溶液で滴定
図 2 定量試験（SOP № C022-1）
量が0.030g/kg即ち30μg/mlであることから，最大添 加量を30μg/mlとし，水と生あんにそれぞれ二酸化硫 黄を5，10，20，30μg/mlの濃度になるように添加し，
対照と比較することにより判定を行った。また，製あ ん所で使用していた漂白剤のハイドロサルファイト を，二酸化硫黄として5，10，20，30μg/mlの濃度に なるように添加し，同様に対照と比較することにより 判定を行った。
3 結 果
3. 1 シアン化合物の検査結果
定性試験は，食品衛生検査指針2）によりシアンの絶 対量が0.2μgで淡褐色，15μgで褐色，50μ-50gで赤褐 色へと色調が変化するのを肉眼で比較判定すると定め られていることから，定性の対照としてシアン絶対量 を0.2，15，50μgとした。その結果収去品の含有量は 0.2μgと15μgの間にあると判定した。その後実施し た定量試験（硝酸銀滴定法）で確認したところ定量下 限値未満であった。
3. 2 二酸化硫黄検査の検査結果
定性試験で陽性を示した生あんから，二酸化硫黄とし て0.024g/kgが検出された（図3 ）。これは製あん所の漂 白剤の使用濃度から計算した値とほぼ一致していた。
3. 3 二酸化硫黄の影響確認試験結果
漂白剤を使用していない生あんに漂白剤及び二酸化 硫 黄 標 準 液 を 段 階 的 （ 二 酸 化 硫 黄 残 存 値 と し て 0.005g/kg〜0.030g/kg）に添加し，ピクリン酸紙によ る呈色状況を検討した。その結果，漂白剤，二酸化硫 黄 標 準 液 の い ず れ に お い て も ， 二 酸 化 硫 黄 と し て
0.005g/kg以上残存すると呈色を示し陽性と判定され
る（疑陽性）ことが確認された。
4 ま と め
今回生あんの収去検査で，定性試験（ピクリン酸紙 法）で陽性を示したが，定量試験（硝酸銀滴定法）で 陰性となった事例があり調査を行った。この事例で，
生あんに漂白剤を使用している場合，シアン化合物のピ クリン酸紙法による定性試験で疑陽性を示すことが判明 した。このため，生あんのシアン化合物検査では，製 あん所における漂白剤の使用の有無を確認するととも に二酸化硫黄の検査も実施する必要性が示唆された。
5 謝 辞
本検査にあたり，試料採取及び情報収集にご協力頂き ました塩釜保健所食品薬事班の方々に深謝致します。
参 考 文 献
1 ）日本食品衛生協会編： 食品衛生検査指針 食品添 加物編 ，p.108（2003），（（社）日本食品衛生協会）．
2 ）日本食品衛生協会編： 食品衛生検査指針 理化 学編 ，p.326（1991），（（社）日本食品衛生協会）．
図 3 二酸化硫黄の検査結果
1 は じ め に
宮城県内産海産物の食の安全を確保するため，漁場 に流入する河川の微生物学的リスクアセスメントを調 査し，この結果を魚介類による食中毒防止対策等に役 立てることを目的に，プロジェクト研究「微生物汚染 と環境」が開始された1）。その一環として，鳴瀬川水 系の河川水について一年間，一般細菌数，大腸菌群等 の細菌学的調査，大腸菌群については簡易検査法であ るコリラート法を用いて行ったので報告する。
2 調 査 方 法 2. 1 調査地点
鳴瀬川水系の上流（漆沢ダム），中流（三本木橋付 近），下流（河口）の3地点を定点とし，月一回採水，
これを検体とした。また，漆沢ダムに流入する唐府沢 川および鳴瀬川の2地点では，大腸菌群および大腸菌 について検査を行った。採水地点を図1に示した。
2. 2 調査期間
上流，唐府沢川，鳴瀬川；
平成16年5月から平成16年12月まで 中流，下流；平成16年4月から平成17年3月まで 2. 3 一般細菌数の検査法
検水1mlを普通寒天平板培地に混釈，25℃および 37℃で1週間培養し，それぞれについて7日目までの 発育菌数を測定した。25℃培養で発育した菌を25℃発 育菌，37℃培養で発育した菌を37℃発育菌とした。
2. 4 大腸菌群および大腸菌数の簡易測定法 大腸菌群および大腸菌数を市販の酵素基質培地法
（コリラート法；アスカ純薬）2）3）4）を用いて同時に測 定した。即ち，検水100mlにコリラート試薬（コリラー ト「アスカ」）を加え混和後，QTトレイに封入，37℃
で24時間培養後，黄色に変化したセル数から大腸菌群
MPN値/100mlを求めた。なお，河口水には海水用試
薬（コリラート18「アスカ」）を用い，37℃18時間培 養 後 に 判 定 し た 。 大 腸 菌 群 計 測 後 の ト レ イ に 波 長 365nmの紫外線を照射し，蛍光を呈するセルを大腸菌 陽性とし，大腸菌MPN値/100mlを求めた。
3 結 果 と 考 察 3. 1 一般細菌数
3. 1. 1 25℃発育菌
各定点における25℃発育菌数の月別変化を図2に示 した。上流水の菌数は年間を通して，1,000cfu/ml前後 であったが，7月は10,000cfu/mlと高い菌数を示した。
中流水および河口水では月別菌数変化には差異が認
鳴瀬川水系における一般細菌数および大腸菌群数の通年変動
The Change of Numbers of Heterotrophic Bacteria and Escherichia coli in Naruse River
山田 わか 齋藤 紀行 渡邉 節 小林 妙子 川野 みち 阿部 郁子 佐々木 久雄 菅原 直子 畠山 敬
Waka YAMADA，Noriyuki SAITO，Setsu WATANABE Taeko KOBAYASHI，Michi KAWANO，Ikuko ABE
Hisao SASAKI，Naoko SUGAWARA，Takashi HATAKEYAMA キーワード：鳴瀬川水系；一般細菌数；大腸菌；コリラート法
Keywords：Naruse River；number of heterotrophic bacteria；Escherichia coli；Colilert Quanti-tray
図 1 調査地点
められなかったが，4月が最も少なく，5月以降は 10,000cfu/ml前後の菌数を示している。特に6月と8 月は50,000cfu/mlを超えている。
3. 1. 2 37℃発育菌
各定点における37℃発育菌数の月別変化を図3に示 した。各地点の菌数を比較すると，6月を除き4月から 12月まで，河口水，中流水，上流水の順に高い菌数を 示している。河口水の最大菌数は8月の32,000cfu/ml，
中流水は6月の18,200cfu/mlであった。上流水では，6月 から9月が100〜1,000cfu/mlで，それ以外は100cfu/ml 以下であった。
3. 2 大腸菌群および大腸菌数
各地点における大腸菌群および大腸菌の月別変化を 図4から図8に示した。
3. 2. 1 大腸菌群
上流水の大腸菌群MPN値は，6月に最高値を示し，6 月から11月までは生活環境項目基準値（50MPN/100ml以
下）を超えていた。また，唐府沢川および鳴瀬川は，
8月に最高値を示し，それぞれ5月から11月及び6月 から11月は基準値（50MPN/100ml以下）を超えていた。
中流水・河口水は，ともに6月に最高値を示した。
中流水は5月から2月まで基準値（1,000MPN/100ml 以下）を超え，また，河口水は6月から11月まで基準 値（5,000MPN/100ml以下）を超えて検出された。
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図 5 大腸菌群と大腸菌の変化（中流水）
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図 2 25℃発育菌の月別変化
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図 3 37℃発育菌の月別変化
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図 6 大腸菌群と大腸菌の変化（河口水）
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図 4 大腸菌群と大腸菌の変化（上流水）
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図 8 大腸菌群と大腸菌の変化（唐府沢川）
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図 7 大腸菌群と大腸菌の変化（鳴瀬川）